ESTANDARIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UNA PCR...
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ESTANDARIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UNA PCR MULTIPLEX PARA LA DIFERENCIACIÓN DE M. tuberculosis y M. bovis EN MUESTRAS DE ESPUTO SUSANA FLORES VILLALVA 1 , ELBA RODRIGUEZ HERNANDEZ 1 , ANA MARIA ANAYA ESCALERA 1 , CLAUDIA PEREA 2 , FELICIANO MILIAN SUAZO 2 y GERMINAL CANTO ALARCON 2 1 Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento Animal CENIDF y MA-INIFAP, 2 Universidad Autonóma de Querétaro. [email protected] La tuberculosis es una enfermedad infecciosa de curso crónico que afecta principalmente al sistema respiratorio aunque puede diseminarse a otros órganos. Esta enfermedad es causada por bacterias del complejo M. tuberculosis, del cual forman parte M. tuberculosis y M. bovis, se caracterizan por tener el 99.9% de identidad a nivel de nucleótidos y una secuencia idéntica de RNAr 16S. M. tuberculosis es el principal agente causante de tuberculosis en humanos; sin embargo, M. bovis, el agente causal de tuberculosis bovina es responsable del 10 al 15% de casos de tuberculosis en humanos. La identificación de la especie de micobacteria causante de tuberculosis es de vital importancia en la salud pública, epidemiología y tratamiento de la enfermedad ya que M. bovis es resistente a uno de los antibióticos de primera línea, la pirazinamida. El diagnóstico de la infección se realiza a través de la baciloscopia seguido del cultivo bacteriano; pero, este último puede tomar hasta 4 semanas. Es por eso que en los últimos años se han desarrollado métodos moleculares basados en la identificación de secuencias específicas de M. tuberculosis con el objetivo de aumentar la precisión y obtener resultados en un tiempo mucho menor. No obstante estos métodos no permiten la identificación a nivel de especie de las bacterias del complejo M. tuberculosis. Por lo que el objetivo de este estudio fue desarrollar un método de PCR que permita la identificación y diferenciación de M. tuberculosis y M. bovis en muestras de esputo. Este método consiste en la amplificación del gen rpoB para la identificación de Mycobacterium spp. Así como la amplificación de un fragmento de 150 pb de la región de diferenciación 8 (RD8) presente en M. tuberculosis, y un fragmento de 360 pb de la región RD8 ausente en M. bovis.
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ESTANDARIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UNA PCRMULTIPLEX PARA LA DIFERENCIACIÓN DE M. tuberculosis
y M. bovis EN MUESTRAS DE ESPUTOSUSANA FLORES VILLALVA1, ELBA RODRIGUEZ HERNANDEZ1, ANA MARIA ANAYA ESCALERA1, CLAUDIA
PEREA2, FELICIANO MILIAN SUAZO2 y GERMINAL CANTO ALARCON2
1 Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento Animal CENIDF y MA-INIFAP, 2Universidad Autonóma de Querétaro. [email protected]
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa de curso crónico que afecta principalmente al sistemarespiratorio aunque puede diseminarse a otros órganos. Esta enfermedad es causada por bacteriasdel complejo M. tuberculosis, del cual forman parte M. tuberculosis y M. bovis, se caracterizan portener el 99.9% de identidad a nivel de nucleótidos y una secuencia idéntica de RNAr 16S. M.tuberculosis es el principal agente causante de tuberculosis en humanos; sin embargo, M. bovis, elagente causal de tuberculosis bovina es responsable del 10 al 15% de casos de tuberculosis enhumanos. La identificación de la especie de micobacteria causante de tuberculosis es de vitalimportancia en la salud pública, epidemiología y tratamiento de la enfermedad ya que M. bovis esresistente a uno de los antibióticos de primera línea, la pirazinamida. El diagnóstico de la infecciónse realiza a través de la baciloscopia seguido del cultivo bacteriano; pero, este último puede tomarhasta 4 semanas. Es por eso que en los últimos años se han desarrollado métodos molecularesbasados en la identificación de secuencias específicas de M. tuberculosis con el objetivo deaumentar la precisión y obtener resultados en un tiempo mucho menor. No obstante estos métodosno permiten la identificación a nivel de especie de las bacterias del complejo M. tuberculosis. Por loque el objetivo de este estudio fue desarrollar un método de PCR que permita la identificación ydiferenciación de M. tuberculosis y M. bovis en muestras de esputo. Este método consiste en laamplificación del gen rpoB para la identificación de Mycobacterium spp. Así como la amplificaciónde un fragmento de 150 pb de la región de diferenciación 8 (RD8) presente en M. tuberculosis, y unfragmento de 360 pb de la región RD8 ausente en M. bovis.
