PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICAARGENTINA

Facultad de Ciencias Agrarias

Ingeniera en Produccin Agropecuaria

Efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre la germinacin y el crecimiento vegetativo temprano de Chloris gayana Kunth.

Tesis de grado presentada para optar al ttulo de Ingeniero en produccin Agropecuaria en Pontificia Universidad Catlica Argentina.

Autor: Avaca, Federico Martn

Profesor tutor: Garca, Mara Dina

Profesor co-tutor: Pesqueira, Julieta

Fecha: 29 de abril de 2015

Modalidad: Experimental

Agradecimientos

A la Universidad Nacional de Lomas de Zamora (UNLZ) por permitirme realizar los ensayos experimentales en sus establecimientos.

A las Doctoras Mara Dina Garca y Julieta Pesqueira por su orientacin, supervisin, y disposicin para llevar adelante el proyecto.

A mi familia y amigos por apoyarme en todo momento a lo largo de la carrera.

ResumenLos objetivos de este trabajo fueron: i) determinar el efecto de la salinidad y la alcalinidad sobre la germinacin final y el tiempo al 50% de germinacin (T50) de 4 cultivares de C. gayana y ii) estudiar las respuestas de plantas de C. gayana cv. Finecut a la salinidad y alcalinidad. Las semillas se incubaron durante 21 das en soluciones que contenan (mM) 0, 100 y 200 de NaCl combinadas con dos niveles de pH: 5,8 y 9,5. Las plantas se cultivaron en soluciones nutritivas que contenan (mM) 0 y 200 de NaCl y dos niveles de pH: 5,8 y 8,5. La combinacin 0 mM de NaCl-pH=5,8 se consider el control en ambos experimentos. La germinacin final y el T50 de todos los cultivares mostraron valores similares a los del control con 100 mM de NaCl y pH 9,5. Todos los cultivares cuadriplicaron el T50 en 200 mM de NaCl respecto del control, exceptoTolgar que slo lo duplic. En las mismas condiciones, el incremento del pH de 5,8 a 9,5 increment an ms el T50 de los cultivares Finecut, Tolgar y Katambora. El cultivo de plantas de C. gayana en una solucin nutritiva con 200 mM de NaCl indujo la disminucin del peso seco del vstago (29 %) y la raz (49%), del contenido relativo de agua (6%), del contenido de K+ y Ca2+ y de la relacin [K+] / [Na+] y el aumento de la relacin V/R y del contenido de Na+ y Cl-, en relacin a los valores de las plantas control. En cambio, el incremento del pH de 5,8 a 8,5 solamente indujo el aumento de la MFE (24%) y del contenido de Na+ del vstago de las plantas cultivadas en las soluciones sin agregado de NaCl. En conclusin, para condiciones similares a las existentes en las zonas marginales de la Cuenca del Salado (10 dSm-1 y pH 8,5), todos los cultivares de C. gayana evaluados mostraron porcentajes de germinacin similares al control. La alcalinidad tuvo poco efecto sobre el crecimiento de las plantas de C. gayana cv. Finecut, ya sea en ausencia o presencia de NaCl en la solucin nutritiva (0 y 200 mM, respectivamente). Por lo tanto, desde el punto de vista de la tolerancia a la alcalinidad, C. gayana podra mostrar un nivel de crecimiento adecuado en los suelos salino/alcalinos de la Cuenca del Salado.

INDICEResumenIII1INTRODUCCION12OBJETIVOS63MATERIALES Y METODOS63.1Material Vegetal73.2Germinacin de C. gayana en condiciones de alcalinidad y salinidad73.2.1Peso de las semillas73.2.2Viabilidad de las semillas y efecto del buffer Tris 10 mM sobre la germinacin final.83.2.3Efecto de la salinidad y alcalinidad83.2.3.1Porcentaje de germinacin final93.2.3.2Tiempo hasta el 50% de germinacin (T50)103.2.4Cultivo de plantas de C. gayana cv. Finecut en condiciones controladas103.2.4.1Preparacin del sustrato103.2.4.2Obtencin de las plntulas y condiciones de cultivo113.2.4.3Tratamientos y condiciones de cultivo123.3Determinaciones143.3.1Cuantificacin del peso seco (Ps) y relacin vstago-raz (V/R)143.3.2Contenido relativo de Agua (CRA) y masa foliar especfica (MFE)143.3.3Contenido de iones153.4Anlisis estadstico164RESULTADOS164.1Germinacin de C. gayana en condiciones de alcalinidad y salinidad.164.1.1Peso de las semillas164.1.2Viabilidad de las semillas y efecto de 10 mM de Tris sobre la germinacin final.164.1.3Efectos de la salinidad y la alcalinidad174.1.3.1Porcentaje de germinacin final174.1.3.2Tiempo hasta el 50% de germinacin (T50)184.2Efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre plantas de C. gayana cv. Finecut bajo condiciones controladas224.2.1Peso seco del vstago (PSV), peso seco de la raz (PSR), y relacin peso seco vstago-raz (V/R)234.2.2Contenido relativo de agua (CRA) y masa foliar especfica (MFE)234.2.3Contenido de iones244.2.3.1Contenido de Na+244.2.3.2Contenido de K+254.2.3.3Relacin [K+]/[Na+]264.2.3.4Contenido de Ca2+274.2.3.5Relacin de los contenidos de Ca2+ del vstago y la raz284.2.3.6Contenido de Cl-284.2.3.7Relacin de los contenidos de Cl- del vstago y la raz285DISCUSION296CONCLUSIONES337BIBLIOGRAFA34

ABREVIATURAS Y SIMBOLOSANVAAnlisis de la varianzaCGrado centgradoCEeConductividad elctrica del extracto de pasta saturadoCRAContenido relativo de aguaDDSDas despus de la siembraDFFFDensidad de flujo fotnico fotosintticogGramohhoraLLitroMFEMasa Foliar especificamgmiligramomlmililitromMmiliMolarPfPeso frescoPsPeso secoPSRPeso seco de la razPSVPeso seco del vstagoPtPeso turgenteT50Tiempo hasta el 50% de germinacinTrisTris(hidroximetil)aminometanoPMPeso molecular

ndice de tablasTabla 1. Caracterizacin de diferentes tipos de suelos afectados por la salinidad y sus niveles de severidad (promedio para 1 m de profundidad del suelo) (adaptado de Wicke et al., 2011). Pag 2

Tabla 2. Contenido de NaCl, de Tris(hidroximetil)aminometano (Tris) y pH de las soluciones de imbibicin. Pag 8

Tabla 3. Concentracin de sales de la solucin nutritiva bsica (adaptada de la solucin nutritiva N6, Chu et al., 1978). Pag 10

Tabla 4. Concentracin de macro y micronutrientes de la solucin nutritiva bsica de crecimiento (adaptada de la solucin nutritiva N6, Chu et al., 1978). Pag 12

Tabla 5. Contenido de NaCl, pH y Conductividad elctrica de los tratamientos aplicados a plantas de C. gayana cv. Finecut. Pag 14

Tabla 6. Peso de 1000 semillas de diferentes cultivares de C. gayana. Media EEM. Pag 16

Tabla 7. Peso seco del vstago (PSV), raz (PSR) y relacin V/R de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Media EEM. Pag 23

Tabla 8. Variacin del CRA y la MFE de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Media EEM. Pag 24Tabla 9. Variacin en la relacin [K+] / [Na+] en vstago y raz de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Media EEM. Pag 26

Tabla 10. Variaciones de los contenidos Cl- en el vstago, la raz, y la relacin de concentraciones entre el vstago y la raz de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Media EEM. Pag 28

ndice de figurasFigura 1. Suelos afectados por salinidad a nivel global, discriminados por tipo y severidad. Adaptado de Wicke et al., 2011. Pag 1

Figura 2. Semillas de los cultivares de C. gayana utilizados en los experimentos Pag 6

Figura 3. Plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en hidroponia, bajo 16 h de fotoperiodo. Pag 12

Figura 4. Efecto del buffer Tris sobre la germinacin de diferentes cultivares de C. gayana. Barras EEM. Pag 17

Figura 5. Efecto del cultivar (Katambora, Toro, Tolgar y Finecut) sobre el porcentaje final de germinacin C. gayana. Barras EEM. Pag 18

Figura 6. Efectos del contenido de 0, 100 y 200 mM de NaCl sobre el porcentaje de germinacin de diferentes cultivares de C. gayana. Barras EEM. Pag 18

Figura 7. Efecto de diferentes concentraciones de NaCl (0,100 y 200 mM) y pHs (5,8 y 9,5) sobre la evolucin diaria de la germinacin de diferentes cultivares de C. gayana cv. Finecut (A), Toro (B), Tolgar (C) y Katambora (D). Media EEM. Pag 19-20

Figura 8. Efectos de la concentracin de NaCl (0, 100 y 200 mM) y el pH (5,8 y 9,5) sobre el tiempo al 50% de germinacin (T50) de semillas de los cultivares de C. gayana Finecut (A), Toro (B), Tolgar (C) y Katambora (D). Barras EEM, letras diferentes indican diferencias significativas entre tratamientos para cada cultivar. Pag 22

Figura 9. Contenido de Na+ del vstago y la raz de plantas de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5).Barras EEM Pag 25

Figura 10. Contenido de K+ en vstago y raz de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Barras EEM. Pag 26

Figura 11. Variacin del contenido de Ca2+ en vstago y raz en de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Barras EEM. Pag 27

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INTRODUCCIONSegn la Fao/Unesco se estima que la superficie global afectada por la salinidad y la alcalinidad supera las 900 millones de hectreas (Wicke et al., 2011). Para el ao 2050, se calcula que la produccin de alimentos a nivel mundial deber crecer un 57% para abastecer al mundo. Esto introducir en el contexto agropecuario un intenso debate por la cantidad de superficie cultivable, al mismo tiempo que la necesidad de un mejor aprovechamiento de los suelos que hoy sufren algn tipo de degradacin, ya sea por salinidad/sodicidad y/o por erosin (Mahjoory, 2011).

Figura 1. Suelos afectados por salinidad a nivel global, discriminados por tipo y severidad. Adaptado de Wicke et al., 2011.

En Argentina, solamente en la provincia de Buenos Aires, 7 Millones de ha (24% de la superficie de la provincia) estn ocupadas por suelos con problemas de hidrohalomorfismo (Miaczynski, 1995). La gran mayora de estos suelos se ubican en la Cuenca del Salado, donde tambin existen condiciones de alcalinidad, y su aprovechamiento algunas veces representa todo un desafo (Sanmartino, 2010). Esta regin se caracteriza por un relieve llano con pendiente menor a 0,5 % y con sistemas fluviales poco desarrollados (Damario y Pascale, 1988). Dentro de los suelos que predominan en esta cuenca se encuentran los Natracualfes y Natralcuoles tpicos, que a nivel provincial totalizan un rea de ms de 4,7 millones de ha (aproximadamente un 16% de la superficie total). Estos suelos poseen tpicamente un horizonte arcilloso, baja permeabilidad y alto contenido de sales sdicas (Miaczynski, 1995). El rgimen hdrico regional se caracteriza por un dficit de lluvias en verano y un exceso durante el invierno. Esto, sumado a una pendiente reducida, un desage insuficiente y al carcter alcalino-sdico de los suelos (Crescimanno et al., 1995), determina que sea frecuente la alternancia de anegamiento y sequa. Los suelos salinos suelen presentar distintas combinaciones de sales. Los iones ms comnmente encontrados son el Cl- y los sulfatos de Na+, Ca2+ y Mg2+. Las sales mencionadas se consideran neutras debido a que no alcalinizan el suelo. Por el contrario, la presencia de carbonato y bicarbonato de Na+ causa un incremento del valor del pH de la solucin edfica. Suelos halomrficos es el trmino general para referirse a los suelos formados bajo condiciones de exceso de sales neutras o alcalinas. La sodicidad o alcalinizacin se desarrolla cuando en la solucin del suelo existe una concentracin elevada de sales sdicas, de tipo carbonato y bicarbonato de sodio, capaces de sufrir hidrlisis alcalina (Etchevehere, 1976). La salinidad de la solucin del suelo se cuantifica en trminos de conductividad elctrica o de potencial osmtico. Cuanto ms alta es la concentracin salina, mayor es la conductividad y menor el potencial osmtico. La alcalinizacin del suelo se produce si el porcentaje de Na+ intercambiable (PSI, porcentaje de Na+ respecto a los dems cationes adsorbidos) supera el 15 % (Miaczynski, 1995). Si bien existen diversas clasificaciones de los suelos afectados por sales, comnmente se acepta la siguiente clasificacin: a) suelo salino (pH < 8,2; PSI < 15, CEe > 4 dSm-1), sin carbonatos en el extracto de la pasta del suelo saturado, y b) suelo alcalino (pH 8,2; PSI 15, CEe variable, frecuentemente < 4 dSm-1), con presencia de bicarbonato y carbonato de Na+ en el extracto de la pasta del suelo saturado (Villafae, 2000). Adems, la salinidad y la alcalinidad o sodicidad pueden afectar a los suelos en diversas combinaciones y niveles de severidad (Wicke et al., 2011, Figura 1 y Tabla 1).

Tabla 1. Caracterizacin de diferentes tipos de suelos afectados por la salinidad y sus niveles de severidad (promedio para 1 m de profundidad del suelo) (adaptado de Wicke et al., 2011).

Tipo de suelo salinoIndicadorNivel de severidad

1 2 LeveModeradoAltoExtremo

SdicoPSI (%)15 - 2020 - 3030 - 40> 40

3 CEe (dSm-1)< 4< 4< 4< 4

SalinoPSI (%)< 15< 15< 15< 15

4 CEe (dSm-1)2 - 44 - 88 - 16> 16

Salino-sdicoPSI (%)15-20/4-8

15-20/4-1630-40/4-830-40/8-1615-20/ >2520-30/ 16-2540-50/4-8

20-30/ >2530-40/ >1640-50/ >8>50/ >4

5 CEe (dSm-1)6 7 8 9

El contenido de sales en los suelos, especialmente cloruro y sulfato de Na+, afecta el crecimiento de las plantas y modifica sus caractersticas morfo-anatmicas y fisiolgicas (Kalaji et al., 1993). Tales alteraciones se deben a efectos osmticos y a desbalances inicos inducidos por la salinidad (Rodrguez Prez, 2006; Munns et al., 2008).En los ltimos aos se incrementaron los estudios sobre los efectos de la alcalinidad sobre la germinacin y el crecimiento de las plantas. La alcalinizacin y estabilizacin del pH de la solucin nutritiva normalmente se ha logrado mediante el agregado del tampn Tris(hidroximetil)aminometano (lo cual permite independizar completamente el pH de la concentracin de sal) (Singh et al., 2002) o mediante la combinacin de diferentes proporciones y concentraciones de bicarbonato y carbonato de Na+ (lo cual genera soluciones con distintos niveles de alcalinidad y salinidad) (Liu et al., 2014). Estas investigaciones, usualmente realizadas con especies poceas o leguminosas, han mostrado que las sales alcalinas producen un efecto ms perjudicial que las sales neutras sobre la germinacin y el crecimiento de especies tales como Medicago sativa, Triticum aestivum, Oriza sativa, Vicia faba L., Panicum virgatum, Chloris virgata, entre otras (Li et al., 2010, Guo et al., 2010, Wang et al., 2011, Radi et al., 2012, Liu et al., 2014, Yang et al, 2008). En Panicum virgatum (Liu et al., 2014) y Chloris virgata (Yang et al., 2008) se comprob que las sales alcalinas (NaHCO3 y Na2CO3) producen un efecto ms negativo que las sales neutras (NaCl y Na2SO4) sobre parmetros tales como la germinacin, el rea foliar y la fotosntesis neta. Al igual que en Setaria viridis (Guo et al., 2011) las sales alcalinas son ms perjudiciales que las sales neutras en el porcentaje de germinacin, el crecimiento relativo y el contenido de agua, y modifican las actividades inicas dentro de la planta (disminuye el contenido de K+ y aumenta el de Na+). En condiciones de estrs por salinidad, el mantenimiento de la homeostasis de los iones K+ y Na+ es de vital importancia para la clula vegetal. Muchas de las enzimas presentes en el citosol dependen de este equilibrio para mantener el potencial de membrana, muy importante para el transporte de iones (Bartels y Ramanjulu, 2005; Muuns, 2002). Un nivel elevado de Na+ en el suelo limita el suministro de K+ a las clulas de la raz y, a nivel celular, afecta las funciones enzimticas (Tester y Davenport, 2003; Shi et al., 2003). Algunos de los mecanismos responsables de mantener niveles bajos de Na+ citoplasmtico son la compartimentalizacin en la vacuola (Munns, 2002), la exclusin del Na+ a nivel de la raz, la discriminacin eficiente entre Na+ y K+, entre otros (Rodrguez Prez, 2006). Los transportadores de alta afinidad de K+ o HKT, presentes en la membrana celular, contribuyen a la absorcin del ion Na+ en suelos salinos y, en presencia de niveles elevados de Na+, estos transportadores podran tener ms importancia en el transporte de Na+ que de K+ (Rus et al., 2004; Mser et al., 2002; Fu y Luan, 1998)El Ca2+ es un ion importante para la osmoregulacin, as como tambin cumple funciones estructurales y funcionales, tanto en las membranas como en la pared celular (Kopittke & Menzies, 2005, Grattan and Grieve, 1999). La absorcin de Ca2+ desde la solucin del suelo disminuye en condiciones de salinidad debido a interacciones inicas, precipitacin e incremento de iones que disminuyen la actividad del Ca2+ (Grattan and Grieve, 1999). La masa foliar especfica, expresada generalmente en g cm-2, determina la cantidad de biomasa por unidad de rea foliar. A nivel de la hoja, junto con el contenido de clorofila determinan la capacidad de intercepcin de la luz. El contenido relativo de agua expresa la cantidad de agua que contiene un tejido vegetal en relacin al contenido mximo posible para ese tejido (Taiz y Zeiger, 2006). Debido a que la salinidad en primera instancia induce un estrs osmtico, la respuesta de la masa foliar especfica y del contenido relativo de agua, es cualitativamente la misma que la inducida en condiciones de estrs hdrico (Taiz y Zeiger, 2006; Munns, 2002). En diferentes especies del gnero Brachiaria (Trin.) se observo que el estrs hdrico normalmente induce una disminucin del contenido de agua y de la masa foliar (Guenni et al., 2006). Entre otros factores ambientales que tambin afectan la MFE se encuentran la irradiancia, la temperatura y la disponibilidad de nutrientes (Munns, 2002). La disminucin del contenido relativo de agua de 100 % a 90 % est relacionada con la reduccin de la expansin celular y el cierre del poro estomtico de la hoja, mientras que contenidos entre 90 % y 80 % estn relacionados con modificaciones en la composicin de los tejidos y algunas alteraciones en las tasas relativas de fotosntesis y respiracin (Gonzlez y Gonzlez-Vilar, 2001; Soares-Cordeiro et al., 2009).Chloris gayana Kunth. es una forrajera originaria del este de frica, algama, perenne, la cual posee muchos ecotipos naturales que difieren en gran medida entre s respecto a un rango de caractersticas morfolgicas, agronmicas y de calidad nutricional. Esta especie, ampliamente cultivada en las regiones tropicales y subtropicales del mundo, se implanta fcilmente, produce gran nmero de semillas y resiste condiciones de sequa y salinidad (Boonman, 1993). Sin embargo, en un estudio que compara C. gayana con Cynodon dactylon, Leptochloa fusca, Distichlis spicata, Paspalum vaginatum y Medicago sativa, la clasifica como tolerante a condiciones de salinidad intermedia (Pasternak et al., 1993). En Argentina, C. gayana se introdujo inicialmente en Tucumn y actualmente presenta una amplia distribucin en el pas debido a su gran adaptacin, tanto a climas subtropicales como climas templados, sean stos semiridos o subhmedos (Martn, 2010). Los cultivares de C. gayana se clasifican en dos grandes grupos: diploides y tetraploides (Boonman, 1993). Los cultivares Finecut, Katambora (Loch y Harvey, 1999) y Tolgar son diploides, y el cultivar Toro es tetraploide (Ribotta et al. 2013). El cultivar Finecut, desarrollado a partir del cv. Katambora, se destaca por presentar tolerancia a la salinidad y al anegamiento, por lo que su implantacin en ambientes con problemas de hidrohalomorfismo (como es el caso de la Cuenca del Salado) permitira aumentar considerablemente la productividad de los mismos (Bertello, 2010). Taleisnik et al. (1997) encontraron una amplia variabilidad en las respuestas a la salinidad en funcin de los cultivares de C. gayana, as como tambin en las productividades de cultivares tetraploides. Las reducciones en los rendimientos de estos cultivares bajo un estrs por salinidad se explican por disminuciones de la germinacin y del peso seco del tallo y la raz, y un aumento de la relacin vstago/raz (Cccoli et al., 2011). Tambin se ha informado un mayor nmero de hojas senescentes, menor rea foliar y menos estolones por planta (De Luca et al., 2001). Los niveles de incremento del Na+ y disminucin del K+ en los tejidos vegetales en respuesta a la salinidad dependen del genotipo. La presencia de NaCl en la solucin del suelo en contacto con las races induce un incremento del contenido de Na+ y una disminucin del contenido de K+ en hojas y races, lo cual se traduce en una disminucin de la relacin [K+] / [Na+], en comparacin con las plantas cultivadas en ausencia de NaCl. La relacin [K+] / [Na+] de las hojas frecuentemente se ha asociado con la tolerancia relativa a la salinidad en genotipos emparentados. Sin embargo, especies o genotipos diferentes muestran distintos grados de asociacin entre la tolerancia a la salinidad y la capacidad de mantener un nivel foliar de Na+ relativamente bajo (Munns y Tester, 2008). La relacin [K+] / [Na+] encontrada en C. gayana est dentro de las observadas en monocotiledneas halfitas (Cccoli et al., 2011).Si bien existen numerosos estudios sobre los efectos de la salinidad en la germinacin y el crecimiento de las plantas, los estudios sobre los efectos de la alcalinidad son mucho ms limitados, lo cual podra explicarse por las dificultades prcticas que representa mantener valores altos de pH en el medio en contacto con las races (Singh et al., 2002). Hasta hoy, la mayora de los estudios para examinar los efectos de la salinidad sobre la germinacin de las semillas y el crecimiento vegetativo de C. gayana se llev a cabo con sales individuales neutras (especialmente NaCl) (Keiffer y Ungar, 1997; Khan et al., 2000; Taleisnik et al., 1997). Por lo tanto, hay poca informacin sobre el efecto de la alcalinidad sobre la germinacin de las semillas y el crecimiento y desarrollo de plantas de C. gayana. Evaluar la respuesta de C. gayana a condiciones de salinidad y alcalinidad en los estadios de germinacin y crecimiento vegetativo temprano aportara informacin til para discriminar genotipos potencialmente tiles como fuente de forrajes para la regin.

OBJETIVOS Objetivo general: Estudiar los efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre la germinacin y el crecimiento vegetativo temprano de Chloris gayana Kunth.

Objetivos especficos:

I. Determinar el porcentaje de germinacin final y el tiempo hasta el 50% de germinacin (T50) de semillas de diferentes cultivares de Chloris gayana Kunth. en condiciones de salinidad y alcalinidad.

II. Evaluar los efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre el crecimiento, el desarrollo, el contenido relativo de agua, el contenido de cationes (K+, Na+ y Ca2+) y del anin Cl- de plantas de Chloris gayana Kunth. cv. Finecut cultivadas bajo condiciones controladas. MATERIALES Y METODOS

Material Vegetal

En los dos experimentos realizados se utiliz semilla comercial de C. gayana, la cual est compuesta por unidades de dispersin que comprenden el cariopse encerrado en (de adentro hacia afuera) las glumelas, las glumas y una cubierta agregada por la empresa que la comercializa. De aqu en adelante las unidades de dispersin se denominarn semillas.

Figura 2. Semillas de los cultivares de C. gayana utilizados en los experimentos.

Las semillas del cv. Finecut se obtuvieron de la empresa Oscar Peman & Asociados S.A. cosecha del ao 2009, mientras que las de los cvs. Katambora, Tolgar y Toro se obtuvieron de la compaa Premium Seeds-Agri & Turf Solutions de cosecha 2011 (Figura 2). Las semillas se conservaron en bolsas de polietileno en heladera a 4C hasta su utilizacin.Para evaluar los efectos de la salinidad y alcalinidad sobre la germinacin de C. gayana (objetivo 1) se utilizaron semillas de tres cultivares diploides (Katambora, Finecut, Tolgar) y uno tetraploide (Toro) de C. gayana. La evaluacin de los efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre el crecimiento y desarrollo de C. gayana (objetivo 2) se realiz en plantas del cv. Finecut.

Germinacin de C. gayana en condiciones de alcalinidad y salinidad

Peso de las semillas

Para determinar el peso de las semillas se pesaron 6 repeticiones de 100 semillas de cada cultivar. Los valores obtenidos se multiplicaron por el factor 10 para lograr el peso de mil semillas (P1000).

Viabilidad de las semillas y efecto del buffer Tris 10 mM sobre la germinacin final.

Semillas de los cuatro cultivares de C. gayana se incubaron en una cmara de cultivo durante 10 das bajo un fotoperiodo de 12 h. Las semillas (0,1 g por caja para todos los cultivares y 6 repeticiones por tratamiento) se hidrataron con 2 ml de agua destilada (Control) o solucin 10 mM del buffer Tris(hidroximetil)aminometano (Tris). El pH del agua y la solucin 10 mM de Tris se ajust a 5,8 utilizando HNO3 o KOH. Diariamente se registraron las semillas germinadas, las temperaturas (media EEM, en C) mxima (25,7 0,26) y mnima (24,3 0.23), y cada 48 h se reemplazaron tanto la solucin de Tris como el agua. Las semillas germinadas (aquellas que mostraban una radcula 2 mm longitud) se contaron y descartaron diariamente hasta los 10 das despus de la siembra (DDS). Con el fin de evaluar el nivel de dormicin (semillas viables no germinadas), se determin la viabilidad de las semillas incubadas en agua que no haban germinado al final del experimento. Para esto se utiliz cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio al 1% en solucin buffer. El buffer fosfato utilizado para disolver la sal de tetrazolio fue constituido a partir de la mezcla en proporcin 2:3 de dos soluciones que llamamos A y B. La solucin A, una dilucin de 9,078 g de KH2P04 en 1000 ml de agua destilada, y la solucin B una dilucin de 11,876 g de Na2HPO4 en 1000ml de agua destilada. Las mismas se mezclaron segn las proporciones mencionadas anteriormente y luego a 100 ml de solucin buffer se le agreg 1g de sal de tetrazolio para obtener la solucin al 1% (Peretti, 1994; ISTA, 2007). Las semillas sin germinar de cada cultivar se enjuagaron 3 veces con agua destilada y se colocaron en cajas de Petri limpias con doble papel de filtro. Luego se separaron las semillas vanas de las que posean cariopse desarrollado. Las ltimas se incubaron en agua destilada bajo las mismas condiciones de temperatura y fotoperiodo durante otros 7 das. Luego se retir el exceso de agua de las cajas, se agregaron 5 ml de solucin de tetrazolio por caja de Petri y se incubaron 4 horas a 30C. Luego se clasificaron como semillas viables o no viables tomando como criterio positivo que partes del embrin estuviera teido de rojo. La viabilidad final se determin mediante la suma de las semillas germinadas y remanentes viables.

Efecto de la salinidad y la alcalinidad

Para determinar los efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre diferentes cultivares de C. gayana se utiliz un diseo factorial completamente aleatorizado (DCA) de 3 niveles de NaCl (0, 100 y 200 mM), dos niveles de pH (5,8 y 9,5) y 4 cultivares (Finecut, Katambora, Tolgar y Toro) con seis repeticiones. El tratamiento 0 mM de NaCl y pH 5,8 se consider el control. Las semillas se colocaron sobre dos discos de papel de filtro en cajas de Petri y se embebieron con 5 ml del tratamiento correspondiente (Tabla 2). El pH se ajust con soluciones de HNO3 o KOH.

Tabla 2. Contenido de NaCl, de Tris(hidroximetil)aminometano (Tris) y pH en las soluciones de imbibicin.

TratamientosNaCl (mM)NaCl (g L-1)Tris (mM)pH

NaCl 0 - pH=5,8 (Control) 00105,8

NaCl 0 - pH=9,500109,5

NaCl 100 - pH=5,81005,85105,8

NaCl 100 - pH=9,51005,85109,5

NaCl 200 - pH=5,820011,7105,8

NaCl 200 - pH=9,520011,7109,5

Durante el transcurso del experimento (21 das desde el comienzo de la imbibicin), las semillas se mantuvieron bajo un fotoperiodo de 12 h y temperaturas mxima (a la luz) y mnima (en oscuridad), al nivel de las cajas de Petri, de 26,6 C 0,24 y 24,2 C 0,23, respectivamente. Las soluciones de imbibicin se reemplazaron por solucin fresca a las 24 h del comienzo de la imbibicin y luego cada 48 h. Las cajas de Petri se cubrieron con polietileno trasparente para evitar la evaporacin. Diariamente se contaron y extrajeron las semillas germinadas (aquellas que mostraban una radcula 2 mm de longitud).

Porcentaje de germinacin final

El porcentaje de germinacin final se calcul el da 21 despus del comienzo de la imbibicin mediante la siguiente frmula:

Porcentaje de germinacin final = (NSGTi / NSGAi) x 100Donde, NSGTi = Nmero de semillas del cultivar i germinadas en un tratamientoNSGAi = Nmero de semillas del cultivar i germinadas en el control

Tiempo hasta el 50% de germinacin (T50)

Para determinar el T50 de cada cultivar se utiliz el modelo de regresin no lineal. Este modelo estadstico trabaja con curvas de tipo sigmoideas. Debido a que la germinacin no fue lineal para cada tratamiento, se consider que este modelo tendra un ajuste ms preciso. Dentro de los modelos posibles en el programa estadstico Infostat, se utiliz el de Gompertz.

El modelo utilizado en esta funcin fue:

Modelo Germinacin = *exp(- *exp(-*Da))

Para determinar el T50 de la poblacin se utilizaron los datos de salida (, , y ) de cada repeticin y se aplic la siguiente ecuacin: Tiempo medio de germinacin (T50) = +((ln() ln(ln(/50) ))/

Donde, T50 es el tiempo (en das) de germinacin en el que germinaron el 50% de las semillas de C. gayana en cada tratamiento.

Cultivo de plantas de C. gayana cv. Finecut en condiciones controladas

Preparacin del sustrato

El sustrato, mezcla de perlita-vermiculita (3:1), se lav con agua corriente durante 30 minutos, se trat con 15 mM de Ca(NO3)2 durante 2 horas, se enjuag 2 veces con agua destilada y se sumergi durante otras 2 horas en la solucin nutritiva bsica (Tabla 3) al 10%.

Tabla 3. Concentracin de sales de la solucin nutritiva bsica (adaptada de la solucin nutritiva N6, Chu et al., 1978).Macronutrientesmg L-1mM

MgSO4 7H2O185 0,751

KH2PO4 400 3,476

KNO3 707,5 6,997

(NO3)2Ca 4H2O1000 4,234

(NH4)2SO4 463 3,505

Micronutrientes

H3BO3 1,6 0,02

MnSO4 H2O 3,3 0,02

ZnSO4 7H2O 1,5 0,02

KI 0,8 0,02

FeSO4 7H2O 27,8 0,1

Na2EDTA 37,30,1

Na2MoO4 2H2O 0,1 4,1 x 10-4

CuSO4 5H2O 0,1 4,0 x 10-4

Cl2Ca 2H2O 20 0,136

Sodio

Na2HPO4 70,98 0,5

Obtencin de las plntulas y condiciones de cultivo

Previo a la siembra, las semillas de C. gayana cv. Finecut se sumergieron en una solucin que contena 2 mmol L-1 de KCl y 1 mmol L-1 de CaCl2 y se mantuvieron sobre un agitador orbital durante 4 horas. Luego se enjuagaron dos veces con agua destilada y se dejaron secar a temperatura ambiente.Las semillas se sembraron en macetas de plstico de 1 L de volumen rellenas con sustrato. Las macetas se cubrieron con polietileno negro y se mantuvieron en oscuridad a una temperatura de 24 C 1 C durante 4 das. Desde los 5 das despus de la siembra (DDS) hasta los 30 DDS (finalizacin del experimento) las plantas se mantuvieron bajo un fotoperiodo de 16 h con una densidad de flujo fotnico fotosinttico (DFFF) de 300 mol m-2 s-1 al nivel superior de las plantas, un promedio de temperaturas (media EEM en C) mxima y mnima de 28,7 1,4 y 21,5 0,32, respectivamente, y la humedad relativa se mantuvo entre el 70 % y 80 % (Figura 3).

Figura 3. Plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en hidroponia, bajo 16 h de fotoperiodo. A los 5 DDS se realiz un raleo y otro a los 11 DDS. En el primer raleo se dejaron en cada punto de siembra (4 puntos de siembra equidistantes por maceta) 2 plantas lo ms parejas posible en cuanto a altura y cantidad de hojas emergidas. En el segundo raleo se dejaron 4 plantas de 3 a 4 cm de altura por maceta, ms o menos equidistantes.

Tratamientos y condiciones de cultivo

A los 13 DDS, las plantas con al menos dos hojas emergidas se pasaron a la solucin de crecimiento (Tabla 4) y se comenzaron a aplicar los tratamientos. El diseo experimental consisti en un factorial completamente aleatorizado (DCA) de dos niveles de NaCl (0 y 200 mM) y 2 niveles de pH (5,8 y 8,5), con seis repeticiones. La solucin 0 mM de NaCl y pH = 5,8 se consider el control. La concentracin final de NaCl se alcanz en cuatro etapas (50 mM, 100 mM, 150 mM y 200 mM los das 13, 15, 17 y 19 DDS, respectivamente).

Tabla 4. Concentracin de macro y micronutrientes de la solucin nutritiva bsica de crecimiento (adaptada de la solucin nutritiva N6, Chu et al., 1978).Macronutrientesmg L-1mMP.M (g)

N (Nitrato de potasio)100,227,1514,01

N (Nitrato de calcio)118,638,4714,01

N (Amonio) 98,227,0114,01

P 91,152,9430,97

S48,11,50 32,066

K297,367,6139,09

Mg 18,250,7524,30

Ca (del CaCl) 5,440,1440,08

Ca (del Ca(NO3)2169,684,2340,08

Micronutrientes

Cl (del ClCa) 9,660,2440,08

Cl (del ClCo6H2O) 0,0075 0,000240,08

Fe 5,60,1055,85

B 0,280,0310,81

Mn 1,070,0254,94

Zn 0,340,0165,39

I 0,6120,00126,90

Cu 0,0250,00 63,55

Mo 0,020,00 95,94

Na (del NaEDTA) 4,60,20 22,99

Na (del Na2HPO4)22,991,00 22,99

La solucin de crecimiento control (Tabla 5) estaba compuesta por la solucin nutritiva bsica (N6 modificada, tablas 3 y 4) pero con la concentracin de los macronutrientes reducida al 25 %, los micronutrientes al 50 % (excepto el Fe que se mantuvo al 100%) y 5 mM de Tris. La concentracin de Na+ en el tratamiento control fue de 1,2 mmol L-1 debido al agregado de 0,5 mmol L-1 de Na2HPO4 y a la presencia de 0,1 mmol L-1 de Na2EDTA en la solucin nutritiva. El Na2HPO4 se agreg para cubrir los requerimientos mnimos de Na+ de las plantas, ya que C. gayana es una especie con metabolismo fotosinttico C4, en la cual el Na+ cumple una funcin metablica crtica. El pH se ajust a 5,8 con soluciones de HNO3 o KOH. La salinidad de los tratamientos se obtuvo mediante el agregado de NaCl. En todos los tratamientos se mantuvo la concentracin 10 mM de Tris desde el comienzo del experimento hasta la cosecha. Las plantas se pulverizaron diariamente con FeSO4 (0,2 %) y ZnSO4 (0,1 %) para evitar deficiencias de estos nutrientes. El recambio de solucin se realiz cada 3 o 4 das. El pH de las soluciones se ajust con KNO3 o KOH en el momento de la preparacin de las mismas. Para evaluar si la presencia de 10 mmol L-1 de Tris en la solucin de cultivo afect las plantas, un grupo de plantas se mantuvo en la solucin nutritiva de crecimiento sin Tris y con un pH 5,8 (Tabla 5).

Tabla 5. Contenido de NaCl, pH y conductividad de los tratamientos aplicados a plantas de C. gayana cv. Finecut. TratamientoNaCl (mM)pHConductividad (dS m-1)

Control sin Tris 1,205,8 0,05 0,83 0,10

Control 1,205,8 0,05 1,15 0,10

Alcalinidad 1,208,5 0,20 0,80 0,05

Salinidad200,005,8 0,0510,30 0,30

Alcalinidad + Salinidad200,008,5 0,2010,10 0,90

DeterminacionesCuantificacin del peso seco y relacin vstago-raz (V/R)

A los 30 DDS, las plantas intactas se removieron de las macetas. Las races se lavaron para eliminar restos del sustrato, se separaron de los vstagos y se registr el peso fresco (mg) de ambas partes. Posteriormente, las races y los vstagos, por separado, se secaron en estufa a 70 C hasta peso constante, para tomar el peso seco. La relacin vstago/raz, surgi del cociente de ambos valores.

Contenido Relativo de Agua (CRA) y Masa Foliar Especfica (MFE)

El da de la cosecha se cortaron 3 crculos de la quinta hoja (o de la ltima hoja totalmente expandida) de cada planta, se tom el peso fresco (Pf) y, a continuacin, se sumergieron en agua destilada y se mantuvieron a 25C y baja intensidad de luz durante 6 horas, transcurridas las cuales se pesaron nuevamente para determinar el peso turgente (Pt). Despus se llevaron a estufa a 70C hasta peso constante para determinar el peso seco (Ps).Todas las unidades de peso se midieron en mg. El contenido relativo de agua (CRA) medido en porcentaje se calcul mediante la siguiente frmula:

CRA = (Pf Ps / Pt - Ps) x 100

Para calcular la masa foliar especfica (MFE) se cortaron 3 crculos (de superficie conocida, medida en cm2) de la quinta hoja (o de la ltima hoja totalmente expandida) y se llevaron a estufa a 70 C hasta peso constante para determinar el peso seco (Ps), medido en mg. La masa foliar especfica (MFE) se calcul mediante la siguiente formula:

MFE = Masa Foliar / Superficie Foliar

Contenido de iones

Para la determinacin de las concentraciones inicas (Na+, K+ y Ca2+), expresadas en mg g-1 de peso seco, se digirieron 50 mg del material seco y molido con 5 ml de HCl 0,1 N en un bao trmico a 60 C durante 2 horas. Luego de enfriados a temperatura ambiente, los tubos se centrifugaron por 5 minutos a 10.000 rpm. El sobrenadante se recuper en tubos Eppendorf y se mantuvo refrigerado en heladera hasta el momento de la determinacin. Las concentraciones de Na+ y K+ se determinaron en un fotmetro de llama (Metrolab 315) y las de Ca2+ en un espectrofotmetro de absorcin atmica (marca Metrolab, modelo AA250). Los valores obtenidos se interpolaron en curvas de calibracin, correspondientes a cada elemento. Para la extraccin de los cloruros (Cl-) se agregaron 100 mg de materia seca y molida, 1 ml de perxido de hidrgeno 30% (100 volmenes), 1 ml de HNO3 concentrado y una gota de alcohol isoamlico en tubos prex con tapa a rosca. La mezcla se incub a temperatura ambiente durante 15 minutos, luego cada muestra se diluy con agua destilada hasta alcanzar un volumen de 10 ml y se centrifug durante 10 minutos a 10.000 rpm. El sobrenadante se recuper en tubos de plstico y se mantuvo a -16C hasta el momento de la medicin. Una alcuota de 1 ml de cada muestra se analiz colorimtricamente por el mtodo del tiocianato de mercurio (II). En este mtodo, un complejo del tiocianato frrico rojo-amarillento se forma cuando los iones cloruro son secuestrados por los iones mercurio del tiocianato de mercurio en presencia de nitrato frrico en exceso. El color se midi mediante un espectrofotmetro a una longitud de onda de 480 nm y los valores obtenidos se interpolaron en una curva de calibracin. Todo el material de vidrio utilizado para la preparacin de las muestras y las soluciones estndares se lav previamente con cido ntrico al 10% y se enjuag con agua destilada.

Anlisis estadsticoLos resultados se analizaron con el programa estadstico InfoStat (DiRenzo et al., 2008). Los resultados se analizaron mediante el anlisis de la varianza (ANVA) y cuando ste mostr diferencias significativas las medias se separaron mediante la prueba de LSD Fisher (p 0,05). RESULTADOS Germinacin de C. gayana en condiciones de alcalinidad y salinidad.Peso de las semillas

Las semillas del cv. Finecut fueron las ms livianas, las del cv. Toro fueron las ms pesadas y los cultivares Katambora y Tolgar mostraron pesos intermedios (Tabla 6).

Tabla 6. Peso de 1000 semillas de diferentes cultivares de C. gayana. Media EEM.CultivarPeso de 1000 semillas (g)

Finecut0,55 0,02 a

Katambora1,06 0,05 b

Tolgar1,24 0,04 c

Toro1,69 0,05 d

Viabilidad de las semillas y efecto de 10 mM de Tris sobre la germinacin final.

Todos los cultivares evaluados mostraron 100 % de germinacin de las semillas viables incubadas en agua, lo cual indica que las semillas no presentaban dormicin al momento de comenzar los experimentos. La presencia de 10 mM de buffer Tris no afect la germinacin de las semillas de los cultivares de C. gayana evaluados, con respecto a la de las semillas de cada cultivar incubadas en agua (Figura 4).

Figura 4. Efecto del buffer Tris sobre la germinacin de diferentes cultivares de C. gayana. Barras EEM.

Efectos de la salinidad y la alcalinidad Porcentaje de germinacin final

Dos de los tres factores principales, el cultivar (p = 0,0084) y la salinidad (p < 0,0001) produjeron diferencias significativas en el porcentaje de germinacin final (figuras 5 y 6). La interaccin entre los factores analizados no fue significativa (p = 0,0903). Los porcentajes de germinacin de los cvs. Katambora y Toro superaron al del cv. Finecut, y el cv. Tolgar mostr valores intermedios (Figura 5).

Figura 5. Efecto del cultivar (Katambora, Toro, Tolgar y Finecut) sobre el porcentaje final de germinacin C. gayana. Barras EEM.

Los porcentajes de germinacin final de las semillas incubadas en soluciones que contenan 0 y 100 mM de NaCl no se diferenciaron estadsticamente. En cambio, las semillas incubadas en 200 mM de NaCl germinaron un 34,3% menos que las incubadas en la solucin control (Figuras 6).

Figura 6. Efectos del contenido de 0, 100 y 200 mM de NaCl sobre el porcentaje de germinacin de diferentes cultivares de C. gayana. Barras EEM.Tiempo hasta el 50% de germinacin (T50)Los tres factores evaluados, cultivar (p = 0,006), salinidad (p < 0,0001) y pH (p < 0,0001) afectaron significativamente el T50; y la interaccin entre los factores fue significativa (p = 0,0001).AB

CD

Figura 7. Efecto de diferentes concentraciones de NaCl (0, 100 y 200 mM) y pHs (5,8 y 9,5) sobre la evolucin diaria de la germinacin de diferentes cultivares de C. gayana cv. Finecut (A), Toro (B), Tolgar (C) y Katambora (D). Media EEM.

Las semillas de todos los cultivares evaluados incubadas en soluciones con 100 mM y pH 5,8 sin el agregado de NaCl y pH 9,5 mostraron valores del T50 similares a las incubadas en la solucin control (0 mM de NaCl-pH 5,8) (Figuras 7 y 8). Los valores de T50 no difirieron entre los cultivares evaluados en las condiciones mencionadas arriba. En presencia de un nivel moderado de NaCl y pH alcalino (100 mM de NaCl-pH 9,5), los valores del T50 tampoco difirieron entre los cultivares evaluados. En el tratamiento mencionado, solamente el cv. Tolgar mostr un incremento del T50 con respecto al respectivo control (Figuras 7 y 8). Las semillas de todos los cultivares incubadas en soluciones con salinidad elevada (200 mM de NaCl-pH 5,8) mostraron un aumento del T50 con respecto al control. En estas condiciones, el incremento del T50 con respecto al control fue menor para el cv. Tolgar (3 veces), que para los cvs. Finecut, Katambora y Toro (4; 3,4 y 3,3 veces, respectivamente) (Figuras 7 y 8). En presencia de una salinidad elevada (200 mM de NaCl), la respuesta del T50 al incremento del pH de 5,8 a 9,5 difiri entre los cultivares evaluados. El incremento del pH no produjo efectos en el cv. Katambora pero increment los valores de T50 2,2; 1,7 y 2,4 veces en los cvs. Finecut, Katambora y Tolgar, respectivamente (Figuras 7 y 8).En condiciones de salinidad moderada y pH 9,5, (condiciones tpicas de los suelos marginales de la Cuenca del Salado, provincia de Buenos Aires), los valores de germinacin final no difirieron con los controles y los valores de T50 no difirieron entre los cultivares evaluados. Figura 8. Efectos de la concentracin de NaCl (0, 100 y 200 mM) y el pH (5,8 y 9,5) sobre el tiempo al 50% de germinacin (T50) de semillas de los cultivares de C. gayana Finecut (A), Toro (B), Tolgar (C) y Katambora (D). Barras EEM, letras diferentes indican diferencias significativas entre tratamientos para cada cultivar.ACDB

Efectos de la salinidad y la alcalinidad sobre plantas de C. gayana cv. Finecut bajo condiciones controladas

Peso seco del vstago (PSV), peso seco de la raz (PSR), y relacin peso seco vstago-raz (V/R)

La salinidad afect negativamente el PSV y el PSR de las plantas de C. gayana (p = 0,0001; p < 0,0001, respectivamente). La alcalinidad no afect el PSV (p = 0,1115) ni el PSR (p = 0,3228). La interaccin entre ambos factores no fue significativa para el PSV (p = 0,1549) ni para el PSR (p = 0,0764). En presencia de 200 mM de NaCl, el PSV y el PSR mostraron disminuciones del 29,26 % y 48,85 %, respectivamente, con respecto al control (Tabla 7). La salinidad y el pH afectaron significativamente la relacin V/R (p < 0,0001, p = 0,0090, respectivamente). La interaccin entre ambos factores fue significativa (p = 0,0128). Bajo condiciones no salinas, la relacin V/R de las plantas cultivadas con pH 8,5 no fue estadsticamente diferente al de las plantas control (3,31 0,15 y 3,29 0,15, respectivamente). En cambio, bajo condiciones salinas, la relacin V/R aument ms con pH 5,8 que con pH 8,5 (43,50 % y 19,63 % con respecto al control, respectivamente) (Tabla 7).

Tabla 7. Peso seco del vstago (PSV), raz (PSR) y relacin V/R de plantas de C. gayana cv. Finecut cultivadas en soluciones nutritivas con diferentes concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y pHs (5,8 y 8,5). Media EEM.CultivarNaCl (mM)pHPeso Seco (mg)

PSVPSRV/R

Finecut05,8417,50 31,90 138,59 14,89 3,31 0,15 a

8,5333,39 31,44 109,26 11,28 3,29 0,15 a

2005,8267,94 23,72 59,19 5,98 4,75 0,16 c

8,5263,18 18,96 67,57 4,64 3,96 0,15 b

Significacin

NaCl******

pHNSNS**

pH*NaClNSNS**

(p8,5), combinados con condiciones moderadas de salinidad, lo cual puede lograrse con el agregado de sales de Na alcalinas (carbonato y bicarbonato de Na) a la solucin nutritiva.

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cv. Finecut0 mM NaCl-pH=5,80 mM NaCl-pH=9,5100 mM NaCl-pH=5,8100 mM NaCl-pH=9,5200 mM NaCl-pH=5,8200 mM NaCl-pH=9,5Das despus de la siembra% germinacin

Germ acum %Germinacin acumulada en % sobre el total de semillas germinadas en tris pH 5,8 - sin el tratamiento aguaNmero de semillas germinadasddsPromedio Germ tris 5,8da 1S da 2S da 3S da 4S da 5S da 6S da 7S da 8S da 9S da 10S da 11S da 12S da 13S da 14S da 15S da 16S da 17S da 18S da 19S da 20S da 21S da 22pHTratamientoCvnro%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%5.8Tris pH 5,8Fc726042.307692307765.384615384665.384615384673.076923076973.076923076973.076923076973.076923076976.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.923076923176.92307692315.8Tris pH 5,8Fc826061.538461538580.769230769284.615384615488.461538461596.153846153896.153846153896.153846153896.15384615381001001001001001001001001001001001001005.8Tris pH 5,8Fc926034.615384615484.615384615484.615384615496.153846153896.153846153896.153846153896.1538461538100103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.84615384625.8Tris pH 5,8Fc1026042.307692307769.230769230880.769230769280.769230769284.615384615492.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307796.15384615381001005.8Tris pH 5,8Fc1126057.692307692380.769230769280.769230769292.307692307796.1538461538103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.8461538462103.84615384625.8Tris pH 5,8Fc1226057.6923076923103.8461538462107.6923076923115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.3846153846115.38461538469.5Tris pH 9,5Fc1326057.692307692388.461538461596.153846153896.153846153896.153846153896.153846153896.153846153896.15384615381001001001001001001001001001001001001009.5Tris pH 9,5Fc142605080.769230769292.307692307796.15384615381001001001001001001001001001001001001001001001001009.5Tris pH 9,5Fc1526061.538461538584.615384615492.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.307692307792.30769230779.5Tris pH 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9,5Kat.9842.17026.084894474775.883329381180.626037467485.368745553785.368745553785.368745553785.368745553787.740099596990.1114536490.1114536490.1114536490.1114536492.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.48280768329.5Tris pH 9,5Kat.9942.17026.084894474773.511975337978.254683424285.368745553787.740099596992.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.482807683292.48280768329.5Tris pH 9,5Kat.10042.17035.570310647490.1114536492.482807683297.2255157695101.9682238558101.9682238558101.9682238558106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.7109319421106.71093194219.5Tris pH 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