Uriel Quijano Juárez

martes, 17 de noviembre de 2015

Grasas totales.

Extracción semicontinua con un disolvente orgánico.

Disolvente: se calienta, se volatiliza y condensa goteando sobre la muestra la cual queda sumergida en el disolvente.

El contenido de grasa se cuantifica por diferencia de peso.

La cantidad y composición de los lípidos extraídos dependerá del solvente utilizado.

(Nielsen, 2003)

Costo bajo.

Extracción de alto porcentaje de grasas y aceites.

Requiere entre 3-8 horas.

Equipo especial.

Método físico de separación con alta resolución.

Dos fases: estacionaria y móvil.

La fase móvil transporta los componentes a distintas velocidades por el lecho estacionario.

Alta reproducibilidad

Alta sensibilidad

rapidez

Dos fases: estacionaria activa y otra móvil líquida interactiva.

Utiliza el movimiento de iones en campos eléctricos y magnéticos para clasificarlos de acuerdo a su relación masa-carga.

Técnica analítica por medio de la cual los lípidos se identifican separando los iones gaseosos en campos eléctricos y magnéticos.

Brinda información cualitativa y cuantitativa acerca de la composición de los materiales.

1. Ionizar la sustancia a analizar.

2. Rompe en trozos.

3. Separación de trozos en base a la relación masa/carga.

Lisis alcalina: fácil, barato y reproducible.

Miniprep: cultivo pequeño 2ml

Maxiprep:

Electroforesis: migración de moléculas de ADN a través de un campo eléctrico.

Gel de agarosa

Bromuro de etidio (colorante)

1. Cultivo

2. Concentración de bacterias por centrifugaciones.

3. Resuspender botón.

4. Lisis de bacterias con detergente aniónico como Dodecilsulfato de sodio (SDS), NaOH provoca desnaturalización de ADN genómico.

5. Neutralización con ácido acético, Acetato de potasio.

6. El ADN precipita con ARN y proteínas.

7. En la fase líquida está el ADN plasmídico.

8. Se agrega alcohol

Detecta la presencia o ausencia de genes específicos en el ADN entre una mezcla de otras secuencias.

Identifica el tamaño del fragmento de restricción que contiene dicha secuencia.

Emplea la técnica de electroforesis en gel de agarosa con el fin de separar los fragmentos de ADN de acuerdo a su longitud y, después, una transferencia a una membrana en la cual se efectúa la hibridación de la

1. Obtención de ADN.

2. Corte con enzimas de restricción.

3. Separación electroforética.

4. Traspaso a membrana de nylon o nitrocelulosa.

5. Hibridación con sonda radioactiva.

6. Revelado por autoradiografía.

Técnica usada para el estudio de expresión genética, detección y cuantificación de mRNA.

El ARN aislado realiza una electroforesis en un gel de agarosa que contiene formaldehído el cual separa dos especies de ARN por tamaño.

1. Aislamiento del RNA.

2. Electroforesis en gel de agarosa.

3. Transferencia (blotting) a membrana de nylon o nitrocelulosa.

4. Hibridación con sonda radioactiva.

5. Lavado

6. Visualización de RNA.

Southern blotting Northern blotting

Separación DNA RNA

Desnaturalización Necesaria No es necesaria

Membranas Filtro de nitrocelulosa Papel filtro Amino

benzyloxymethyl

Hibridación DNA-DNA RNA-DNA