Querales Marvin IsaacQuerales Marvin IsaacTorres Jesús D.Torres Jesús D.

Universidad de CaraboboUniversidad de CaraboboFacultad de Ciencias de la SaludFacultad de Ciencias de la Salud

Escuela de BioanálisisEscuela de BioanálisisDepartamento de Estudios ClínicosDepartamento de Estudios ClínicosPrácticas profesionales EspecialesPrácticas profesionales Especiales

Trabajo de Investigación sobre metabolismo de Trypanosoma cruzi

Differential energetic metabolism during Trypanosoma cruzi differentiation. II. Hexokinase,

phosphofructokinase and piruvate kinase.

Francisco- Javier Androher, Antonio Osuna and José A. Lupiáñez

Molecular and cellular Biochemestry 94: 71-82, 1990

Ciclo Evolutivo de Ciclo Evolutivo de Trypanosoma cruziTrypanosoma cruzi

Orificio de la picada o lesiónProsbócide

Pielo

Mucosa

Insecto Reduviidae

EpimastigotaTripomastigotas

metacíclicos en orina

Penetración en célula

Tripomastigota

Amastigota

Lisis celular

Colonización de tejido muscular o neural

Torrente saguíneo

Nido de amastigotas

Célulasanguínea

Célula

Morfogénesis de Morfogénesis de Trypanosoma cruziTrypanosoma cruzi

Proceso de transformación del Trypanosoma cruzi, el cual pasa de un estadio a otro con cambios

morfológicos acentuados.

Tripomastigota sanguícola

Epimastigota Tripomastigota metacíclico

Amastigota

Epimastigogénesis AmastigogénesisAmastigogénesis

TripomastigogénesisTripomastigogénesis

MetaciclogénesisMetaciclogénesis

Morfología deMorfología deTrypanosoma cruziTrypanosoma cruzi

Axonema

FlageloNúcleo

Kinetoplasto

Acidocalcisomas

Microtúbulossubpeliculares

Axonema

FlageloNúcleo

Kinetoplasto

Acidocalcisomas

Microtúbulossubpeliculares

Flagelo

Bolsa flagelar

Kinetoplasto

Microtúbulossubpeliculares

AcidocalcisomaNúcleo

Flagelo

Bolsa flagelar

Kinetoplasto

Microtúbulossubpeliculares

AcidocalcisomaNúcleo

Axonema

Kinetoplasto

Axonema

Kinetoplasto

Epimastigota Tripomastigota Amastigota

Metabolismo deMetabolismo deTrypanosoma cruziTrypanosoma cruzi

Objetivos de la InvestigaciónObjetivos de la Investigación

• Investigar el desarrollo de la vía glicolítica tanto en Epimastigotas como en tripomastigotas metacíclicos

• Determinación de pH, producción de amoníaco y consumo de glucosa durante la cinética de

crecimiento.

• Determinar la actividad enzimática de las enzimas reguladoras de la glicólisis: Hexokinasa,

Fosfofructokinasa y Piruvato Kinasa.

Fase experimentalFase experimental

Cepa de T. cruzi mantenida en medio NNN y MEM

Epimastigotas Tripomastigotas Metacíclicos

Medio Líquido libre de células de Boné y parent

(8vo día)

9no día de crecimiento en el medio Grace’s

insect (86%)

Fase experimentalFase experimental

Masas Celulares

Sobrenadante

Resuspensión y homogeneizado

Hexokinasa Fosfofructokinasa Piruvato Kinasa

Fase experimentalFase experimentalDeterminación de las concentraciones de glucosa,

amoníaco y valores de pH

pHGlucosa Amoníaco

Nota: se usó medio Grace’s Insect suplementado con 100 mM de NaCl y 10 % suero fetal bovino, obtienedo un (50-55% metacíclicos)

ResultadosResultadosMetaciclogénesis. Variaciones de Glucosa y Amoníaco en el medio de cultivo

ResultadosResultadosEnzimas glicolíticas en Epimastigotas y tripomastigotas metacíclicos

Hexokinasa

ResultadosResultadosCambios en los Parámetros Cinéticos

Hexokinasa

ResultadosResultadosEnzimas glicolíticas en Epimastigotas y tripomastigotas metacíclicos

Fosfofructokinasa

ResultadosResultadosCambios en los Parámetros Cinéticos

Fosfofructokinasa

ResultadosResultadosEnzimas glicolíticas en Epimastigotas y tripomastigotas metacíclicos

Piruvato kinasa

ResultadosResultadosCambios en los Parámetros Cinéticos

Piruvato kinasa

DiscusiónDiscusión

• La gran actividad de las enzimas glicosomales (hexokinasa y fosfofructokinasa) en los Epimastigotas pudiera deberse a la necesidad

acelerada que tiene el parásito de obtener altas concentraciones de ATP en respuesta a la división Celular.

• Los resultados sugieren la aparente existencia de una mecanismo de regulación coordinada por el cual se modula el metabolismo proteico

• El número de glicosomas afecta la actividad de las enzimas hexokinasa y fosfofructokinasa, pero no de piruvato Kinasa

DiscusiónDiscusión

•Los cambios en las actividades metabólicas durante la metaciclogénesis se pudieran deber a un fenómeno enzimático de inducción-represión en los

organelos subcelullares dependiendo de las condiciones ambientales.

• El conocimiento profundo de las enzimas glicosomales en el estado de tripomastigota metacíclico de T. cruzi, constituye una base fundamental

para el diseño de nuevas drogas tripanosidas.

Muchas Gracias….Muchas Gracias….