EXTRACCIÓN DE ADN

Proyecto Integrado

OBJETIVO DEL PROYECTO

Este proyecto tiene como objetivo la extracción del ADN de una naranja para poner en práctica lo estudiado en clase.

Es una manera sencilla de comprender las distintas capas presentes en la pared celular ya que hay que romperla para poder llegar al núcleo, que es donde se encuentra el ADN.

El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos de los laboratorios de biotecnología.

Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

MATERIALES NECESARIOS

2 vasos de precipitado (250ml y 500ml) 2 tubos de ensayo de cristal 1 cuchillo Batidora eléctrica, con vaso Un embudo Papel de filtro Termómetro 10ml de detergente líquido de lavavajillas 100ml de agua mineral 3g de NaCl 5g de bicarbonato sódico 20ml de alcohol etílico muy frío Enzimas proteasas (en este caso líquido de lentillas) Varilla fina, a ser posible de metal Probeta Fuente de ADN (naranja)

PROCEDIMIENTO SEGUIDO

En primer lugar cortamos la naranja en trozos pequeños para poder batirla con facilidad. Después pesamos con la balanza 3 gramos de NaCl y 5 gramos de bicarbonato sódico.

Depositamos todo esto con 10 ml de lavavajillas en un vaso de precipitados de 500 ml., le añadimos la naranja y los 100 ml de agua mineral y lo batimos todo.

Cuando ya la disolución esté bien batida la ponemos a reposar durante 15 minutos.

Pasado ese tiempo tenemos que filtrarlo, para ello cogemos papel secante y hacemos el filtro. Con la medida de un embudo grande hacemos un círculo y lo plegamos progresivamente, como si fuera un acordeón. Ponemos el filtro dentro de nuestro embudo y pasamos la disolución de naranja por el filtro. El liquido verde-amarillo sin espuma que nos quede (20 ml) lo ponemos en un tubo de ensayo.

Más tarde le ponemos un poco de liquido de lentillas. Además tenemos que poner 20 ml de alcohol etílico pero muy frío, que medimos en una probeta, y lo metemos en un tubo de ensayo. Luego pasamos el alcohol etílico de ese tubo de ensayo al otro pero de manera que el alcohol pase solo por las paredes del tubo de ensayo con un ángulo de 45º y vertemos muy despacio.Cuando ya hayamos acabado con todo ese proceso cogemos la varilla y sacamos el ADN de la naranja.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas:

- En primer lugar tienen que romperse la membrana plasmática de la célula eucariota para poder acceder al núcleo de la célula. En el caso de los vegetales también habrá que romper la pared celular.

- A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN.

-Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo. Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. la solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN.

¿Por qué pusimos esos ingredientes?

Aquí observamos cómo actúa el detergente en la membrana celular y en la nuclear, ya que ambas tienen la misma estructura.

Problemas planteados La primera experiencia al intentar extraer ADN de la naranja no dio un buen

resultado pues no conseguimos que se observara con claridad. Creemos que es debido a que no dejamos que estuviera un tiempo determinado de reposo.

Además en este intento nos faltó tiempo suficiente para realizar la práctica, es por esto que no reposó.

En el segundo intento se nos presentó el problema de que, aún habiendo empleado el tiempo correcto, no le vertimos suficiente cantidad de líquido de lentillas, que se encargaba de degradar las proteínas de la membrana nuclear, por lo que esta no liberó el ADN correctamente. Lo que visualizamos, finalmente, fue una mezcla de ADN con pulpa de naranja en suspensión sobre el alcohol.

Realizado por Isabel Mª Lorite Méndez Cristina Monje Blanco Laura Guisado Díaz Maikel Albalat Orejuela

2ºBach AProyecto biológico-científico