PRÁCTICO 1ESTUDIO DE UNA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Objetivos:

Nombres:  Moreira, Santiago Presa, Claudia Daianna Rodríguez, Lourdes Valeria

                  Tutor:

Mastrogiovanni, Mauricio

Grupo:

a) Evaluar el efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad

inicial de una reacción enzimática.

b) Determinar los parámetros cinéticos (Km y Vmax) de la invertasa o

sacarosa.

Tabla de datos correspondiente a Curva de Calibración

Nombres:  Moreira, Santiago Presa, Claudia Daianna Rodríguez, Lourdes Valeria

                  Tutor:

Mastrogiovanni, Mauricio

Grupo:

[Glucosa](mM)

Abs570nm(Mm)

02 0,024 0,0386 0,1068 0,11710 0,19

0 2 4 6 8 10 120

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

0.14

0.16

0.18

0.2

f(x) = 0.0187 x − 0.015R² = 0.94527234461586

Curva de calibración del DNS con glucosa

Abs570nm(Mm) Linear (Abs570nm(Mm))

[Glucosa](mM)

Abs5

70nm

(U.A

)

[Sacarosa](mM) Abs570nm en15 min [Glu]en 15 min Vo Mm de Glu /min

0 0 0 010 0,038 1,01 0,06720 0,124 3,31 0,2250 0,228 6,09 0,406

100 0,255 6,8 0,453300 0,226 6 0,4360 0,244 6,5 0,433

[Sacarosa](mM) Vo Mm de Glu/min0 0

10 0,06720 0,2250 0,406

100 0,453300 0,4360 0,433

0 50 100 150 200 250 300 350 4000

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

0.45

0.5

Vo Mm de Glu/min

1/[Sacarosa](Mm)

1/Vo Mm de Glu/min

0 00,1 14,9

0,05 4,50,02 2,40,01 2,2

0,003 2,50,0027 2,3

0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.120

2

4

6

8

10

12

14

16

f(x) = 127.898089936807 x + 0.72133209981928R² = 0.906968713064154

1/Vo Mm de Glu/min Linear (1/Vo Mm de Glu/min)

Axis Title

Axis

Titl

e

Parámetros Cinéticos de la Invertasa de Levadura:

y=a∗x+b=1Vo

=

KmVmax

∗1

S+

1Vmax

y=127,9∗x+0,7213

1Vmax

= 10,7213

=1,386385692

Vmax=1,38 (mM )

KmVmax

=127,9

Km=Vmax∗127,9

Km=1,38 (mM )∗127,9=176,509

Km=176,5(M )

−1Km

=−0,00566 (M )

Conclusión:

En conclusión el sustrato solo influye en la formación del complejo enzima sustrato.

Cuanto más sustrato haya, mayor será la velocidad inicial (Vo) porque la formación del

complejo es más. A partir de cierta concentración los aumentos de sustratos no van a

modificar el valor de Vo ya que la enzima se satura y la velocidad de la reacción se

mantiene “constante” o similar sin mucha diferencia y en ese momento se denomina

velocidad máxima (Vmax).

La relación entre Vo y concentración de sustrato no es lineal, sino que es una

hipérbola rectangular. Si por el contrario aumentamos la concentración de enzimas la

velocidad de la reacción tanto Vo como Vmax aumentan en forma lineal

Antes de l baño a 100°C :

Luego de los 5 min de un baño a 100°C :

*Se puede ver como los azúcares reductores reaccionaron con el DNS y producieron un cambio de color.