Biotipos fenotipos genotipo II (rmp 2011) ¿Qué biótipo tenemos?
ESPECIES Y BIOTIPOS DE Brucella spp AISLADAS EN ANIMALES SILVESTRES Y BOVINOS DE CASTILLA Y LEON...
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ESPECIES Y BIOTIPOS DE ESPECIES Y BIOTIPOS DE Brucella spp Brucella spp AISLADAS EN AISLADAS EN ANIMALES SILVESTRES Y BOVINOS DE CASTILLA Y ANIMALES SILVESTRES Y BOVINOS DE CASTILLA Y LEON 2005 - 2008 LEON 2005 - 2008 . León Soria B urgos A vila Zam ora Salam anca Palencia Segovia Valladolid B.abortus.BIO TIPO 3 B.abortus BIO TIPO 1 (cepa de cam po) B.abortus BIO TIPO 1 (cepa vac.rb51) B.abortus BIO TIPO 1 (cepa de cam po,cepa vacunal rb51) B.abortus.BIO TIPO 1 (cepa vac.B 19) B.abortus.BIO TIPO 1 (cepa vac rb51 y B19) B.m elitensis.BIO TIPO 3 B.abortus-BIO TIPO 3.B.m elitensis-BIO TIPO 3 B.abortus-BIO TIPO 3 y 1 (cepa vac.rb51 y B 19) B.abortus-BIO TIPO 3 y 1 (cepa vac.rb51).B .m elitensis BIO TIPO 3 CONCLUSIONES CONCLUSIONES 1.No se aisló B. abortus, especie de gran especificidad en el ganado bovino, lo que en principio permitiría descartar la hipótesis de la fauna silvestre como reservorio de gran importancia para B. abortus, al menos en Castilla y León. 2.El aislamiento de B.melitenses biotipo 1 (cepa vacunal Rev-1) en animales silvestres confirmaría la existencia de vías de contagio entre poblaciones silvestres y domésticas. Especialmente importante se revela el papel de jabalí como especie que debe ser objeto de un mayor control. 3.El hallazgo de B.suis biotipo 3 en jabalíes vuelve a poner de manifiesto la importancia del jabalí como agente implicado en la dinámica de transmisión de la brucelosis porcina. MAPAS DE DISTRIBUCION DE MAPAS DE DISTRIBUCION DE LOS DIFERENTES BIOTIPOS DE LOS DIFERENTES BIOTIPOS DE Brucella spp Brucella spp BIOTIPOS DE BRUCELA AISLADOS INTRODUCCIÓN INTRODUCCIÓN Castilla y León es una Comunidad Autónoma con una superficie total de 94.225 Km², Posee un censo de 1.226.014 bovinos y 4.492.736 ovinos/caprinos así como una red de treinta y nueve Espacios Naturales Protegidos con gran variedad de especies silvestres. Castilla y León instauró un plan de vigilancia epidemiológica en la fauna silvestre en el año 2004 con el fin, entre otros, de profundizar en el conocimiento de la epidemiología de diversas enfermedades comunes al ganado domestico y a la fauna silvestre. Entre las enfermedades objeto de vigilancia están incluidas aquellas producidas por especies del genero Brucella.spp. La importancia de realizar una tipificación de todas los aislamientos de Brucella spp obtenidos en los animales de Castilla y León se resume en: 1.Establecer la identidad de la especie de Brucella spp causante de brotes, elaboración de mapas de sus biotipos en Castilla y León y establecer programas de control en caso necesario. 2.Determinar la importancia de la fauna silvestre como posible reservorio de la enfermedad para el ganado domestico y establecer el posible sentido de la transmisión. 3.Evaluar las especies silvestres que presentan un mayor riesgo para esta enfermedad. 4.Valorar la posible presencia de aislamiento de cepas vacunales vivas. Biotipos de Brucella Biotipos de Brucella spp. aislados spp. aislados León Burgos Soria Avila Zam ora Salam anca Palencia Segovia Valladolid B.suis.B IO TIPO 1 uestra positiva B .m elitensis.B IO TIP O 3 uestra positiva B .m elitensis.B IO TIP O 1 (cepa vacunalR EV-1) 2 m uestras positivas uestras positivas Castilla y León Bandas de PCR para Brucella suis B1: biotipo1 ; B2: biotipo2 ; B3: biotipo3 ; C: controles GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DÍEZ GALLEGO, M.; GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DÍEZ GALLEGO, M.; GONZÁLEZ GONZÁLEZ, Y.; GONZÁLEZ GONZÁLEZ, Y.; MARQUÉS PRENDES, S. MARQUÉS PRENDES, S. NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S TO TAL 251 243 8 260 260 0 181 181 0 390 0 0 NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S TO TAL 97 97 0 100 100 0 41 41 0 66 0 0 NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S TO TAL 21 21 0 13 13 0 0 0 0 1 0 0 NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S NºMUESTRAS NEGATIVAS PO SITIVA S TO TAL 19 19 0 1 1 0 4 4 0 1 0 0 JABALÍ RUM IANTES SILVESTRES CANIDOS SILVESTRES 2005 2006 2007 2008 2005 2006 LAGOMORFOS SILVESTRES 2005 2006 2007 2007 2008 2008 2005 2006 2007 2008 RESULTADOS FAUNA SILVESTRE 2005-2008 AÑO NºMUESTRAS NEGATIVOS PO SITIVO S 2005 742 380 360 2006 1.282 854 421 2007 1.091 653 437 2008 1.245 1.008 237 TOTAL 4.360 2.895 1.455 RESULTADOS GANADO BOVINO % MUESTRAS SEGUN GRUPO DE ANIMALES SILVESTRES 75% 21% 2% 2% JABALÍ RUMIANTES CANIDOS LAGOMORFOS PORCETAJE DE MUESTRAS SEGÚN GRUPO DE ANIMALES 75% 25% BOVINOS FAUNA SILVESTRE 0 200 400 600 800 1.000 1.200 1.400 2005 2006 2007 2008 MUESTRAS RECOGIDAS MÉTODOS LABORATORIALES: MÉTODOS LABORATORIALES: Las muestras utilizadas para la realización del presente estudio, se remitieron al Laboratorio Regional de Sanidad Animal (León) para la identificación de Brucella spp y al Laboratorio Nacional de Referencia Español de Santa Fe (Granada) para la determinación de la especie y biotipo. La identificación y tipificación de las cepas de Brucella spp. aisladas mediante cultivo fueron realizadas mediante técnicas bacteriológicas standard y técnicas de biología molecular , en concreto esta última mediante PRC-AMOS modificada (PCR múltiple para la diferenciación de las distintas especies y biotipos de Brucella.) Adicionalmente, las cepas de Brucella suis fueron identificadas molecularmente mediante el método rápido INgene Bruce-ladder suis, que permite la detección de los 5 biotipos existentes a partir de DNA purificado o de colonias aisladas mediante la amplificación por PCR de seis bandas de diferente tamaño cuya combinación proporciona unos perfiles característicos en función del biotipo de B.suis de que se trate. MUESTREO: MUESTREO: Las determinaciones microbiológicas se realizaron sobre muestras procedentes de: Abortos y anejos fetales, básicamente de bovinos domésticos. Muestras procedentes de matadero de órganos de animales de la especie bovina positivos y negativos a serología (Fijación del Complemento y/o ELISA) Muestras de órganos, en animales silvestres, recogidas en cacerías. 0 100 200 300 400 500 2005 2006 2007 2008 MUESTRAS RECOGIDAS 84,31% 0,35% 1,40% 0,21% 0,98% 12,46% 0,28% B .abortus B iotype 3 B .abortus B iotype 1 (field strain) B .abortus B iotype 1 (vaccine strain rb51) B .abortus B iotype 1 (vaccine strain B 19) B .suis B iotipo 3 B .m ellitensis B iotype 1 (vaccine strain rev-1) B.m elitensis B iotype 3 38% 49% 13% B .suis biotiype 3 B.m ellitensis biotype 1 (vaccine strain rev-1) B.m ellitensis biotype 3 Biotipos de Biotipos de Brucella Brucella spp. spp. en fauna en fauna silvestre silvestre RESULTADOS: RESULTADOS: • El porcentaje de aislamientos de Brucella spp. ,considerando todas las muestras analizadas, es del 0,62% en fauna silvestre y 32.54% en ganado bovino. • En los aislamientos de fauna silvestre destaca el jabalí, donde se ha aislado Brucella spp. en el 0.74% de las muestras, seguida del ciervo, con un 0,34% • No se ha aislado B. abortus en fauna salvaje en el periodo 2005-2008. Las especies de Brucella spp. aisladas en jabalíes fueron B. melitensis biotipo 3 ,y B.suis biotipo 3. • Como hallazgo, se aislaron 4 muestras de B.melitenses biotipo 1 (cepa vacunal Rev-1) en jabalíes, circunscritas al norte de la provincia de Palencia. • En bovinos el porcentaje los distintos biotipos en los aislamientos positivos no vacunales fue: B. abortus biotipo 3 (97,33%), B. abortus biotipo 1 (1,13%) y B.melitenses (1,54%) • El porcentaje de aislamientos de biotipos vacunales en bovino es del 12,82% B.suis biotipo 3 B .melitensis biotipo3 B .melitensis biotipo1 (rev -1) ESPECIE NºM UESTRAS BIO TIPAD O S B.abortus B iotipo 3 B.abortus B iotipo 1 (cepa de cam po) B.abortus B iotipo 1 (cepa vacunal rb51) B.abortus B iotipo 1 (cepa vacunalB 19) B.suis B iotipo 3 (cepa de cam po) B.mellitensis B iotipo 1 (cepa vacunalrev-1) B. melitensis B iotipo 3 JABALI 1080 8 0 0 0 0 3 4 1 RUM IANTES SILVESTRES 304 1 0 0 0 0 0 1 0 CANIDOS SILVESTRES 35 0 0 0 0 0 0 0 0 LAGOMORFOS 25 0 0 0 0 0 0 0 0 BO VINO 4360 1419 1204 14 178 4 0 0 19 TO TAL 5804 1428 1204 14 178 4 3 5 20
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ESPECIES Y BIOTIPOS DE ESPECIES Y BIOTIPOS DE Brucella sppBrucella spp AISLADAS EN ANIMALES SILVESTRES Y AISLADAS EN ANIMALES SILVESTRES Y
BOVINOS DE CASTILLA Y LEON 2005 - 2008BOVINOS DE CASTILLA Y LEON 2005 - 2008
.
León
Soria
Burgos
Avila
Zamora
Salamanca
Palencia
Segovia
Valladolid
B. abortus. BIOTIPO 3
B. abortus BIOTIPO 1 (cepa de campo)
B. abortus BIOTIPO 1 (cepa vac. rb51)
B. abortus BIOTIPO 1 (cepa de campo, cepa vacunal rb51)
B. abortus. BIOTIPO 1 (cepa vac. B19)
B. abortus. BIOTIPO 1 (cepa vac rb51 y B19)
B. melitensis. BIOTIPO 3
B. abortus-BIOTIPO 3. B. melitensis-BIOTIPO 3
B. abortus-BIOTIPO 3 y 1 (cepa vac. rb51 y B19)
B. abortus-BIOTIPO 3 y 1 (cepa vac. rb51). B. melitensis BIOTIPO 3
CONCLUSIONESCONCLUSIONES
1.No se aisló B. abortus, especie de gran especificidad en el ganado bovino, lo que en principio permitiría descartar la hipótesis de la fauna silvestre como reservorio de gran importancia para B. abortus, al menos en Castilla y León.
2.El aislamiento de B.melitenses biotipo 1 (cepa vacunal Rev-1) en animales silvestres confirmaría la existencia de vías de contagio entre poblaciones silvestres y domésticas. Especialmente importante se revela el papel de jabalí como especie que debe ser objeto de un mayor control.
3.El hallazgo de B.suis biotipo 3 en jabalíes vuelve a poner de manifiesto la importancia del jabalí como agente implicado en la dinámica de transmisión de la brucelosis porcina.
MAPAS DE DISTRIBUCION MAPAS DE DISTRIBUCION DE LOS DIFERENTES DE LOS DIFERENTES
BIOTIPOS DE Brucella sppBIOTIPOS DE Brucella spp
BIOTIPOS DE BRUCELA AISLADOS
INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNCastilla y León es una Comunidad Autónoma con una superficie total de
94.225 Km², Posee un censo de 1.226.014 bovinos y 4.492.736 ovinos/caprinos así como una red de treinta y nueve Espacios Naturales Protegidos con gran variedad de especies silvestres.
Castilla y León instauró un plan de vigilancia epidemiológica en la fauna silvestre en el año 2004 con el fin, entre otros, de profundizar en el conocimiento de la epidemiología de diversas enfermedades comunes al ganado domestico y a la fauna silvestre. Entre las enfermedades objeto de vigilancia están incluidas aquellas producidas por especies del genero Brucella.spp.
La importancia de realizar una tipificación de todas los aislamientos de Brucella spp obtenidos en los animales de Castilla y León se resume en:
1. Establecer la identidad de la especie de Brucella spp causante de brotes, elaboración de mapas de sus biotipos en Castilla y León y establecer programas de control en caso necesario.
2. Determinar la importancia de la fauna silvestre como posible reservorio de la enfermedad para el ganado domestico y establecer el posible sentido de la transmisión.
3. Evaluar las especies silvestres que presentan un mayor riesgo para esta enfermedad.
4. Valorar la posible presencia de aislamiento de cepas vacunales vivas.
Biotipos de Brucella Biotipos de Brucella spp. aisladosspp. aislados
León
Burgos
Soria
Avila
Zamora
Salamanca
Palencia
Segovia
Valladolid
B. suis. BIOTIPO 1
1 muestra positiva
B. melitensis. BIOTIPO 3
1 muestra positiva
B. melitensis. BIOTIPO 1 (cepa vacunal REV-1)
2 muestras positivas
3 muestras positivas
Castilla y León
Bandas de PCR para Brucella suis
B1: biotipo1 ; B2: biotipo2 ; B3: biotipo3 ; C: controles
GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DÍEZ GALLEGO, M.; GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DÍEZ GALLEGO, M.; GONZÁLEZ GONZÁLEZ, Y.; GONZÁLEZ GONZÁLEZ, Y.; MARQUÉS PRENDES, S.MARQUÉS PRENDES, S.
Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS
TOTAL 251 243 8 260 260 0 181 181 0 390 0 0
Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS
TOTAL 97 97 0 100 100 0 41 41 0 66 0 0
Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS
TOTAL 21 21 0 13 13 0 0 0 0 1 0 0
Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS
TOTAL 19 19 0 1 1 0 4 4 0 1 0 0
JABALÍ
RUMIANTES SILVESTRES
CANIDOS SILVESTRES
2005 2006 2007 2008
2005 2006
LAGOMORFOS SILVESTRES
2005 2006 2007
2007 2008
2008
2005 2006 2007 2008
RESULTADOS FAUNA SILVESTRE 2005-2008
AÑO Nº MUESTRAS NEGATIVOS POSITIVOS
2005 742 380 3602006 1.282 854 4212007 1.091 653 4372008 1.245 1.008 237
TOTAL 4.360 2.895 1.455
RESULTADOS GANADO BOVINO
% MUESTRAS SEGUN GRUPO DE ANIMALES SILVESTRES
75%
21%
2% 2%
JABALÍ
RUMIANTES
CANIDOS
LAGOMORFOS
PORCETAJE DE MUESTRAS SEGÚN GRUPO DE ANIMALES
75%
25%
BOVINOS
FAUNA SILVESTRE
0
200
400
600
800
1.000
1.200
1.400
2005 2006 2007 2008
MUESTRAS RECOGIDAS
MÉTODOS LABORATORIALES:MÉTODOS LABORATORIALES:Las muestras utilizadas para la realización del presente estudio, se remitieron al
Laboratorio Regional de Sanidad Animal (León) para la identificación de Brucella spp y al Laboratorio Nacional de
Referencia Español de Santa Fe (Granada) para la determinación de la especie y biotipo.
La identificación y tipificación de las cepas de Brucella spp. aisladas mediante cultivo fueron realizadas mediante técnicas bacteriológicas standard y técnicas de biología molecular , en concreto esta última mediante PRC-AMOS modificada (PCR múltiple para la diferenciación de las distintas especies y biotipos de Brucella.)
Adicionalmente, las cepas de Brucella suis fueron identificadas molecularmente mediante el método rápido INgene Bruce-ladder suis, que permite la detección de los 5 biotipos existentes a partir de DNA purificado o de colonias aisladas mediante la amplificación por PCR de seis bandas de diferente tamaño cuya combinación proporciona unos perfiles característicos en función del biotipo de B.suis de que se trate.
MUESTREO:MUESTREO:Las determinaciones microbiológicas se realizaron sobre muestras procedentes de:
Abortos y anejos fetales, básicamente de bovinos domésticos. Muestras procedentes de matadero de órganos de animales de la especie
bovina positivos y negativos a serología (Fijación del Complemento y/o ELISA) Muestras de órganos, en animales silvestres, recogidas en cacerías.
0
100
200
300
400
500
2005 2006 2007 2008
MUESTRAS RECOGIDAS
84,31%
0,35%
1,40%
0,21%
0,98%
12,46%0,28%
B.abortus Biotype 3
B.abortus Biotype 1 (field strain)
B.abortus Biotype 1 (vaccine strain rb51)
B.abortus Biotype 1 (vaccine strain B19)
B.suis Biotipo 3
B.mellitensis Biotype 1 (vaccine strain rev-1)
B. melitensis Biotype 3
38%
49%
13%
B. suis biotiype 3
B. mellitensis biotype 1 (vaccine strain rev-1)
B. mellitensis biotype 3
Biotipos de Biotipos de Brucella spp.Brucella spp. en en fauna silvestrefauna silvestre
RESULTADOS:RESULTADOS:
• El porcentaje de aislamientos de Brucella spp. ,considerando todas las muestras analizadas, es del 0,62% en fauna silvestre y 32.54% en ganado bovino.• En los aislamientos de fauna silvestre destaca el jabalí, donde se ha aislado Brucella spp. en el 0.74% de las muestras, seguida del ciervo, con un 0,34%• No se ha aislado B. abortus en fauna salvaje en el periodo 2005-2008. Las especies de Brucella spp. aisladas en jabalíes fueron B. melitensis biotipo 3 ,y B.suis biotipo 3.• Como hallazgo, se aislaron 4 muestras de B.melitenses biotipo 1 (cepa vacunal Rev-1) en jabalíes, circunscritas al norte de la provincia de Palencia.• En bovinos el porcentaje los distintos biotipos en los aislamientos positivos no vacunales fue: B. abortus biotipo 3 (97,33%), B. abortus biotipo 1 (1,13%) y B.melitenses (1,54%)• El porcentaje de aislamientos de biotipos vacunales en bovino es del 12,82%
B.suis biotipo 3
B.melitensis biotipo3
B.melitensis biotipo1 (rev -1)
ESPECIE Nº MUESTRAS BIOTIPADOSB.abortus Biotipo 3
B.abortus Biotipo 1 (cepa
de campo)
B.abortus Biotipo 1
(cepa vacunal rb51)
B.abortus Biotipo 1
(cepa vacunal B19)
B.suis Biotipo 3 (cepa de campo)
B.mellitensis Biotipo 1 (cepa vacunal rev-1)
B. melitensis Biotipo 3
JABALI 1080 8 0 0 0 0 3 4 1RUMIANTES SILVESTRES 304 1 0 0 0 0 0 1 0
CANIDOS SILVESTRES 35 0 0 0 0 0 0 0 0
LAGOMORFOS 25 0 0 0 0 0 0 0 0BOVINO 4360 1419 1204 14 178 4 0 0 19TOTAL 5804 1428 1204 14 178 4 3 5 20
