Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores ...
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Universidad de La Salle Universidad de La Salle Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias 2014 Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores hemáticos e Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores hemáticos e inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso colombiano inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso colombiano en Tabio, Cundinamarca en Tabio, Cundinamarca Diana Patricia Pacheco González Universidad de La Salle, Bogotá Adriana Paola Bermúdez Rodríguez Universidad de La Salle, Bogotá Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria Part of the Comparative and Laboratory Animal Medicine Commons, and the Large or Food Animal and Equine Medicine Commons Citación recomendada Citación recomendada Pacheco González, D. P., & Bermúdez Rodríguez, A. P. (2014). Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores hemáticos e inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso colombiano en Tabio, Cundinamarca. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/235 This Trabajo de grado - Pregrado is brought to you for free and open access by the Facultad de Ciencias Agropecuarias at Ciencia Unisalle. It has been accepted for inclusion in Medicina Veterinaria by an authorized administrator of Ciencia Unisalle. For more information, please contact [email protected].
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Universidad de La Salle Universidad de La Salle
Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle
Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias
2014
Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores hemáticos e Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores hemáticos e
inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso colombiano inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso colombiano
en Tabio, Cundinamarca en Tabio, Cundinamarca
Diana Patricia Pacheco González Universidad de La Salle, Bogotá
Adriana Paola Bermúdez Rodríguez Universidad de La Salle, Bogotá
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Part of the Comparative and Laboratory Animal Medicine Commons, and the Large or Food Animal
and Equine Medicine Commons
Citación recomendada Citación recomendada Pacheco González, D. P., & Bermúdez Rodríguez, A. P. (2014). Efecto de polipéptidos linforeticulares, en los valores hemáticos e inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso colombiano en Tabio, Cundinamarca. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/235
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UNIVERSIDAD DE LA SALLE
Facultad de Ciencias Agropecuarias
Programa de Medicina Veterinaria
EFECTO DE POLIPÉPTIDOS LINFORETICULARES, EN LOS VALORES HEMÁTICOS E
INMUNOGLOBULINA G EN UN GRUPO DE EQUINOS DE PASO COLOMBIANO EN
TABIO, CUNDINAMARCA
Trabajo de grado
Diana Patricia Pacheco González
Adriana Paola Bermúdez Rodríguez
Bogotá, Colombia
2014
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
2
Facultad de Ciencias Agropecuarias
Programa de Medicina Veterinaria
EFECTO DE POLIPÉPTIDOS LINFORETICULARES, EN LOS VALORES HEMÁTICOS E
INMUNOGLOBULINA G EN UN GRUPO DE EQUINOS DE PASO COLOMBIANO EN
TABIO, CUNDINAMARCA
Trabajo de grado
Diana Patricia Pacheco González
Código: 14051098
Adriana Paola Bermúdez Rodríguez
Código: 14071124
Director:
Víctor Acero Plazas
MV, cMSc
Bogotá, Colombia
2014
I
I
APROBACIÓN
DIRECTOR _____________________________
Víctor Manuel Acero Plazas
JURADO _____________________________
Ruth Miriam Valbuena Serrato
JURADO ______________________________
José Alejandro Espinosa
II
II
COMPROMISO
Los trabajos de grado no deben contener ideas que sean contraria a la doctrina católica
en asuntos de dogma y moral.
Ni la Universidad, ni el director, ni el jurado calificador son responsables de las ideas
expuestas por las graduadas.
III
III
DIRECTIVOS
RECTOR Hno. Carlos Gabriel Gómez Restrepo
VICERECTOR Hno. Carlos Enrique Carvajal Costa
VICERECTOR DE DESARROLLO
Y PROMOCION HUMANO Hno. Frank Leonardo Ramos Baquero
VICERECTOR ADMINISTRATIVO Dr. Eduardo Ángel Reyes
VICERECTOR DE INVESTIGACION
Y TRANSFERENCIA Hno. Manuel Cancelado Jiménez
DECANO FACULTAD DE Dra. Claudia Aixa Mutis
CIENCIAS AGROPECUARIAS
DIRECTOR PROGRAMA Dr. Fernando Nassar Montoya
MEDICINA VETERINARIA
IV
IV
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos principalmente al Doctor Víctor Manuel Acero (director del trabajo de
grado), por ofrecer una constante guía y apoyo durante todo el proceso de realización de
este proyecto de investigación.
A Dios por habernos dado la oportunidad de realizar en este proyecto y poder culminar
con nuestro sueño de ser Medicas Veterinarias.
A nuestros Padres, por su apoyo constante, paciencia y por la ayuda económica para la
realización de este proyecto.
V
V
TABLA DE CONTENIDO
Pág.
RESUMEN x
ABSTRACT xi
INTRODUCCIÓN 1
OBJETIVOS 3
Objetivo general 3
Objetivos específicos 3
1. MARCO TEÓRICO 4
1.1 SISTEMA INMUNE DE LOS EQUINOS 4
1.1.1 Defensas del cuerpo 4
1.1.1.1 Barreras físicas y químicas 4
1.1.1.2 Inmunidad innata 4
1.1.1.3 Inmunidad adquirida 5
1.2 CUADRO HEMÁTICO DE LOS EQUINOS 8
1.3 INMUNOGLOBULINA G DE LOS EQUINOS 8
1.3.1 Turbidimetría 9
1.4 POLIPÉPTIDOS LINFORETICULARES 9
1.5 INMUNOMODULADORES 10
1.5.1 Inmunomoduladores de acción inespecífica 11
1.5.2 Inmunomoduladores de acción específica 11
1.5.3 Lista de inmunomoduladores. Acción terapéutica 11
VI
VI
Pág.
2. MATERIALES Y METODOS 14
2.1 LOCALIZACIÓN 14
2.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 14
2.3 VARIABLES 15
2.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 16
2.5 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS 16
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 17
3.1 RESULTADOS DE CUADROS HEMÁTICOS 17
3.1.1 Resultados de la línea roja del grupo tratamiento 17
3.1.2 Resultados de la línea roja del grupo control 17
3.1.3 Análisis estadístico línea roja del grupo tratamiento y grupo control 18
3.1.4 Resultados de plaquetas del grupo tratamiento 19
3.1.5 Resultados de plaquetas del grupo control 20
3.1.6 Análisis estadístico de las plaquetas del grupo tratamiento y el 21
grupo control
3.1.7 Resultados de la línea blanca del grupo tratamiento 21
3.1.8 Resultados de la línea blanca del grupo control 22
3.1.9 Análisis estadístico línea blanca de grupo tratamiento y grupo 23
control
3.1.10 Resultados de las globulinas del grupo tratamiento 24
3.1.11 Resultados de las globulinas del grupo control 25
3.1.12 Análisis estadístico de la globulina del grupo tratamiento y 25
grupo control
VII
VII
Pág.
3.2 RESULTADOS DE INMUNOGLOBULINA G 26
3.2.1 Resultados de Inmunoglobulina G del grupo tratamiento 26
3.2.2 Resultados de inmunoglobulina G del grupo control 27
3.2.3 Análisis estadístico de la inmunoglobulina G del 27
grupo tratamiento y grupo control
3.3 RESULTADOS ADICIONALES 28
3.4 CORRELACIÓN DE LOS RESULTADOS CON OTROS ESTUDIOS 28
4. CONCLUSIONES 30
5. RECOMENDACIONES 31
6. LISTA DE REFERENCIAS 32
ANEXOS 36
VIII
VIII
LISTA DE TABLAS
Pág.
Tabla1. Grupos de estudio 14
Tabla 2. Variables presentes en el estudio 15
Tabla 3. Comparación entre el primer, segundo y tercer 17
cuadro hemático de línea roja del grupo tratamiento
Tabla 4. Comparación entre el primer, segundo y tercer 18
cuadro hemático de línea roja del grupo control
Tabla 5. Comparación entre el primer, segundo y tercer 20
resultados de plaquetas del grupo tratamiento
Tabla 6. Comparación entre el primer, segundo y tercer 20
resultados de plaquetas del grupo control
Tabla 7. Comparación entre el primer, segundo y tercer 21
cuadro hemático de línea blanca del grupo tratamiento
Tabla 8. Comparación entre el primer, segundo y tercer 22
cuadro hemático de línea blanca del grupo control
Tabla 9. Comparación entre el primer, segundo y tercer 24
cuadro hemático de globulina del grupo tratamiento
Tabla 10. Comparación entre el primer, segundo y tercer 25
cuadro hemático de globulina del grupo control
Tabla 11. Comparación entre la primera, segunda, y tercera 26
toma de inmunoglobulina G del grupo tratamiento
Tabla 12. Comparación entre la primera, segunda, y tercera 27
toma de inmunoglobulina G del grupo control
IX
IX
LISTA DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Fases de la respuesta inmunitaria 6
Figura 2. Respuesta inmunitaria 7
Figura 3. Análisis estadístico de hematíes 19
Figura 4. Análisis estadístico de hematocrito 19
Figura 5. Análisis estadístico de plaquetas 21
Figura 6. Análisis estadístico de neutrófilos 23
Figura 7. Análisis estadístico de linfocitos 24
Figura 8. Análisis estadístico de globulina 26
Figura 9. Análisis estadístico de inmunoglobulina G 28
X
X
RESUMEN
Los Polipéptidos linforeticulares de origen esplénico y hepático porcino son una alternativa
como inmunoestimulantes y coadyuvantes en diferentes procedimientos biológicos y
enfermedades. Este tratamiento de apoyo metabólico se asocia al concepto de que la
célula es una fábrica de proteínas y necesita por consiguiente de un soporte metabólico
específico para si misma o un tejido en deterioro. El objetivo del trabajo fue determinar el
efecto de los polipéptidos linforeticulares sobre los valores hemáticos y de
inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso criollo Colombiano en Tabio,
Cundinamarca. Se seleccionaron 20 equinos sanos del criadero Danielandia, separados
en un grupo control y un grupo experimental a los cuales se les suministro vía oral
polipéptidos linforeticulares “Uprone®” a una dosis de 2 cápsulas de 200mg/equino/día. A
cada animal se le analizaron los posibles cambios en los cuadros hemáticos y pruebas de
inmunoglobulina G, para finalmente determinar las posibles diferencias significativas y/o
efectos colaterales entre el grupo control y el grupo tratamiento durante la tomas del día 0,
15 y 30. Los resultados principales mostraron un leve aumento en el conteo de glóbulos
rojos, neutrófilos, linfocitos e IgG en el grupo tratamiento y muy pocos superaban los
rangos normales. Al aplicar las prueba estadística de diseño factorial A x B y Tukey para
determinar si hubo diferencias significativas entre las variables (hematíes, hematocrito,
linfocitos, neutrófilos, plaquetas, globulinas e inmunoglobulina G) con respecto al
tratamiento de cada grupo experimental, se determinó que en ninguno de los grupos hubo
diferencias estadísticamente significativas en cuanto al efecto del suministro de Uprone®.
Sin embargo encontramos diferencias significativas en cuanto al tratamiento y el tiempo
de muestreo. El uso de polipéptidos linforeticulares no mostró efectos secundarios en
ninguno de los animales tratados. El tratamiento con polipéptidos linforeticulares mostró
incrementos en los valores de globulina contribuyendo con el sistema inmune de los
equinos tratados. Posiblemente los polipéptidos linforeticulares (Uprone®) se constituyan
como una alternativa para mejorar la inmunidad en las diferentes especies animales.
Palabras clave: Polipéptidos linforeticulares, Inmunoestimulantes, Inmunoglobulinas.
XI
XI
ABSTRACT
The polypeptides of splenic lymphoreticular origin and porcine liver are an alternative as
immunostimulants and adjuvants in different biological processes and diseases. This
treatment is associated metabolic support to the concept that the plant cell is a protein and
therefore needs a specific metabolic support itself or tissue deterioration. The objective
was to determine the effect of polypeptides on lymphoreticular and hematological values of
immunoglobulin G in a group of horses Colombian Creole step in Tabio, Cundinamarca.
20 healthy horses hatchery Danielandia separated into a control group and an
experimental group which was given by mouth polypeptides lymphoreticular "uprone ®" at
a dose of 2 capsules of 200mg/horse/day were selected. Each animal was analyzed
possible changes in hematological pictures and immunoglobulin G tests to finally
determine possible significant differences and / or side effects between the control group
and the treatment group during the shots of the day 0, 15 and 30. The main results
showed a slight increase in the number of red blood cells, neutrophils, lymphocytes and
IgG in the treatment group and few exceeded the normal range. In applying the test
statistic factorial design A x B and Tukey to determine whether there were significant
differences between the variables (red blood cells, hematocrit, lymphocytes, neutrophils,
platelets, globulins and immunoglobulin G) with respect to the treatment of each
experimental group, it was determined that in none of the groups were statistically
significant in the effect of providing uprone ® differences. However significant differences
in the treatment and sampling time. Lymphoreticular using polypeptides showed no side
effects in any of the treated animals. Treatment with lymphoreticular polypeptides showed
increases in globulin values contributing to the immune system of the treated equines.
Possibly the lymphoreticular polypeptides (Uprone®) becoming as an alternative to
improve immunity in different animal species.
Keywords: lymphoreticular polypeptides, immunostimulants Immunoglobulins.
1
INTRODUCCIÓN
La resistencia a los antibióticos se ha convertido en uno de los principales problemas de
salud. El combatir a los organismos patógenos con terapias combinadas que involucren la
participación del sistema inmune y de fármacos antimicrobianos, representa un modelo
exitoso para el tratamiento de enfermedades infecciosas agudas y crónicas. Los
inmunomoduladores de origen bacteriano, eucariótico y farmacológico, estimulan los
mecanismos de defensa del hospedero contra diversas enfermedades virales,
bacterianas, parasitarias y fúngicas. El potencial de estos agentes para modular la
respuesta inmune puede ser utilizado como tratamiento o como terapia adyuvante de
diversas enfermedades microbianas. En las enfermedades infecciosas, el creciente
problema de la resistencia a los agentes antibióticos y quimioterapéuticos, hace aún más
patente el impacto benéfico que puede tener la modulación de la respuesta inmune en la
resolución de la enfermedad (García, Guerrero, Castro y Medina, 2009).
En la actualidad, el sistema inmunológico de los equinos ha sido objeto de particular
interés por los científicos; teniendo como propósito lograr mayor control sobre muchas
enfermedades y sus condiciones inmunopatológicas. Los caballos, debido a su
temperamento y actividades a las que se les destina, sufren frecuentemente estados de
estrés que propician una serie de cambios fisiológicos profundos, los que interaccionan
con eventos externos y provocan un estado de incompetencia inmunológica,
caracterizado entre otras cosas, por el hecho de que el individuo no puede establecer una
defensa efectiva contra agentes invasores. Estas situaciones provocan complicaciones y
cronicidad de algunas enfermedades (Hernández, Ríos, Cruz, Salas y Romero, 2005).
Los dueños de caballos, buscan usar métodos alternos y preventivos a muy temprana
edad en sus animales con el simple objetivo de evitar la presentación de patologías que
en su gran mayoría cursan con cuadros crónicos e incluso letales. Diversos estudios
manejan el Uprone® suplemento dietario, como terapia coadyuvante; compuesto por
polipéptidos hepáticos y esplénicos de origen porcino de bajo peso molecular, registrado
en el mercado farmacéutico colombiano (van´t Veen, de Ruyter, Mouton, Hartleb y
Lachmann, 1996; Mejía, 2010; Mejía, De Urbina, Mejía, Higuera y Acero, 2011; Urbimed,
2013).
La industria farmacéutica tradicional, pese a los extraordinarios logros del siglo pasado,
no ha logrado aún en todos los casos desarrollar vacunas eficaces y sustancias sintéticas
eficientes, para el control y tratamiento de una serie importante de enfermedades que
afligen al género humano y animales, tales como las enfermedades autoinmunes y
2
degenerativas, las epidemias virales y ciertas entidades oncológicas. Con la llegada del
siglo XXI, y los nuevos descubrimientos en la ciencia junto con el desarrollo de disciplinas
tales como la patología molecular, la bioquímica, la ingeniería genética y la inmunología,
las proteínas especificas se proyectan actualmente como elementos muy importantes y
promisorios en el campo de la terapéutica, en cuanto forman parte integral de los
procesos metabólicos que se llevan a cabo en los organismos vivos (Mejía, 2003).
Los polipéptidos esplénicos de bajo peso molecular (LMW) Introducidos en la farmacopea
alemana desde hace cuatro décadas, obtenidos por procesos de fragmentación peptídea
controlada, han demostrado representar una propuesta alternativa valiosa para el manejo
de este tipo de patologías, las cuales constituyen un serio problema de salud pública en
todos los países del mundo, no importando su desarrollo económico (Mejía, 2003).
Los polipéptidos linforeticulares provienen de tejidos inmunocompetentes que ayudan o
estimulan la producción de inmunoglobulinas. El bazo cumple una importante función en
el sistema inmunológico como es la diferenciación temprana celular. Por otro lado el
hígado es el órgano donde se producen las reacciones de fase aguda y la síntesis de
proteínas plasmáticas, importantes en los procesos de defensa orgánica (van´t Veen et
al., 1996; Mejía, 2010).
3
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Determinar el efecto de los polipéptidos linforeticulares en los valores hemáticos e inmunoglobulina G en un grupo de equinos de paso Colombiano en Tabio, Cundinamarca.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Evaluar si existen diferencias en los valores hematológicos entre el grupo experimental y el grupo control.
Identificar si existen diferencias en los rangos de inmunoglobulina G entre el grupo experimental y el grupo control.
Determinar la presencia o ausencia de efectos adversos causados por la administración del producto.
1. MARCO TEÓRICO
4
1.1 SISTEMA INMUNE DE LOS EQUINOS
El sistema inmune es activado por las estructuras moleculares, tanto internas como
externas, produciendo respuestas celulares y/o humorales de afinidades muy variadas
que son la base del equilibrio dinámico del sistema, y que en un momento dado le
permiten hacer frente a las agresiones externas. A estas estructuras moleculares se las
denomina antígeno, y a los productos de la respuesta inmune humoral, anticuerpos. La
característica fundamental de los anticuerpos es su especificidad es decir, la capacidad
para reconocer y distinguir entre estructuras antigénicas diferentes (Martin, 2001).
1.1.1 Defensas del cuerpo
1.1.1.1 Barreras físicas y químicas
La supervivencia depende de la exclusión exitosa de los microorganismos invasores, o
que los animales recurran a una gran variedad de estrategias de defensa. De hecho el
cuerpo cuenta con múltiples líneas defensivas. Las principales son las barreras físicas
contra la invasión. En este sentido, la piel constituye una barrera física eficaz que, de
dañarse, es reparada con rapidez mediante el proceso de la cicatrización. En las demás
superficies corporales, las defensas físicas más sencillas consisten en procesos de auto-
limpieza como la tos, el estornudo y el flujo de moco en las vías respiratorias, la diarrea, el
pH del tubo digestivo, el flujo de orina en las vías urinarias y las enzimas. La presencia de
flora normal también excluye a muchos invasores potenciales (Tizard, 2009).
1.1.1.2 Inmunidad innata
Aunque muy útiles, las barreras físicas no son del todo eficaces por si solas, ya que con el
tiempo y la persistencia suficiente, el invasor llega a vencer los obstáculos físicos. De este
modo, la segunda línea de defensa consiste en los mecanismos químicos celulares y
conocidos de manera colectiva como sistema inmunitario innato. Este sistema se basa en
el hecho de que los organismos invasores son químicamente muy distintos de los
componentes corporales sanos. Así, los animales cuentan con enzimas que digieren las
paredes celulares de las bacterias y las proteínas unidas a carbohidratos que cubren las
bacterias, lo que acelera su destrucción. Los animales también cuentan con células que
reconocen las estructuras moleculares asociadas a los microorganismos invasores y
desencadenan su destrucción. Un aspecto clave de la inmunidad innata es la capacidad
del cuerpo de enfocar estos mecanismos innatos de defensa en los sitios de invasión
bacteriana, esta respuesta de defensa enfocada o concentrada se conoce como
inflamación. En ella, los cambios locales ocasionados en los tejidos por invasión
microbiana o lesión tisular inducen un incremento en el flujo sanguíneo y la acumulación
local de células capaces de atacar y destruir a los invasores. Estas células, reciben el
nombre de neutrófilos y monocitos, por lo general aniquilan la mayor parte de los agentes
patógenos e impiden su propagación a las regiones no infectadas. Para destruir
microbios, el cuerpo también utiliza enzimas que son activadas por la presencia de los
invasores. Estas enzimas constituyen el sistema del complemento. Algunas de las células
que intervienen en el proceso inflamatorio también reparan tejidos dañados y los
5
devuelven a su estado normal una vez destruidos los invasores (Tizard, 2009).
El cuerpo animal posee mecanismos específicos para reaccionar a los lipopolisacáridos
bacterianos. Los animales también cuentan con moléculas antimicrobianas naturales,
como es el caso de la enzima lisozima (que digiere carbohidratos) y muchas proteínas de
unión a carbohidratos. Algunas circulan todo el tiempo mientras que otras son inducidas
por la invasión bacteriana. Estas proteínas se unen a los microorganismos invasores y
aceleran su destrucción (Tizard, 2009).
El sistema inmune innato de los mamíferos proporciona la primera línea de protección
contra la materia ingerida o microorganismos inhalados y extranjeros. Los mecanismos no
específicos están implicados, lo que representa el antiguo sistema conservado de defensa
de los organismos vivos antes de la exposición al antígeno (por ejemplo, un
microorganismo o cuerpo extraño). Estos sistemas son capaces de responder
inmediatamente a un desafío por sustancias extrañas, sin la movilización de moléculas de
reconocimiento específicas. Las células del sistema innato actúan como barreras tanto
físicas e inmunológicas, que juega un papel crítico en el mantenimiento de la integridad
estructural de los tejidos linfoides asociados con el sistema inmune común de las
mucosas (CMIS) y en la protección del huésped. Macrófagos representan los
componentes celulares decisivos de la respuesta inmune que se produce como una
reacción a un invasor o sustancia extraña. Los macrófagos son células a base del tejido
perteneciente al sistema reticuloendotelial, capaz de fagocitosis y la producción de una
variedad de mediadores inmunomoduladores, incluyendo citoquinas y especies reactivas
de oxígeno (ROS) (Kronek, Paulovicova, Paulovicova, Kronekova y Luston, 2012).
La activación de los macrófagos provoca una amplia variedad de genes inflamatorios y la
respuesta inmune y la expresión de una variedad de moléculas, incluyendo las citoquinas
pro-inflamatorias, por ejemplo, factor de necrosis tumoral (TNF-a), interleucina-1 (IL- 1),
interleucina-6 (IL-6), interferones (IFN-c y el IFN-b), factor estimulante de colonias de
granulocitos(G-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-
CSF), factor de crecimiento transformante beta(TGF-b) y proteína inflamatoria de
macrófagos 1(MIP-1) y también da como resultado una regulación de la inducción de la
óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) y otros reactivos oxidantes potentes (Kronek, et al.,
2012).
1.1.1.3 Inmunidad adquirida
Es claro que la inflamación y los demás componentes del sistema inmunitario innato
(Figura 1) contribuyen en un grado significativo con la defensa del cuerpo. Los animales
con deficiencia en las reacciones inflamatorias mueren al poco tiempo a causa de la
invasión microbiana, sin embargo estas reacciones tampoco constituyen la solución
definitiva para defender el cuerpo; lo que realmente se necesita es un sistema de defensa
capaz de detener y eliminar los invasores al tiempo que experimenta dicho proceso, en
otras palabras, se requiere un sistema que aprenda a reconocer a los invasores cuando
vuelva a encontrase con ellos para poder reaccionar aun con mayor rapidez y eficacia.
Este tipo de reacción adaptativa es la función del sistema de inmunidad específica contra
6
un invasor (Tizard, 2009).
Figura 1. Fases de la respuesta inmunitaria.
Tomada de: Borghetti, et al., 2009
Los anticuerpos o inmunoglobulinas, son moléculas sintetizadas por las células
plasmáticas en respuesta a la estimulación antigénica y tienen la propiedad de unirse
específicamente al antígeno que indujo su formación (Martin, 2001).
La respuesta inmune puede ser dividida en dos actividades secuenciales relacionadas: el
reconocimiento de lo extraño y su reacción y consecuencia. El reconocimiento
inmunológico está dado por la especificidad y es capaz de reconocer ligeras diferencias
químicas que distinguen a un patógeno de otro, así como discriminar entre moléculas
extrañas y componentes propios. Una vez que ha reconocido al organismo extraño, el
sistema inmune desarrolla una respuesta apropiada denominada respuesta efectora para
eliminar o neutralizar al organismo. Los linfocitos son las células centrales del sistema
inmune, responsables de la inmunidad adquirida y los atributos de diversidad,
especificidad, memoria y reconocimiento de lo propio y no propio, característicos de la
respuesta inmune (Figura 2) (García et al., 2009).
Figura 2. Respuesta inmunitaria.
7
Adaptado de: García et al.,2009.
Los otros tipos de leucocitos sanguíneos juegan papeles importantes fagocitando y
destruyendo microorganismos, presentando antígenos y secretando citocinas. La entrada
de un antígeno (Ag) al organismo pone en marcha la respuesta inmune, el Ag es captado
y procesado por una célula presentadora de Ag (CPA), que lo muestra asociado al
Complejo Principal de Histocompatibilidad (CPH). Dependiendo de la CPA que actúe y las
señales que libere, se estimularán las células ThO, que posean el receptor en la célula T
(RCT) adecuado para reconocer al Ag, expandiéndose y diferenciándose a Th1 o Th2.
Las células Th1 están implicadas en la activación del receptor de la célula T y de
macrófagos; las Th2 intervienen en la respuesta humoral. Sólo cuando existen suficientes
Th2 que reconocen a un antígeno, cabe esperar una expansión importante de células B
que también lo reconozcan (García et al., 2009).
Los linfocitos Th1 secretan fundamentalmente IL-2, IFN-Y y TNF, mientras que los Th2,
secretan IL-4, IL-5, IL-6 yTGF-ß. Las citocinas liberadas por un tipo de célula, tienden a
excluir a la otra. Así, las células Th2 liberan IL-10 que inhibe la diferenciación hacia Th1. Y
a su vez, las células Th1 liberan IFN-y que inhibe la diferenciación hacia Th2 (García et
al., 2009).
Los antígenos intracelulares favorecen la respuesta Th1, mientras que los extracelulares y
solubles favorecen hacia Th2. De la misma manera, la naturaleza del Ag y la vía de
administración influyen en la diferenciación hacia Th1 o Th2. Las razones por las que la
estimulación deriva a Th1 o Th2 no son conocidas con precisión, pero está claramente
influenciado por algunos factores como el tipo de infección, la célula que presenta el
antígeno y otras células implicadas en la respuesta inmune (García et al., 2009).
8
1.2 CUADRO HEMÁTICO DE LOS EQUINOS
El hemograma, es una prueba de laboratorio que cuantifica y evalúa los diferentes grupos
celulares que conforman la sangre, glóbulos rojos (eritrocitos), glóbulos blancos
(leucocitos) y plaquetas, también evalúa la hemoglobina y otros parámetros relacionados
con su cantidad, contenido y forma (volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina
corpuscular media (HCM) y concentración media de hemoglobina corpuscular (CMHC)).
En el análisis de sangre se mide tanto de forma global como en porcentajes los tres
grupos básicos de células, cada uno de estos cuenta con una función específica que se
verá alterada si se presenta algún tipo de modificación en cantidad o características de las
células que lo conforman (Bush, 1999).
En un estudio realizado los resultados arrojaron los siguientes parámetros: Recuento de
células rojas (RBC), concentración de hemoglobina (Hb), hematocrito (Ht), volumen
corpuscular medio (MCV) y hemoglobina corpuscular media (MCH) disminuyen poco a
poco hasta la 4 semana de vida; En la primera semana de vida la concentración de
hemoglobina corpuscular media (CHCM) disminuye y se mantiene hasta la cuarta semana
sin cambio alguno; El recuento plaquetario (PLT) disminuye significativamente en la
primera semana de vida pero aumenta posteriormente; los neutrófilos incrementan en la
primera semana y a partir de la fecha empiezan a disminuir; y los linfocitos aumentan
gradualmente con la edad (Smith, Chaffin, Cohen y Martens, 2002; Axon y Palmer, 2008;
Aoki y Ishii, 2012).
Los niveles para eritrocitos, concentración de hemoglobina y hematocrito más altos se
alcanzan a los 2 años y disminuyen a medida que avanza la edad. Los valores del
volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media y concentración de
hemoglobina corpuscular media aumentan consecuentemente al avanzar la edad (Rincón
y Torres, 2010). En las hembras los valores del recuento leucocitario total son mayores
que en los machos, pues son algo superiores los neutrófilos y linfocitos (Rincón y Torres,
2010). En un estudio realizado con 147 caballos separados por grupos de edad, se
demostró que el recuento total de leucocitos era mayor en el grupo de animales jóvenes
en comparación con el grupo entre cinco y diecisiete años de edad (Rincón y Torres,
2010).
1.3 INMUNOGLOBULINA G DE LOS EQUINOS
Las inmunoglobulinas pueden existir en forma de monómero (IgG, IgA o IgE) o en forma
de polímero, dímero fundamentalmente, para la IgA o pentámero para la IgM. La IgM es la
primera inmunoglobulina en desarrollarse aumentando su concentración muy rápido lo
que permite que el equino sea capaz de responder a los estímulos antigénicos. En
segundo lugar se desarrolla la IgG(T), aumentando la concentración de esta
inmunoglobulina mucho más rápidamente que la IgG y la IgA lo que indicaría que a
edades tempranas la IgGT del equino es más activa que la IgG. De esta forma, la IgG al
madurar más lentamente, no alcanza los niveles adultos hasta los 3-4 años de edad, en
cambio los niveles de IgG(T) en potros son elevados siendo por tanto la inmunoglobulina
más importante de los caballos jóvenes (Reed, Bayly y Sellon, 2005).
La función principal de la IgG es en el momento de la eliminación de los microorganismos
9
y la neutralización de las toxinas es en la fase secundaria de la respuesta inmune. Es la
inmunoglobulina que se distribuye con mayor facilidad por los espacios extravasculares
debido a su reducido tamaño, se difunde muy bien a través de las membranas y es la
inmunoglobulina predominante en los líquidos tisulares como el sinovial, peritoneal,
pleural, cefalorraquídeo y humor acuoso. Por tanto interviene rápidamente en la defensa
tisular y de las superficies corporales (Martin, 2001).
La IgG posee la capacidad de aglutinar los antígenos que están adheridos a la superficie
de los eritrocitos "hemaglutinación", y además puede fijar el complemento después de
interaccionar de forma específica con el antígeno e incluso puede inhibir la fijación del
mismo, si se halla en cantidades equivalentes, pudiendo diferir su capacidad funcional
según su eficacia por atraer y fijar el complemento. Algunas subclases de IgG pueden
unirse a la superficie de las células cebadas interviniendo así en las reacciones de
hipersensibilidad tipo I (Martin, 2001). En los equinos, al igual que en otras especies, el
aporte de selenio en la dieta, supone un estímulo en la respuesta inmune humoral,
particularmente la IgG, y en los títulos de hemaglutinación de los glóbulos rojos, siendo
mayor esta respuesta en los animales viejos que en los jóvenes (Martin, 2001).
Se observan que los factores medioambientales modifican la concentración media de IgG
de tal forma que, a medida que las radiaciones solares aumentan, se incrementan los
niveles de IgG en el plasma de los potros, por el contrario, se considera que la
concentración media de IgG aumenta en los caballos estabulados debido a la mayor
carga antigénica que reciben por la escasa ventilación de estos lugares (Martin, 2001).
La inmunoglobulina G es la más abundante y constituye la mayor parte de las globulinas
séricas, representando un sin número de anticuerpos contra agentes infecciosos con fase
hemática (virus, bacterias, parásitos y hongos). Puede reconocerse en plasma sanguíneo,
posee una vida media de 23 días y tiene propiedades opsonizantes, efectos citolíticos,
capacidad de fijar complemento y neutralizar toxinas (Mejía, 2007a). Estas serían las
características biológicas de los polipéptidos Linforeticulares (L.M.W.) Uprone® que
pudieran explicar los beneficios terapéuticos de este suplemento proteico de origen
animal, observados en la práctica clínica y que ha demostrado disminuir la glicólisis
celular, propiciando la homeóstasis metabólica (Mejía, 2007b).
1.3.1 Turbidimetría
Es una técnica de uso que cuantifica la IgG en suero o plasma; Los anticuerpos anti-IgG
forman compuestos insolubles cuando se combinan con la IgG de la muestra del paciente,
ocasionando un cambio de absorbancia proporcional a la concentración de IgG en la
muestra, y que puede ser cuantificada por comparación con un calibrador de IgG de
concentración conocida. EL significado clínico de este tipo de análisis es que la IgG es la
más importante pata la producción de las células plasmáticas, y representa un 75% del
total de inmunoglobulina, siendo su principal función la neutralización de toxinas en el
espacio tisular. Los valores de referencia a manejar por el laboratorio Zoolab están entre
700-1600 mg/dl dados por SPINREACT (2014).
1.4 POLIPÉPTIDOS LINFORETICULARES
10
Los polipéptidos linforeticulares de origen porcino, obtenidos por procesos de
fragmentación proteica controlada y utilizados en la clínica como suplemento metabólico
específico del sistema inmune, pretenden proporcionar aminoácidos, oligoelementos y
fracciones peptídeas afines, de bajo peso molecular (L.M.W.) presentes en los tejidos
hepáticos y esplénicos, los cuales actuarían como precursores y modificadores de la
respuesta biológica y del restablecimiento metabólico celular, cuando se administran
exógenamente, en procesos donde se supone existe un deterioro o compromiso del
sistema inmune. El uso de estos polipéptidos han arrojado resultados hematológicos en
donde se propicia el aumento de las células mononucleares periféricas y los componentes
del cuadro rojo: GR, Hto y Hb, linfoquinas, estímulo a la formación de linfocitos y N.K.C. y
a la liberación de INF intrínseco. Los iones orgánicos Na, K, Ca, Mg, Mn, Cl, P, Fe, Cu y
Zn presentes en las células de estos tejidos específicos, son elementos cruciales para el
metabolismo energético celular y factores reductores y antioxidantes de gran importancia.
Se asume además, que los polipéptidos linforeticulares (PLR) interaccionan de la misma
manera que los reactantes de fase aguda, suministrados al torrente sanguíneo por el
hígado, el bazo, la tiroides y otros órganos durante la fase de reacción aguda presente en
los episodios febriles, que disparan la respuesta inmunológica (Mejía, 2007a). En estos
órganos se activa la producción de globulinas, células y proteínas específicas para
reaccionar activamente ante la agresión. Se sabe que los oncogenes, los virus y otros
agentes patógenos, se comportan como generadores de trastornos metabólicos puntuales
en los organismos vivos y como activadores crónicos de los procesos de reacción de fase
aguda (Urbimed, 2013).
Hoy en día se conoce suficientemente, que el hígado y el bazo son los mayores
productores de inmunoglobulinas séricas (IgG, IgM, IgA) y globulinas plasmáticas y que
bajos ciertas condiciones injuriosas, realiza procesos de hidrólisis y fragmentación
proteica, a fin de proveer al organismos de aminoácidos, globulinas, oligoelementos y
factores quimiotáxicos, necesarios para el control efectivo de la agresión y la
autoreparación tisular. Procesos similares se presentan en otros órganos asociados al
sistema inmune (Urbimed, 2013).
Los polipéptidos linforeticulares (L.M.W) reciben su nombre de los órganos y tejidos de los
cuales se derivan y pretenden actuar de la misma manera que estos polipéptidos y
fracciones de bajo peso molecular lo hacen en los organismos vivos, puesto que están
proporcionando los mismos aminoácidos, ácidos nucleicos y oligoelementos que dichas
células orgánicas contienen, en forma tal, que sean anexados selectivamente a los
procesos metabólicos de la célula, para su auto condicionamiento y reparación. Estos
polipéptidos, debido a los procesos de fragmentación previa y su condición de bajo peso
molecular, no son digeridos por los ácidos y las enzimas digestivas, por lo cual son
incorporados de manera inmediata al torrente sanguíneo (Urbimed, 2013).
1.5 INMUNOMODULADOR
Los inmunomoduladores representan una opción para tratar enfermedades; ya que
modulan el sistema inmune y logran que responda de manera más amplia a un estímulo
extraño y utilice una o todas sus armas para controlar tumores, infecciones virales,
11
bacterianas o crónicas con evidencia de inmunodeficiencia secundaria; el mecanismo de
acción propuesto de estos productos es la activación de macrófagos y la subsecuente
liberación de citocinas. Los inmunomoduladores pueden ser de origen animal, vegetal o
sintético (Hernández et al., 2005).
Las sustancias inmunomoduladoras tienen la capacidad de modular la respuesta inmune
por un proceso de estimulación o supresión de esta, dentro de las cuales, a los
inmunopotenciadores se les atribuyen funciones importantes en las inmunodeficiencias de
algunos tipos de infecciones virales y bacterianas, y en especial en el tratamiento del
cáncer cuando las radiaciones y los medicamentos anticancerosos rompen el equilibrio
del sistema inmune (Martínez, 2006).
Los inmunomoduladores actúan a diferentes niveles del sistema inmune, por la necesidad
de desarrollar agentes que puedan inhibir o intensificar selectivamente poblaciones o
subpoblaciones de células para la respuesta inmune como: linfocitos, macrófagos,
neutrófilos células asesinas NK; citotóxicas (CTL), o la producción de mediadores solubles
como las citoquinas. Los inmunomoduladores en sus mecanismos de acción pueden
actuar de forma específica o inespecífica (Martínez, 2006).
1.5.1. Inmunomoduladores de acción inespecífica
Son agentes que logran una estimulación o supresión de la respuesta inmune sin que la
actividad de las células estimuladas vaya dirigida hacia un antígeno determinado. Se
diferencian en 3 tipos según su acción; los que actúan sobre el sistema inmune normal
(Tipo I); los que actúan sobre el sistema inmune inmunodeprimido (Tipo II); los que actúan
sobre el sistema inmune funcionalmente normal e inmunodeprimido (Tipo III) (Martínez,
2006).
1.5.2. Inmunomoduladores de acción específica
Logran su acción sobre células del sistema inmune, por la presencia de un antígeno o
inmunógeno dado, por lo que hay especificidad selectiva en la acción de estas células
para producir una respuesta inmune. La inmunomodulación es selectiva cuando hay
estimulación y su resultado significa una inmunorreacción hacia un antígeno o varios,
como es el caso de los adyuvantes inmunológicos o las vacunas terapéuticas.
1.5.3 Lista de inmunomoduladores. Acción terapéutica
Bacilo Calmette Guering (BCG): Posee acción específica e Inespecífica, activa macrófagos, células T, y la producción de interleuquina 2 (IL-2). Por su efecto inmunomodulador, hace parte como coadyuvante dentro de una serie de vacunas terapéuticas con acción específica contra el cáncer de vejiga, ovario, colon, y melanomas (Martínez, 2006). Según García et al. (2009) los efectos anti-tumorales del BCG parecen estar relacionados a mecanismos inmunológicos. Los cuales son reflejados por un incremento transitorio de varias citocinas y la presencia de
12
leucocitos inmunocompetentes activados en la orina dentro de las 24 horas posterior a la instilación.
Levamisol: Actúa de forma inespecífica, es capaz de restaurar la respuesta inmune humoral y celular (Martínez, 2006). El efecto del levamisol sobre la inmunidad celular es principalmente sobre linfocitos T alérgicos, macrófagos y leucocitos polimorfonucleares (Martínez, 2006; García et al., 2009). Se aplica fundamentalmente en inmunodeficiencias producidas por helmintos y protozoos (Martínez, 2006).
Dipéptido murámico (MDP): Su modo de acción puede ser específico e inespecífico. Estimula la respuesta inmune humoral y celular, con acción antitumoral utilizado en tratamientos del cáncer e infecciones bacterianas (Martínez, 2006; García et al., 2009; Nayak, et al., 2011).
Glucanos (hongos) y polisacáridos de algas: Su acción puede ser inespecífica y específica. Estimula la respuesta inmune humoral y celular, las células del sistema retículo endotelial. Los polisacáridos de algas se han ensayado en aplicaciones para la terapia tumoral en oncogénesis virales y metástasis (Martínez, 2006).
Hormonas tímicas, timosina y timopoyetina: Su acción es inespecífica, permiten la diferenciación y maduración de linfocitos T y estimulan la inmunidad celular. Son efectivas en la terapia de inmunodeficiencias de células T (Martínez, 2006).
Proteínas del complemento (globulinas): Son capaces de actuar por vía inespecífica y específica. Fundamentalmente activan la respuesta humoral. Se usan en la terapia de hipogammaglobulinemias y anemias (Martínez, 2006).
Citoquinas: Interleuquina 1(IL-1); interferón gamma (INF y), interleuquina 2 (IL-2), interleuquina 5 (IL-5); factor de necrosis tumoral alfa (FNTa); interleuquina 18 (IL-18); factor de transferencia, y factor de crecimiento y diferenciación granulocito – macrófago (GM-CSF), Interleuquina 12 ( IL-12 ): estos actúan de forma inespecífica en sentido general, pero muchas pueden actuar de forma específica.Capaces de regular y activar la respuesta inmune humoral y celular (Martínez, 2006; García et al., 2009). Cuando se utilizan citocinas para inducir una inmunoestimulación, las ventajas locales son: 1) generar altas concentraciones de citocinas de manera local, similar a la respuesta propia del organismo contra antígenos extraños; 2) aprovechar los efectos paracrinos de las citocinas en forma sostenida que activen el sistema inmune (García e tal., 2009). Son utilizadas en la terapia de inmunodeficiencias, cáncer, hepatitis y en la recuperación hematopoyética (Martínez, 2006).
Lectinas, concavalina A y fitohemaglutininas (PHA): Su acción es inespecífica con efectos mitógenos en linfocitos, por lo que son utilizados en ensayos para la activación de estas células en ensayos de proliferación (Martínez, 2006).
Lipopolisacárido bacteriano (LPS): Pueden actuar por vía inespecífica y específica, son activadores de linfocitos, macrófagos y TNFa. Se han ensayado en la terapia experimental de inmunodeficiencias (Martínez, 2006; García et al., 2009).
13
Lectina (Mistetloe) de origen vegetal: Su modo de acción es inespecífico, siendo capaz de activar las células natural killer (NK); macrófagos; PMN; TNF; INFy; IL-1 e 1L-6. Se han realizado ensayos para la terapia del cáncer (Martínez, 2006).
Polipéptidos linfo-reticulares: Son unidades proteicas naturales específicas Modificadores de la Respuesta Biológica (M.R.B), se presentan como un aporte suplementario, en aquellos estados patológicos, donde los procesos metabólicos se encuentran alterados (exceso de catabolismo) y las defensas orgánicas disminuidas. Actualmente se desconoce su mecanismo de acción como inmunomodulador y la probable interacción que presenta con otras reacciones metabólicas del organismo, se han realizado estudios preliminares donde se han evidenciado sus efectos biológicos y los efectos clínicos positivos, sobre los parámetros de peso corporal, mejoría del estado general de la calidad de vida e incremento del tiempo de supervivencia, en pacientes oncológicos (Mejía, 2007b). Sin embargo Mejía, Minotta y Hurtado (2003) en su estudio mencionan que el mecanismo de acción de estos compuestos parece residir en la capacidad de reducción atóxica de la glicólisis celular, presente y elevada en los procesos catabólicos implicados en las lesiones tumorales y otras patologías y su comprobada habilidad para estimular la producción de células linfocitarias, de tal manera, que hoy se ha propuesto el nombre de “panregulinas” por su capacidad para transmitir información que permite de alguna forma regular los procesos inmunes del organismo.
14
2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 LOCALIZACIÓN
El estudio se llevó a cabo en el Municipio de Tabio, Cundinamarca (Colombia) en el Criadero Danielandia. Limita por el norte con el municipio de Zipaquirá, al oriente con el municipio de Cajicá, al occidente con el municipio de Subachoque y al sur con el municipio de Tenjo. En la zona se maneja una temperatura media de 14º C.
2.2 POBLACIÓN Y MUESTRA
En este estudio se emplearon 20 animales, de acuerdo con la metodología descrita por Monclin, Farnir y Grauwels (2011), separados en dos grupos: un grupo control y un grupo tratamiento, cada uno constituido por 10 animales, según se muestra en la tabla 1. Los equinos al examen clínico fueron considerados sanos y bajo condiciones de manejo similares, a los cuales se le tomaron muestras sanguíneas y se les hizo su respectiva evaluación; la diferencia entre dichos grupos radico en que al grupo tratamiento se les administro vía oral dos cápsulas de Uprone® a una dosis de 200mg/equino/día. Tabla 1. Grupos de estudio.
Pacientes
Variables
Tratamiento
Sexo
Edad Años
1 H 12
2 M 10
3 M 12
4 H 12
5 H 5
6 H 7
7 H 4
8 H 10
15
9 H 6
10 H 8
Control
1 H 12
2 M 8
3 M 12
4 H 12
5 H 5
6 H 7
7 H 4
8 H 10
9 H 6
10 H 10
2.3 VARIABLES Dentro del estudio se presentaron diferentes variables, mostradas en la tabla 2.
Tablas 2. Variables presentes en el estudio.
Variable Tipo de variable Unidad de medida Observaciones
Sexo Cualitativo Macho
Hembra
Se tendrán en cuenta
hembras y machos.
Edad Cuantitativo # de años Se tendrán en cuenta
animales entre 3 y 12
años.
Tiempo de
muestreo
Cuantitativo # en días Se tendrán en cuenta el
tiempo que transcurre
del dia 0 al día 15 y del
día 15 al dia 30.
Cuadro hemático Cuantitativo Hematies: 10⁶/μl
Hematocrito: %
Plaquetas: 105/μl
Se tendrán en cuenta
los valores mas
relevantes de cuadro
hemático.
16
Neutrófilos: 103 /μl
Linfocitos: 103 /μl
Globulinas: gr/dl
Inmunoglobulina Cuantitativo Inmunoglobulina G:
mg/dl
Se tendrá en cuenta la
IgG.
2.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO Se realizó un análisis con base en la estadística descriptiva, utilizando un diseño factorial A x B (anexo 1) para el análisis de las variables de hematíes, hematocrito, plaquetas, neutrófilos, linfocitos, globulina e IgG entre el grupo control y tratamiento revelando la interacción entre los dos grupos. Para determinar si las variables son de distribución normal, se realizó la Prueba de Shapiro, arrojando como resultado que todas son de distribución normal (anexo 2). En cuanto al análisis de las diferencias entre el tiempo y los grupos manejados se utilizó el modelo muestra repetida en el tiempo; posteriormente se llevó a cabo ANOVA como fuente de variación e integración del tratamiento y el tiempo de muestreo (periodo), finalizando con la Prueba de Tukey. 2.5 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS Para este estudio se seleccionaron 20 equinos hembras y machos mayores a 3 años de
edad. Previo al día 0 se realizó examen clínico a todos los equinos los cuales fueron
considerados sanos y bajo las mismas condiciones de manejo. Posterior a esto se hace la
división de la población equitativamente para obtener un grupo control y un grupo
tratamiento cada uno de 10 animales.
Al día 0 en horas de la mañana se tomaron las primeras muestras sanguíneas para los 20
equinos, utilizando tubos Vacutainer® con EDTA para los cuadros hemáticos y tubo sin
anticoagulante para el análisis de inmunoglobulina G, la cual es analizada bajo la técnica
de Turbidimetría; fueron transportadas bajo refrigeración al laboratorio.
Según el estudio realizado por Acero et al. (2011) se realizó la administración vía oral de
dos cápsulas de Uprone® (200mg/equino/día); este estudio reportado se emplea como
base para el inicio del tratamiento posterior al día 0. Al día 15 se toman nuevamente las
muestras sanguíneas de los 20 animales para el análisis de cuadro hemático e
inmunoglobulina G, siendo transportadas bajo las mismas condiciones de refrigeración.
Se realizó finalmente el último muestreo sanguíneo el día 30, con el fin de comparar los
resultados de los exámenes iniciales con los finales.
Durante los 30 días se cumplió con la dosificación de las cápsulas y finalizando el
procedimiento del proyecto. En este estudio se tuvo en cuenta la ley 84 de 1989 acerca
del bienestar animal y las condiciones necesarias para animales de experimentación en
Colombia. Posteriormente se procedió a realizar el análisis y comparación de resultados
tanto de cuadro hemático e inmunoglobulina G, para de esta forma establecer las
diferencias entre ambos grupos y la presencia o ausencia de efectos adversos en los
equinos.
17
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3.1 RESULTADOS DE CUADROS HEMÁTICOS
3.1.1 Resultados de la línea roja del grupo tratamiento
A nivel de la línea roja del cuadro hemático, en términos generales los pacientes del grupo
tratamiento no presentaron cambios significativos entre los valores del primer, segundo y
tercer cuadro hemático, todos estos resultados se evidencian en la tabla 3.
Tabla 3. Comparación entre el primer, segundo y tercer cuadro hemático de línea roja del
grupo tratamiento.
En el equino número 3, 4 y 7 se observó un aumento en los eritrocitos y el hematocrito, en
el equino número 5 y 6 aumentó en la toma del día 15 los eritrocitos y posteriormente
disminuyó pero el hematocrito en ambos aumentó, y en el equino número 10 se observó
un aumento en los eritrocitos en la toma del día 15; posiblemente por estrés. Según
Núñez y Bouda (2007) como también Marlin y Nankervis (2003), lo anterior pude ser
explicado por la excitación que provoca la liberación de epinefrina y la contracción
Línea roja
grupo
tratamiento
Rango Eritrocitos:
6-12 10⁶/μl
Rango Hematocrito:
32-48 %
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 9,97 10,52 8,87 44 45 39
Equino 2 12,59 12,05 11,7 55 53 53
Equino 3 10,66 11,62 11,73 49 54 53
Equino 4 8,09 9,06 9,49 40 43 43
Equino 5 8,99 9,31 8,99 42 43 43
Equino 6 8,48 9,14 8,7 37 40 39
Equino 7 9,4 9,42 9,81 41 41 43
Equino 8 8,88 8,78 8,49 43 42 41.3
Equino 9 10,85 10,64 9,54 50 48 44.57
Equino 10 10,99 11,01 8,06 52 51 35
18
esplénica, el bazo actúa como reservorio de los eritrocitos en el perro, gato, caballo y
oveja, causando un incremento en la cantidad de eritrocitos circulantes hasta en un 15%;
conocido como eritrocitosis relativa. Los resultados completos del cuadro hemático de los
animales del grupo tratamiento se evidencian en el anexo 4.
3.1.2. Resultados de línea roja del grupo control
En la línea roja del cuadro hemático, en términos generales los equinos del grupo control
no presentaron cambios significativos entre los valores del primer, segundo y tercer
cuadro hemático, todos estos resultados se evidencian en la tabla 4.
Tabla 4. Comparación entre el primer, segundo y tercer cuadro hemático de línea roja del
grupo control.
Línea roja grupo
control
Rango Eritrocitos:
6-12 10⁶/μl
Rango Hematocrito:
32-48 %
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 7,86 7,77 8,15 36 36 38
Equino 2 9,56 10 9,56 46 48 46
Equino 3 10,17 9,52 8,77 49 45 42
Equino 4 7,62 7,58 6,54 39 38 34
Equino 5 11,03 11,08 9,87 44 43 40
Equino 6 8,48 5,94 7,62 40 28 37
Equino 7 10,38 10,69 9,91 44 46 43
Equino 8 9,08 9,2 7,6 44 45 36
Equino 9 8,94 8,97 9,75 38 38 43
Equino 10 8,56 8,46 7,52 43 42 38
Los resultados completos del cuadro hemático de los animales del grupo control se
evidencian en el anexo 5.
3.1.3. Análisis estadístico línea roja del grupo tratamiento y grupo control
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para los hematíes no se encuentran diferencias estadísticamente significativas (p> 0,05)
en cuanto al tratamiento, pero si se encuentran diferencias en los tiempos de muestreo
puesto que el grupo control siempre disminuyó; el grupo tratamiento aumentó del día 0 al
19
día 15 y luego disminuyó del día 15 al día 30 según la Prueba de Tukey como se puede
observar en la figura 3.
Figura 3. Análisis estadístico de hematíes.
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para el hematocrito no se encuentran diferencias estadísticamente significativas (p> 0,05)
respecto al tratamiento y el tiempo de muestreo (Figura 4).
Figura 4. Análisis estadístico de hematocrito.
3.1.4 Resultados de plaquetas del grupo tratamiento
A nivel de plaquetas del cuadro hemático, los pacientes del grupo tratamiento no
presentaron cambios significativos entre los valores del primer, segundo y tercer cuadro
hemático, todos estos resultados se evidencian en la tabla 5.
20
Tabla 5. Comparación entre el primer, segundo y tercer resultados de plaquetas del
grupo tratamiento.
Se administró suplemento alimentario durante 30 días y al no obtener ningún cambio en
los resultados con respecto a las plaquetas, lo podemos correlacionar según Guyton y
Hall, (2006) y Greer et al (2004) a que estas permanecen en la circulación
aproximadamente de 8 a 12 días y son eliminadas principalmente por macrófagos del
sistema fagocítico nuclear.
3.1.5 Resultados de plaquetas del grupo control
Las plaquetas del grupo control, no presentaron cambios significativos entre los valores
del primer, segundo y tercer cuadro hemático, todos estos resultados se evidencian en la
tabla 6.
Tabla 6. Comparación entre el primer, segundo y tercer resultados de plaquetas del grupo
control.
Plaquetas grupo tratamiento
Rango Plaquetas:
1-6 105/μl
Cuadro hemático
día 0
Cuadro hemático
día 15
Cuadro hemático
día 30
Equino 1 3,33 3,1 3,49
Equino 2 2,55 3,55 2,35
Equino 3 2,62 3,44 2,52
Equino 4 3,09 3,74 3,29
Equino 5 3,88 3,78 3,1
Equino 6 3,71 3,71 3,41
Equino 7 3,23 2,49 2,51
Equino 8 4,58 2,92 3,64
Equino 9 3,29 2,84 2,2
Equino 10 3,28 2,26 2,9
21
Plaquetas
grupo
control
Rango Plaquetas:
1-6 105/μl
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 3,98 3,1 5,05
Equino 2 3,22 3,9 3,7
Equino 3 3,47 2,93 5,2
Equino 4 2,4 2,93 2,15
Equino 5 2,46 2,16 2,73
Equino 6 3,66 3,34 3,94
Equino 7 3,68 3,82 3,3
Equino 8 2,79 1,57 4,29
Equino 9 3,31 2,76 4,23
Equino 10 3,92 4,22 5,38
3.1.6 Análisis estadístico de las plaquetas del grupo tratamiento y el grupo control.
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para las plaquetas no se encuentran diferencias estadísticamente significativas (p> 0,05)
en cuanto al tratamiento y el tiempo de muestreo (Figura 5).
22
Figura 5. Análisis estadístico de plaquetas.
3.1.7 Resultados de la línea blanca del grupo tratamiento
A nivel de la línea blanca del cuadro hemático, en términos generales los pacientes del
grupo tratamiento no presentaron cambios significativos entre los valores del primer,
segundo y tercer cuadro hemático, todos estos resultados se evidencian en la tabla 7.
Tabla 7. Comparación entre el primer, segundo y tercer cuadro hemático de línea blanca
del grupo tratamiento.
Línea blanca
grupo
tratamiento
Rango Neutrófilos:
30-75 103 /μl
Rango Linfocitos:
25-60 103 /μl
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 57 66 47 38 32 50
Equino 2 89 70 72 11 30 28
Equino 3 68 64 69 32 35 26
Equino 4 59 68 63 40 30 36
Equino 5 61 60 57 39 39 35
Equino 6 64 60 60 31 38 38
23
Equino 7 70 43 44 22 55 48
Equino 8 68 59 60 28 40 33
Equino 9 60 71 65 40 28 32
Equino 10 57 65 57 35 33 39
El equino número 2 en la toma de día 0 se observó un aumento en los neutrófilos y una
disminución de los linfocitos, y en el equino número 7 se evidencio en la toma del día 0
una disminución de linfocitos; presuntamente por estrés que de acuerdo a la literatura el
estado presentado por los animales mencionados llega a ser influenciado por la
interacción entre el sistema nervioso central, sistema endocrino y sistema inmune,
respondiendo a estímulos estresantes de una manera coordinada e influenciando el
comportamiento de un animal. La respuesta de estrés comienza con el envió de una señal
al cerebro la cual es integrada en el hipotálamo, se produce una serie de hormonas que
regulan la función de la hipófisis anterior, la cual secreta ACTH (las hormonas
relacionadas a sus secreción en los equinos son la hormona liberadora de corticotropina
CRH y vasopresina de arginina AVP). Una vez que CRH y AVP estimulan la secreción de
ACTH al torrente sanguíneo, se estimula la glándula adrenal liberando cortisol. El
aumento de estas hormonas genera un circuito de retroalimentación negativo inhibiendo
la posterior secreción de las mismas y por ello, para mantener la homeostación durante
condiciones estresantes, se modifica la actividad del sistema nervioso autónomo y
secreción hormonal regulada por mecanismos de feedback (Flores, 2010).
Dentro de lo reportado por Rincón y Torres (2010) una posible respuesta fisiológica para
el estrés presentado por los equinos en el presente estudio ocurre por la liberación de
cortisol pudiendo desencadenar una neutrofilia y linfopenia, aumentando el coeficiente
N:L. El mecanismo responsable de la linfopenia involucra la marginación y redistribución
de los linfocitos dentro del sistema linfático, además de una marcada y acelerada
apoptosis. La neutrofilia durante una inflamación sistémica es causada por la de
marginación de neutrófilos, disminución en la apoptosis de neutrófilos y estimulación de
células madres a través de factores de crecimiento (Zahorec, 2001). Según Stull y Rodiek
(2000) el coeficiente N:L sería un indicador más confiable de estrés que la concentración
de cortisol.
Por otro lado en los equinos número 1, 6, 7, 8 y 10 se observó aumento de los linfocitos a
de día 0 al día 30. Dallard (2006) menciona que la acción de los Inmunomoduladores está
relacionada con el mecanismo y equilibrio del adenosina-monofosfato-cíclico (AMPc) y la
guanina-monofosfato-cíclico (GMPc), y determina que el aumento de los niveles de AMPc
inhibe la función efectora de los linfocitos lo que conlleva a una inmunosupresión,
mientras que altos niveles de GMPc promueve un incremento en la actividad de los
linfocitos maduros lo que se traduce en una inmunoestimulación.
3.1.8. Resultados de la línea blanca del grupo control
24
A nivel de la línea blanca del cuadro hemático, en términos generales los pacientes del
grupo control no presentaron cambios significativos entre los valores del primer, segundo
y tercer cuadro hemático, todos estos resultados se evidencian en la tabla 8.
Tabla 8. Comparación entre el primer, segundo y tercer cuadro hemático de línea blanca
del grupo control.
Línea blanca
grupo
control
Rango Neutrófilos:
30-75 103 /μl
Rango Linfocitos:
25-60 103 /μl
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 80 64 69 19 32 31
Equino 2 80 68 72 20 30 20
Equino 3 92 75 76 8 34 24
Equino 4 71 50 55 29 49 45
Equino 5 74 73 56 23 26 42
Equino 6 67 65 72 32 34 25
Equino 7 53 60 59 40 38 39
Equino 8 62 58 66 34 38 29
Equino 9 42 53 50 48 37 38
Equino 10 70 58 68 25 40 30
En promedio los equinos del grupo control no presentaron diferencias significativas, sin
embargo los equinos número 1, 2 y 3 presentan neutrofilia y linfopenia. Estos resultados
se asimilan a los obtenidos en la línea blanca del grupo tratamiento por situación de
estrés al momento de la realización de la toma, debido a lo mencionado previamente; una
interacción completa entre el sistema nervioso central, el sistema endocrino y el sistema
inmune, respondiendo a estímulos (Rincón y Torres, 2010).
3.1.9 Análisis estadístico línea blanca del grupo tratamiento y grupo control
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para los neutrófilos no se encuentran diferencias estadísticamente significativas (p> 0,05)
en cuanto al tratamiento y el tiempo de muestreo (Figura 6).
25
Figura 6. Análisis estadístico de neutrófilos.
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para los linfocitos no se encuentran diferencias estadísticamente significativas (p> 0,05)
en cuanto al tratamiento, pero si se encuentran diferencias en el tiempo de muestreo
puesto que el grupo control aumentó del día 0 al día 15 y después disminuyó del día 15 al
día 30; mientras que el grupo tratamiento siempre aumentó según la Prueba de Tukey
como se puede observar en figura 7.
Figura 7. Análisis estadístico de linfocitos.
26
3.1.10 Resultados de las globulinas del grupo tratamiento
Los resultados de los cuadros hemáticos en cuanto a las globulinas del grupo
experimental, se evidencian en la tabla 9.
Tabla 9. Comparación entre el primer, segundo y tercer cuadro hemático de globulina del
grupo tratamiento.
Globulinas
grupo
tratamiento
Rango Globulina:
2,4-4,6 gr/dl
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 2,52 3,51 5,1
Equino 2 1,47 3,14 4,6
Equino 3 2,35 2 4
Equino 4 1,47 2,04 3
Equino 5 1,6 1,98 3,5
Equino 6 1,85 2,23 3
Equino 7 1,89 1,7 1,9
Equino 8 2,39 3,73 3,95
Equino 9 2,32 2,97 2,8
Equino 10 2,03 2,47 2,8
En el grupo tratamiento se observa un aumento progresivo de la toma 0 a la toma del día
30 presuntamente por la administración de los polipéptidos linforeticulares. Estos
resultados pueden ser atribuidos a la evidencia científica del perfil electroforético del
Uprone® con un altísimo contenido de globulinas (70 % aprox. de gamma globulinas, 30%
de betha y alpha globulinas), así como unas franjas consistentes de oligopéptidos de bajo
peso molecular, situadas entre los 40.000 y los 6.000 Dalton. En las practicas realizadas a
los polipéptidos linforeticulares de origen porcino en el Instituto de Referencia Andino,
27
Bogotá-Colombia (2001-2002), los estudios electroforéticos seriados de proteínas
muestran perfiles similares a los contenidos de proteínas plasmáticas, siendo altamente
superiores a las observadas en patrones de referencia para sujetos inmunocompetentes.
Por ende se desencadena el aumento de los perfiles tipo gammaglobulinas (70-80 %) y
de otras fracciones (Cabrera, Vera y Lavaroni, 2003; Mejía, 2010).
3.1.11 Resultados de las globulinas del grupo control
Los resultados de los cuadros hemáticos en cuanto a las globulinas del grupo control, se
evidencian en la tabla 10.
Tabla 10. Comparación entre el primer, segundo y tercer cuadro hemático de globulina
del grupo control.
Globulinas
grupo
Control
Rango Globulina:
2,4-4,6 gr/dl
Cuadro
hemático
día 0
Cuadro
hemático
día 15
Cuadro
hemático
día 30
Equino 1 1,59 2,94 3
Equino 2 1,98 2,96 3,3
Equino 3 2,75 2,57 2,9
Equino 4 1,2 2,07 1,3
Equino 5 2,23 2,42 2
Equino 6 1,45 3,08 2,2
Equino 7 1,93 3,09 2,9
Equino 8 1,87 2,11 4,2
Equino 9 1,98 2,2 1,9
Equino 10 2,1 2,3 3,2
Los resultados de globulina del cuadro hemático de los equinos del grupo control, no
presentaron cambios significativos entre los valores del primer, segundo y tercer cuadro
hemático.
28
3.1.12 Análisis estadístico de la globulina del grupo tratamiento y grupo control
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para la globulina no se encuentran diferencias estadísticamente significativas (p> 0,05) en
cuanto al tratamiento, pero si se encuentran diferencias en el tiempo de muestreo según
la Prueba de Tukey (Figura 8).
Figura 8. Análisis estadístico de globulina.
3.2 RESULTADOS DE INMUNOGLOBULINA G
3.2.1 Resultados de inmunoglobulina G del grupo tratamiento
Los resultados en cuanto a inmunoglobulina G del grupo experimental, se evidencian en
la tabla 11.
Tabla 11. Comparación entre la primera, segunda, y tercera toma de inmunoglobulina G
del grupo tratamiento.
Rango Inmunoglobulina G:
29
Inmunoglobulina G
grupo tratamiento
1065-2463 mg/dl
Día 0 Día 15 Día 30
Equino 1 2093 2187 2495
Equino 2 2082 2166 2047
Equino 3 1820 2724 2258
Equino 4 1987 2381 2070
Equino 5 1806 2172 2452
Equino 6 1684,3 2427 2281
Equino 7 1684,2 2434 2362
Equino 8 1463,4 1841 1505
Equino 9 1490,1 2113 1256
Equino 10 1682,2 2296 2598
Se pueden observar variaciones en los resultados de la inmunoglobulina G en el grupo
tratamiento. Según Bautista (1994) ciertos adyuvantes pueden usarse para incrementar la
formación de una clase de inmunoglobulina determinada, o estimular selectivamente la
inmunidad células más que la formación de anticuerpo y viceversa ambos tipos de
respuestas.
Durante la realización de este estudio, la administración de las cápsulas se llevó a cabo
vía oral. Mejía (2010) reporta que el consumo exógeno de los polipéptidos linforeticulares
favorece a la respuesta de los mismos como precursores, modificadores de la respuesta
biológica y del restablecimiento metabólico celular; ya que proporcionan aminoácidos,
oligoelementos y fracciones peptídicas afines de bajo peso molecular (L.M.W) presentes
en los tejidos hepáticos y esplénicos de origen porcino. Gracias a dichas propiedades, los
polipeptidos son utilizados en la clínica como suplemento metabólico específico del
sistema inmune (Furr, 2014).
Los resultados completos de la prueba de inmunoglobulina G de los animales del grupo
tratamiento se evidencian el anexo 6.
3.2.2 Resultados de inmunoglobulina G del grupo control
30
Los resultados en cuanto a inmunoglobulina G del grupo control, se evidencian en la tabla
12.
Tabla 12. Comparación entre el primer, segundo, y tercer toma de inmunoglobulina G del
grupo control.
Inmunoglobulina
G grupo control
Rango Inmunoglobulina G:
1065-2463 mg/dl
Día 0 Día 15 Día 30
Equino 1 1673 2780 2840
Equino 2 1738,7 2415 2330
Equino 3 2186 2503 2246
Equino 4 2290 2552 2862
Equino 5 1776 2381 2226
Equino 6 1793,1 2781 2580
Equino 7 1995,6 2608 2493
Equino 8 1614 2156 2632
Equino 9 1709 2228 1400
Equino 10 1894,5 2584 3320
Los resultados completos de las pruebas de inmunoglobulina G de los animales del grupo
control se evidencian en el anexo 7.
3.2.3 Análisis estadístico de la inmunoglobulina G del grupo tratamiento y grupo
control
31
Mediante un diseño factorial A x B (anexo 1) se revela la interacción entre los dos grupos,
para la inmunoglobulina G no se encuentran diferencias estadísticamente significativas
(p> 0,05) en cuanto al tratamiento, pero si se encuentran diferencias en el tiempo de
muestreo según la Prueba de Tukey (Figura 9).
Figura 9. Análisis estadístico de inmunoglobulina G.
3.3 RESULTADOS ADICIONALES
Una vez iniciado y desarrollado el método experimental del proyecto, no se presentó
ningún tipo de interrupción u problema durante la administración del suplemento, ni
tampoco en la toma de muestras necesarias para el análisis de resultados. Sin embargo,
al cabo del día 7 se observó un brote de aparente infección respiratoria en el criadero; fue
diagnosticada por el Médico Veterinario tratante por la presencia de signos como
estornudo y secreción nasal, afectando el 12% de la población equina total (potros y
animales adultos). Para el grupo control, 4 de los 10 animales previamente seleccionados
manifestaron signos como los mencionados anteriormente. Lo más destacable de la
situación es que ninguno de los animales pertenecientes al grupo control mostró ningún
síntoma ni se vio afectado durante y después de los 30 días del uso de Uprone®.
3.4 CORRELACIÓN DE LOS RESULTADOS CON OTROS ESTUDIOS
32
Recientemente se ha empezado a utilizar en la Medicina Veterinaria los polipéptidos
linforeticulares (terapia alternativa y coadyuvante) en pacientes sanos o animales con
enfermedades infecciosas, con el fin de determinar posibles cambios en los valores
sanguíneos y la presencia o ausencia de efectos adversos; entendiendo claramente que
la administración de estos contribuye al aumento de la respuesta inmune (Bernal,
Fuentes, Martínez y Zapata, 2012).
Durante el desarrollo de este estudio los resultados en el grupo tratamiento evidenciaron
primero el aumento de los eritrocitos, hematocrito, neutrófilos y linfocitos. Sin embargo,
hubo disminución de los linfocitos en algunos de los equinos pero siempre dentro de los
rangos normales; similar a los encontrados en los trabajos investigativos de Acero et al,
2011, Ballen, Durán y Godoy (2011), Bautista y Castiblanco (2011), Bedoya, García y
Donoso (2012) y Pérez, Contreras, Garavito, Fonseca y Acero (2012) donde el efecto
inmunomodulador de los polipéptidos linforeticulares logran mantener los valores del
hematocrito y de la línea blanca dentro de los valores normales aun cuando los pacientes
fueron sometidos a situaciones de estrés.
En segundo lugar los valores de globulinas e IgG fueron aumentando levemente, muy
pocos de los equinos a los que se les administró el suplemento dietario excedieron los
rangos normales. Y por último, ninguno de los animales del grupo tratamiento presentó
efectos colaterales. Mediante la toma de muestras sanguíneas y bajo parámetros de
tiempo promedio (30 días) se ha evidenciado que el uso del Uprone® aumenta los valores
de proteínas plasmáticas e IgG, y no existen hechos que confirmen la presencia de
efectos adversos durante el desarrollo de estudios en animales sanos, siendo
recomendado como terapia preventiva (Acero et al., 2011; Ballen et al., 2011; Bautista et
al., 2011; Díaz y Peñuela, 2011; Ruiz, Bastidas, Dangond y Velasco, 2011; Pérez et al.,
2012).
33
4. CONCLUSIONES
Los resultados hematológicos obtenidos durante el desarrollo del estudio, el grupo control y el grupo tratamiento no evidenciaron cambios altamente significativos que favorezcan el uso, empleo, vía de administración y dosis de los polipéptidos linforeticulares.
Respecto a la inmunoglobulina G tanto del grupo control como del grupo tratamiento, en general los equinos no presentaron cambios significativos que puedan sugerir una diferencia causada por el tratamiento con Uprone®.
A nivel de las proteínas plasmáticas (Globulina), si existió una variación de los resultados el cual se puede atribuir al uso con Uprone®, no siendo significativo por no sobrepasar los niveles normales.
El uso de Uprone® no mostró efectos adversos en los equinos a los cuales les fue suministrado.
34
5. RECOMENDACIONES
Continuar con la investigación de los efectos y el uso del Uprone® como suplemento dietario, mediante estudios con poblaciones, muestras, tiempos y periodos superiores que generen resultados más significativos.
Realizar estudios con el uso de Uprone® en poblaciones que presenten alguna alteración sistémica, para que el desarrollo del estudio sea significativo en cuanto a los procedimientos y resultados.
Debido a las dificultades del suministro de las cápsulas a los equinos, es necesario la investigación de métodos, medios o vías de administración del suplemento para un mejor aprovechamiento del mismo.
Es posible que debido a las diferentes variables presentes durante este estudio los resultados no hayan sido estadísticamente concluyentes.
Debido a que los estudios experimentales están limitados por aspectos de costos y por el tiempo estipulado del tratamiento a estudiar, es posible que los resultados no hayan sido estadísticamente concluyentes.
35
6. LISTA DE REFERENCIAS
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40
1. ANEXOS
ANEXO 1: Diseño factorial A X B
Statistix 8.0 datos uprone2, 11/06/2014,
12:59:23 p.m.
Descriptive Statistics for TTO = CONTROL
Mejía, G. (2005).
GLOBULINA HEMATIES HEMATOCRI IGG LINFOCITO
N 30 30 30 30 30
Mean 2.3847 8.8727 40.967 2286.2 31.967
SD 0.6751 1.2855 4.6423 447.40 9.2382
Variance 0.4558 1.6524 21.551 200165 85.344
SE Mean 0.1233 0.2347 0.8476 81.683 1.6867
C.V. 28.311 14.488 11.332 19.569 28.899
Minimum 1.2000 5.9400 28.000 1400.0 8.0000
1st Quarti 1.9675 7.7325 38.000 1869.2 25.000
Median 2.2150 8.9550 42.000 2310.0 32.000
3rd Quarti 2.9450 9.8800 44.250 2590.0 38.250
Maximum 4.2000 11.080 49.000 3320.0 49.000
NEUTROFIL PLAQUETAS
N 30 30
Mean 65.600 3.4260
SD 10.520 0.9017
Variance 110.66 0.8130
41
SE Mean 1.9206 0.1646
C.V. 16.036 26.318
Minimum 42.000 1.5700
1st Quarti 58.000 2.7825
Median 66.500 3.3250
3rd Quarti 72.250 3.9500
Maximum 92.000 5.3800
Descriptive Statistics for TTO = UPRONE
GLOBULINA HEMATIES HEMATOCRI IGG LINFOCITO
N 30 30 30 30 30
Mean 2.6770 9.8610 44.896 2061.9 34.700
SD 0.9330 1.2558 5.5166 369.80 8.3383
Variance 0.8706 1.5770 30.433 136755 69.528
SE Mean 0.1703 0.2293 1.0072 67.517 1.5224
C.V. 34.854 12.735 12.288 17.935 24.030
Minimum 1.4700 8.0600 35.000 1256.0 11.000
1st Quarti 1.9600 8.8775 41.000 1775.6 30.000
Median 2.4300 9.4550 43.000 2103.0 35.000
3rd Quarti 3.2300 10.885 50.250 2366.8 39.000
Maximum 5.1000 12.590 55.000 2724.0 55.000
NEUTROFIL PLAQUETAS
N 30 30
Mean 62.433 3.1597
SD 8.8695 0.5618
Variance 78.668 0.3156
42
SE Mean 1.6193 0.1026
C.V. 14.206 17.779
Minimum 43.000 2.2000
1st Quarti 58.500 2.6025
Median 62.000 3.2550
3rd Quarti 68.000 3.5725
Maximum 89.000 4.5800
43
ANEXO 2: Prueba Shapiro
Statistix 8.0 datos uprone2, 11/06/2014,
01:05:59 p.m.
Shapiro-Wilk Normality Test
Variable N W P
GLOBULINA 60 0.9411 0.0061
HEMATIES 60 0.9895 0.8849
HEMATOCRI 60 0.9718 0.1787
IGG 60 0.9864 0.7444
LINFOCITO 60 0.9782 0.3581
NEUTROFIL 60 0.9747 0.2465
PLAQUETAS 60 0.9746 0.2437
Statistix 8.0 datos uprone2, 11/06/2014,
01:07:50 p.m.
Shapiro-Wilk Normality Test
Variable N W P
GLOBULINA 60 0.9411 0.0061
HEMATIES 60 0.9895 0.8849
HEMATOCRI 60 0.9718 0.1787
IGG 60 0.9864 0.7444
LINFOCITO 60 0.9782 0.3581
NEUTROFIL 60 0.9747 0.2465
PLAQUETAS 60 0.9746 0.2437
GLOBULIN1 60 0.9870 0.7711
44
ANEXO 3: Prueba Tukey (anova)
Statistix 8.0 datos uprone2, 11/06/2014,
01:10:17 p.m.
Analysis of Variance Table for GLOBULIN1
Source DF SS MS F P
TTO 1 0.02840 0.02840 1.33 0.2647
Error TTO*EQUINO 18 0.38577 0.02143
PERIODO 2 0.35426 0.17713 21.95 0.0000
TTO*PERIODO 2 0.04057 0.02028 2.51 0.0951
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 0.29050 0.00807
Total 59 1.09949
Grand Mean 0.3820
CV(TTO*EQUINO) 38.33
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 23.52
Analysis of Variance Table for HEMATIES
Source DF SS MS F P
TTO 1 14.652 14.6520 3.58 0.0747
Error TTO*EQUINO 18 73.691 4.0939
PERIODO 2 3.334 1.6671 3.76 0.0329
TTO*PERIODO 2 0.659 0.3293 0.74 0.4832
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 15.970 0.4436
Total 59 108.306
45
Grand Mean 9.3668
CV(TTO*EQUINO) 21.60
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 7.11
Analysis of Variance Table for HEMATOCRI
Source DF SS MS F P
TTO 1 231.56 231.556 4.00 0.0609
Error TTO*EQUINO 18 1042.97 57.943
PERIODO 2 58.99 29.497 2.69 0.0812
TTO*PERIODO 2 11.46 5.732 0.52 0.5968
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 394.09 10.947
Total 59 1739.07
Grand Mean 42.931
CV(TTO*EQUINO) 17.73
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 7.71
Analysis of Variance Table for IGG
Source DF SS MS F P
TTO 1 754814 754814 4.23 0.0544
Error TTO*EQUINO 18 3208490 178249
PERIODO 2 3749722 1874861 25.70 0.0000
TTO*PERIODO 2 185955 92978 1.27 0.2919
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 2626530 72959
Total 59 1.052E+07
Grand Mean 2174.1
46
CV(TTO*EQUINO) 19.42
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 12.42
Analysis of Variance Table for LINFOCITO
Source DF SS MS F P
TTO 1 112.07 112.067 1.02 0.3253
Error TTO*EQUINO 18 1972.60 109.589
PERIODO 2 418.53 209.267 3.67 0.0354
TTO*PERIODO 2 48.53 24.267 0.43 0.6565
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 2051.60 56.989
Total 59 4603.33
Grand Mean 33.333
CV(TTO*EQUINO) 31.41
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 22.65
Analysis of Variance Table for NEUTROFIL
Source DF SS MS F P
TTO 1 150.42 150.417 0.85 0.3674
Error TTO*EQUINO 18 3167.23 175.957
PERIODO 2 317.23 158.617 2.91 0.0673
TTO*PERIODO 2 45.03 22.517 0.41 0.6645
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 1961.07 54.474
Total 59 5640.98
Grand Mean 64.017
CV(TTO*EQUINO) 20.72
47
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 11.53
Analysis of Variance Table for PLAQUETAS
Source DF SS MS F P
TTO 1 1.0640 1.06400 1.19 0.2891
Error TTO*EQUINO 18 16.0492 0.89162
PERIODO 2 1.4856 0.74282 2.55 0.0920
TTO*PERIODO 2 4.7146 2.35731 8.10 0.0012
Error TTO*EQUINO*PERIODO 36 10.4793 0.29109
Total 59 33.7928
Grand Mean 3.2928
CV(TTO*EQUINO) 28.68
CV(TTO*EQUINO*PERIODO) 16.38
Statistix 8.0 datos uprone2, 11/06/2014,
01:20:13 p.m.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of GLOBULIN1 for TTO
TTO Mean Homogeneous Groups
UPRONE 0.4037 A
CONTROL 0.3602 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.0378
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 0.0795
48
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of GLOBULIN1 for PERIODO
PERIODO Mean Homogeneous Groups
30 0.4663 A
15 0.3992 A
0 0.2804 B
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.0284
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 0.0695
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are 2 groups (A and B) in which the means
are not significantly different from one another.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of HEMATIES for TTO
TTO Mean Homogeneous Groups
UPRONE 9.8610 A
CONTROL 8.8727 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.5224
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 1.0982
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of HEMATIES for PERIODO
49
PERIODO Mean Homogeneous Groups
15 9.5380 A
0 9.5290 A
30 9.0335 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.2106
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 0.5149
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of HEMATOCRI for TTO
TTO Mean Homogeneous Groups
UPRONE 44.896 A
CONTROL 40.967 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.9654
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 4.1314
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of HEMATOCRI for PERIODO
PERIODO Mean Homogeneous Groups
0 43.800 A
15 43.450 A
30 41.544 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.0463
50
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 2.5580
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of IGG for TTO
TTO Mean Homogeneous Groups
CONTROL 2286.2 A
UPRONE 2061.9 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 109.01
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 229.14
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of IGG for PERIODO
PERIODO Mean Homogeneous Groups
15 2386.5 A
30 2312.7 A
0 1823.1 B
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 85.416
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 208.83
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are 2 groups (A and B) in which the means
are not significantly different from one another.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of LINFOCITO for TTO
51
TTO Mean Homogeneous Groups
UPRONE 34.700 A
CONTROL 31.967 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 2.7029
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 5.6817
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of LINFOCITO for PERIODO
PERIODO Mean Homogeneous Groups
15 35.900 A
30 34.400 AB
0 29.700 B
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 2.3872
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 5.8364
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are 2 groups (A and B) in which the means
are not significantly different from one another.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of NEUTROFIL for TTO
TTO Mean Homogeneous Groups
CONTROL 65.600 A
UPRONE 62.433 A
52
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 3.4250
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 7.1994
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of NEUTROFIL for PERIODO
PERIODO Mean Homogeneous Groups
0 67.200 A
15 63.000 A
30 61.850 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 2.3340
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 5.7062
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of PLAQUETAS for TTO
TTO Mean Homogeneous Groups
CONTROL 3.4260 A
UPRONE 3.1597 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.2438
Critical Q Value 2.973 Critical Value for Comparison 0.5125
Error term used: TTO*EQUINO, 18 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
Tukey HSD All-Pairwise Comparisons Test of PLAQUETAS for PERIODO
53
PERIODO Mean Homogeneous Groups
30 3.4690 A
0 3.3225 A
15 3.0870 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 0.1706
Critical Q Value 3.458 Critical Value for Comparison 0.4171
Error term used: TTO*EQUINO*PERIODO, 36 DF
There are no significant pairwise differences among the means.
