Examen de Manchas Desconocidas

7/26/2019 Examen de Manchas Desconocidas

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EXAMEN DE MANCHAS DESCONOCIDAS(SANGRE)

En las ciencias forenses, las manchas son evidencias comnmen!e eval"adas# $or

mancha se en!iende !oda modificaci%n de color, !oda s"ciedad, !oda adici%n de "na

ma!eria e&!ra'a, visile o no, en la s"erficie del c"ero h"mano, sore

ins!r"men!os, o sore "n o*e!o c"al+"iera, de!erminada or el de%si!o de "n

rod"c!o l+"ido, lando - al."nas veces s%lido, de c"-o es!"dio se "eden

es!alecer relaciones de la in!ervenci%n o ar!iciaci%n de "na ersona o cosa en

"n hecho delic!ivo#

/a san.re es la evidencia m0s comn - conocida, +"i10 "na de las m0s imor!an!es

en criminolo.a, s" resencia en la ma-ora de los casos li.a .eneralmen!e al

sosechoso o a la vc!ima a "na " o!ra escena#

/os a!rones de la mancha de san.re halan m"cho de la osici%n - del

movimien!o d"ran!e el crimen, +"2 s"cedi% rimero, de +"2 manera, - c"0n!as

veces# El asec!o de la mancha de san.re vara con la an!i.3edad, can!idad - el

soor!e sore el +"e recaen# En los !e*idos asoren!es - claros las manchasrecien!es resen!an "n color ro*o osc"ro, +"e con el !iemo !iende a enne.recerse

m0s# Si las manchas han sido lavadas con a."a, el color se hace rosa - el i.men!o

dif"nde al !e*ido, si ien de "n modo irre."lar, con l".ares m0s densos +"e o!ros#

El asec!o de la mancha, como de haer sido lavada, dee oner en ."ardia al

eri!o, or+"e las le*as - los 0cidos modifican las carac!ers!icas es!r"c!"rales de

los comonen!es de las manchas, dando l".ar a ca"sas de error en la

inves!i.aci%n#

$ara o!ener "n res"l!ado confiale al reali1ar el an0lisis a es!as manchas de san.re,

es necesario con!ar con !2cnicas validadas, si es!o no se lleva a cao, odran

.enerarse .randes er*"icios, no solo a los s"*e!os rocesales, sino a la ins!i!"ci%n -

al rofesional encar.ado#


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En la inves!i.aci%n de manchas de san.re lo +"e se lan!ea es lo si."ien!e4

A# 5s+"eda de las osiles manchas de san.re#

5# Recolecci%n - !raslado de las m"es!ras al laora!orio#

C# An0lisis de las m"es!ras remi!idas#

D# Redac!ar el informe ericial#

6#7) Definici%n de mancha4 Es !oda modificaci%n de "na s"erficie, -a sea or "na

al!eraci%n del color o el de%si!o de "na s"s!ancia e&!ra'a a la misma#

$"eden ser de san.re, semen, saliva - de la m0s variada na!"rale1a#

Conce!o de san.re4 /a san.re del ser h"mano con!iene

rincialmen!e l+"ido san."neo (lasma) - .l%"los ro*os - lancos# /a san.re de "n

homre sano !iene aro&imadamen!e 7879 de s" eso !o!al# De ello se ded"ce +"e "n

c"ero de ad"l!o con!iene m0s de cinco li!ros de san.re#

/os .l%"los ro*os dan a la san.re s" color carac!ers!ico, con!eniendo el i.men!o

hemo.loina#

En los "lmones la hemo.loina se sa!"ra de o&.eno, asa a los vasos +"e la

dis!ri"-en or !odo el c"ero - c"ando es!a, finalmen!e, re.resa al cora1%n es ore

en o&.eno# $or es!a ra1%n s" color es m0s rillan!e en las ar!erias +"e en las venas#

6#6) Insecci%n Oc"lar

/a s+"eda dee hacerse en el escenario del deli!o, revisando !odas las s"erficies -

los o*e!os +"e en 2l se enc"en!ren# /as manchas "eden hallarse en la vc!ima, en el

iso, en los h"ecos, en!re las !alas, en las aredes, sore alfomras o dea*o de

ellas, en cor!inados, en los m"eles, de!r0s de es!os, en armas, herramien!as, e!c#


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A veces se enc"en!ran f0cilmen!e es!as manchas o no, "ede res"l!ar difcil s"

"icaci%n, deido a +"e no son claramen!e visiles, -a +"e se "dieron haer

removido o lavado, o or el color de s"erficie sore la c"al se hallan (manchas sore

aredes emaeladas o in!adas de colores osc"ros)# /a il"minaci%n con diferen!es

l"ces - a dis!in!os 0n."los "ede a-"dar a la "icaci%n#

El emleo de la l"1 "l!raviole!a es !il, or+"e "ede aarecer la san.re osc"ra,

mien!ras +"e el soor!e sore el c"al se enc"en!ra "ede !ener "n color dis!in!o, de

con!ras!e ermi!iendo locali1ar - delinear la mancha#

C"ando se "ica "na osile mancha de san.re, se dee efec!"ar "na descrici%n de

s" color, forma, osici%n, direcci%n de la salicad"ra, al!"ra es!imada de cada,

can!idad encon!rada, e!c#

$ara conservar la mancha se si."e "n ordenamien!o, evi!ando de es!a manera al!erar

los res"l!ados, - !ener "na clara evidencia de lo encon!rado#

El rimer oficial +"e lle."e a la escena ro!e.e la misma en s" !o!alidad# Se incl"-en

los fl"idos ara evi!ar s" con!aminaci%n, osile 2rdida o des!r"cci%n# Si es!0n

e&"es!os a las inclemencias del !iemo se deen c"rir con "n reciien!e de me!al#

El me*or m2!odo de conservar las manchas es la !oma de osesi%n del o*e!o sore elc"al f"eron hallados# /a san.re se sos!iene firmemen!e sore las !elas, ael -

madera: ero no sore s"erficies arni1adas o in!adas, me!ales "limen!ados, e!c#

En es!e l!imo caso lle.a a erderse c"ando se seca, - "ede caerse al m0s li.ero

roce# Si es!o s"cede, ara conservarla se coloca encima "n !ro1o de ael

!ransaren!e h"medecido con "na sol"ci%n de .oma acacia, an!es de mover el o*e!o#

El se."ndo en in.resar es el fo!%.rafo, ara re.is!rar la escena del deli!o - s"s

ad-acencias en el es!ado en +"e se enc"en!ra - an!es de +"e se !o+"e o rem"evaal.o#

El !ercero +"e dee in.resar es el lanis!a, ara oder lanime!rar la escena,

lasmando de es!a manera los o*e!os en el l".ar del hecho an!es de +"e los mismos

se han !ocados#

El c"ar!o en in.resar es el dac!iloscoo, ara la revelaci%n de los ras!ros ailares

la!en!es - el arovechamien!o de los visiles, con re.is!ros fo!o.r0ficos de !odos ellos#

El scoom2!rico es el +"in!o en in.resar a la escena, ara la recolecci%n de !odoa+"ello +"e cond"1ca a la iden!ificaci%n de cosas, escri!os rela!ivos a e&resiones de


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l!ima vol"n!ad, al c"mlimien!o de ven.an1a o a dia!rias con!ra la a"!oridad,

eviden!es en aeles, aredes, e!c#, h"ellas de efracci%n en "er!as, ven!anas,

m"eles ara la individ"ali1aci%n del elemen!o emleado#

$erforaciones rod"cidas or ro-ec!iles de armas de f"e.o, es!aleciendo la

direcci%n - dis!ancia del disaro, as !ami2n como h"ellas de imac!os ara

de!erminaci%n de !ra-ec!orias, el calire, marca - modelo de las armas emleadas#

/os +"micos le.ales - !o&icol%.icos son los se&!os en in.resar e in!ervienen en el

levan!amien!o - arovechamien!o de !oda clase de manchas, elos, resid"os l+"idos,

e!# $ara l"e.o efec!"ar el an0lisis, alicar reac!ivos, es!alecer calidades, e&!raer

elemen!os iden!ifica!orios - or l!imo informar sore la e&is!encia de s"s!ancias

!%&icas, e!c#

El odon!%lo.o le.al es el l!imo en en!rar a la escena# In!erviene en el es!"dio, an0lisis

- doc"men!aci%n de h"ellas de mordidas - s" os!erior ad*"dicaci%n# ;ami2n anali1a

el e&amen de la imlan!aci%n den!aria en los cad0veres de iden!idad desconocida,

ara e&!raer elemen!os +"e cond"1can a s" os!erior iden!ificaci%n#


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intenci!n de lavar la mancha. #obre tejidos, el brillo es menos visible. $l final, el color

se vuelve gris.

#in embargo las manchas de sangre pueden tener otros colores, desde el rojo al

casta%o o negro, o pueden aparecer verdes, azules o blanco&grisceas.

El color y tambi"n el tiempo 'ue re'uiere para el cambio, depende del material en 'ue

se encuentre. El cambio es ms rpido en superficies de metal y ms lento sobre

tejidos.

En unos tipos de telas la sangre penetra en las fibras, y en otros 'ueda encima de la

trama.

El brillo superficial es con frecuencia menos marcado sobre telas.

(as manchas de sangre sobre el papel de pared pueden aparecer con colores

sorprendentes, por tomar la sangre color del papel. tras manchas compuestas de

pigmento, o*idaciones metlicas, tabaco, rap", orines, heces, caf", etc. #e confunden

con facilidad con manchas de sangre.

(as manchas no deben clasificarse por su color y aspecto, ya 'ue una mancha

cual'uiera puede componerse de sangre, y otra mancha 'ue parece de sangre no lo

es.

2.+) ormas y posiciones de las manchas

(a superficie de cho'ue, ya sea piso de madera, lin!leo, piso de piedra, etc. en la cual

caen las gotas influye, pero no del todo como para 'ue determinen la forma de las

mismas.

(a forma de las manchas producidas por goteo permite estimar el ngulo de impacto y

la distancia de ca-da desde el punto de origen, hasta la superficie sobre el cual se

encuentran las mismas.

Cuando ms burda y spera es la superficie, mayor es la posibilidad de 'ue la

gota se rompa y desparrame.

Cuando las gotas caen verticalmente sobre una superficie lisa, a una

altura menor de / cm., su forma es circular con los bordes, lisos y bien

definidos.


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Cuando su altura se comprende entre los /cm y 0//cmlas gotas son redondas

y su periferia est rodeada de picos 1bordes festoneados). (as proyecciones son

al principio densas y distantes, pero cuando aumenta la altura de ca-da se

afirman y apro*iman unas a otras.

Cuando la altura va desde los 0//cm hasta los 0/cm son ms aguzados,

produci"ndose proyecciones radiales a una mayor altura.

Cuando la altura de ca-da supera los 0/cm las proyecciones son finas y tienen

salpicaduras radiales 'ue se e*tienden hasta unos 3/cm del centro de la gota.

e'ue%as gotitas pueden aparecer rodeando la gota principal o separada de

ella.


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Una gota de sangre al chocar con una superficie en ngulo recto, produce un aspecto

casi circular.

#i el ngulo decrece, la mancha ad'uiere una forma ms ovoidal, y es ms alargada

cuando ms chico es el ngulo de impacto.

(a forma 'ue adopte la gota de sangre y las salpicaduras, var-an de acuerdo a la

velocidad con 'ue caigan.

#i el ngulo en 'ue cae la gota es muy pe'ue%o y se desprende una pe'ue%a gotita,

la forma de la mancha es similar a la del signo de e*clamaci!n.

Una pe'ue%a gota puede proyectarse libremente a una gran distancia, formando como

una raya bajo un signo de admiraci!n. Esta raya o el e*tremo puntiagudo de la

salpicadura se%alan la direcci!n del camino recorrido por las gotas.


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2.) orfolog-a de las manchas

(a imagen hemtica puede aportar datos importantes, relacionados con las

circunstancias del hecho 'ue se investiga.

4. anchas de proyecci!n5 6otas y salpicaduras.

44. anchas de escurrimiento5 Charcos, regueros y rebabas.

444. anchas por contacto5 4mpresiones sangrantes de manos, pies, etc.

47. anchas por impregnaci!n5 roducida por la imbibici!n0de la sangre en tejidos

te*tiles.

7. anchas de limpieza5 8uedan sobre telas en 'ue se limpi! un arma, de las

manos de un pu%o, etc.

74. anchas recientes5 9e color roja, luego parduscas y por :ltimo, negruzcas.

2.;) 7elocidad5

El impacto de baja velocidad es afectado por la fuerza de gravedad. #u ca-da es de

forma horizontal y puede producir goteo sobre sangre.

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El impacto a velocidad moderada puede ser producido por un objeto contuso o

punzante. ueden producir flujo o charco arterial.

Cuando la arteria es lesionada la sangre sale disparada hacia la pared o cual'uier

objeto 'ue se encuentre cerca. Eventualmente baja debido a la fuerza de gravedad. El

impacto de alta velocidad puede ser producido por un arma de fuego o e*plosivos.

Cuando la arteria venosa es lesionada, la sangre es de color oscuro y casi no tiene

potencia, y s!lo se produce cuando la hemorragia es leve.

Una caracter-stica 'ue debemos tener en cuenta es 'ue la sangre ante morten se

coagula entre y < minutos posterior a su salida del cuerpo, lo 'ue nos indica 'ue la

v-ctima no muri! inmediatamente.


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(a post morten no se coagula, y su forma, direcci!n y estado de las manchas puede

indicar los movimientos posteriores de la v-ctima, si e*isti! lucha o forcejeo, si estaba

con vida, si fue encontrada en su posici!n original o movida.

2.=) Clasificaci!n de los patrones de sangre

ara clasificarlos, hay 'ue tener en cuenta5

0. El grado de salpicadura lo determina la te*tura de la superficie y no la distancia

de ca-da.

2. (as manchas en forma de lgrima 1e*tremos puntiagudos) indican la direcci!n

del recorrido. (as gotitas ms pe'ue%as y ms largas e*hiben sus e*tremos

puntiagudos apuntando a las manchas ms grandes de donde provienen.

3. Cuanto ms pe'ue%as las gotas, mayor la energ-a de impacto.

+. El ngulo de impacto de una mancha de sangre puede ser estimado por lageometr-a de la mancha.

#e clasifican en tres grupos

Pasiva:#e crea cuando la fuerza 'ue la produce act:a sobre su gravedad.

uede ser patr!n producido por goteo o flujo.

Proyectadas: son a'uellas 'ue son creadas cuando sale la sangre e*puesta

por un objeto en acci!n o una fuerza mayor 'ue la de gravedad. El tama%o, la

figura y el n:mero 'ue resultan de la mancha van a depender del tipo de fuerza

'ue se utilice para hacer brotar la sangre.


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Transferidas:#e produce cuando un objeto con sangre entra en contacto con

la superficie de otro 'ue no tiene sangre

2.


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En este diagrama podemos observar lo 'ue sucede cuando un reactivo produce una

reacci!n positiva. El o*-geno combinado en el reactivo 'ueda libre en contacto con

una pero*idasa, y act:a sobre el reactivo para producir una coloraci!n.

2.>) 4nterpretaci!n geom"trica de las manchas de sangre

Cuando se comete un delito en el 'ue surgen huellas o manchas de sangre, se debe

tener suma atenci!n en el registro de la ubicaci!n, forma, direcci!n, medida y

superficie del rea de impacto de tal elemento.

Cuando esta informaci!n se aplica a las caracter-sticas f-sicas de la sangre, el

investigador podr5

a. #aber el origen de la sangre

b. (a distancia entre el rea de impacto y el origen al momento de ocurrencia.

c. El tipo y la direcci!n del impacto

d. osici!n de la v-ctima durante el ata'ue

e. El movimiento y direcci!n del sospechoso y de la v-ctima durante y despu"s

de la efusi!n de sangre.

2.0/) $nlisis de las muestras remitidas

(os ensayos de sangre nos pueden brindar la siguiente informaci!n5

a) 4dentificaci!n de manchas como correspondientes a sangre5 los anlisis 'ue sehacen es para identificar positivamente la sangre.


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b) 9eterminaci!n de sangre humana o animal.

c) 9eterminaci!n del grupo de sangre.

?ecolecci!n y env-o al laboratorio

El mejor m"todo para preservar manchas de sangre es enviarla al laboratorio para su

anlisis, sobre el objeto en el cual, se encuentran. #i hay riesgo de 'ue la sangre no

se adhiera fuertemente a superficies pintadas o lustradas, metales pulidos, etc. #e

puede humedecer un trozo de papel transparente delgado y colocarlo sobre la mancha

antes de mover el objeto. #i las manchas estn secas, sobre objetos 'ue no pueden

ser trasladados, la forma de preservarla es enumerando cada una de las manchas,

despu"s de haber tomado nota de su posici!n y forma.

(a sangre ser raspada con una hoja de afeitar, escalpelo o bistur-, sobre un trozo de

papel blanco limpio. Este papel se pliega de forma tal de minimizar la p"rdida de

sangre. #i una mancha se encuentra en un material, parcialmente absorbente, y esta

no puede ser raspada, se coloca sobre la mancha un trozo de algod!n humedecido

con agua destilada o soluci!n fisiol!gica@ tambi"n se puede usar papel de filtro

humedecido comprimi"ndolo sobre la zona manchada.

Sangre lquida:#e colectan 2 ml en pipeta limpia y se colocan en un tubo de ensayo

con soluci!n salina al /.>A. #e tapa el tubo y se invierte dos o tres veces paramezclar. Bambi"n se puede usar para su recolecci!n papel de filtro, hisopos o trozos

de algod!n.

Sangre seca:?aspado con una hojilla de afeitar o de bistur-, y el polvillo se recoge en

una hoja de papel.

Ropas manchadas:#e secan a temperatura ambiente o por corriente de aire fr-o y

lejos de la luz directa del sol. (o ideal es mandar la ropa u objeto completo. #e

evitarn doblar para 'ue la sangre no se transfiera de un sector a otro.

Especificar lugar de procedencia, dimensiones y caracter-sticas de la mancha.

En ning:n caso se agregarn agentes preservadores sobre las manchas.

Bodas las muestras remitidas al laboratorio deben llevar en su embalaje, eti'uetas con

los siguientes datos5

Contenido


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ombre de la v-ctima

echa del hecho

Calificaci!n del hecho

Comisar-a actuante

Duzgado y secretar-a 'ue corresponde actuar

2.00) $nlisis en el laboratorio

El anlisis en el laboratorio puede dividirse en cinco etapas5

4. bservaci!n de las muestras

44. Ensayos preliminares

444. Ensayos confirmativos

47. 4nvestigaci!n de la especie

7. Bipificaci!n de la mancha de sangre humana

2.02)bservaci!n de las muestras

El material recibido, ser sacado de su envoltorio con sumo cuidado y esparcido sobre

una amplia superficie, utilizando guantes de lte*.

#i se llegara a encontrar insectos se coloca la muestra en una bolsa plstica, se

adicionan unas gotas de formiato de etilo y se cierra herm"ticamente. (uego de una

hora, tiempo considerable para e*terminar los insectos, se retira el material de la bolsa

y se somete al e*amen.

#e observan detenidamente, se describen y dibujan los objetos recibidos@ por

ejemplo5 una camisa, un cuchillo, etc. 4ndicando las manchas 'ue contienen con el

mayor detalle posible. 9urante el e*amen se tomar nota del da%o causado por

proyectiles, cortes con arme blanca, etc. #e se%alar la posici!n de los mismos en un

es'uema correspondiente.

Bodos a'uellos elementos e*tra%os se separan, pueden ser fibras, pelos, fragmentos

de vidrio, astillas de madera, part-culas vegetales, etc. (a e*tracci!n de este material

se realiza con pinzas o un micro&aspirador y se coloca en bolsitas, pe'ue%os tubos o

cajas de etra, debidamente eti'uetados.


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#i la mancha no es tan evidente, se marcar el contorne de la misma, aprovechando

el contraste con la luz ultravioleta. (a marcaci!n puede hacerse con tiras de papel

adhesivo de color, lpiz o tiza de sastre.

or :ltimo se procede a numerar las manchas.

Ensayos preliminares

(os ensayos preliminares son pruebas rpidas basadas en la actividad de pero*idasa

'ue posee el grupo HEMOde la hemoglobina de la sangre y 'ue, en presencia de

agua o*igenada y de ciertos reactivos orgnicos, dan lugar a la aparici!n de

coloraciones o luminiscencia 'ue orientan sobre la posible e*istencia de sangre en las

muestras analizadas.

Estos ensayos tienen valor como ensayos de orientaci!n, pero no aseguran la

presencia de sangre en la mancha 'ue se est estudiando.

Bodos los ensayos 'ue se describirn, sufren en mayor o menor grado la interferencia

de las pero*idasas de secreciones biol!gicas y pero*idasas vegetales. Bambi"n

interfieren agentes fuertemente o*idantes, algunos metales y sales metlicas.

El reactivo de an !enn "#$%#&:consiste en tintura de resina de guayaco

disuelta en alcohol et-lico. En presencia de sangre y agua o*igenada desarrolla

un color azul. #e disuelven /,/ g de resina en 0/ ml de alcohol de


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se usa una varilla de vidrio. #e hacen to'ues con la soluci!n obtenida, sobre el

papel de filtro.

En cada uno de ellos se agrega primero una gota de los

reactivos 'ue se desean ensayar, se espera unos segundos Fpor si hubiera

o*idantes presentes& y si no hay reacci!n, se agrega una gota de agua

o*igenada. (a aparici!n del color caracter-stico en los ensayos utilizados,

indica la posible presencia de sangre.

2) Telas de color con supuestas manchas de sangre:#e puede realizar de

varias maneras los ensayos. #e repite el mismo ensayo 'ue se utiliz! para

telas blancas, pero ac de color son dichas telas.

Bambi"n se puede raspar la mancha suavemente con el v"rtice de un cuadrado

de papel de filtro doblado en cuatro. #e despliega el papel y en el centro de

este 'ued! parte del material raspado, se agrega una gota de etanol y luego se

incorpora una gota de la reacci!n de Gastle eyer. (uego de unos segundos,

si no hay desarrollo de color se a%ade una gota de agua o*igenada. (a

coloraci!n caracter-stica indicar un resultado positivo.

tra forma es humedeciendo un trozo de papel de filtro con soluci!n fisiol!gica

y se oprime fuertemente sobre la mancha. #e hacen luego los ensayospreliminares sobre el papel.

Esta variante se har en una pe'ue%a zona de la mancha y siempre 'ue la

misma sea e*tensa.

#i todos los ensayos anteriores dieron negativo, se corta una pe'ue%a hebra

de hilo de la mancha y se coloca en el centro de un papel de filtro. #e aplica el

reactivo de Gastle eyer sobre la hebra, se espera unos segundos y se agrega

una gota de agua o*igenada. #e observar el cambio de color.

3)'guas de lavado/ vertederos/ ca0eras/ etc1:#i se sospecha 'ue el agua

puede estar contaminada con una pe'ue%a cantidad de sangre, se colocan &0/

ml de la misma en un tubo de ensayo y se agrega una gota del reactivo de

Gastle eyer@ se espera unos segundos y se adiciona una gota de

3) agua o*igenada. $l agitar la soluci!n suavemente aparecer el color

caracter-stico 'ue nos indica un resultado positivo.


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+) O.2etos varios "maderas/ .aldosas/ ho2as de cuchillos/ etc1& con

supuestas manchas de sangre: #e raspan con cuidado pe'ue%os

fragmentos de cada una de las manchas, sobre vidrios de reloj.

#e agregan sobre los trocitos reunidos en la concavidad del vidrio, 2&3 gotas de

soluci!n fisiol!gica y con una varilla se ayuda a la disoluci!n de estos

fragmentos. Con la soluci!n obtenida se hacen to'ues sobre el papel de filtro.

#e agrega sobre los mismos una gota de los reactivos elegidos, se espera

unos segundos y si no hay aparici!n del color, se agrega una gota de agua

o*igenada en cada vaso.

) Superficies amplias como pisos/ escaleras/ etc1:#e pulveriza la superficie a

investigar con la soluci!n de luminol y carbonato de sodio.

#e espera unos instantes y se roc-a con agua o*igenada. (a aparici!n de

luminiscencia azul, nos dir sobre la posible e*istencia de sangre en la

muestra.

2.00) Ensayos confirmativos

#on ensayos espec-ficos 'ue certifican la e*istencia de sangre en la mancha

investigada.

#e dividen en + m"todos5

4. "todo microsc!pico

44. "todo micro&cristalogrfico

444. "todo cromatogrfico

47. "todo microespectrosc!pico

"todo microsc!pico

Es la observaci!n de los elementos figurados de la sangre.


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(a observaci!n de gl!bulos rojos 1eritrocitos) y gl!bulos blancos 1leucocitos) en

manchas de sangre puede verse afectada por diferentes circunstancias, la naturaleza

del sustrato sobre el cual se encuentra la mancha, la antigHedad, el da%o originado

por el manipuleo y la putrefacci!n 'ue causar la destrucci!n de los elementos

figurados.

Cuando la sangre se deposita sobre un objeto en una capa fina y se deseca

rpidamente, es cuando mejor se conservan los gl!bulos rojos y blancos.

O.servaci-n de leucocitos "gl-.ulos .lancos&

(a t"cnica 'ue se emplee depender si la mancha se encuentra sobre un material

absorbente5 tela, o un soporte no absorbente5 hoja metlica.

Soporte a.sor.ente "tela&:#e coloca un pe'ue%o trozo de la tela manchada sobre

un portaobjeto, se agregan unas gotas de alcohol et-lico absoluto y se deja en reposo

por 2/ minutos. Este procedimiento asegura la adhesi!n de la sangre, de lo contrario

se disolver-a en las siguientes operaciones. #e colorea con 6iemsa, por 3/ minutos y

se enjuaga con agua destilada. #e deja secar al aire.

#e coloca el portaobjeto en el microscopio y se observa la presencia o no de gl!bulos

blancos.

Soporte no a.sor.ente "ho2a met3lica&:#e deposita sobre un portaobjeto una capa

de alb:mina de ayer, a continuaci!n se raspa una parte de la mancha y el polvo 'ue

se obtiene se deja caer en forma de lluvia fina sobre la capa de alb:mina. #e fija el

preparado con soluci!n de metanol&formol por 3 minutos. #e lava con agua destilada y

se colorea con el colorante 6iemsa.

#e lava el preparado, se seca al aire y se observa en el microscopio.

#i la tela es trasl:cida, pueden verse los mismos sin desintegrar el tejido. #i se trata

de una tela oscura o gruesa, puede re'uerir luego del te%ido, el deshilachado de dicho

material sobre el portaobjetos, mediante el empleo de agujas adecuadas.

O.servaci-n de los eritrocitos "gl-.ulos ro2os&

Manchas so.re soportes opacos no a.sor.entes:


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(as manchas de sangre sobre hojas metlicas 1armas blancas u otros objetos no

absorbentes) pueden ser e*aminadas directamente al microscopio por el m"todo de

epimicroscop-a.

Esta realiza las observaciones iluminando con luz incidente, mientras 'ue la

microscop-a convencional utiliza luz por transparencia.

(os mejores resultados se han logrado cuando la capa de sangre 'ue se asienta

sobre la hoja metlica es muy delgada.

$l secarse rpidamente la mancha, es probable 'ue la sangre no sufra alteraciones y

entonces los gl!bulos rojos se distinguirn bien.

Cuando la capa sangre es gruesa, la observaci!n es ms dif-cil y, en ocasiones,

imposible, pues los eritrocitos decantan por su mayor peso espec-fico, formndose por

encime de los mismos una costra de alb:mina. or otra parte, el secado es ms lento

y se incrementa el riesgo de putrefacci!n de la sangre.

"todo micro&cristalogrfico

Consiste en la preparaci!n y observaci!n microsc!pica de cristales obtenidos por

acci!n de ciertos reactivos sobre la hemoglobina de la sangre.

(os dos m"todos ms utilizados son el de Beichmann y el de BaIayama.

M4todo de Teichman "#$56&: Consiste en la cristalizaci!n caracter-stica del

clorhidrato de hematina 1hemina), bajo la forma de cristales rombo"dricos de color

caf", utilizando cido ac"tico glacial con vestigios de cloruro de sodio.


21/30

#e prepara un e*tracto de la mancha, si se encuentra impregnado un tejido, se

macera un trocito del material manchado en la menor cantidad de agua posible.

#i el soporte no es absorbente, el e*tracto se prepara por disoluci!n en agua de unas

escamitas de la mancha. (uego se calienta un portaobjeto durante un minuto sobre la

tapa de un ba%o de agua a ;/C.

Con una micro&pipeta se coloca una gota del e*tracto del portaobjeto, y se evapora

hasta se'uedad. #i es necesario se evaporan ms gotas hasta obtener una mancha

visible de color pardo.

#e coloca sobre la mancha un cubreobjetos, interponiendo entre el portaobjetos y el

cubreobjetos, un pe'ue%o rectngulo de papel de filtro, con el fin de dejar una hendija

suficiente para el paso de una gota del reactivo de Beichmann. or :ltimo se apoya el

portaobjetos sobre la placa del ba%o de agua y se deja hasta la evaporaci!n total del

cido ac"tico. #e vuelve a agregar una gota de reactivo y se evapora de nuevo.

#e repite el procedimiento una tercera y cuarta vez, se deja enfriar el portaobjeto y se

observa al microscopio.

(a aparici!n de los cristales caracter-sticos de Beichmann, indicarn un resultado

positivo.

M4todo de Ta7ayama: Es espec-fico y est basado en la obtenci!n de los cristales de

piridina&hemocrom!geno como consecuencia de la acci!n del reactivo sobre la

hemoglobina de la sangre, presente en la muestra.

El reactivo consiste en una mezcla de piridina, soluci!n saturada de glucosa y soluci!n

de hidr!*ido de sodio. (os cristales obtenidos son de color rosado intenso.

"todo cromatogrfico

#e basa en la obtenci!n del mismo ?h caracter-stico para un e*tracto de la muestra y

un testigo de sangre@ ambos sembrados sobre papel para uso cromatogrfico o sobre

placa delgada.

#e disuelven las manchas con soluci!n fisiol!gica. #e hace una prueba preliminar,

sembrando sobre una placa delgada diferentes cantidades del e*tracto de muestra

10,2 ! microgotas), luego se pulveriza con el reactivo leucobase del verde de

mala'uita y agua o*igenada.


22/30

ara el desarrollo cromatogrfico se elige la cantidad 'ue d" una reacci!n neta, pero

no demasiado intensa, y se siembra en la l-nea recta.

(uego se siembran microgotas de sangre testigo diluida, despu"s de unos minutos

se coloca la placa en la cuba cromatogrfica, previamente saturada con el solvente

mencionado.

#e retira la placa de la cuba y se seca en una estufa a 0//C durante minutos, para

evitar la interferencia de las pero*idasas de origen vegetal. (uego se roc-a con el

reactivo verde de mala'uita, se esperan unos minutos, y si no aparece coloraci!n, le

agrego agua o*igenada.

"todo microespectrosc!pico

#u uso ha sido desplazado por los m"todos cristalogrficos.

Consiste en observar el espectro de absorci!n de la o*ihemoglobina, con un

microscopio provisto de un ocular micro&espectrosc!pico, en lugar del ocular

corriente. El espectro de absorci!n de la o*ihemoglobina est caracterizado por dos

bandas de absorci!n, cuyas longitudes de onda correspondientes son =;&=< nm y

+/&+2 nm, situadas entre las l-neas 9 y E del espectro visible.

Cuando la muestra de sangre es fresca, el m"todo no ofrece problemas, siempre 'ue

se disponga de la cantidad suficiente5 pero si la mancha es antigua, la hemoglobina se

habr transformado parcialmente en metahemoglobina, hematina y hemocrom!geno.

(a carbo*ihemoglobina da un espectro similar al de la o*ihemoglobina, pero con un

ligero desplazamiento de las bandas hacia el violeta.

#i se agrega un agente reductor, la o*ihemoglobina se transforma en hemoglobina

reducida, y presentar una :nica banda ubicada entre las dos correspondientes a la

o*ihemoglobina y 'ue se llama banda de #toIes.

(a carbo*ihemoglobina mantiene la doble banda aun luego del agregado de un

reductor.

2.02) Bipificaci!n de las manchas

#i en el anlisis de una mancha se comprueba 'ue es de sangre y 'ue pertenece a la

especie humana, por :ltimo 'ueda el e*amen de la tipificaci!n de la misma.


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Bipificar una mancha de sangre es encontrar su tipo o grupo dentro de la mayor

cantidad posible de sistemas, y es fundamental para llegar a la individualizaci!n.

#i en la escena del crimen 'uedan manchas, 'ue son de sangre humana, y se

comprueba 'ue las mismas no pertenecen a la v-ctima, su estudio es muy importante

para localizar al criminal.

(a posibilidad de coincidencia entre los grupos sangu-neos de dos individuos se hace

cada vez ms dif-cil, al ser mayor el n:mero de sistemas utilizados en la tipificaci!n de

la sangre. (os avances producidos en este campo de la ciencia han incrementado la

probabilidad de asignar a un individuo en particular, una mancha de sangre.

ara la tipificaci!n de las mismas se usan t"cnicas inmunol!gicas y bio'u-micas.

T4cnicas inmunol-gicas

Estas sern aplicadas al estudio de los sistemas $J, y ?h.

#e basan en la e*istencia sobre la superficie de los gl!bulos rojos de la sangre, de

ciertas estructuras 'u-micas llamadas ant-genos. Estos son los 'ue confieren a la

sangre, el tipodentro de cada sistema sangu-neo.

En sangre fresca, la presencia o ausencia de un ant-geno, se determina por la

aglutinaci!n o no de los gl!bulos rojos puestos en contacto con un antisuero

espec-fico, con ciertas condiciones.

En manchas de sangre seca, los gl!bulos rojos se encuentran destruidos, por lo

general, y por lo tanto las t"cnicas de aglutinaci!n directa no son aplicables.

#in embargo, los ant-genos no se desnaturalizan inmediatamente y retienen la

capacidad de combinarse con anticuerpos espec-ficos.

#istema $J

Kubo muchos cient-ficos 'ue realizaron estudios cient-ficos respecto de la circulaci!n

de la sangre, la inyectaci!n de la misma en los humanos para curarlos, transfusiones

de sangre animal a humanos, etc.

(andsteiner en el a%o 0>// se%al! 'ue el suero humano normal no solo aglutina los

gl!bulos rojos de animales, sino 'ue en algunos casos, los provenientes de otrosindividuos.


24/30

(uego de realizar varios e*perimentos con humanos para ver como se aglutinaban los

gl!bulos, lleg! a la conclusi!n 'ue e*isten dos factores en los gl!bulos rojos, a los 'ue

design! como aglutin!genos ' y 8, 1conocidos como ant-genos) y 'ue el suero

conten-a anticuerpos normales o aglutininas.

Este cient-fico dijo 'ue cada persona pod-a poseer en los gl!bulos rojos uno de los

ant-genos, ambos o ninguno. Cuando uno de estos aglutin!genos est ausente en los

gl!bulos rojos de una persona, su correspondiente aglutinina est presente en el

suero.

or otra parte, cual'uiera sea el ant-geno 'ue una persona tenga en la superficie de

sus gl!bulos rojos, los correspondientes anticuerpos faltan en su suero.

$plicaci!n del sistema $J en la tipificaci!n de manchas de sangre

6eneralmente no se presentan problemas en la investigaci!n del grupo sangu-neo en

sangre fresca, pero puede presentarse inconvenientes en el agrupamiento de

manchas de sangre secas.

ara tal fin se re'uiere reconstruir el grupo $J de la mancha en estudio, o sea,

encontrar los aglutin!genos y aglutininas presentes.

actores 'ue pueden afectar los resultados5

0. (a antigHedad de la mancha

2. (a naturaleza del sustrato sobre el cual se encuentra

3. (as condiciones a las 'ue estuvo e*puesta

+. Cantidad de muestra, etc.

(a antigHedad de la mancha es fundamental, por'ue las aglutininas son muy poco

estables, se debe realizar la investigaci!n en el laboratorio lo ms rpido posible.

(os aglutin!genos en manchas de sangre seca y bien conservada, son en cambio

muy persistentes.

o se deben manipular las muestras con las manos sin guantes, ya 'ue los ant-genos

$J se encuentran en las secreciones 1sudor, semen, saliva, lgrimas, etc.) en los

individuos secretores. (os 'ue no manifiestan esta propiedad son los individuos no

secretores.

tro factor es la contaminaci!n bacteriana de la muestra.


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4nvestigaci!n de aglutininas 1anticuerpos anti $ y anti J) en manchas de sangre

seca

E*isten dos t"cnicas para e*aminar en este tipo de mancha la presencia de

anticuerpos anti $ y anti J.

T4cnica de ,attes:

#i se cuenta con una costra delgada de sangre, es mejor utilizar este m"todo. Bales

costras estn usualmente disponibles cuando la sangre est concentrada en un rea

reducida y sobre un material no absorbente.

Consiste en colocar una costra muy pe'ue%a de sangre sobre un portaobjetos, y

ponerla en contacto con una suspensi!n de gl!bulos rojos conocidos 1$, J, /), en

soluci!n fisiol!gica.

#e cubre la preparaci!n con un cubreobjetos, y luego de un tiempo, se e*amina al

microscopio la presencia o ausencia de aglutinaci!n.

(a costra a utilizar debe tener un grosor tal, 'ue no levante el cubreobjeto,

produci"ndose una acumulaci!n de gl!bulos, en algunas zonas, produciendo una

falsa apariencia de aglutinaci!n.

#i la costra es demasiado delgada, la aglutinaci!n puede ser -nfima 1dos o tres

gl!bulos aglutinados) dificultando una lectura certera.

M4todo e9tractivo a tu.o:

#e aplica cuando no se dispone de costras de sangre. #i la mancha se encuentra

sobre madera, se aplica unas gotas de soluci!n fisiol!gica sobre la misma, para poder

e*traerla. (a soluci!n restante se recoge con una pipeta.

#i la mancha se encuentra sobre un tejido, se corta un trozo y se coloca en un tubo de

ensayo. #e agregan unas gotas de soluci!n fisiol!gica para 'ue se disuelva, utilizando

una varilla de vidrio.

El e*tracto obtenido se somete a una centrifugaci!n breve. El sobrenadante se separa

en tres pe'ue%os tubos de ensayo. $l primer tubo se agrega una gota de suspensi!n

de gl!bulos $, al segundo una gota de gl!bulos rojos J, y al tercero una gota de

gl!bulos rojos /.

#e colocan los tubos en la heladera por 0/ minutos apro*imadamente, luego se

centrifugan a 0///&0// rpm durante dos minutos. #e e*trae el l-'uido sobrenadante y


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sobre los gl!bulos rojos sedimentados, se agrega una gota de soluci!n fisiol!gica. #e

agitan ligeramente los tubos y se observa si hay aglutinaci!n.

#i los gl!bulos rojos se resuspenden, la prueba es negativa. En cambio, si los gl!bulos

se han aglutinado, la prueba es positiva.

4nvestigaci!n de aglutin!genos del sistema $J/ en manchas de sangre secas

Una vez hecha la investigaci!n de anticuerpos anti $ y anti J, se realiza la

determinaci!n de aglutin!genos $ y J.

9ebe recurrirse a pruebas indirectas para la b:s'ueda de los antigenos, ya 'ue la

mayor-a de las veces, en manchas secas los gl!bulos se deterioran o se destruyen,

perdiendo as- la capacidad de aglutinaci!n. (os aglutin!genos $ L J retienen durante

mucho tiempo, su capacidad de absorber o fijar los correspondientes anticuerpos anti$ y anti J.

(os m"todos 'ue se emplean para la investigaci!n son5

"todo de absorci!n&inhibici!n5 Este estudio tambi"n puede aplicarse en forma

similar, para detectar ant-geno en otras manchas biol!gicas 1semen, saliva, sudor,

etc.) de individuos secretores.

#i un antisuero de t-tulo conocido, se l agrega a una mancha de sangre y luego de un

tiempo determinado se titula nuevamente, podremos observar si su t-tulo disminuy! o

se mantuvo.

En el primer caso, la disminuci!n del t-tulo indicar la presencia en la mancha de

sangre del aglutin!geno respectivo. #i el t-tulo del anti $ disminuy! netamente, se

comprobar la e*istencia del ant-geno $ en la muestra. #i disminuy! el t-tulo del anti

J, se encuentra presente el ant-geno J. #i e t-tulo de los antisueros se mantuvo, no

e*isten en la mancha los ant-genos respectivos 1ni $ ni J).

"todo de absorci!n&eluci!n5 Este m"todo es altamente sensible y confiable a:n en

manchas antiguas.

or esta t"cnica, pe'ue%as muestras del material machado con sangre, se ponen en

contacto con antisueros espec-ficos 1anti $, anti J y anti K), durante un tiempo para

'ue se forme el complejo ant-geno&anticuerpo.

En una segunda etapa, el material manchado se lava cuidadosamente con soluci!n

fisiol!gica, para eliminar todos los anticuerpos no fijados a la mancha.


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(uego se realiza la disociaci!n del complejo ant-geno&anticuerpo, por calentamiento a

/ C, durante 0 minutos, Este proceso es conocido como eluci!n, se rompe el

complejo formado inicialmente y se liberan los anticuerpos.

or :ltimo, se agregan gl!bulos rojos del grupo conocido. #i se produjo eluci!n de anti

$, se aglutinarn los gl!bulos rojos $. 9e la misma manera, se aglutinarn los

gl!bulos rojos J o gl!bulos rojos /, si se eluyeron anti J o anti K, respectivamente.

#istema 5

En este sistema se distinguen tres grupos sangu-neos. (os mismos son el , el y

el .

Este sistema es independiente del $J y del ?h.

En general los ant-genos3 y no son detectables despu"s de + a ; semanas de

antigHedad de la mancha. El es el menos estable.

En la prctica es esencial seleccionar cuidadosamente los antisueros adecuados. En

ensayos realizados con sueros+ anti , en un /A dieron resultados correctos. En

cambio, de los sueros anti ensayados, s!lo resultaron eficaces un 0/A.

(os riesgos son mucho ms serios al tratar de detectar el ant-geno en una mancha

, dada la mayor efectividad como antisuero del anti con respecto al anti , en

una mancha, podr-a ocurrir 'ue se detectase pero no .

$dems se presentan problemas de reacciones cruzadas y es posible encontrar en

individuos pertenecientes al grupo , una cierta actividad residual .

$lgunos sueros son ms espec-ficos cuando se absorben a temperatura ambiente y

otros re'uieren +C.

Es necesario incluir controles con manchas de los tres grupos. En algunas ocasiones,

aun cuando el grupo de la mancha no pueda ser establecido en forma definitiva, se

puede e*cluir la posibilidad de 'ue provenga de un cierto individuo.

El m"todo empleado para determinar el grupo dentro del sistema , es el de

absorci!n&eluci!n, similar en sus diferentes etapas al utilizado para investigar los

ant-genos del sistema $J/. Bambi"n es semejante la cantidad de muestra re'uerida.

3

4


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#istema ?h

ara este tipo de sistema se realizaron varias investigaciones.

En 0>3> (evine, fue un disc-pulo de (andsteiner, public! su hallazgo respecto al

comportamiento del suero de un paciente del grupo /, 'ue recibi! una transfusi!n de

sangre de su esposo, tambi"n del grupo /.

9escubri! 'ue en el suero de la mujer se hab-a producido un anticuerpo espec-fico

contra un ant-geno presente en los gl!bulos rojos de su esposo. #e preguntaban como

hab-a ocurrido la inmunizaci!n de la mujer, y llegaron a la conclusi!n de 'ue el

ant-geno presente en los gl!bulos rojos del esposo, hab-a sido transmitido

gen"ticamente al hijo@ y 'ue los gl!bulos rojos fetales, portadores de dicho ant-geno,

al introducirse en la circulaci!n materna, fueron los causantes de la formaci!n del

anticuerpo espec-fico.

Esto se confirmar-a con el descubrimiento del factor ?h. (a mujer era ?h negativa y su

esposo ?h positivo. El ni%o 'ue naci! muerto era ?h positivo y su ant-geno ?h

provoc! la inmunizaci!n de la madre 'ue elabor! anticuerpos anti ?h.

En 0>+/ (andsteiner y Miener estudiaron los anticuerpos producidos en conejos

inmunizados con gl!bulos rojos de monos acaccus rhesus.

(uego informaron 'ue el suero de los conejos aglutinaba no s!lo los gl!bulos del

mono rhesus, sino tambi"n, los gl!bulos rojos de casi todos los humanos de raza

blanca.

En ese a%o Miener y eters vieron una similitud entre la especificidad del anticuerpo

animal y el anticuerpo hallado en el suero de tres pacientes con transfusiones. $mbos

anticuerpos reaccionaron con los mismos gl!bulos rojos.

Como consecuencia de esa similitud, se llam! ?h al ant-geno presente en la superficie

de los gl!bulos rojos, y anti ?h al anticuerpo, siendo ?h el s-mbolo formado con las

dos primeras letras de ?hesus.

(os individuos 'ue tienen el ant-geno ?h se denominan ?h positivos y los 'ue no lo

tienen ?h negativos 1tambi"n llamado anti 9).

(uego fueron hallados otros anticuerpos 'ue daban reacciones similares pero no

iguales a anti 9. En 0>+ hab-an sido descriptos anticuerpos relacionados5 anti 9,

5


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anti C, anti E, anti c y anti e. Estos constituyen el sistema sangu-neo ?h, se hallan

sobre la superficie de los gl!bulos rojos, siendo todos ellos hereditarios.

$plicaci!n del sistema ?h a la tipificaci!n de manchas de sangre seca

En el caso de sangre fresca la determinaci!n del grupo dentro del sistema ?h no

ofrece problemas. En cambio, con sangre seca, el anlisis es mucho ms complicado.

#e re'uiere disponer de suficiente cantidad de sangre, y es fundamental 'ue la

antigHedad de la muestra no e*ceda de un mes. Cuanto ms reciente es la mancha y

mejor conservada se encuentre, es ms probable 'ue se pueda hallar el fenotipo de la

misma dentro del sistema ?h. En este sistema son cinco los aglutin!genos 'ue se

ponen en evidencia, empleando antisueros espec-ficos.

9e las m:ltiples combinaciones posibles de estos ant-genos para constituir el

genotipo, s!lo nueve de ellas se presentan con frecuencias significativas.

Esto hace 'ue una mancha pueda corresponder a una de las nueve combinaciones y

aumenta la probabilidad de discriminaci!n. Es decir, dos manchas de diferente

procedencia, cuyos grupos coinciden dentro del sistema $J/ y 'uiz tambi"n dentro

del sistema , es manos probable 'ue coincidan dentro del sistema ?h@ dadas las

nueve combinaciones diferentes del mismo.

(a determinaci!n de los ant-genos del sistema ?h en manchas secas, puede

realizarse con el mismo m"todo de absorci!n&eluci!n, 'ue se utiliza para el sistema

$J/ y , pero con algunas variantes.

(a cantidad de muestra de sangre re'uerida es mayor, dada la menor concentraci!n

de sitios antig"nicos en la membrana de los gl!bulos. (a temperatura !ptima para la

absorci!n del antisuero es 3=C.

or otra parte, el lavado para eliminar el antisuero no absorbido, debe ser aun ms

cuidadoso y e*haustivo.

(a eluci!n debe hacerse en ausencia de los gl!bulos rojos, por'ue re'uiere una

temperatura alta durante un tiempo prolongado. En esta e*posici!n a ;/C, los

gl!bulos rojos pierden su capacidad de aglutinaci!n frente a antisueros espec-ficos.

Como se utilizan anticuerpos incompletos, es necesario un tratamiento enzimtico

previo de los mismos con papa-na. Esta modifica la superficie de los gl!bulos rojos y

contribuye a disminuir su carga el"ctrica, favoreciendo la aglutinaci!n.


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actores como el calor, luz solar directa, humedad, embalaje inadecuado y la

antigHedad, pueden disminuir la posibilidad de llegar a un resultado correcto en la

investigaci!n de este sistema.

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Examen de Manchas Desconocidas

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