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Hctor Mayani, Eugenia Flores-Figueroa, Rosana Pelayo, Juan Jos Montesinos, Patricia Flores-Guzmn y Antonieta Chvez-Gonzlez

Laboratorio de Hematopoyesis y Clulas Troncales, Unidad de Investigacin Mdica en Enfermedades Oncolgicas.Centro Mdico Nacional Siglo XXI, IMSS.

Abstract

Blood cell production hematopoiesis- is a complex process in which hematopoietic stem cells prolifer-ate and differentiate, giving rise to all the different types of mature circulating cells (i.e., erythrocytes, granulocytes, lymphocytes, monocytes and plate-lets). Hematopoiesis takes place in bone marrow, where an intricate network of stromal cells and their products, regulates the generation of primi-tive, intermediate and mature cells. Alterations in hematopoiesis can result in over production of blood cells (as it occurs in leukemia), or in a dimin-ished production of such cells (aplastic anemia). The study of hematopoiesis has implications not only in the field of biology, but also in terms of clini-cal hematology and regenerative medicine.

Resumen

LA PRODUCCIN de clulas sanguneas -hematopoyesis- es un proceso complejo a travs del cual las clulas troncales he-matopoyticas proliferan y se diferencian,

dando lugar a los distintos tipos de clulas madu-ras circulantes (i.e., eritrocitos, granulocitos, linfo-citos, monocitos y plaquetas). La hematopoyesis tiene lugar en la mdula sea, en donde una in-trincada red de clulas estromales y sus produc-tos, regulan cada una de las etapas que conducen a la generacin de clulas primitivas, intermedias y maduras. Alteraciones en la hematopoyesis pueden conducir a situaciones de sobreproduc-cin de clulas hematopoyticas (como las leuce-mias), o a una produccin deficiente de las mis-mas (como en la anemia aplstica). El estudio de la hematopoyesis tiene implicaciones, no solo de tipo biolgico, sino en el campo de la hematolo-ga clnica y la medicina regenerativa.

Mayani et al, Cancerologa 2 (2007): 95-107

Correspondencia a:Dr. Hctor MayaniTallo 2, D-102, San Pablo TepetlapaCoyoacn, Mxico, D.F. 04620Tel: 56 27 69 59 Fax: 57 61 09 52e-Mail: hmayaniv@prodigy.net.mx

Hematopoyesis

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Introduccin

Diariamente se producen en nuestro organismo cantidades extraordinarias de clulas sanguneas. Por ejemplo, en un adulto de 70 kg de peso, se producen 2 x 1011 eritrocitos, 2 x 1011 plaquetas y 7 x 1010 granulocitos (1). Lo anterior compensa la prdida diaria de dichas clulas de tal manera que, en condiciones normales, los niveles en circulacin de eritrocitos, leucocitos y plaquetas se mantienen constantes. El proceso a travs del cual se generan las clulas de la sangre se denomina hematopoye-sis y ocurre bajo condiciones muy especficas en el interior de los huesos, en la llamada mdula sea (2). La hematopoyesis es un proceso extraordina-riamente complejo en el que intervienen una gran variedad de tipos celulares y el cual es regulado por diversos factores. Hoy en da, y gracias al avance en diversos campos de la biologa -como la inmu-nologa, la gentica molecular, el cultivo celular, la microscopa electrnica, y la bioqumica, por nom-brar algunos- se ha logrado obtener un panorama muy amplio y detallado de este proceso.

Organizacin del SistemaHematopoytico

Compartimientos CelularesEl sistema hematopoytico puede ser dividido en base al grado de madurez de las clulas que lo con-forman y a los distintos linajes celulares que de l se generan. De acuerdo al grado de maduracin celular, se han identificado cuatro compartimentos. El primer compartimiento corresponde a las clulas ms primitivas, llamadas clulas troncales hematopo-yticas (CTH). Estas clulas tienen dos caractersti-cas funcionales que las distinguen: son capaces de auto-renovarse (al dividirse, por lo menos una de las clulas hijas conserva las propiedades de la clula madre) y son multipotenciales (pueden dar origen a los distintos linajes sanguneos). Las CTH correspon-den al 0.01% del total de clulas nucleadas presen-tes en la mdula sea, por lo que su estudio puede verse limitado desde el punto de vista prctico. Sin embargo, gracias a los estudios realizados hasta aho-ra sabemos que estas clulas tiene una morfologa

linfoblastoide, las cuales expresan antgenos como CD34, CD90, CD117 y CD133, y que carecen de la expresin de antgenos de linajes especficos, como CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD33, CD38, CD45, CD57, CD71, Glicoforina A, etc. (3).

Las CTH dan origen a clulas progenitoras hemato-poyticas (CPH), las cuales han perdido su capacidad de auto-renovacin, pero conservan su potencial pro-liferativo. Estas pueden ser multipotenciales, o bien, pueden estar restringidas a dos (bipotenciales) o a un solo linaje (monopotenciales). Las CPH constituyen el segundo compartimiento del sistema hematopoy-tico, el cual corresponde a 90% de las clulas hematopoyticas residentes en la cavidad medular). Finalmente, los precursores hematopoyticos al madurar, generan a las clulas sanguneas circulantes (cuarto compartimiento).

Generacin de Linajes HematopoyticosLas clulas de la sangre se dividen en dos grandes grupos: mieloides y linfoides. Las primeras com-prenden a los granulocitos (neutrfilos, basfilos y eosinfilos), monocitos, eritrocitos y tromboci-tos, mientras que las segundas comprenden a los linfocitos B, linfocitos T y clulas NK. Las clulas mieloides son producidas a travs de un proceso conocido como mielopoyesis, mientras que las linfoides son resultado de la linfopoyesis. Ambos procesos, si bien independientes, estn muy rela-cionados y la interaccin que existe entre clulas de uno y otro es muy estrecha.

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Mielopoyesis

Al igual que el resto de la hematopoyesis, la mie-lopoyesis toma lugar dentro de la medula sea, sitio en donde las clulas troncales hematopoyti-cas dan lugar a los progenitores mieloides comu-nes (PMC). Los PMC son clulas con una alta ca-pacidad proliferativa (y por lo tanto activas en el ciclo celular), pero incapaces de auto-renovarse y cuyo potencial de diferenciacin est restringido a linajes especficos; estas clulas son responsivas a un determinado tipo y nmero de citocinas, evento que est definido por el nmero de re-ceptores que cada progenitor presenta (5). Los PMC subsecuentemente se pueden diferenciar en progenitores ms especficos, tales como los progenitores granulo-monocticos (PGM), y los progenitores eritroides-megacariocticos (PEM) (6), tal y como se ejemplifica en la Figura 1.

La maduracin posterior en cada uno de los li-najes hematopoyticos est definida por dos pro-cesos fundamentales: la prdida definitiva del po-tencial de auto-renovacin y la adquisicin de una

identidad especfica. Estos procesos son controla-dos por programas genticos en donde los genes que mantienen la capacidad de auto-renovacin se apagan, al tiempo que los genes que regulan la diferenciacin se encienden. De esta manera, los progenitores hematopoyticos se diferencian a clulas precursoras, a travs de una serie de even-tos en donde grupos alternados de genes en aso-ciacin con diversos factores de crecimiento de-terminan el destino celular en donde cada clula madura tiene una identidad y funcin definitiva. Entre los principales genes involucrados en la diferenciacin al linaje mieloide se encuentran: PU.1 (7), Hox (8), C/EBPa, C/EBPb y C/EPBe (9), RUNX1 (10) y SCL (11). Cabe hacer notar que altos niveles de expresin de PU.1 se aso-cian con la diferenciacin granuloctica, mientras que su baja expresin se asocia con diferencia-cin hacia el linaje eritroide (7). PU.1, junto con los factores de transcripcin GATA 1, GATA 2 y FOG, son esenciales para la maduracin y di-ferenciacin eritroide y megacarioctica (12,13). Una vez que los factores de transcripcin se en-cienden o apagan son capaces de inducir la ex-presin de receptores de factores de crecimien-to involucrados con la diferenciacin eritroide, megacarioctica y granulo-monoctica.

Progenitores Eritroides Diversos sistemas de cultivo han demostrado que los progenitores eritroides tienen diferente potencial proliferativo. Los progenitores eritroi-des ms primitivos son denominados unidades formadoras de brotes eritroides (del ingls BFU-E), las cuales mantienen una alta tasa de prolife-racin en respuesta a citocinas, mientras que los progenitores eritroides ms maduros, denomina-dos unidades formadoras de colonias eritroides (del ingls CFU-E) tienen un limitado potencial de proliferacin. Estos progenitores dan lugar a precursores eritroides, dentro de los que se incluyen proeritroblastos, eritroblastos basfi-los, eritroblastos policromatfilos, eritroblastos orocromticos, y reticulocitos; estos ltimos, a su vez, dan origen a los eritrocitos (Fig. 2).

CTH PMP

PMC

PLC

PEM

PGM

Figura 1Mielopoyesis. La Clula Troncal Hematopoytica (CTH), da lugar a Progenitores Multipotentes (PMP), los cuales pierden capacidad de autorrenovarse pero

generan al Progenitor Linfoide Comn (PLC) y al Progenitor Mieloide Comn (PMC). Este ltimo es capaz de generar Progenitores Granulocito/Monocticos (PGM)

y a Progenitores Eritroides/Megacariocticos (PEM), los cuales continan con su va de diferenciacin, y dan lugar

a las clulas maduras circulantes (Figuras 2 y 3)

98 Hematopoyesis

A lo largo de esta ruta de diferenciacin, la eri-tropoyetina (EPO) acta como una de las prin-cipales citocinas reguladoras de la eritropoyesis. Esta molcula es producida por clulas renales y en menor proporcin por clulas hepticas. La principal actividad de la EPO es controlar la produccin de clulas eritroides a travs de la promocin de la sobrevivencia, proliferacin y diferenciacin de progenitores eritroides en la mdula sea. En clulas progenitoras eritroides tempranas (BFU-E), la EPO acta como agente mitognico y promueve su proliferacin, mientras que en progenitores eritroides tardos (CFU-E), acta como agente de sobrevivencia (14).

Es importante destacar que adems de la EPO, ci-tocinas como interleucina 3 (IL-3), trombopoyetina (TPO), ligando de la tirosina fetal 3 (FLT-3L) y el factor de clulas seminales (SCF) participan tam-bin en la eritropoyesis; estas citocinas son capaces de sinergizar con EPO y regular la proliferacin, diferenciacin y sobrevivencia de clulas progeni-toras y precursores eritroides (15).

Progenitores MegacariocticosEn relacin a los progenitores megacariocticos, una clasificacin jerrquica ha sido desarrollada con base en sus potenciales de proliferacin y la ex-

presin de c-mpl (el receptor de trombopoyetina) en su superficie. Los progenitores ms tempranos son definidos como clulas formadoras de brotes megacariocticos (meg-BFC) y son capaces de for-mar colonias de alrededor de 100 clulas, despus de 21 das de cultivo. Estos meg-BFC dan lugar a clulas formadoras de colonias de megacariocitos (meg-CFC) que representan a los progenitores tardos, capaces de formar pequeas colonias des-pus de 12 das de cultivo. Estos meg-CFC a lo largo de 5 a 7 das, tienen diversas endomitosis (replica-cin del ADN sin divisin nuclear), que conducen a la formacin de precursores poliploides denomi-nados megacariocitos inmaduros, quienes una vez que desarrollan un citoplasma maduro dan lugar a megacariocitos maduros, que eventualmente darn lugar a las plaquetas (Fig. 2). A lo largo de todo el proceso de diferenciacin megacarioctica, el elemento regulador clave es la trombopoyetina, ya que promueve el crecimiento de los meg-CFC, incrementando sustancialmente la tasa de endoci-tosis y estimulando la diferenciacin a megacario-citos maduros. Algunas otras citocinas involucradas con este proceso son IL-3, IL-6 e IL-11.

Progenitores Granulo-Monocticos Los progenitores mieloides por su parte incluyen unidades formadoras de colonias granulo-monoci-

PEM

BFU-E

Meg-BFC Meg-CFC

CFU-E PE EB EPC EO RET Eritrocito

Meg-I Meg-M Plaquetas

Figura 2Diferenciacin Eritroide. El progenitor eritroide-megacarioctico (PEM), da lugar a Unidades Formadoras

de Brote Eritroide (BFU-E), quienes a su vez originan Unidades Formadoras de Colonias Eritroides (CFU-E), para posteriormente dar lugar a proeritroblastos (PE), eritroblastos basoflicos (EB), eritroblastos policromatoflicos

(EPC), eritroblastos ortocromticos (EO), reticulocitos (RET) y clulas eritroides maduras. El progenitor eritroide-megacarioctico tambin puede dar lugar a Clulas Formadoras de Brotes Megacariocticos (Meg-BFC), los

cuales, a su vez, generan Clulas Formadoras de Colonias Megacariocticas (Meg-CFC), que posteriormente generaran megacariocitos inmaduros (Meg-I) y maduros (Meg-M), que finalmente liberaran a las plaquetas.

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CFU-M

CFU-G

PGM

MIEL PM

MIEL MM

MONOB PMON MON Macrfago

Basfilo

Neutrfilo

Eosinfilo

tcas (del ingls CFU-GM), que a su vez dan origen a unidades formadoras de colonias granulocitcas (del ingls CFU-G) y unidades formadoras de co-lonias monocitcas (del ingls CFU-M). Una vez encaminadas en la va de diferenciacin, las CFU-G dan lugar a mieloblastos, promielocitos, mie-locitos, metamielocitos y clulas maduras (eosi-nofilos, neutrofilos y basofilos). Mientras que las CFU-M dan lugar a monoblastos, promonocitos, monocitos, y finalmente macrfagos (Fig. 3).

A lo largo de toda la ruta de diferenciacin, las clulas de linaje mieloide son reguladas por un amplio nmero de citocinas entre las que se en-centran: el factor estimulador de colonias de granulocitos y monocitos (GM-CSF), el factor es-timulador de colonias de granulocitos (G-CSF), el factor estimulador de colonias de monocitos (M-CSF), la interleucina-3 (IL-3), IL-6 y el factor de clulas seminales (SCF), entre muchas otras.

Los factores estimuladores de colonias son capaces de inducir la sobrevivencia y proliferacin de clu-las progenitoras hematopoyticas, conducindolas hacia linajes especficos (macrofgico, megacarioc-tico, neutroflico), dependiendo de la combinacin de factores empleados. De esta forma, por ejem-

plo, el G-CSF tiene un efecto ms especfico para la diferenciacin a linaje granuloctico, en donde, adems de inducir la diferenciacin, incrementa la funcionalidad de las clulas maduras (16,17).

Aunado a lo anterior, se sabe que citocinas como el SCF y el Flt-3L por s solos son capaces de es-timular el crecimiento de clulas troncales y pro-genitoras hematopoyticas, as como de los linajes linfoides y mieloides, aunque tienden a tener un mayor efecto cuando actan en combinacin con otros factores de crecimiento, como GM-CSF, IL-3, IL-6, G-CSF, TPO y EPO (18,19).

Cabe mencionar que adems de las citocinas esti-muladoras de la mielopoyesis existe tambin un n-mero considerable de citocinas que la inhiben, tal y como sucede con el factor de necrosis tumoral- (TNF-), el factor de crecimiento transformante- (TGF-), la protena inflamatoria de macrfagos-1 (MIP-1) y los interferones (IFN), entre otras. Estas molculas son capaces de disminuir los niveles de clulas troncales y progenitoras hematopoyti-cas mediante la inhibicin de su proliferacin; dicha inhibicin puede ocurrir de manera directa -por in-ducir la disminucin de la expresin de receptores de molculas estimuladoras- o a travs del efecto

Figura 3Diferenciacin Mieloide. Los progenitores grnulo-monocito o Unidades Formadoras de Colonias Grnulo-monocticas (CFU-GM), dan lugar Unidades Formadoras de colonias Granulocticas (CFU-G) y Unidades Formadoras de Colonias Mielocticas (CFU-M). Una vez encaminadas en la va de diferenciacin las CFU-G dan lugar a mieloblastos (MIEL), promielocitos (PM), mielocitos (MIEL), metamielocitos (MM) y clulas maduras (basfilos, neutrfilos y eosinfilos). Mientras que las CFU-M dan lugar a monoblastos (MONOB), promonocitos (PMON), monocitos (MON), y finalmente macrfagos.

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sinrgico entre dos o ms factores, causando un efecto supresor en la proliferacin y formacin de colonias hematopoyticas (20-22).

Linfopoyesis

Tal y como ocurre en la mielopoyesis, la produccin de las clulas del linaje linfoide (linfocitos B, linfo-citos T, clulas NK y algunas categoras de clulas dendrticas) es un proceso dinmico y complejo, el cual est determinado por combinaciones de factores intrnsecos y microambientales que guan la diferenciacin de progenitores linfoides a partir de las clulas troncales hematopoyticas (23).

Definiendo a los ProgenitoresLinfoides Tempranos Est bien establecido que la diferenciacin del li-naje linfoide progresa gradualmente en la mdula sea desde progenitores muy primitivos con po-tenciales mltiples hasta precursores restringidos que pierden opciones de diferenciacin en paralelo con una ganancia de funciones especializadas (23). A lo largo de este progreso la transcripcin del locus de la enzima que recombina los segmentos genticos VDJ de la inmunoglobulina y del TCR, la recombinasa RAG1, marca a los progenitores linfoides ms primitivos del ratn, denomina-dos ELPs (del ingls early lymphoid progenitors) (24,25). Ellos son tempranos en trminos de mar-cadores de superficie, factores de transcripcin en contexto, y tiempo requerido para su diferencia-cin, y muestran un tremendo potencial para ge-nerar todas las lneas de clulas linfoides. Siendo responsables de la mayor produccin de clulas dendrticas plasmacitoides (pDCs) (26) y contri-buyendo a la generacin de las recientemente des-critas clulas dendrticas asesinas productoras de interfern (IKDC) (27), los ELPs dan origen a los progenitores linfoides comunes o CLPs, que son reconocidos como los ms eficientes precursores de linfocitos B y clulas NK en la mdula sea (28,29). Adems, estos progenitores tempranos constituyen uno de los candidatos ms probables para la colonizacin del timo y la iniciacin de la linfopoyesis de T en el ratn (30).

En la mdula sea y el cordn umbilical del ser humano una variedad de progenitores multipo-tentes residen en la fraccin celular que no ex-presan en la superficie membranal ningn marca-dor de clula sangunea madura, pero expresan molculas CD34. La aparicin de CD10 y de la enzima desoxinucleotidil-transferasa terminal (TdT) en dichas clulas es probablemente uno de los eventos iniciales que distinguen a los proge-nitores linfoides (31). As mismo, el receptor de quimiocina CXCR4 es sustancialmente expresa-do en clulas con actividad precursora linfoide, de tal modo que se especula que podra ser un marcador distintivo de la contraparte de ELPs del ratn. Los posibles progenitores linfoides co-munes (CLPs) expresan adems el receptor de interleucina 7 (IL-7), CD38 y CD45RA, y aun-que, tanto en cultivo como in vivo, muestran un potencial residual hacia clulas T, NK y dendr-ticas, se diferencian principalmente a linfocitos B (32). Por otro lado, clulas que expresan CD34, CD45RA y CD7, pero no expresan CD10 ni el receptor de IL-7, son altamente eficientes en la generacin de clulas T y NK (33).

Desarrollo de las Clulas BEn la ontogenia, el desarrollo de las clulas B pue-de ocurrir en el epiplon y el hgado fetal, mien-tras que despus del nacimiento se confina pri-mordialmente a la mdula sea. An cuando la informacin acerca de los eventos de transicin a partir de los potenciales CLPs a los precurso-res de clulas B es muy limitada, se han identi-ficado poblaciones funcionales que definen la va de diferenciacin ro abajo, iniciando con las clulas B tempranas CD34+CD19-CD10+ y continuando con pro-B CD34+CD19+CD10+, pre-BI grandes CD34+CD19+CD10+, pre-BII grandes CD34-CD19+CD10+, pre-BII peque-as CD34-CD19+CD10+, B inmaduras CD34-CD19+CD10+sIgM+ hasta la produccin de B maduras CD34-CD19+CD10-sIgM+sIgD+, que eventualmente sern exportadas a los tejidos lin-foides perifricos para cumplir su funcin de reco-nocimiento de antgeno, activacin y produccin de anticuerpos especficos. El proceso completo

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en la mdula sea requiere de la accin concer-tada de mltiples factores de transcripcin, inclu-yendo Ikaros, PU.1, E2A, EBF y Pax-5. Los dos primeros actan paralelamente en el control de la transicin de las clulas troncales a progenitores, mientras que E2A, EBF y Pax-5 regulan secuen-cialmente el desarrollo de las clulas B tempranas (34). La linfopoyesis de B en el humano parece cumplirse sin el requerimiento de algunas citoci-nas documentadas como esenciales para el pro-ceso en el ratn, como la interleucina 7, y hasta el momento se desconocen los factores de creci-miento y/o citocinas que la dirigen.

Desarrollo de las Clulas T Debido a que el timo no produce progenitores de renovacin autloga, la linfopoyesis de T es man-tenida por la importacin peridica de progenito-res hematopoyticos a travs de la corriente san-gunea (35), y aunque a mltiples progenitores se les reconoce cierto potencial para generar clulas T, no todos ellos tienen la propiedad de estable-cerse en este rgano. Las bases moleculares de su entrada no han sido totalmente elucidadas, pero se predice que pudiera ser un proceso secuencial anlogo al homing de leucocitos, esto es: adhe-sin dbil al endotelio vascular mediado por se-lectinas, sealizacin va quimiocinas, adhesin fuerte a travs de integrinas, y transmigracin. Al respecto, los modelos experimentales han mostra-do la importancia que CD44, P-selectina y CCR9 tienen en la colonizacin tmica (36). Los precursores tmicos ms tempranos (ETP) residen en la poblacin CD34+CD1a-CD38loCD44+IL-7R+ y a partir de ellos se inicia el proceso de compromiso de estadios interme-dios de diferenciacin desde clulas pre-T, clu-las inmaduras CD4 uni-positivas pequeas, clu-las CD4 uni-positivas grandes, clulas tempranas doble-positivas (EDP), hasta los timocitos DP CD4+CD8+TCR+, los cuales darn origen a la diversidad de linfocitos T maduros CD4 y CD8 con capacidad de reconocimiento de antgeno y activacin. La participacin de algunos factores de transcripcin en ste proceso ha sido blan-

co de gran investigacin, y actualmente es claro que las interacciones de los receptores Notch con sus ligandos juegan un papel crucial en el control de la diferenciacin y proliferacin de los precursores tempranos, dirigiendo as las deci-siones de linaje de T en el timo (35), concomi-tante con la supresin del linaje de B. As mis-mo, el balance de la expresin de las protenas E y sus antagonistas naturales Id est implicado en la diversificacin tmica T/NK (31), y el factor GATA3 es esencial para el re-arreglo apropiado de genes del receptor de clulas T.

Respecto a la importancia de las citocinas, se co-noce que la linfopoyesis de T es crticamente de-pendiente de IL-7, lo que ha sido sustentado por la profunda deficiencia en clulas T (pero no B) que desarrollan los pacientes con inmunodeficiencia se-vera combinada por defectos genticos en el gen que codifica para la cadena c del receptor de IL-7, as como los pacientes deficientes en IL-7R (31).

Desarrollo de Clulas NK Las clulas asesinas naturales (NK) pueden produ-cirse en mltiples sitios. En el feto se han encon-trado precursores en mdula sea, hgado, timo, bazo y ganglios linfticos, mientras que en nios y adultos la mdula sea es el sitio predominante de su desarrollo a partir de progenitores linfoides. Los factores de transcripcin Id2 y Id3 controlan el desarrollo temprano de las clulas NK, mien-tras que los tres estadios que definen el proceso completo -el compromiso de linaje, la seleccin del repertorio de receptores NK y la maduracin funcional- son crticamente dependientes de inter-leucina 15, que mantiene la viabilidad y sostiene la proliferacin de las clulas en desarrollo (37).

Desarrollo de Clulas Dendrticas A la fecha, el origen hematopoytico del creciente nmero de poblaciones de clulas dendrticas en el humano est pobremente definido; sin embargo, la expresin de algunos genes asociados al linaje linfoi-de en las clulas plasmacitoides dendrticas (pDCs) sugiere una afiliacin linfoide en la mdula sea, y datos recientes indican que Notch, en concierto con

102 Hematopoyesis

1. Regulacinhumoral

3. InteraccinCelular

2. Interaccin a travsde Molculas de laMatriz Extracelular

Macrfagos

Fibroblastos Estromales Osteoblastos

AdipocitosNicho

+

el factor de transcripcin Spi-B pudieran regular la diversificacin de linaje T/pDC en el timo (38).

Microambiente Hematopoytico

La hematopoyesis es un proceso finamente regu-lado que se lleva a cabo nicamente en ciertos rganos, denominados rganos hematopoyti-cos (saco vitelino, bazo, hgado, mdula sea). En ellos las clulas hematopoyticas se desarro-llan en un ambiente especfico denominado mi-croambiente hematopoytico (MH) (39,40). El MH consiste en una estructura tridimensional, altamente organizada, de clulas del estroma y sus productos (matriz extracelular, citocinas, qui-miocinas, entre otras) que regula la localizacin y fisiologa de las clulas hematopoyticas (39,41).

Clulas del EstromaLa palabra estroma deriva del griego que quiere de-cir cama y del latn que quiere decir colchn (39), ya que de acuerdo con la definicin ms an-tigua se pensaba que las clulas estromales nica-mente provean un soporte fsico para las clulas hematopoyticas. Uno de los grandes avances para entender la biologa de las clulas del estroma fue el desarrollo de los cultivos denominados a largo plazo

tipo Dexter (42), los cuales hasta la fecha son un mo-delo in vitro que permite el crecimiento de clulas hematopoyticas y estromales de mdula sea por varias semanas (humano) e incluso meses (ratn) (43). Este tipo de cultivos favorecen el crecimien-to de una capa de clulas estromales, conformada en su mayor parte por fibroblastos estromales, una proporcin menor de macrfagos y por diferentes tipos celulares como adipocitos y osteoblastos, los cuales permiten el desarrollo de las clulas hema-topoyticas sin la necesidad de aadir ningn ele-mento o citocina exgena al cultivo. A esta capa heterognea de clulas adherentes se le denomina genricamente como estroma (Fig. 4) (44). Para su estudio, las clulas estromales pueden ser clasificadas de acuerdo a su origen en dos compo-nentes: el componente hematopoytico, confor-mado por los macrfagos estromales, los cuales de-rivan de las clulas troncales hematopoyticas, y el componente mesenquimal, conformado por fibro-blastos estromales, adipocitos y osteoblastos, los cuales derivan de la clula troncal mesenquimal.

Componente HematopoyticoLos macrfagos estromales son los nicos elemen-tos del estroma que presentan el antgeno CD45.

Figura 4Microambiente Hematopoytico. Esquema representativo de los diferentes tipos celulares que integran el

microambiente hematopoytico y los mecanismos de regulacin de la hematopoyesis. El microambiente se compone principalmente de cuatro tipos celulares, macrfagos, fibroblastos estromales, adipocitos y osteoblastos. El microambiente

hematopoytico regula la proliferacin, sobrevida, maduracin, autorrenovacin y migracin de las clulas hematopoyticas a travs de tres mecanismos: (1) el humoral, a travs de la secrecin de citocinas y quimiocinas, (2) la interaccin a travs de

matrz extracelular y (3) el contacto clula-clula a travs de molculas de adhesin y morfgenos. Dentro del microambiente hematopoytico, los osteoblastos forman el nicho hematopoytico, regulando a las clulas troncales hematopoyticas

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Estas clulas pueden distinguirse gracias a que ex-presan molculas especficas como las molculas del complejo mayor de histocompatibilidad clase II (MHC II), el antgeno CD14, CD11c y CD68. Los macrfagos estromales son el segundo com-ponente del estroma ms abundante de la mdula sea y de los cultivos lquidos a largo plazo (39). Dentro de la mdula sea stos se localizan en dife-rentes sitios: como macrfagos centrales en las islas eritroblsticas, en el endotelio y dispersos entre las clulas hematopoyticas. Estas clulas llevan a cabo diferentes y muy importantes funciones, regulan-do la hematopoyesis mediante interacciones clula clula, y por medio de la secrecin de citocinas estimuladoras e inhibidoras de la hematopoyesis. Dentro de la variedad de citocinas producidas por los macrfagos encontramos el factor estimulante de colonias de macrfagos (FEC-M), de granuloci-tos y monocitos (FEC-GM), diversas interleucinas (IL) como la IL-3, la IL-1, la IL-6, IL-8 y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF) (39, 45,46). Componente MesenquimalEl componente mesenquimal se encuentra confor-mado por distintos tipos de clulas que provienen de una clula troncal mesenquimal (47) y que, de-pendiendo de los factores que se encuentren en su ambiente, sigue un determinado patrn de di-ferenciacin hacia fibroblastos estromales, adipo-citos, y osteoblastos. Estas clulas estromales de origen mesenquimal tienen un papel fundamental en la regulacin de la hematopoyesis (48).

Fibroblastos EstromalesLa mayor parte de las clulas estromales CD45- son clulas vasculares tipo msculo liso, tambin conocidas como clulas reticulares o fibroblastos estromales o miofibroblastos (39,44,48). Estas clulas presentan varios marcadores que com-parten con las clulas de msculo liso vascular, como las protenas de citoesqueleto: actina alfa de msculo liso y metavinculina, entre otras (48). Estas clulas tambin expresan una variedad de molculas de la matriz extracelular como vimeti-na, fibronectina, colgena tipo I, III y IV.

En sistemas in vitro se ha demostrado que los fi-broblastos estromales son capaces de mantener la hematopoyesis sin la adicin de citocinas exgenas, ya que son capaces de sintetizar y secretar citoci-nas como la IL-1, 6, 7, 8, 11, FEC-M, FEC-G, el fac-tor de crecimiento de clulas troncales (SCF) y el interfern-beta (IFN-). Estas molculas actan so-bre receptores especficos en las clulas hematopo-yticas, desencadenando cascadas de sealizacin que modulan la expresin de genes reguladores de proliferacin, sobrevida, diferenciacin, adhesin y secrecin de citocinas. Los fibroblastos estromales tambin secretan una variedad de molculas que forman parte de la matriz extracelular, como fi-bronectina (49), colgena tipo I y III, heparn sul-fato, cido hialurnico (50) las cuales interactan con las clulas hematopoyticas gracias a que stas expresan en su superficie una serie de molculas de adhesin, como VLA-4, VLA-5, L2 integrina y CD44, entre otras (51,52). Las molculas de matriz extracelular tambin regulan la hematopo-yesis a travs de su interaccin con citocinas, las cuales son captadas por esta matriz confirindoles estabilidad, incrementando su tiempo de vida y restringiendo su ubicacin en el medio (49).

Los fibroblastos estromales producen y secretan quimiocinas, como el factor derivado del estroma (SDF-1), el cual regula la quimiotaxis de las clu-las B y T, la migracin de las clulas CD34+, as como suprime la apoptosis y promueve la transi-cin G0/G1 de las clulas CD34+ (53). Tanto las citocinas, quimiocinas, molculas de la matriz ex-tracelular, molculas de adhesin, son necesarias para regular la autorrenovacin, diferenciacin, maduracin, proliferacin, muerte (apoptosis) y migracin de las clulas hematopoyticas (39,45). OsteoblastosLa funcin ms conocida de los osteoblastos es la de regular la reabsorcin del hueso inducien-do la expansin, maduracin y activacin de los precursores de los osteoclastos. Los osteoblas-tos son el blanco primario de los estmulos de reabsorcin del hueso, como las prostaglandinas y la 1,25-dihidroxivitamina D3 (54).

104 Hematopoyesis

El papel de los osteoblastos como parte del estro-ma hematopoytico no haba sido comprendido debido a su escasez en los cultivos tipo Dexter y a la falta de mtodos para aislarlos y cultivarlos. Gracias a la tcnica de cultivo por explante en donde es cultivada una fraccin de hueso de la mdula sea- se ha logrado establecer cultivos homogneos de osteoblastos primarios (54).

Los osteoblastos producen una gran variedad de citocinas, capaces de regular la hematopoyesis, tanto positiva como negativamente. Se ha repor-tado la presencia de ARN mensajero que codi-fica para el FEC-G, FEC-M, el FEC-GM, la IL-1 y la IL-6. La produccin de estas citocinas es basal, y puede ser regulada positivamente por IL-1, el TNF y lipopolisacridos. A nivel de protena se ha corroborado la produccin de G-CSF, GM-CSF, IL-6; as como se ha encontrado la expre-sin del factor inhibitorio de la leucemia (LIF), TNF, el factor de crecimiento vascular (VEGF), TGF- y linfotoxina TNF- (LT) (55). Los osteoblastos han demostrado tener la capacidad para mantener la proliferacin de clulas CD34+ en sistemas de co-cultivos (56-58). Se observ que estimulan preferentemente a los progenitores de colonias granulocticas (UFC-G), lo cual se debe pro-bablemente a la secrecin de grandes cantidades de FEC-G en ausencia de estmulos de inflamacin, a diferencia de lo que ocurre con otros tipos celulares mesenquimales. De acuerdo con este modelo, los fibroblastos estromales, las clulas endoteliales y los miofibroblastos estaran nicamente incrementando la granulopoyesis, pero no manteniendo la basal. Los osteoblastos son capaces de producir factores que permiten a las clulas hematopoyticas dirigirse a la mdula sea (homing), como la angiopoyetina 1 (Ang-1) (59) y el factor derivado del estroma (SDF-1) (60). La Ang-1 promueve la adhesin de las CTH a la fibronectina y colgena a travs de su receptor Tie2, permitiendo que las CTH se localicen en un sitio es-pecfico de la mdula sea (nicho) que promueve su quiescencia y sobrevida. Se ha observado que la ex-presin de Ang-1 por parte de los osteoblastos es

fundamental para el establecimiento de la hematopo-yesis definitiva en la mdula sea. Al parecer, los oste-oblastos presentan en su superficie varios receptores que permiten localizar a las clulas hematopoyticas ms primitivas, como el receptor de vitronectina (V3), N-caderina, Tie2 y Jagged-1. Estos hallazgos han permitido establecer que los osteoblastos forman una zona o nicho que favorece la expansin de las CTH, lo cual tiene una gran relevancia no solo en la investigacin bsica sino en la clnica (62,63).

AdipocitosLa presencia de adipocitos en el estroma post-natal depende de varios factores: 1) el estadio de desa-rrollo del esqueleto, ya que se ha observado que la adipognesis progresa de la difisis a la epfisis; 2) la edad, el nmero de adipocitos incrementa con la edad; y 3) el nivel de hematopoyesis, debido a que la adipognesis aparentemente correlaciona de ma-nera inversa con la celularidad, y con la proporcin del hueso que est llevando a cabo hematopoye-sis (44). Su papel en la hematopoyesis no es muy claro, se ha propuesto que sean inhibidores de la hematopoyesis (39,45), que regulen el tamao del nicho hematopoytico o que su regulacin sea a travs de la secrecin de leptina (64).

La Hematopoyesis y lasEnfermedades Hematolgicas

Es evidente que la hematopoyesis es un proceso muy complejo, en el que participan diversos tipos celulares y sus productos; todos stos interactan estrechamente para permitir que la produccin de clulas sanguneas ocurra de manera controlada. Es tambin claro que al ocurrir alteraciones en algunos de los compartimientos celulares del sis-tema hematopoytico, sobre todo en los ms pri-mitivos, la produccin de clulas sanguneas puede verse modificada, de manera que los niveles de clulas circulantes sean abatidos drsticamente o incrementados muy por encima de lo normal; cualquiera de stas condiciones puede conducir a estados fisiolgicos muy delicados, e incluso, a la muerte del individuo. Enfermedades como la anemia aplsica, las leucemias mieloides (tanto

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crnica como aguda), las leucemias linfoides y los sndromes mielodisplsicos se originan a partir de alteraciones en clulas troncales y progenitoras hematopoyticas (65-68). Hoy en da tenemos un mayor conocimiento acerca de los genes involu-crados en la transformacin maligna que conduce a ciertas leucemias (69), tenemos una idea muy clara sobre la identidad de las clulas inmaduras en donde ocurren dichas transformaciones (70) y del papel que el microambiente hematopoytico parece jugar en la fisiopatologa de leucemias y sndromes de falla medular (71). Sin embargo, son todava muchas las preguntas que quedan por con-testar. Desde el punto de vista biolgico, todas s-tas enfermedades constituyen campos de estudio extraordinarios; desde el punto de vista clnico, el tratamiento y la prevencin de ellas representan grandes retos para la medicina del siglo XXI.

Referencias

1. Wintrobe MM. Clinical Hematology. 8th ed. Phila-delphia Lea & Febiger. 1981, p352. Torok-Strob B. Cellular interactions. Blood 1988; 72: 373-3853. Wognum A, Eaves AC, Thomas TE. Identification and isolation of hematopoietic stem cells. Arch Med Res 2003; 34: 461-4754. Civin CI, Gore SD. Antigenic analysis of hematopoie-sis: a review. J Hematother 1993; 2: 137-1445. Quesenberry P, Colvin G. Hematopoietic Stem Cells, progenitor cells and cytokines. En: Hematolo-gy. Beutler E, Marshall S, Coller B, Kipps T, Seligsohn M. Mc Graw Hill, 2001, pp1536. Rosenbauer F, Tenen DG. Transcription factors in mye-loid development: balancing differentiation with transfor-mation. Nat Rev Immunol 2007; 7: 105-177. Back J, Allman D, Chan S, Kastner P. Visualizing PU.1 activity during hematopoiesis. Exp. Hematol 2005; 33: 395-4028. John F, McAdara J, Yaron Y, Sakaguchi M, John F, Gasson J. Characterization of HOX Gene Expresin During Myelo-poiesis: Role of HOX A5 in Lineage Comminment and Ma-turation. Blood 1999; 93: 3391-34009. Yamanaka R, Barlow C, Castilla L, Liu P, Eckhaus M, Deker T, Xanthopoulos K. Impaired granulo-poiesis myelodysplasia and early lethality in CCAAT enhancer binding protein deficient mice. Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94: 13181-13192

10. Okuda T, van D J, Hiebert S, Grosveld G, Do-wning J. AML1, the target of multiple chromosomal tranlocations in human leukemia is essential for normal fetal liver hematopoiesis. Cell 1996; 87: 321-33011. Shivdasani R, Mayer E, Orkin S. Absence of blood formation in mice lacking the T-cell leukemia onco-protein tal-1/SCL. Nature 1995; 373: 432-43412. Lowry J, Mackay J. GATA-1: one protein, many partners. Int J Biochem Cell Biol 2006; 38: 6-1113. Cantor A, Orkin S. Transcriptional regulation of erythropoiesis: an affair involving multiple partners. Oncogene 2002; 21: 3368-7614. Miyajima A, Ito Y, Kinoshita T. Cytokine signaling for proliferation, survival and death in hematopoietic cells. Int J Hematology 1999; 69: 137-14615. Schareder J. IL-3. En: A compendium of cytokines and other mediators of host defense. Joost J, Oppen-helm J, & Feldmann M, eds. AP Press 2001. pp 89916. Nicola N. GM-CSF. En: A compendium of cytokines and other mediators of host defense. Joost J, Oppen-helm J, & Feldmann M eds. AP Press 2001. pp 89917. Cohen A, Zesbo K, Inoue H, Hines D, Bone T, Chazin V, Tsai L, Ritch T, Souza L. In vivo stimulation of granulo-poiesis by recombinant human granulocyte colony-stimula-ting factor. Proc Natl Acad Sci USA 1987; 84: 2484-248818. Anderson DM, Lyman SD, Baid A, Wignal J, Ei-senman J, Rauch C, March C, Boswel S, Gimpel S, Cosman D. Molecular cloning of mast cell growth fac-tor, a hematopoietin that is active in both membrane bound and soluble forms. Cell 1990; 63: 235-24319. Brasel K, Mc Kenna H, Morrissey P, Carrier K, Morris A, Lee C, Williams D, SD Lyman. Hematologic effects of flt3-L in vivo in mice. Blood 1996; 88: 2004-201220. Aggarwal B, Samanta A, Feldmann M. TNF-. En: A compendium of cytokines and other mediators of host defense. Joost J, Oppenhelm J, & Feldmann M. AP Press 2001. pp 89921. Fortunel N, Hatzfeld A, Hatzfeld J. Transforming growth factor-: pleiotropic role in the regulation of hematopoiesis. Blood 2000; 96: 2022-203622. Broxmeyer H. Supressor Cytokines and regulation of myelopoiesis. Am J Ped Hematol/Oncol 1992; 14: 22-3023. Baba Y, Pelayo R, Kincade PW. Relationships bet-ween hematopoietic stem cells and lymphocyte pro-genitors. Trends Immunol 2004; 25: 645-64924. Igarashi H, Gregory SC, Yokota T, Sakaguchi N, Kincade PW. Transcription from the RAG1 locus marks the earliest lymphocyte progenitors in bone marrow. Immunity 2002; 17: 117-13025. Yokota T, Kouro T, Hirose J, Igarashi H, Garrett KP, Gregory SC, Kincade PW. Unique properties of fe-

106 Hematopoyesis

tal lymphoid progenitors identified according to RAG1 gene expression. Immunity 2003; 19: 365-37526. Pelayo R, Welner R, Perry SS, Huang J, Baba Y, Yokota T, Kincade PW. Lymphoid progenitors and primary routes to becoming cells of the immune sys-tem. Curr Opin Immunol 2005; 17: 100-10727. Welner RS, Pelayo R, Garrett KP, Chen X, Perry SS, Sun X-H, Kee BL, Kincade PW. Interferon-produ-cing killer dendritic cells (IKDC) arise via a unique di-fferentiation pathway from primitive c-kitHiCD62L+ lymphoid progenitors. Blood 2007; PMID 17317852 28. Kondo M, Weissman IL, Akashi K. Identifica-tion of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow. Cell 1997; 91: 661-67229. Pelayo R, Welner RS, Nagai Y, Kincade PW. Life before the Pre-BCR checkpoint: specification and com-mitment of primitive lymphoid progenitors in adult bone marrow. Semin. Immunol 2006; 18: 2-1130. Perry SS, Welner RS, Kouro T, Kincade PW, Sun XH. Primitive lymphoid progenitors in bone marrow with T lineage reconstituting potential. J Immunol 2006; 177: 2880-28831. Bloom B & Spits H. 2006. Development of human lymphoid cells. Annu Rev Immunol 2006; 24: 287-32032. Galy A, Travis M, Cen D, Chen B. Human T, B, natural killer, and dendritic cells arise from a common bone ma-rrow progenitor cell subset. Immunity 1995; 3: 459-47333. Haddad R, Guardiola P, Izac P, Thibault C, Radich J et al. Molecular characterization of early human T/NK and B-lymphoid progenitor cells in umbilical cord blood. Blood 2004; 104: 3918-392634. Busslinger M. Transcriptional control of early B cell development. Annu Rev Immunol 2004; 22: 55-7935. Bhandoola A, Sambandam A, Allman D, Meraz A, Schwarz B. Early T lineage progenitors: new insights, but old questions remain. J Immunol 2003; 171: 5653-565836. Schwarz BA, Sambandam A, Maillard I, Harman BC, Love PE, Bhandoola A. Selective thymus settling regulated by cytokine and chemokine receptors. J Immunol 2007; 178: 2008-201737. Di Santo JP, Vosshenrich CA. Bone marrow ver-sus thymic pathways of NK cell development. Immu-nol Rev 2006; 214: 35-4638. Dontje W, Schotte R, Cupedo T, Nagasawa M, Scheeren F, Gimeno R, Spits H, Blom B. Delta-like 1-indu-ced Notch1 signaling regulates the human plasmacytoid dendritic cells versus T-cell lineage decisions through con-trol of GATA3 and Spi-B. Blood 2006; 107: 2446-245239. Mayani H, Guilbert LJ, Janowska-Wieczorek A. Biology of the hemopoietic microenvironment. Eur J Haematol 199240. Long W M, Wicha MS. The hemopoietic Micro-environment. John Hopkins, 1993

41. Perkins S, Feishman M. Hematopoietic Microenvi-ronment. J Clin Invest 1988; 81: 1072-107942. Dexter TM, Allen TD, Lajtha L. Conditions con-trolling the proliferation of hemopoietic stem cells in vitro. J Cell Physiol 1977; 91: 335-34443. Deans RJ, Moseley AB. Mesenchymal stem ce-lls: Biology and potential clinical uses. Exp Hematol 2000; 28: 875-88444. Dorshkind K. Regulation of hemopoiesis by bone marrow stromal cells and their products. Ann Rev Im-munol 1990; 8: 111-13745. Deryugina E. Mller-Sieburg. Stromal cells in long-term cultures: keys to the elucidation of hematopoietic development? Crit Rev Immunol 1993;13:115-15046. Flores-Figueroa E, Montesinos JJ, Mayani H. Clu-las Troncales Mesenquimales: historia, biologa y apli-cacin clnica. Rev Inv Cln 2006; 58: 498-51147. Charbord P. The hematopoietic stem cell and the stro-mal microenvironment. Therapy. 2001; 56: 383-38448. Moreau, I., Duvert, V., Caux, C., Galmiche, M.C., Charbord, P., Bancereau, J., y Saeland, S. Myofibro-blastic stromal cells isolated from human bone ma-rrow induce the proliferation of both early myeloid and B lymphoid cells. Blood 1993; 82: 2396-240549. Li K, Senseb L, Herv P, Charbord P. Non transfor-med colony-derived stromal cell lines from normal human marrow. III. The maintenance of hematopoiesis from CD34+ cell populations. Exp Hematol 1997; 25: 582-59150. Almeida-Porada G, Porada CD, Tran N, Zanjani ED. Cotransplantation of human stromal cell pro-genitors into preimmune fetal sheep results in early appearance of human donor cells in circulation and boosts cell levels in bone marrow at later time points after transplantation. Blood 2000; 95: 3620-362751. Yoder. M.C., Williams D.A. Matrix molecule interactions with hematopoietic cells. Exp Hematol 1995; 23: 961-96752. Gordon M.Y. Extracellular matrix of the marrow microenvironment. Br J Haematol 1988; 70: 1-453. Teixido J, Hemier ME, Greenberger JS, Ankiesa-ria P. Role of 1 and 2 integrins in the adhesion of human CD34hi stem cells to bone marrow stroma. J Clin Invest 1992; 9: 358-36754. Coulombel L., Auffray I., Gaugler M-H., Rosemblatt M. Expression and function of integrins on hematopoie-tic progenitor cells. Acta Haematol 1997; 97: 13-2155. Lataillade J.J., Clay D., Bourin P., Hrodin F., Du-puy C., Jasmin C, Le Bousse-Kerdils M.C. Stromal cell-derived factor 1 regulates primitive hematopoiesis by suppressing apoptosis and by promoting Go/G1 transition in CD34+ cells: evidence for an autocrine/paracrine mechanism. Blood 2002; 99: 1117-1129

107Mayani et al, Cancerologa 2 (2007): 95-107

56. Dorshkind K. Regulation of hemopoiesis by bone marrow stromal cells and their products. Annu Rev Immunol 1990; 8: 111-13757. Emerson SG, Taichman RS, Adams S. The role of osteoblasts in hematopoietic stem cell biology. En: Hematopoiesis: a developmental approach. Zon LI. Ed. Oxford. 2001:476-48358. Taichman RS, Emerson S.G. The role of osteoblasts in the hematopoietic microenvironment. Stem Cells. 1998; 16: 7-1559. Arai F, Hirao A, Ohmura M, Sato H, Matsuoka S, Takubo K, Ito K, Koh GY, Suda T. Tie2/angiopoietin-1 signaling regulates hematopoietic stem cell quiescence in the bone marrow niche. Cell 2004; 118: 149-16160. Yu XF, Huang YF, Collin-Osdoby P, Osdoby p. Stromal cell-derived fator-1 (SDF-1) recruites osteo-clast precursors by inducing chemotaxis, matrix meta-lloproteinase-0 (MMP-9) activity, and collagen transmi-gration. J Bone Mineral Res 2003; 18: 1404-141861. Calvi LM, Adams GB, Weibrecht KW, Weber JM, Olson DP, Knight MC, Martin RP, Schipani E, Divieti P, Bringhurst FR, Milner LA, Kronenberg HM, Scadden DT. Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche. Nature 2003; 425: 841-84662. Taichman RG. Blood and bone: two tissues who-se fates are intertwined to create the hematopoietic stem-cell niche. Blood 2005; 105: 2631-2639

63. Calvi LM, Adams GB, Weibrecht KW, Weber JM, Olson DP, Knight MC, Martin RP, Schipani E, Divieti P, Bringhurst, Milner LA, Kronenberg, Scadden DT. Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche. Nature 2004; 425: 841-84564. Gimble JM, Robinson CE, Wu X, Kelly KA. The Function of Adipocytes in the Bone: An Update. Bone 1996; 19: 421-42865. Petzer AL, Gunsilius E. Hematopoietic stem cells in chro-nic myeloid leukemia. Arch Med Res 2003; 34: 496-50666. Hope KJ, Jin L, Dick JE. Human acute myeloid leu-kemia stem cells. Arch Med Res 2003; 34: 507-51467. Mundle SD. Lingering biologic dilemmas about the status of the progenitor cells in myelodysplasia. Arch Med Res 2003; 34: 515-51968. Maciejewski JP, Risitano A. Hematopoietic stem cells in aplastic anemia. Arch Med Res 2003; 34: 520-52769. Jordan CT. Unique molecular and cellular featu-res of acute myelogenous leukemia stem cells. Leuke-mia 2002; 16: 559-56270. Montesinos JJ, Mayani H. Nuevos conceptos en la biologa de la Leucemia Mieloide Aguda. Gac Med Mex 2002; 138: 67-7671. Mayani H. Composition and function of the he-mopoietic microenvironment in human myeloid leu-kemia. Leukemia 1996; 10: 1041-1047