Evolución Dirigida de Lipasa de Pseudomonas Aeruginosa Para

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Evolución dirigida de lipasa de Pseudomonas aeruginosa para la mejora de la actividad en la hidrólisis de amidas CINÉTICA QUÍMICA Y ENZIMÁTICA Jose Luis Rodrigo Loyola Llori 19/07/2022

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Evolución dirigida de lipasa de Pseudomonas aeruginosa

para la mejora de la actividad en la hidrólisis de

amidasCINÉTICA QUÍMICA Y ENZIMÁTICA

Jose Luis Rodrigo Loyola Llori

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Características generales

• Triacilglicerol hidrolasas (EC 3.1.1.3).

• Serin-hidrolasas.• Amplia especificidad

de sustrato.• Preparación de

productos químico puros y fármacos ópticamente activos.

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Sitio activo• Ser-His-Asp/Glu.• Parecido a serin-

proteasas (espejo).• Escasa actividad

amidasa.• Resonancia

estabilizada de las amidas.

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Serin-proteasas

• Actividad amidasa disminuye, mientras actividad esterasa aumenta cuando ocurren cambios.

• Las proteasas son mas evolucionadas que las lipasas. • ¿Por qué las lipasas no

hidrolizan amidas a pesar de su similitud con las serin-proteasas?

• ¿Las lipasas pueden evolucionar para hidrolizar amidas?

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ObjetivoEvolución dirigida de una lipasa de

Pseudomonas aeruginosa para mejorar la actividad amidasa.

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Ensayo de actividad amida- y ester-hidrolasa

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• 1 U de actividad amidasa: cantidad de lipasa que liberó 1 umol de 2-naftil amina por minuto.

• 1 U de actividad esterasa: cantidad de lipasa que liberó 1 umol de 2-naftol por minuto.

Ensayo de actividad amida- y ester-hidrolasa

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Fundamento