Estudio de correlación del etanol en aire espirado y ... · muestra tomada es de 500 microlitros,...

Grupo de Trabajo Control de drogas en el tráfico Rodado.Grupo de Trabajo Control de drogas en el tráfico Rodado.Grupo de Trabajo Control de drogas en el tráfico Rodado.Grupo de Trabajo Control de drogas en el tráfico Rodado.

Servicio de Toxicología Forense. Instituto Universitario de Servicio de Toxicología Forense. Instituto Universitario de Servicio de Toxicología Forense. Instituto Universitario de Servicio de Toxicología Forense. Instituto Universitario de

Medicina Legal.Medicina Legal.Medicina Legal.Medicina Legal.

CoordinadorCoordinadorCoordinadorCoordinador: Prof. Manuel López-Rivadulla.

Miembros del equipoMiembros del equipoMiembros del equipoMiembros del equipo:

Profa. Angelines Cruz Landeira.

Dras. Ana de Castro Ríos, Marta Concheiro Guisán.

Dr. Oscar Quintela Jorge

Técnicos de laboratorio: Daniel González Aido, Salvador Blanco Turnes

Estudio de correlación del etanol en aire espirado y Estudio de correlación del etanol en aire espirado y Estudio de correlación del etanol en aire espirado y Estudio de correlación del etanol en aire espirado y

saliva, a partir de muestras obtenidas en controles saliva, a partir de muestras obtenidas en controles saliva, a partir de muestras obtenidas en controles saliva, a partir de muestras obtenidas en controles

policiales a conductores de policiales a conductores de policiales a conductores de policiales a conductores de vehículosvehículosvehículosvehículos

Santiago de Compostela, Noviembre de 2011Santiago de Compostela, Noviembre de 2011Santiago de Compostela, Noviembre de 2011Santiago de Compostela, Noviembre de 2011

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓN

La relación entre la presencia de alcohol etílico (AE) en el organismo y su influencia en la

conducción es un hecho constatable y estudiado desde hace muchos años. La evolución

tecnológica de los diferentes dispositivos permite su correcta detección en el aire espirado

con precisión, y de los valores obtenidos deducir sus niveles en la sangre con cierto rigor,

mediante la aplicación de la Ley de Henry (1, 2, 3)

El AE es una sustancia muy soluble en agua, tiene un bajo peso molecular y no presenta

capacidad para unirse a las proteínas del plasma; estas propiedades lo hacen especialmente

válido para que su análisis sea llevado a cabo en otras matrices biológicas diferentes a la

sangre, como la orina, la saliva y el sudor. La distribución del AE en el cuerpo es proporcional

al contenido en agua del tejido, y por ello es razonable pensar que la concentración de AE en

estos fluidos reflejará la que se encuentra en la fracción acuosa de la sangre total.(4,5,6). La

proporción del flujo de sangre al tejido de la glándula salival es tan alta que la concentración

de etanol entrando en la saliva debe reflejar con exactitud su concentración en la sangre.(7)

En la actualidad la determinación del contenido en AE en la saliva está supeditada a

constituir una prueba indiciaria, aplicada en casos de controles en el trabajo, ya que el tráfico

rodado, la detección en el aire espirado es, con gran diferencia, el procedimiento más

comúnmente usado. El proyecto DRUID ha constituido un hito relevante para el estudio de la

prevalencia del consumo de drogas en los conductores, y la disponibilidad de la saliva, así

como la de los niveles del AE en el aire espirado, permite a priori, afrontar el estudio de la

correlación entre el AE en la saliva y en el aire espirado/sangre. La comparación entre ambos

datos nos permitirá confirmar o no, las consideraciones que hemos hecho anteriormente. A

pesar de que existen en el mercado sistemas comercializados para la detección de AE en

saliva, QED kits, Alcoscreen (8,9), como mencionaremos en el apartado de material y

métodos, la saliva remitida al laboratorio para hacer el análisis de drogas, se puede usar sin

problema, para evaluar la presencia del AEE.

MATERIAL Y METODOSMATERIAL Y METODOSMATERIAL Y METODOSMATERIAL Y METODOS

ObtenObtenObtenObtención de muestrasción de muestrasción de muestrasción de muestras

Las muestras de saliva fueron obtenidas por los equipos de trabajo, de acuerdo con un

protocolo establecido en el que el conductor introducía una torunda con algodón en la boca,

y una vez obtenido el volumen deseado, se mezclaba con un tampón en un tubo, el cual se

remitía al Laboratorio. (Figura 1).

Figura 1

La muestra de saliva obtenida mezclada con el tampón tiene un volumen aproximado de 4

mL, de los cuales aproximadamente 1mL se corresponde a la saliva. En el laboratorio la

muestra tomada es de 500 microlitros, y el AE se detecta de acuerdo con el protocolo que

figura a continuación.

Metodología analítica en laboratorioMetodología analítica en laboratorioMetodología analítica en laboratorioMetodología analítica en laboratorio

1. Cromatografo de gases AGILENT 5890II, acoplado a un detector de ionización de llama, y a

un equipo automatizado de espacio de cabeza para análisis de compuestos volatiles. (Fig 2).

2. Condiciones cromatograficas: Columna: Porapak “Q” 1%. Empacada 2m. Temperatura

Isoterma: 90ºC. Temperatura Inyector 120ºC. Temperatura Inyector 120º C. Patrón Interno:

Isopropanol al 1%.

3. Procedimiento. 100 microlitros de muestra se mezclan con 500 microlitros de patrón

interno, se introduce en el vial y se inyecta en el cromatógrafo en las condiciones referidas.

Descripción del Trabajo de Campo.Descripción del Trabajo de Campo.Descripción del Trabajo de Campo.Descripción del Trabajo de Campo.

El estudio se basó en las muestras obtenidas en el proyecto DRUID, en concreto en el trabajo

desarrollado por la DGT en España dentro del WP2.2 sobre prevalencia de consumo de

sustancias psicoactivas en conductores de vehículos. A continuación se describe brevemente

el citado trabajo.

Descripción del Trabajo de Campo del estudio de Prevalencia de DRUID en España.

Población de referencia y características generales. El estudio de Prevalencia del consumo de

sustancias psicoactivas en conductores se desarrolló como un estudio trasversal en el que se

reclutó, de manera aleatoria, una muestra de más 3.400 conductores con representatividad

nacional, mediante criterios de selección basados en el tamaño de la población, la

localización geográfica, el ámbito de circulación (urbano o interurbano), la hora, el día de la

semana y el mes del año, y la intensidad circulatoria.

El estudio se basó en la recogida de una toma de fluido oral de los conductores

seleccionados que fue analizada posteriormente en nuestro laboratorio, según las

condiciones que se refieren más adelante.

Recursos humanos. En el desarrollo de los controles han participado más de 300 agentes

policiales (policías locales, miembros de la Agrupación de Tráfico de la Guardia Civil y

Miembros de las policías Autónomas), que han sido sometidos a un entrenamiento con el

objetivo de familiarizarlos con el funcionamiento de los dispositivos y con el reconocimiento

de signos de influencia. Estos agentes fueron los encargados de realizar las pruebas con los

citados dispositivos en saliva. Además, en el trabajo participaron 80 investigadores de

campo, que en grupos de 2 estuvieron presentes en cada uno de los controles para la

obtención de datos y garantizar la aleatoriedad en el reclutamiento.

Selección de los puntos de control. La planificación de los controles (lugar y hora) fue

realizada por el equipo técnico de la Dirección General de Tráfico, bajo criterios de

representatividad muestral y aleatoriedad en el reclutamiento. Las muestras se recogieron en

los conductores participantes en el estudio por toda la geografía nacional, a lo largo de los

11 meses en que se desarrolló el trabajo de campo.

En la página web de la Dirección General de Tráfico (www.dgt.es) es posible acceder al

informe resumen del estudio de prevalencia que ahora referimos, y que ha sido la base para

la obtención de las muestras analizadas. Asimismo, en la página del proyecto europeo DRUID

(www.druid-project.eu) se pueden consultar los diversos informes técnicos elaborados en el

mismo.

Toma de las muestras y procedimiento general. Los controles se efectuarán con el siguiente

procedimiento:

- A los conductores detenidos en el control y con criterios de inclusión en el estudio, se les

sometió a una primera determinación de drogas mediante el procedimiento indiciario de

cribado mediante el dispositivo Draeger DrugTest 5000. En el caso de resultado positivo a

alguna o algunas sustancias, se obtuvo una segunda muestra de fluido oral con el fin de su

envío al laboratorio para realizar la prueba de confirmación cuantitativa. En caso de

resultado indiciario negativo, se pedio la participación voluntaria en el estudio mediante la

obtención de una segunda muestra de fluido oral para el correspondiente envío al

laboratorio toxicológico.

- El personal investigador obtuvo el consentimiento informado, en su caso, y cumplimentó

los cuestionarios correspondientes Asimismo, el personal investigador fue responsable, en su

caso, de explicar al conductor el objetivo de la obtención de la muestra, proceder a la

obtención de las muestras biológicas, obtener el consentimiento informado, cumplimentar

los cuestionarios de información para la investigación, etiquetar y almacenar las muestras y

velar por la inviolabilidad de la cadena de custodia hasta que se inicie el trasporte de la

muestra. Todo ello de acuerdo al Manual de Procedimiento de investigación desarrollado

específicamente para el estudio.

- A todos los participantes se les realizó la correspondiente toma de aire espirado para la

medición del etanol, según procedimiento policial habitual. El equipo utilizado fue el

alcoholímetro Draeger modelo 6810 (ver figura). En los casos positivos se utilizó un

etilómetro evidencial, de acuerdo a la normativa vigente, pero en este trabajo se utilizan

exclusivamente los resultados obtenidos en la prueba indiciaria.

- Las muestras se enviaron al laboratorio manteniendo en todo momento la cadena de frío

(por debajo de 8 grados), de acuerdo a las recomendaciones del proyecto DRUID.

RRRRESULTADOSESULTADOSESULTADOSESULTADOS

Resultados generalesResultados generalesResultados generalesResultados generales

Obs Mean Variance Std Dev

Aire espirado 2240 0,0203 0,0070 0,0836

Saliva: 2242 0,0230 0,0145 0,1204

Variation SS df MS F statistic Between 4,4870 123 0,0365 6,9163 Within 11,1554 2115 0,0053 Total 15,6424 2238 P-value = 0,0000

Correlación de los valores entre saliva y aire espirado.Correlación de los valores entre saliva y aire espirado.Correlación de los valores entre saliva y aire espirado.Correlación de los valores entre saliva y aire espirado.

La distribución de los valores hallados para cada caso en saliva y en aire espirado, se muestra

en la Figura R.1.

Figura R.1. Distribución de resultados para saliva y aire espirado

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

3,00

0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00

Aire espirado (mg/L)

Sali

va (

g/L

)

La gráfica muestra una distribución aparentemente dispersa con una probable correlación

lineal entre las variables. Con objeto de conocer el grado de correlación entre las dos

variables, se ha procedido a eliminar los valores de cero (Figura R.2.), y los valores extremos.

De esta manera se obtiene un coeficiente de correlación de 0,3764 (coeficiente de

determinación 0,1417).

Figura R.2. Distribución de resultados positivos para saliva y

aire espirado (valores extremos eliminados)

y = 0,927x + 0,1362

r = 0,3764

0,00

0,20

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

1,40

1,60

0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00

Aire espirado (mg/L)

Saliva (

g/L

)

Validez de la saliva respecto al aire espirado.Validez de la saliva respecto al aire espirado.Validez de la saliva respecto al aire espirado.Validez de la saliva respecto al aire espirado.

Los resultados en aire espirado (tomados como valores “Gold Standard”) se han clasificado

en cuatro niveles, según su significado normativo y legal:

- Nivel cero o negativo: cuando el valor está por debajo de 0,15 mg de etanol por

litro de aire espirado

- Nivel 1 o positivo entre 0,15 y 0,24 mg de etanol por litro de aire espirado

- Nivel 2 o positivo entre 0,25 y 0,60 mg de etanol por litro de aire espirado

- Nivel 3 o positivo por encima de 0,61 mg de etanol por litro de aire espirado.

En primer lugar se ha analizado la capacidad de la saliva para clasificar adecuadamentecapacidad de la saliva para clasificar adecuadamentecapacidad de la saliva para clasificar adecuadamentecapacidad de la saliva para clasificar adecuadamente

el nivel de etanol en alguno de estos cuatro niveles.

Correcta_clasificacion Frequency Percent Cum Percent

No 173 7,7% 7,7%

Sí 2070 92,3% 100,0%

Total 2243 100,0% 100,0%

El 92,3% de las pruebas clasifican adecuadamente el valor de etanol respecto a los valores

obtenidos en aire espirado.

En segundo lugar, se ha analizado la capacidad de la saliva para determinar la positividad o

no administrativa (o legal) hallada en el aire espirado. Se ha estudiado la sensibilidad,

especificidad y precisión (exactitud) del test para clasificar a los sujetos en “positivos” o

“negativos” a alcohol, y se ha hecho a dos niveles de corte para postividad diferentes: 0,15 y

0,25 mg/L..

Validez_sobre_p

os_neg_para_0_

15 Frequency Sensibilidad Especificidad Precisión % fp (1- Espec)

fn 78 0,31 0,96 0,93 0,04

fp 75

vn 2055

vp 35

Total 2243

Validez_sobre_p

os_neg_para_0_

25 Frequency Sensibilidad Especificidad Precisión % fp (1- Espec)

fn 38 0,32 0,97 0,96 0,03

fp 59

vn 2128

vp 18Total 2243

No se han observado diferencias en la capacidad de cribado de la prueba según el punto de

corte (más de 0,15 o más de 0,25). En ambos casos, la sensibilidad de la prueba es sólo

moderada, lo que indica una escasa capacidad de la misma para detectar adecuadamente a

los casos realmente positivos. Los casos realmente negativos, son, sin embargo,

adecuadamente detectados. Hay que tener en cuenta en estos datos que la prevalencia, es

decir, la frecuencia de casos negativos en la muestra de referencia es muy elevada (más del

90%), lo que condiciona estos resultados.

DISCUSIÓN y CONCLUSIONESDISCUSIÓN y CONCLUSIONESDISCUSIÓN y CONCLUSIONESDISCUSIÓN y CONCLUSIONES

Entre saliva y aire espirado para la medición de etanol, existe una correlación positiva de

moderada magnitud, que supone una dificultad para la precisión de la medida del alcohol

etílico a partir de los valores hallados en saliva. La concordancia entre las variables, en

cambio, es escasa.

La capacidad discrimativa del test en saliva es, en términos generales, moderada o escasa, si

bien sería preciso un análisis en población más prevalente en casos positivos a alcohol. En un

primer análisis, la práctica de prueba en saliva no alcanza unos niveles de concordancia

individual que permitan su uso con fines administrativos o legales. Por otra parte, el

procedimiento no supone mejora alguna respecto a la práctica en aire espirado. Sólo es

posible plantear su utilidad dentro de los controles rutinarios de otras drogas, donde la toma

de saliva es un hecho habitual. Sin embargo, la falta de una lectura in situ del resultado de

alcohol, podría anular un supuesto beneficio de su uso, puesto que las fuerzas policiales no

podrían determinar en el momento la necesidad de inmovilizar o no al conductor, a falta de

un resultado objetivo de la determinación de etanol.

ANEXOANEXOANEXOANEXO

Anexo. Resultados de los análisis de etanol realizados en las muestras válidas de fluido oralAnexo. Resultados de los análisis de etanol realizados en las muestras válidas de fluido oralAnexo. Resultados de los análisis de etanol realizados en las muestras válidas de fluido oralAnexo. Resultados de los análisis de etanol realizados en las muestras válidas de fluido oral CasoCasoCasoCaso Aire_espirado__mg_L_Aire_espirado__mg_L_Aire_espirado__mg_L_Aire_espirado__mg_L_ Saliva__g_L_Saliva__g_L_Saliva__g_L_Saliva__g_L_

CC12-04 0,09 0,138 CC21-14 0,19 0,136 CC23-07 0,13 0,113 CC24-04 0,38 0,507 CC31-11 0,94 0,5 CC32-06 0,27 0,578 CC32-36 0,13 0,165 CC33-07 0,25 0,311 CC33-12 0,24 0,206 CC33-16 0,28 0,283 CC41-16 0,11 0,152 CC41-26 0,14 0,155 CC41-48 0,26 0,531 CC42-18 0,11 0,14 CC42-24 0,3 0,109 CC42-45 0,6 0,308 CC44-05 0,36 0,783 CC44-49 0,16 0,388 CU12-05 0,04 0,135 CU21-16 0,24 0,3 CU22-05 0,15 0,15 CU22-11 0,09 0,174 CU23-01 0,2 0,314 CU23-10 0,36 0,373 CU31-16 0,08 0,157 CU33-12 0,7 1,474 CU34-12 0,2 0,262 CU34-16 0,09 0,224 CU34-29 0,45 0,904 CU41-20 Missing 0,339 CU43-14 0,24 0,483 CU43-15 0,24 0,368 CU43-24 0,22 0,676 CU44-09 0,18 1,829 CU44-35 0,11 0,225 MC12-01 0,05 0,11 MC13-08 0,1 0,146 MC21-12 0,1 0,234 MC22-18 0,41 0,561 MC23-01 0,28 0,431 MC32-27 0,17 0,208 MC34-37 0,2 0,387 MC41-09 0,26 0,344 MC42-08 0,35 0,738 MC42-52 0,27 0,772 MC43-07 0,2 0,244 MC43-18 0,09 0,142 MC43-19 0,26 0,4 MC43-40 0,2 0,566 MC43-52 0,39 0,744 MC44-44 0,5 0,288 MU12-05 0,08 0,248 MU34-41 0,88 0,109 MU42-35 0,06 0,102 MU42-43 0,11 1,129 MU43-04 0,1 0,34 NC14-01 0,33 0,132 NU33-18 0,25 0,438 SC42-11 0,04 0,243 SU32-18 0,24 0,396 SU42-14 0,15 0,367 SU44-10 0,25 0,275 CC11-01 0 0 CC11-02 0 0 CC11-03 0 0 CC11-04 0 0 CC11-05 0 0 CC11-07 0 0

CC11-08 0 0 CC11-09 0 0 CC11-10 0 0 CC11-11 0 0 CC11-12 0 0 CC12-01 0 0 CC12-02 0 0 CC12-03 0 0 CC12-05 0 0 CC12-06 0 0 CC12-07 0 0 CC12-08 0 0 CC12-12 0 0 CC13-01 0 0 CC13-02 0 0 CC13-04 0 0 CC13-07 0 0 CC14-02 0 0 CC21-01 0 0 CC21-02 0 0 CC21-04 0 0 CC21-06 0 0 CC21-07 0 0 CC21-08 0 0 CC21-09 0 0 CC21-10 0 0 CC21-11 0 0 CC21-12 0 0 CC21-13 0 0 CC22-01 0 0 CC22-02 0 0 CC22-03 0 0 CC22-04 0 0 CC22-05 0 0 CC22-08 0 0 CC22-09 0 0 CC22-10 0 0 CC22-11 0 0 CC22-12 0 0 CC22-13 0 0 CC23-01 0 0 CC23-02 0 0 CC23-03 0 0 CC23-04 0 0 CC23-05 0 0 CC23-06 0 0 CC23-08 0 0 CC23-11 0 0 CC23-12 0 0 CC23-13 0 0 CC24-01 0 0 CC24-02 0 0 CC24-05 0 0 CC24-06 0 0 CC24-07 0 0 CC24-08 0 0 CC24-09 0 0 CC24-10 0 0 CC24-11 0 0 CC24-12 0 0 CC24-13 0 0 CC24-14 0 0 CC24-15 0 0 CC31-03 0 0 CC31-04 0 0 CC31-05 0 0 CC31-06 0 0 CC31-07 0 0 CC31-08 0 0 CC31-09 0 0 CC31-12 0 0 CC31-13 0 0 CC31-14 0 0 CC31-15 0 0 CC31-16 0 0

CC44-02 0 0 CC44-03 0 0 CC44-04 0 0 CC44-06 0 0 CC44-07 0 0 CC44-08 0 0 CC44-10 0 0 CC44-11 0 0 CC44-12 0 0 CC44-13 0 0 CC44-14 0 0 CC44-16 0 0 CC44-17 0 0 CC44-18 0 0 CC44-19 0 0 CC44-20 0 0 CC44-21 0 0 CC44-22 0 0 CC44-23 0 0 CC44-24 0 0 CC44-26 0 0 CC44-27 0 0 CC44-28 0 0 CC44-30 0 0 CC44-31 0 0 CC44-32 0 0 CC44-33 0 0 CC44-34 0 0 CC44-35 0 0 CC44-36 0 0 CC44-39 0 0 CC44-40 0 0 CC44-41 0 0 CC44-42 0 0 CC44-43 0 0 CC44-44 0 0 CC44-45 0 0 CC44-46 0 0 CC44-47 0 0 CC44-50 0 0 CU11-01 0 0 CU11-02 0 0 CU11-03 0 0 CU11-04 0 0 CU11-07 0 0 CU11-08 0 0 CU11-09 0 0 CU11-10 0 0 CU11-11 0 0 CU12-02 0 0 CU12-03 0 0 CU12-04 0 0 CU12-07 0 0 CU12-09 0 0 CU12-11 0 0 CU13-02 0 0 CU13-04 0 0 CU13-05 0 0 CU13-08 0 0 CU13-09 0 0 CU13-10 0 0 CU13-11 0 0 CU13-12 0 0 CU14-01 0 0 CU14-02 0 0 CU14-03 0 0 CU14-04 0 0 CU14-05 0 0 CU14-07 0 0 CU14-08 0 0 CU14-09 0 0 CU14-10 0 0 CU14-11 0 0 CU21-01 0 0 CU21-03 0 0

CU21-04 0 0 CU21-06 0 0 CU21-07 0 0 CU21-09 0 0 CU21-10 0 0 CU21-11 0 0 CU21-13 0 0 CU22-01 0 0 CU22-02 0 0 CU22-03 0 0 CU22-06 0 0 CU22-07 0 0 CU22-08 0 0 CU22-09 0 0 CU22-10 0 0 CU22-13 0 0 CU22-14 0 0 CU22-15 0 0 CU22-16 0 0 CU22-17 0 0 CU23-03 0 0 CU23-04 0 0 CU23-05 0 0 CU23-06 0 0 CU23-07 0 0 CU23-09 0 0 CU23-11 0 0 CU23-12 0 0 CU23-13 0 0 CU23-14 0 0 CU23-15 0 0 CU24-01 0 0 CU24-06 0 0 CU24-07 0 0 CU24-08 0 0 CU24-09 0 0 CU24-11 0 0 CU31-01 0 0 CU31-02 0 0 CU31-03 0 0 CU31-04 0 0 CU31-06 0 0 CU31-07 0 0 CU31-08 0 0 CU31-13 0 0 CU31-15 0 0 CU31-17 0 0 CU31-18 0 0 CU31-19 0 0 CU31-20 0 0 CU31-21 0 0 CU31-22 0 0 CU31-23 0 0 CU31-24 0 0 CU31-27 0 0 CU31-29 0 0 CU31-30 0 0 CU31-32 0 0 CU32-01 0 0 CU32-03 0 0 CU32-04 0 0 CU32-05 0 0 CU32-06 0 0 CU32-07 0 0 CU32-09 0 0 CU32-10 0 0 CU32-11 0 0 CU32-12 0 0 CU32-13 0 0 CU32-18 0 0 CU32-19 0 0 CU32-20 0 0 CU32-27 0,01 0 CU32-32 0 0 CU32-33 0 0

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Estudio de correlación del etanol en aire espirado y ... · muestra tomada es de 500 microlitros,...

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