Equipos de QPCR y PCR
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Ingeniería Genética
M.C. Eddy Luz Cab Barrera
Marizza Gándara García Alejandra Guardado Méndez Grupo: 453
Equipo qPCR y PCR
PCRTermocicladoresEs el aparato que permite llevar a cabo de forma
automática y reproducible la sucesión de ciclos de temperatura necesarios para la PCR.
Características principales
Bloque térmico
• Cuyo calentamiento y enfriamiento se produce a gran velocidad
Tubos
• 0.2 ml aunque aún existen para 0.5 ml.
Rango de temperaturas
• 4°C a 110°C, rango habitual 15°C a 95°C
Tapa térmica
• Evitar la evaporación de la muestra, contacta totalmente con la tapa del tubo.
Software
• programación de tiempos y temperaturas
Mastercycler nexus gradien
Mastercycler nexus
Mastercycler nexus eco
Bloque térmico Aluminio
Capacidad de muestras 96 tubos PCR de 0,2 mL, 1 placa PCR de 8 × 12 ó de hasta 77 tubos PCR de 0,5 mL
Rango de temperatura del bloque térmico
4–99 °C
Modos de calentamiento
rápido, estándar, seguro
Rango de temperatura de la tapa
37–110 °C
Bloque con gradiente de temperatura
12 filas - -
Rango del gradiente 1–20 °C - -
Rango de temperatura del gradiente
30–99 °C - -
Dimensiones (An × Pr × Al)
25 × 41,2 × 32,1 cm
Peso 10,9 kg 10,9 kg 10,9 kg
Es la técnica más sensible para la detección de ácidos nucleicos (ADN y RNA). La PCRq es una técnica que combina la amplificación y la detección en un mismo paso al correlacionar, el producto de la PCR de cada uno de los ciclos con una señal de intensidad de fluorescencia.
Alta especificidad
Amplio rango de detección
Rapidez en visualización del
producto
Reacción de cadena polimerasa en tiempo Real PCRq
No requiere electroforesis posterior. Pueden detectar diferencias de una sola copia Alta sensibilidad
Reactivos de la PCR punto final +
un fluoróforo
Termociclador acoplado a sistema
óptico
Equipos PCRq
Fluorómetro Hardware Software
Equipos para Realizar la PCR en tiempo Real Mantener una temperatura uniforme en todas las muestras
• Desnaturalización DNA molde• Alineamiento de oligonucleótidos• Síntesis o elongación
Sistema fluorométrico• Fuente de energía para excitar a los fluoróforos
Lámpara (Tungsteno) Resistencia (diodo emisor de luz) Láser
• Sistema de detección Filtros, multiplicadores y fotodetectores Fluoróforos
Con afinidad por el DNA Sondas específicas para fragmentos de DNA
• Sondas de hidrólisis • Sondas de Hibridación • Sondas de Horquillas
FiltrosEspectro
(nm)
Espectro de
emisión
Fluoróforos 520 nmFAMSYBRGreenDABCYL
550 nmCY-3JOEVIC
580 nm
TAMRA
610 nm
ROX
650 nm
CY-5
Figura. 1. Espectro de emisión de los fluoróforos comúnmente usados en la PCR en tiempo real. En la figura se observan los espectros de emisión de diversos fluoróforos a diferentes longitudes de onda. Las letras A a la E representan las longitudes de onda empleadas por diferentes filtros para detectar el grupo de fluoróforos listados en la parte inferior.
Roche Life ScienceLightCycler 2.0
EL sistema LightCycler 2.0 permite analizar de forma rápida y Reproducible muestras, posibilitando la elección de nuevos parámetros.
Varios formatos de detección Distintos volúmenes de reacción Detección a 6 diferentes longitudes de onda (530-710nm) Tecnología de 16 bits (excelente señal y captación rápida) Gran sensibilidad Señal de detección por fibras de vidrio
Utiliza resistencia
LightCycler ® Nano Real-Time PCR System - Ultra-compacto, silencioso y elegante.
El Instrumento LightCycler ® Nano amplifica de manera rápida y precisa hasta 32 muestras en tiras de 8 tubos, proporcionando la máxima resolución térmica y reproducibilidad acostumbrada por Roche en sus instrumentos de PCR en tiempo real:
Resultados de alta calidad en RT-qPCR, genotipado, y HRM Asegura una Amplificación y unas curvas de fusión precisas y
reproducibles con marcajes y reactivos dedicados. ensayos pre-validados Amplio espectro de marcajes fluorescentes (510-750 nm). software de sencillo (Windows o Mac OS, o trabaje
simplemente conectando una unidad flash USB al equipo