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ESTUDIO BIOFÍSICOQUÍMICO DEL PROTEINOGRAMA EN GANADO BOVINO CRIOLLO

De Vega, F.; Ábalos, E.: Lobo, M.; Costas Otero, S.Laboratorio de Investigaciones Biofisicoquímicas. Gorriti Nº 237.

S. S. de Jujuy (4600). Argentina. Tel-Fax: 0388-4221579 fdevega@fca.unju.edu.ar

SECTER. Universidad Nacional de Jujuy.

RESUMENNo existiendo en la literatura valores normales del proteinograma en ganado Bovino Criollo, se ha realizado

su estudio sobre distintos lotes de animales usando la técnica sobre medio soporte cellogel, en condiciones óptimas de pH 8,6; fuerza iónica 0,125; potencial 140 V, miliamperaje de 1,8 mA/tira y se usó como colorante rojo Ponceau con un tiempo de corrida de 3 horas; obteniéndose óptimas resoluciones, las movilidad electro-foréticas se compararon con un suero humano para ubicar claramente las distintas fracciones. Sobre un total de 148 muestras de sueros, los valores medios con su desviación estándar de las concentraciones absolutas fueron: Albúmina 3,88 ± 0,50 mg %, Globulina (á1 + á2) 0,72 ± 0,17 mg %, Globulina á 0,75 ± 0,16 mg % y Globulina ãg 2,30 ± 0,59 mg %; en tanto que las concentraciones relativas dieron Albúmina 50,85 ± 6,00 %, Globulina (á1 + á2) 9,45 ± 2,21 %, Globulina â 9,87 ± 1,83 %, Globulinaã 29,84 ± 6,29 % y relación Albúmina Globulina 1,07 ± 0,26. Se determinaron los intervalos de confianza del 95 % para todas las fracciones, los resultados son Albúmina 3,88 ± 0,08 mg %, Globulina (á1 + á2) 0,72 ± 0,03 mg %, Globulina â 0,75 ± 0,03 mg %, Globulina ã 2,30 ± 0,10. Los valores obtenidos demuestran por primera vez los porcentajes relativos y absolutos de los electroferogramas en Bovinos Criollos de gran aplicación en clínica veterinaria, Fisiología Comparada y Producción Animal.

Palabras claves: Colesterolemia normal – Bovinos Criollos – Jujuy

SUMMARYBecause of normal values of the concentration of the fraction proteins in cattle Creole Bovine, we have

been carried out their study on different lots of animals. We use the technique on cellogel support, in optimal conditions of pH 8,6; ionic force of 0,125; potential 140 V, amperage of 1,8 mA/ ribbon and it was used like coloring Red Ponceau with a time of running of 3 hours; getting good resolutions, the electrophoretic mobility were compared with a human serum, in order to be located the different fractions clearly. On a total of 148 pat-terns of serums, the medium values with their standard deviation of the absolute concentrations were: Albumin 3,88 ± 0,50 mg %, Globulin (á1 + á2) 0,72 ± 0,17 mg %, â Globulin 0,75 ± 0,16 mg % and ã Globulin 2,30 ± 0,59 mg %; in so much that the comparative concentrations gave: Albumin 50,85 ± 6,00 %, Globulin (á1 + á2) 9,45 ± 2,21 %, â Globulin 9,87 ± 1,83 %, ã Globulin 29,84 ± 6,29 % and Albumin/Globulin relationship 1,07 ± 0,26. The intervals of trust of the 95 % were determined for all the fractions, the outputs are Albumin 3,88 ± 0,08 mg %, Globulin (á1 + á2) 0,72 ± 0,03 mg %, â Globulin 0,75 ± 0,03 mg %, ã Globulin 2,30 ± 0,10. The values them gotten demonstrate for first time, the comparative and absolute percentages of the concentration of the fraction of the proteins in Bovine Creoles of great application in Veterinary Clinic, Compared Physiology and Animal Production.

Key Words: Normal Cholesterol- Bovine Creoles- Jujuy

INTRODUCCIONA los efectos de poder contar con los valores normales de las distintas fracciones de proteínas de la sangre

en Ganado Bovinos Criollo (suero); hemos realizado un detallado estudio en distintos lotes de animales nor-males de la zona de los valles de los Departamentos de Arroyo del Medio (tres lotes) y El Remate, alimentados con pasturas naturales, a los fines de poder contar con los parámetros normales de las distintas fracciones de las proteínas del suero, separadas electroforéticamente, de esta manera se contaría con valores normales para aplicarlos en la clínica como valores de referencia, los cuales fueron comparados con distintos trabajos del autor [Nacionales (2, 3, 4 y 17) e Internacionales (5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,16)].

Los valores obtenidos servirán para estudiar las patologías de origen hepático causadas por parasitosis y otros tipos de infecciones víricas y bacteriostáticas, entre los objetivos del estudio.

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MATERIALES Y METODOSLas muestras de sangre fueron extraídas de los distintos lotes de animales en condiciones basales, a partir

de las mismas y luego de haber sufrido el proceso de coagulación se separaron los sueros, sin hemólisis, dentro de las 48 horas fueron procesados, durante dicho tiempo estuvieron refrigerados a 0º C para evitar problemas de desnaturalización.

Se trabajó con animales perfectamente hidratados, dicho control fue realizado mediante la determinación de la osmolaridad o electrolitemia en el suero a través de la medida de la conductividad específica y utilizando la correlación con las proteínas totales según la técnica modificada por De Vega (1) y el nomograma de Davidof y Sautier.

Las corridas electroforéticas se realizaron en medio soporte cellogel utilizando el buffer Veronal Veronal Sódico de pH 8,6, voltaje de corrida 140 V, miliamperaje total 11 mA (1mA/tira). El colorante utilizando fue Rojo Ponceau y el tiempo de corrida fue de 3 horas, a los fines de obtener claras resoluciones de las distintas fracciones.

Las corridas fueron reveladas con ácidos acético 5 % (v/v) en cinco baños distintos hasta obtener un medio soporte totalmente blanco en las zonas que no existen proteínas y lograr un blanco totalmente comparativo. Las distintas fracciones fueron eluídas con ácido acético al 80 % (v/v) y leídas espectrofotométricamente, dosándose las proteínas por la técnica del Biuret.

RESULTADOS Y DISCUSIONEn el Gráfico N° 1 se representan las Fracciones Proteicas Relativas (%) y Absolutas (g%) en sueros de

75 animales de Arroyo del Medio.

En el Gráfico N° 2 se pueden observar las Fracciones Proteicas Absolutas y Relativas correspondientes a 54 Bovinos Criollos de Arroyo del Medio, separados por Albúmina y Globulinas Alfa, Beta y Gamma.

En el Gráfico N° 3 se esquematizan las Fracciones Proteicas Relativas (%) y Absolutas (g%) en sueros de 21 animales de Arroyo del Medio.

En la figura Nº 4 se detalla una corrida electroforética de bovino comparada con una humana control, a los efectos de poder fijar cada fracción según las movilidades individuales, tomando como testigo el suero humano.

En el gráfico N° 5 se representan las fracciones proteicas relativas de bovinos raza criolla sobre un total de 148 muestras y en el gráfico Nº 6 se expresan las fracciones proteicas absolutas.

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GRÁFICO N° 3: FRACCIONES PROTEICAS EN BOVINOS

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A partir de los valores obtenidos se hizo el estudio bioestadístico. En las tablas Nº 1 y 2 se representa individualmente los distintos valores de frecuencia para las fracciones albúmina, globulina á, globulina â y globulina ã, obteniéndose un intervalo de confianza del 95 % para la concentración de albúmina absoluta de 3,8 a 3,96 gr %, para el caso de la globulina á 0,60 a 0,75 gr %, para la globulina â 0,72 a 0,78 gr % y para la globulina ã 2,20 a 2,40 gr %.

En el gráfico N° 7 se representa la distribución de frecuencia de la fracción Albúmina, en los gráficos N° 8, 9 y 10 se representan las distribuciones de frecuencia para las fracciones globulina á, globulina â y globulina ã, respectivamente.

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A través de los mismos podemos observar una distribución normal perfecta que nos confirma la seguridad y exactitud de los valores determinados.

Por primera vez, que tengamos conocimiento, en la zona del NOA y Latinoamérica se ha determinado bioestadísticamente las distintas fracciones del proteinograma en ganado Bovino Criollo, sobre un total de 148 muestra normales obtenidas en distintos lotes de animales de zona de los valles.

Dichos valores son los que a continuación se detallan, expresados en valores absolutos y relativos.

Porcentajes relativos Concentraciones Absolutas

Albúmina 50,85 ± 6,00 % 3,88±0,50 gr%Globulina α 9,45 ± 2,21 % 0,72±0,17gr %Globulina β 9,87 ± 1,83 % 0,75±0,16gr %Globulina γ 29,84 ± 6,29 % 2,30±0,59gr%.

Al relacionar estos valores con los obtenidos en otros trabajos del Director del grupo de investigación, se observa una total relación con los valores de porcentajes relativos, a continuación figura un cuadro comparativo de los distintos porcentajes relativos, calculados en otras razas por el Dr. De Vega en la Provincia de Buenos Aires (ganado holando argentino) utilizando medio soporte papel y como colorante azul de bromofenol, del mismo puede deducirse la casi total igualdad con los valores obtenidos, lo que confirma la seguridad en las determinación utilizando colorante y medio soporte distintos.

Los datos obtenidos se compararon con los citados en la bibliografía extranjera, habiéndose trabajado en otros medios soportes y otros colorantes, de donde se puede ver que hay relativa uniformidad con el trabajo de Roohey y Laborie, cuyos porcentajes relativos son los que a continuación se detallan:

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Cuadro comparativo de fracciones proteicas en sueros bovinos según distintos autores

Existen múltiples trabajos de otros autores ( 7-8-9-10-11-12-13-14-15-16) en los cuales hay diferencias, sobre todo están en el porcentaje de Albúmina, son inferiores, lo que hace obtener un cociente albúmina/glo-bulina menor, estas diferencias posiblemente estén en la distintas razas y metodologías usadas.

Las condiciones de trabajo fueron óptimas y también se realizo el estudio del error en la separación elec-troforética usando un suero de bovino patrón, existió gran reproductivilidad. Los valores medios relativos y absolutos calculados sobre la misma muestra sembrada 10 veces, con su desviación estándar fueron:

Porcentajes Relativos Porcentajes AbsolutosAlbúmina 52,69 ± 2,14 % 4,03 ± 0,16 gr %Globulina α 9,68 ± 0,61 % 0,74 ± 0,05 gr %Globulina β 9,15 ± 0,60 % 0,70 ± 0,05 gr %Globulina γ 28,49 ± 2,00 % 2,18 ± 0,15 gr %

CONCLUSIONES1- Resulta sorprendente la igualdad de las fracciones de Albúmina, Globulina á, Globulina â y Globulina

α, en los distintos lotes de Bovinos Criollos.

2- Existen algunas diferencias con los valores obtenidos por densitometría en ganado bovino raza Holando (Jujuy) en lo que se refiere sobre todo a los porcentajes de albúmina y ã globulinas, posiblemente se deban a la diferencia entre el coeficiente de absorción según el colorante esté en disolución o en el medio soporte.

3- Los valores normales obtenidos servirán para poder realizar estudios sobre patologías regionales, he-patopatías de origen tóxico y parasitario.

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BIBLIOGRAFIA1- DE VEGA,F. Medida de la conductividad en sueros y plasma de bovinos normales y su correlación con el ionograma. Revista

Bioquímica Clínica, 3 : 4 ( 1969 ), Pág. 166.

2- DE VEGA, F. y BADE, G. 1970. Estudio Electroforético en Papel Sobre Sueros de Bovinos Normales. Analecta Veterinaria. Vol II. 1, 2 y 3. Enero - Diciembre

3- DE VEGA, F.; LOBO, M; RESINA, M. 1995. “Proteinogramas Normales por Vía Electroforética en Bovinos ( Raza Criolla ), Arroyo del Medio, Jujuy ”. XII Congreso Latinoamericano de Bioquímica Clínica, III Congreso Argentino de Bioquí-mica Clínica, II Jornadas Bioquímicas del Cono Sur, I Simposio Latinoamericano de Educación en Bioquímica. Buenos Aires, Argentina, 5 al 10 de Setiembre de 1995. Libro de Resúmenes. Pag. 117.

4- DE VEGA, F.; LOBO, M. Estudio de los proteinogramas en ganado bovino criollo de Arroyo del Medio - Jujuy. Perfiles Metabó-licos en Bovinos, Ovinos y Caprinos Criollos de la Provincia de Jujuy. Red de Editoriales de Universidades Nacionales. Argentina. I.S.B.N. 950-721-089-X. Pág.111- 119.1997.

5- ROONEY, J.R. Am. Journal of Veterinary Research, 18:67.

6- LABORIE, R. 1958. Revue du Corps Veterinaire de L’armes, 13(1), 17.

7- BUGUTH, W. HABERMALZ, F. y SCHAPPAUF, H. 1959. Papierelektrophoretische bvestimmñung der proteingebundenen iohlenhyñdrate im serum von haus - un laboratoriumstierem. Lzentralbatt Jür Veterinärmedizin, 4, (10), 901.

8- VENTUROLI, M. 1958. Studio elettroforetico dialcune epatopatie bovine. Zooprofilassi, 13, 601.

9- PERK, K. y LOBL, K. A. 1959. Comparative study on the sera proteins and lipids in two breeds of cattle. The British Veterinary Journal. 115, 411.

10- SAINZ, S.; PARDO, G. Y LAGLERA, A. 1959. Investigación de las proteínas del suero sanguíneo de los rumiantes por elec-troforesis en papel. XVI Congreso Mundial de Veterinaria. 2, 131.

11- VASSELINOVITCH, J. 1959. The analysis of serum proteins of domestic animals by filter paper electrophoresis. A review. The Cornell Veterinarian, 49, 82.

12- MASSELIN, J.; MONESIGLIO, J.; CHIARAVALLE,

A. y GARCIA, N. 1961. Electroforesis sobre papel a alta presión y voltaje. Su aplicación al fraccionamiento de proteínas séricas de sueros bovinos normales. Rev. De Investigaciones Ganaderas. 12, 197.

13- MAZZINI, C. Y FRATTINI, J. 1961. Estudio químico y electroforético en sueros sanguíneos de bovinos normales. II Congreso Nacional de Veterinaria, buenos Aires, 185.

14- GARRIDO CONTRERAS, A. 1967. Investigaciones elctroforéticas e inmunoelectroforéticas del suero sanguíneo de las especies rumiantes domesticas. Archivos de zootecnia, 16 (63), 257.

15- IRFAN, M. 1967. The electrophoretic pattern of serum proteins in normal animals. Research in Veterinary Science, 8(2), 137.

16- SVENSON, H. ARK,1943. Mineral Geol., 22A, 10.

17- DE VEGA, F.; LOBO, M; RESINA, M. 1997. Proteinogramas Normales por Vía Electroforética en Bovinos ( Raza Criolla ), Arroyo del Medio, Jujuy. Revista Xuxuy. Año 1 - N° 3. Pág. 46-51.