Extracción de un preparado enzimático crudo amilásico

TRUJILLO-2012

TRUJILLO-2012

“EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”

PROFESOR: ING. SÁNCHEZ GONZALES, JESÚS ALEXANDER

ALUMNA: MARTÍNEZ SALDAÑA, YURICO ELIZABETH

CICLO: IX

HORARIO: JUEVES 11-1PM

BIOTECNOLOGÍA DE LOS

PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES


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LABORATORIO N°05

EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”

I. INTRODUCCIÓN

Es muy relevante tener conocimientos de las propiedades de productos enzimáticos para mejorar la

selección de las propiedades de los productos. Se debe lograr un adecuado control en sus

aplicaciones tecnológicas, así como para facilitar el diseño de un apropiado proceso de modo que

pueda aplicarse a los al campo de ingeniería agroindustrial.

Las enzimas que catalizan la hidrólisis de los enlaces peptídicos de las proteínas son las Proteasas,

que están presentes en todos los organismos vivos, las cuales se agrupan según los residuos de

aminoácidos del centro activo y los mecanismos de acción en cinco grupos: serino, cisteíno,

aspártico, metalo proteasas y peptidasas de mecanismo catalítico desconocido. La Papaína es uno

de los miembros que pertenecen a las familias de cisteínopeptidasas , las cuales son las más

conocidas.

Dichas biomoléculas se han utilizado tradicionalmente como ablandadoras de carnes. Además, se

utilizan como complemento alimenticio.Se ha descrito que muestran varias acciones

farmacológicas: aumentan la absorción de otros medicamentos, se han utilizado en tratamientos de

desórdenes digestivos, en enfermedades virales y en la formulación de vacunas. Tienen

potencialidades como antiedematosas, antiinflamatorias, antitrombóticas y fibrinolíticas. Se

demostró recientemente, la posible actividad antitumoral de cisteíno-proteasas como la bromelina.

Sin embargo, el número de proteasas vegetales que se han aislado y caracterizado es aún muy

bajo y existen muchas fuentes naturales por explorar, se han estudiado menos del 1 % de las

especies vegetales conocidas, de ahí el interés en la búsqueda de nuevas fuentes naturales de

obtención de proteasas vegetales.

II. OBJETIVOS

Identificar cualitativamente del Preparado Enzimático Crudo, la actividad enzimática de la

amilasa

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Muchas investigaciones encaminadas a explicar los mecanismos de activación de las cisteíno

proteasas in vivo han demostrado claramente que la activación de estas enzimas depende del pH.

Los autores sugieren un predominio de moléculas de enzima activa a pH ácido y está claro que las


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variaciones de pH neutro a pH ácido en las vacuolas provocan cambios en la conformación nativa

de la enzima inactiva, lo que permite el procesamiento y plegamiento de la enzima activa.

Pocas enzimas intracelulares son producidas a gran escala y las ventas de estas enzimas

representan solo un pequeño porcentaje del total de ventas. Sin embargo, la producción de

enzimas intracelulares es de gran interés por varias razones. Con los avances en las técnicas de

inmovilización, el uso de enzimas y células inmovilizadas está en aumento. Por ejemplo, se han

establecido procesos comerciales para la producción de jarabes de fructosa usando glucosa

isomerasa.

ENZIMAS

Son proteínas especializadas en la función catalítica y las sustancias sobre las cuales actúan se

denomina sustratos.Lo que distingue a las enzimas de las demás proteínas es precisamente que,

una vez producido el reconocimiento molecular del sustrato, se realiza la transformación de la

sustancia reconocida, como consecuencia de diferentes interacciones entre la proteína enzimática y

su sustrato este experimenta un reordenamiento de sus elementos constituyentes debido a la

ruptura y formación de algunos enlaces químicos. La que resulta de la acción de la enzima sobre el

sustrato recibe el nombre de producto.

La existencia del complejo enzima-sustrato y la característica de que la mayoría de los sustratos

presentan un tamaño varias veces menor que la estructura de la enzima, implica que la enzima solo

entra en contacto con el sustrato en una pequeña zona específica de su voluminosa estructura.

Las proteínas enzimáticas presentan dos regiones o sitios importantes, uno de ellos reconoce y liga

al sustrato (sitio de reconocimiento) y el otro cataliza la reacción (sitio catalítico) toda vez que el

sustrato se ha unido. Estos dos sitios están adyacentes uno al otro en la forma activa de la enzima

y en ocasiones, el sitio catalítico es parte del de reconocimiento, estas dos regiones en conjunto

reciben el nombre de centro activo.

Las enzimas poseen dos propiedades fundamentales, derivándose estas de las características del

centro activo:

Gran eficiencia catalítica.

Elevada especificidad.

Siendo la Elevada Especificidad, la que sirve de fundamento para establecer la clasificación y

nomenclatura de las enzimas.

Su función es de ser “Catalizador Óptimo”.


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Se han establecido 6 grupos principales:

Oxidoreductasas: Enzimas que catalizan reacciones de oxidoreducción.

Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico entre un donante y un aceptor,

se excluyen aquellas que transfieren electrones o sus equivalentes, pues pertenecen a la

clase anterior y aquellas en que el aceptor del grupo es el agua y pertenece a la clase

siguiente.

Hidrolasas: Catalizan la ruptura de enlaces químicos con la participación de las moléculas

de agua.

Liasas: Catalizan reacciones en las cuales se produce la adición o sustracción de grupos

químicos a dobles enlaces.

Isomerasas: Catalizan la interconversión de dos isómeros.

Ligasas: Catalizan la unión covalente de dos sustratos mediante la energía de hidrólisis de

nucleósidostrifosfatados, generalmente el ATP.

A) Estabilidad de las Enzimas

La frágil naturaleza proteica de las enzimas, que conlleva a una estabilidad limitada de su

estructura y funcionalidad, constituye un aspecto importante en un contexto tecnológico. Se

considera que una enzima es apropiada para una aplicación comercial, si su estabilidad es

suficiente para dicha aplicación.

Diagrama de flujo para la producción de enzimas a partirde tejidos animales o vegetales

“Diagrama de Enzyme´sBiotechnology”. (Figura 1).

Las enzimas se obtienen por fermentación en cultivos semisólidos, sumergidos, extracción de

tejidos ya sea en plantas o animales bajo condiciones controladas.


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Figura 1. “Diagrama de Enzyme´sBiotechnology”.

B) Fuentes de enzimas

Es obvio que hay tres fuentes de enzimas: células animales, vegetales y microbianas. En años

pasados, las plantas y los animales fueron las fu entes tradicionales de enzimas, pero dados los

avances recientes de la biotecnología, probablemente el futuro está en los sistemas microbianos.

1. Enzimas de origen animal

Obtenidas a partir de tejidos animales, por lo general, se preparan de animales recién sacrificados.

Inmediatamente después del sacrificio, se quitan los tejidos y se congelan para evitar la

degradación bioquímica y de sulfuración. Se remueven los tejidos extraños, particularmente los

cuerpos grasosos, y a continuación el tejido es cortado en rebanadas o se pasa a través de un

molino de martillos. En algunos casos la preparación resultante se pasa también por un mezclador

para obtener un puré fino.

Varios tejidos animales se usan como fuente de enzimas, incluyendo el páncreas, bazo, hígado y

varias porciones del intestino. Por supuesto, la extracción de la enzima va acompañada por varios

pasos de purificación, los cuales serán tratados con enzimas microbianas (Scragg, 1996).


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Tabla 1. Enzimas que se obtienen de tejidos animales

Enzima

Fuente

α-amilasa Páncreas

Lipasa/estearasa de ácidos grasos Páncreas bovino/porcino

LIsozima Albúmina de huevo de bovino

Fosfolipasa A Páncreas porcino

Tripsina Páncreas bovino/porcino

Quimo tripsina Páncreas bovino/porcino

Pepsina Mucosa porcina

Renina Bovino

Fuente, Scragg, 1996.

2. Células y tejidos vegetales

Por muchos años se han hecho preparaciones alimentarias de enzimas vegetales (Tabla 2). Sin

embargo, la extracción de enzimas a partir de plantas es a menudo difícil y requiere equipo pesado

para macerar y moler el material típicamente fibroso. Los sistemas de molienda comunes por lo

general son insuficientes, excepto en los casos donde la fuente de materia es tejido de las hojas y

es posible usar molinos de martillos de uso rudo modificado.

Tabla 2. Enzimas derivadas de tejidos vegetales

Enzima

Fuente

Β-amilasa Grano de cebada

Peroxidasa Raíz de rábano

Papaína Látex del árbol de papaya

Bromelina Bromas sp.

Ficina Higuera

Fuente: Scragg, 1996


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3. Células microbianas

Se acepta generalmente que la fuente principal de enzimas a escala industrial serán, en el futuro,

los microorganismos (Tabla 3). Las razones son:

Los sistemas de producción microbianos pueden mantenerse bajo estrecho control.

Las concentraciones de enzimas y, por lo tanto, la productividad, se pueden manipular en

forma genética y ambiental.

El aumento progresivo y la alimentación del sistema no presentan el mismo problema

logístico que una fuente derivada de la agricultura.

Hay un grado inherente de flexibilidad en el proceso a través de la elección de varias

enzimas.

Los métodos de tamizado para sistemas microbianos son comparativamente simples.

Tabla 3. Enzimas microbianas y sus aplicaciones

Enzima Fuente Aplicación

Amilasa

Bacillus subtilis

Asperyllusoryzae

Penicilliumroquefort

AspergillusNíger

Deprestado de textiles, licuefacción de

almidón, producción de glucosa.

Penicilinasa Bacillussubtilis Degradación de la penicilina.

Invertasa Aspergillus Níger

Saccharomyecescerevisiae Industria de la confitería

Celulasa Aspergillus Níger

Trichodermasp.

Disminución de la viscosidad, auxiliares

de digestión

Pectinasa Aspergillus niger Clarificación de vinos y jugos de fruta

Proteasa Clostridiumsp Suavizante, auxiliar en la digestión

Fuente, Scragg, 1996

La mayoría de las enzimas microbianas usadas comercialmente son extracelulares, esto es, se

producen en el interiro de las células y luego se excretan o difunden en el medio de cultivo, del cual

pueden ser operados. Esto reduce el problema que se presentan a menudo con plantas y, algunas

veces con tejidos animales, de tener que romper las células individuales (Scragg, 1996).


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C) Almidón

Se encuentra en los cereales, tubérculos y en algunas frutas como polisacárido de reserva

energética y su concentración varía con el estado de madurez; el caso del plátano es muy indicativo

en este sentido; en estado verde o inmaduro, el almidón constituye la mayor fracción de los hidratos

de carbono, ya que los azúcares son muy escasos; a medida que la fruta madura, el polisacárido se

hidroliza por la acción de las amilasas, y mediante otros sistemas enzimáticos se sintetiza

sacarosa y fructosa que se encuentran cuando llega la maduración.Químicamente el almidón es

una mezcla de dos polisacáridos muy similares, la amilasa y la amilo pectina; el primero es el

producto de la condensación de D-glucopiranosas por medio de enlaces α (1-4), que establece

cadenas lineales con 200-2500 unidades y pesos moleculares hasta de un millón; es decir, la

amilasa es una α-D-(1-4)-glucana cuya unidad repetitiva es la α-maltosa. Tiene la facilidad de

adquirir una conformación tridimensional helicoidal, en la que cada vuelta de la hélice consta de

seis moléculas de glucosa.

Por su parte la amilopectina se diferencia de la amilasa en que contiene ramificaciones que le dan

una forma molecular similar a la de un árbol; las ramas están unidas al tronco central (semejante a

la amilosa) por enlaces α-D-(1-6), localizadas cada 15-25 unidades lineales de glucosa. Su peso

molecular es muy alto ya que algunas fracciones llegan a alcanzar hasta 200 millones de saltones.

En términos generales, los almidones contienen aproximadamente 17-27% de amilasa y el resto de

amilopectina (Badui, 1996).

Identificación de almidones

Se hace de manera cualitativa se realiza de una manera muy sencilla. Esta prueba se basa en que

el yodo reacciona con la amilasa y genera un fuerte color azul característico debido al complejo que

se establece entre una molécula de éste con cada 7-8 glucosas; como para desarrollar

perfectamente la coloración se requiere un mínimo de 40 residuos de monosacáridos, las cadenas

muy cortas de amilasa, en lugar de azul, producen un color rojo. Aparentemente, el complejo

amilasa-Yodo se establece por la inclusión del I2en hélice, mecanismo semejante al que se observa

en los mono glicéridos que se usan en la elaboración del pan. Por otra parte, la amilo pectina sólo

acompleja una pequeña cantidad de I2 y desarrolla una coloración roja (Badui, 1996).

D) Carbohidrasas

Enzimas comercialmente disponibles, las carbohidrasas son las más abundantes y tal vez las más

empleadas principalmente de fuentes microbianas que pueden ser hongos, levaduras, bacterias


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i. Amilasas: En esta categoría se encuentran la α y la β-amilasa, cuyos mecanismos de

actividad se detallarán más adelante. El uso más importante de estas amilasas es en la

industria de la panificación, ya que hidrolizan el almidón y producen los azúcares (glucosa y

maltosa) que a su vez, facilitan las reacciones de oscurecimiento no enzimático que dan

origen al color en el horneado; también favorecen la generación del anhídrido carbónico,

pues son sustratos fáciles para las levaduras, lo cual provoca el esponjamiento, y por último

mejoran la textura del pan (Badui, 1996).

La α-amilasa es una endohidrolasa que actúa de manera aleatoria sobre los enlaces

internos α(1,4) de la amilasa y de la amilopectina, con lo cual se producen dextrinas; se le

da el nombre de enzima licuante debido a que su presencia provoca la rápida reducción de

la viscosidad de las soluciones de almidón. Es capaz de romper las uniones glucosídicas

adyacentes a ambos lados del enlace α(1,6) de la amilopectina, aunque no ataca

específicamente este enlace.

Por su parte la β-amilasa hidroliza los enlaces α(1,4) a partir de los extremos no reductores

de la amilasa y de la amilopectina, y produce moléculas de maltosa; esta actividad la

clasifica consecuentemente como una exoenzima. Su acción se detiene al llegar a las

uniones α(1,6) de la amilopectina, y su nombre se refiere a que ocasiona una inversión del

enlace α a β y genera moléculas de β-maltosa.

Durante la maduración de cereales, como el trigo, la actividad de α-amilasa se incrementa

considerablemente, se concentra en las capas más externas y disminuye cuando alcanza la

madurez; la β-amilasa también aumenta su actividad pero la mantiene cuando alcanza la

madurez.

ii. Amiloglucosidasa: Esta enzima, también llamada glucoamilasa, tiene la capacidad de

hidrolizar tanto los enlaces α(1,4) como los α(1,6) de las glucanas; su acción prolongada

puede causar la ruptura total del almidón, por lo que se emplea en la fabricación de los

jarabes de glucosa.

iii. Dextranasa:Las dextranas son polímeros de glucosa sintetizados a partir de la sacarosa por

acción del Leuconostocmesenteroides en el jugo de la caña; por sus características de

hidrocoloide, estos polisacáridos incrementan la viscosidad y dificultan la manipulación de

los líquidos. La adición de la dextranasa se hace para hidrolizar estos carbohidratos y

facilitar así la manipulación de los líquidos en la elaboración de la sacarosa.

iv. Lactasa: La β-galactosidasa o lactasa desdobla la lactosa en sus correspondientes

monosacáridos y se puede emplear en diversos productos lácteos, sobre todo en los que se

elaboran para las poblaciones que no toleran este disacárido. En algunos países existe


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incluso una prelación a base de la enzima, que se le añade a la leche antes de consumirla

para reducir la cantidad de lactosa (Badui, 1996).

v. β-glucanasa: La acción hidrolítica de esta enzima se ejerce sobre los enlaces β(1,3) y

β(1,4) de diversos polisacáridos, como algunas gomas; s eemplea para mejorar la extracción

del mosto de cervecería.

vi. Celulasa: La celulasa es en realidad un sistema complejo de enzimas que hidrolizan las

uniones β(1,4) de las glucanas, como la celulosa, produciendo celulodextrinas; se ha usado

en forma limitada para mejorar la extracción de aceites esenciales, así como para ablandar

los tejidos celulósicos de verduras y frutas y para ayudar la rehidratación de diversos

productos.

vii. Pululanasa: La pululanasahidroloza los enlaces α (1,6) de la maltotriosa (pululano), por lo

que tiene la capacidad de actuar sobre la amilopectina y las dextrinas límites.

viii. Invertasa: La β-fructofuranosidasa o invertasa hidroliza la sacarosa en sus dos monómeros

constituyentes: su mayor aplicación es en la elaboración del azúcar invertido.

ix. Hemicelulosa: Esta enzima actúa sobre los enlaces β(1,4) de gomas como la guar y la de

algarrobo, por lo que ayuda a descascarar los granos de café y en la producción del mosto

para la cervecería.

x. Pectinasa: Las preparaciones comerciales de esta enzima son en realidad mezclas de la

pectinmetilestearasa, la poligalacturonasa y la pectinliasa: la forma de acción de cada una

de ellas fue descrita en los ítems anteriores. Se usa en la extracción, clarificación y filtración

de diversos jugos de frutas y de vinos, así como en la elaboración de purés y concentrados

frutícolas.

Figura 2. Polímero de Almidón

Formada por 1000 o más unidades de alfa-glucosa unidas por enlaces glicosídicos.


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Figura 3. Enlaces y disposición del almidón

El polímero de almidón existe en forma de espiral. La forma de espiral es mantenida por los enlaces

de hidrógeno.

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

A. Materiales y Equipos

Materiales

2 muestras de papaya

1 muestra de hígado de pollo de nuestro horario y la otra muestra del hígado del

laboratorio de la mañana

Solución de Almidón

Agua destilada

HCl 0.1M

KCl 0.154M

Solución de I2 0.01N

Equipos

Tubos de ensayo

Centrifuga

Mortero

Embudo de Vidrio

Gasa

Pipetas

Mortero


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B. Metodología

Tomar nuestras muestras de papaya e hígado de pollo (para este caso hacer varios

lavados, para eliminar la sangre y luego triturarlo) 20g de cada uno.

Hacemos el lavado de las muestras con solución de KCl al 0.154M.

Homogeneizamos en un Mortero con soluciones de KCl 20 mL, para el caso de las

muestras de papaya e hígado. El KCl permite una diferente presión y llega a establecer

un desprendimiento de la enzima. El KCl se agrega durante la Trituración.

Hacemos un filtrado, con la ayuda de una gasa la cual esta debe estar humedecida con

KCl(se pone en el embudo). Disolver bien el triturado y filtramos.

Centrifugamos los tubos preparados a 4000 RPM por 10 minutos.

Nos quedamos con el líquido sobrenadante de cada tubo (PEC , porque no sabemos si

el preparado tiene enzimas.

En los tubos de ensayo ingreso el Sustrato la “Solución Almidón Soluble”: 400ppm a 0.4g

almidón en un litro de agua destilada.

A continuación en Cuadro1, la cual se muestra en Resultados; procedemos a realizar

para la Identificación del Preparado enzimático Crudo.

De este modo preparamos los tubos blanco, problema y testigo.

Cuadro 1. Agregados para los tubos testigos, problemas y Blanco en PEC

Soluciones Testigo Problema Blanco

Solución almidón 400 rpm 2.5 mL 2.5mL -------

Agua destilada 0.4mL 0.4mL 2.9mL

PEC ------ 0.1mL 0.1mL

Incubar a 35°C por 15 minutos

Agregar HCl 0.1N 2.5 mL 2.5mL 2.5mL

PEC 0.1mL ------ ------

Solución de Iodo 0.1mL 0.1mL 0.1mL


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V. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Figura 4.Papaya preparada en el primer turno de la mañana asignada a nuestro horario

Figura 5. Papaya del primer turno

Según Crueger (1993), la Piña (Bromelina); su temperatura óptimaesta entre 45 y 60ºC; el

incremento muy grande puede provocar desnaturalización e inactivación. Su actividad enzimática

dependerá del color que tome a un mayor color indicará que no hay actividad enzimática. De la

figura 4, vemos que la papaya preparada la de color transparente la tercera “Tubo Blanco”, tiene

mayor actividad enzimática y la que de color azul tubo “Testigo”; como la de color morado “Tubo

Problema”; a mayor color menos actividad enzimática tendrá y el tubo color azul hay presencia de

almidón pero no hay actividad enzimática.

Según Hernández, et al (1999); las enzimas son más susceptibles a la desnaturalización e

inactivación a altos contenidos de humedad. Esto se comprueba en la Figura 5 donde vemos que el

tubo es de color marrón, por lo que interpretamos que no hubo reacción. Porque a mayor color no

hay reacción enzimática. Pero no olvidemos que este tuvo corresponde al primer turno que por lo

que diríamos que el tiempo fue un factor en la actividad enzimática.

TESTIGO PROBLEMA BLANCO EXTRACTO DE

PAPAYA

PAPAYA


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Figura 6.Hígado de pollo preparado en el primer turno

Figura 7. Hígado de pollo preparado en mi turno 11-1pm

SegúnBadui (1996), la catalasa es una enzima común encontrada en los organismos vivos, donde

funcionan como catalizadores en las reacciones de descomposición del peróxido de

hidrógeno(H2O2) en agua y oxígeno; esto se puede encontrar en el hígado.De la figura 6, vemos

que el hígado tiene presencia de catalasas en el tubo Blanco, vemos que con el hígado de la

mañana no hubo reacción. En el tubo primero “Tubo Testigo”, color azul fuerte es la que menos

actividad enzimática tiene, de igual modo en el segundo tubo “Tubo Problema”; la que es más

amarillenta “Tubo Blanco”, es la que más actividad enzimática.Tiene entonces a más transparente

TESTIGO EXTRACTO DE

HIGADO

PROBLEMA BLANCO

TESTIGO PROBLEMA BLANCO EXTRACTO DE

HIGADO


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que sea el tubo más actividad enzimática tendrá y la menos transparente es la que menos actividad

enzimática tiene de igual modo a mas color menos actividad enzimática tendrá. De igual modo

observamos en la Figura 7 que el color azul representa la presencia de almidón.

SegúnWiseman (1996), la identificación de almidones presentes en un compuesto, se hace de

manera cualitativa se realiza de manera muy sencilla. Esta prueba se basa en que el yodo

reacciona con la amilasa y genera un fuerte color azul característico debido al complejo que se

establece entre una molécula de éste con cada 7-8 glucosas; como para desarrollar perfectamente

la coloración se requiere un mínimo de 40 residuos de monosacáridos, las cadenas muy cortas de

amilasa, en lugar de azul, producen un color rojo. Aparentemente, el complejo amilasa-Yodo se

establece por la inclusión del I2en hélice, mecanismo semejante al que se observa en los mono

glicéridos que se usan en la elaboración del pan. Por otra parte, el amilo pectina sólo acompleja

una pequeña cantidad de I2 y desarrolla una coloración roja. Esto se pudo comprobar en las figuras

4, 6 y 7 donde vemos que la presencia de almidón se darácuando haya menos coloración la cual se

hace con la ayuda de la reacción del yodo y el color azul que se genera en estas muestras indican

presencia de almidón. De la figura 7, vemos que si hay presencia de almidón en el tubo Azul”Tubo

Testigo” es la de mayor presencia de almidón y la que tiene menor presencia de almidón es el tubo

color transparente“Tubo blanco” ya que u color azul refleja la presencia de almidón.

Según Frazier (1981), en los tubos testigos hay presencia de sustrato y no reacciona, en los tubos

problemas aquí solo hay reacción y tiene sustrato y enzima. En el tubo Blanco no hay sustrato si

enzima, por lo que no hay reacción. Esto se comprobó en las figuras 4 donde en el tubo testigo no

hay reacción por la presencia del sustrato y no de la enzima, en la Figura 6 vemos que en el hígado

de pollo el tubo testigo no hay reacción pero si actividad enzimática.

VI. CONCLUSIONES

Se llegó a identificar cualitativamente un preparado enzimático crudo con papaya e hígado

de pollo en lo cual vemos que si el tubo de ensayo se torna de color azul indicará la

presencia del almidón. se identificó cualitativamente la actividad enzimática de las mismas

muestras donde los tubos testigos no había reacción porque a mayor color no hay reacción y

en los tubos blancos al tener un color más claro si hará reacción.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

BADUI, S. (1996). Química de los Alimentos. Editorial Pearson Education. México


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CRUEGER, W. (1993). Biotecnología - Manual de Microbiología Industrial. Edit. Acribia, S.A Zaragoza. España

FRAZIER, C. (1981). Microbilogía de los Alimentos, 2ª Ed. Edit. Acribia, S.A. Zaragoza. España.

HERNÁNDEZ M, CARVAJAL C, SANTOS R, MÁRQUEZ M, BLANCO M, GONZÁLEZ J,( 1999). Purification

alternatives of obtained bromelain from different sources.Pineapple News.1999; 6:5.

WISEMAN, A.(1986). “Principios de Biotecnología”. Editorial ACRIBIA S.A. ZARAGOSA (España).

SCRAGG (1996). Biotecnología para Ingenieros. Sistemas Biológicos en procesos tecnológicos. Editorial

Limusa Editores. México D.F.

ANEXOS

Figura 8.

Extraccióndesolucion

de papaya

Figura 9. Centrifugación

desolución de papaya

Figura 10. Materiales a

usar en laboratorio

Extracción de un preparado enzimático crudo amilásico

Technology

Transcript of Extracción de un preparado enzimático crudo amilásico