ELECTROFORESIS CAPILAR

ERIKA BARRETONATALIA ESPITIAXIMENA FERNANDEZJULIANA MORERALORENA SOTAQUIRATALINA ZULETA

ELECTROFORESIS CAPILAR

• Es una técnica de separación en la que especiescargadas se separan, basado en carga y tamaño, porsus diferentes tasas de migración en un campoeléctrico.

• Es una técnica muy adecuada para el análisis demuestras de pequeño tamaño, células y ensayos demicrodialisis

LORENA

• Las separaciones pueden complementarse en periodoscortos de tiempo.

• La puesta a punto de métodos de análisis es simple ybastante rápida.

• El consumo de muestras y reactivos es mínimo yprácticamente no genera residuos.

• Es una técnica relativamente económica y bajo impactoambiental.

CARACTERISTICAS

LORENA

VELOCIDAD DE MIGRACIÓN• Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con

carga neta son colocadas en un campo eléctrico,estas experimentan una fuerza de atracción hacia elpolo que posee carga opuesta, dejandotranscurrir cierto tiempo las moléculas cargadaspositivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polonegativo) y aquellas cargadas positivamente sedesplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).

JULIANA

• El movimiento de las moléculas esta gobernadotambién por dos fuerzas adicionales; inicialmente lafricción con el solvente dificultará este movimientooriginando una fuerza que se opone , por otrolado las moléculas tienen que moverse en formaaleatoria debido a que poseen energía cinéticapropia denominado difusión. La energía cinética delas moléculas aumenta con la temperatura, por ello amayor temperatura mayor difusión.

JULIANA

VENTAJAS

• La ventaja de esta técnica es que el capilar desílice fundida que generalmente se cubre con unacapa de polimina para darle mayor rigidez yresistencia, tiene una ventana a través de ella quepermite el pasaje de la luz UV de tal manera quela visualización es on-line.

• Con esta técnica descrita es posible separarcationes, aniones, proteínas, macromoléculas ysustancias no cargadas en forma simultánea.

XIMENA

ERICA

TALINA

APLICACIONES

• El avance de la electroforesis capilar se ha extendido a áreas tales como:

• Biomédica

• Biofarmaceutica

• Alimentos

• Control ambiental

NATALIA

PROTOCOLO SENCILLO PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN

GENÓMICO DE TEJIDO DE OREJA DEL RATÓN Y LA RATA,

USANDO LA ENZIMA BROMELINA

RESUMEN

Los métodos usados para el genotipo de losanimales de laboratorio incluye el aislamiento delácido Desoxirribonucleico (ADN) de biopsias detejido, seguidas de la amplificación mediante latécnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa(RCP).Los métodos que utilizan la hidrólisis conproteinasas tienen como principio básico el uso dela proteinasa K, la cual digiere proteínas y remuevecontaminantes a partir de las preparaciones deácidos nucleicos.

XIMENA

OBJETIVO

• Desarrollar un método sencillo para extraer ADNde tejido con un máximo grado de pureza, basadoen la aplicación de un método enzimático perousando la enzima comercializada a nivelfarmacéutico. (bromelina)

NATALIA

INTRODUCCION• Jesús y col. presentaron la estandarización de una técnica de extracción de

ADN de tejido de oreja de ratón.• la técnica estandarizada permitió obtener ADN, tal como lo reveló el

análisis en geles de agarosa al 0,9% y mediante espectrofotometría.

• Entre los métodos para realizar la extracción del ADN de tejido , seencuentran aquellos que se fundamentan en la hidrólisis con proteinasa K.

• La adición de proteinasa K inactiva rápidamente nucleasas que degradan elADN o el ácido ribonucleíco (ARN)durante la extracción.

• El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de un método sencillopara extraer ADN de tejido, con un máximo grado de pureza, basado en laaplicación de un método enzimático, pero utilizando una enzimacomercializada a nivel farmacéutico como Ananase, con Bromelina comoprincipio activo. La calidad del ADN obtenido se evaluó medianteespectrofotometría y electroforesis, además de esto se realiza PCR laspruebas realizadas conducen a presentar un método de extracción de ADNcon un alto grado de pureza, de fácil aplicación.

JULIANA

MATERIALES Y METODOS

Se tomaron fragmentos de la

oreja de 10 ratones y de 80

ratas para la extracción de ADN

Para la estimación de la concentración del

ADN obtenido se realizó una dilución del

ADN en agua, para realizar las medidas de

absorbancia a 260 y 280 nm, en un

espectrofotómetro

Las bandas fueron visualizadas en

Un transiluminadorUV de 254 nm

La integridad del ADN se evaluó

mediante electroforesis

en geles de agarosa al 0,9% en

Buffer

LORENA

CONCLUSIONES

• Los resultados obtenidos en las pruebasrealizadas permiten proponer el uso de la enzimaBromelina como un excelente sustituto de laproteinasa K, en la extracción de ADN de tejidode ratones y ratas.

• Esta proteína, la cual es el único principio activode algunos antiinflamatorios es fácil de encontraren las redes de farmacias de cualquier país, queademás de ser económico lo hace accesible paracualquier laboratorio de investigación.

ERICA