FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS ESCUELA ACADÉMICA ...

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

“Efecto de las concentraciones de 2250, 3375 y 9000 ppm de

Methomyl sobre la germinación, el crecimiento y la actividad

entomopatógena de Beauveria bassiana en condiciones de

laboratorio”

TESIS

PARA OPTAR EL TÍTULO DE

BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO

Br. JARA CARRANZA, JACQUELINE LISSETH

TRUJILLO - PERÚ

2017

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ii

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

QUE OTORGAN EL TITULO PROFESIONAL DE

BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO

Dr. Orlando Gonzáles Nieves.

RECTOR

Dr. Rubén César Vera Véliz

VICE-RECTOR ACADÉMICO

Dr. Weyder Portacarrero Cárdenas

VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN

Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa

SECRETARIO GENERAL



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

iii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TITULO

PROFESIONAL DE BIOLOGO – MICROBIOLOGO

Dr. Freddy Mejía Coico

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. William Zelada Estraver

SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. Bertha Soriano Bernilla

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

MICROBIOLOGÍA Y PARASÍTOLOGÍA



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

iv

DEL ASESOR

El que suscribe: Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis titulada:

Efecto de las concentraciones de 2250, 3375 y 9000 ppm de Methomyl sobre la

germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana, en

condiciones de laboratorio.

CERTIFICA:

Que la investigación ha sido desarrollada de acuerdo al reglamento establecido por la

Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en

conformidad con su correspondiente proyecto de tesis y que el informe ha sido redactado

bajo mi asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

Por ello, autorizo a Jacqueline Lisseth Jara Carranza, para continuar con el trámite del

reglamento establecido

Trujillo, Febrero del 2018

__________________________

Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg

ASESOR



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

v

PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y

Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su consideración y elevado

criterio la presente Tesis titulada: Efecto de las concentraciones de 2250, 3375 y 9000 ppm

de Methomyl sobre la germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de

Beauveria bassiana, en condiciones de laboratorio., con el objetivo de obtener el título

profesional de Biólogo-Microbiólogo.

Trujillo, Febrero del 2018

_______________________________

Br. Jacqueline Lisseth Jara Carranza



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

vi

MIEMBROS DEL JURADO

------------------------------------------------------

Dra. Manuela Natividad Lújan Velásquez

PRESIDENTA

------------------------------------------------

Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg

SECRETARIO

-------------------------------------------------

Ms. C. Jaime Agreda Gaitán

VOCAL



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

vii

APROBACIÓN

Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente

Informe de Tesis titulado: Efecto de las concentraciones de 2250, 3375 y 9000 ppm de

Methomyl sobre la germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de

Beauveria bassiana, en condiciones de laboratorio, ha cumplido con los requisitos formales

y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.

------------------------------------------------

Dra. Manuela Natividad Lújan Velásquez

PRESIDENTA

------------------------------------------------

Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg

SECRETARIO

-------------------------------------------------

Ms. C. Jaime Agreda Gaitán

VOCAL



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

viii

DEDICATORIA

A Dios,

Por darme la vida, iluminar mi mente y fortalecer mi corazón poniendo en mi

camino a personas que han sido mi soporte y compañía durante todo el período de

estudio.

A mis padres,

Zoraida y Alberto, por ser el pilar fundamental en todo lo que soy, su incondicional

apoyo perfectamente mantenido a través del tiempo en toda mi educación tanto

académica como en la vida, gracias por creer y fomentar en mí el deseo de

superación y el anhelo de triunfo en la vida.

A mi familia,

A mi hermana Antonella, mis abuelos, tíos y primos porque el orgullo que sienten

por mí fue lo que me hizo seguir adelante. Mil palabras no bastarían para

agradecerles su apoyo, su comprensión y sus consejos, espero no defraudarlos y

contar siempre con su valioso, sincero e incondicional apoyo.

A mis amigas

Mis mejores amigas Cajabambinas, gracias por su apoyo incondicional porque a

pesar de los distintos caminos que tomamos la amistad permanece en el tiempo y a

mis amigas universitarias con las que nos apoyamos en nuestra formación

profesional y que hasta ahora seguimos siendo amigas.

Hoy puedo ver alcanzada mi meta, gracias a todos.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ix

AGRADECIMIENTOS

Mi agradecimiento profundo a un gran maestro, amigo, a mí asesor al Ms. C. Juan Héctor

Wilson Krugg, que con sus conocimientos, paciencia y amplia experiencia me ha brindado

las orientaciones y el apoyo desinteresado para poder concretizar la presente investigación.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

x

RESUMEN

Se determinó el efecto de las concentraciones de 2250, 3375 y 9000 ppm del insecticida

methomyl sobre la germinación, crecimiento y actividad entomopatógena de Beauveria

bassiana. El efecto de methomyl sobre la germinación de B. bassiana se determinó

colocando en diferentes frascos 2 mL de cada concentración del insecticida y 2 mL de la

suspensión de esporas, obteniéndose una concentración final de 1x105 esporas/mL.

incubándose a 25ºC, durante 24 horas; y luego se realizó el conteo de esporas germinadas.

Para evaluar el efecto del insecticida sobre el crecimiento de B. bassiana, se prepararon

placas de Petri conteniendo agar papa sacarosa y el insecticida a diferentes concentraciones,

así como también una placa control. Se sembró B. bassiana, por puntura en la parte central

de las placas de Petri y se incubó a 25°C durante 10 días. Para evaluar la actividad

entomopatógena se inocularon larvas de Spodoptera frugiperda con el hongo crecido en

medio con el insecticida a las concentraciones correspondientes; además del control que

fueron larvas inoculadas con el hongo crecido en agar papa sacarosa. Se encontró que

methomyl disminuye significativamente la germinación y el crecimiento in vitro de

Beauveria bassiana a 2250, 3375 y 9000 ppm. En cuanto a la capacidad entomopatógena se

encontró que methomyl no afecta la patogenicidad de B. bassiana sobre larvas de S.

frugiperda. Se concluye que el insecticida Methomyl disminuye el porcentaje de

germinación y crecimiento de B. bassiana en las concentraciones 2250, 3375 y 9000 ppm y

no afecta significativamente la actividad entomopatógena de B. bassiana sobre Spodoptera

frugiperda.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

xi

INDICE

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ............................... ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ................................. iii

ASESOR ....................................................................................................................................... iv

PRESENTACIÓN ........................................................................................................................ v

MIEMBROS DEL JURADO .......................................................................................................... vi

APROBACIÓN .......................................................................................................................... vii

DEDICATORIA ........................................................................................................................ viii

AGRADECIMIENTOS ............................................................................................................. ix

RESUMEN ................................................................................................................................... x

INDICE ........................................................................................................................................ xi

INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................... 1

MATERIAL Y MÉTODO .......................................................................................................... 6

RESULTADOS…………………………………………………………………………………10

DISCUSIÓN .............................................................................................................................. .17

CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 21

RECOMENDACIONES ........................................................................................................... 22

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................ 23

ANEXOS .................................................................................................................................... 31



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

xii

Anexo 1. Ficha técnica de METHOMEX 90 PS ............................................................ 31

Anexo 2. Insecticida METHOMEX 90 PS, principio activo methomyl .......................... 32

Anexo 3: Estructura y fórmula química de Methomyl .......................................................... 33

Anexo 4: Reactivación de cepa de Beauveria bassiana utilizada en el estudio ............... 34

Anexo 5: Evaluación de la germinación, frascos con caldo papa sacarosa, insecticida e

inoculados con B. bassiana ........................................................................................... 35

Anexo 6: Conteo de las esporas de B. bassiana en cámara de Neubauer ............................. 36

Anexo 7: Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana frente a las diferentes

concentraciones del insecticida methomyl a las 24 horas de evaluación ............................... 37

Anexo 8: Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de germinación de B. bassiana frente a las diferentes concentraciones del insecticida methomyl, utilizando el método Duncan…………………………………………………………………………………38 Anexo 9: Crecimiento radial promedio de B. bassiana (cm), a la concentración 0 ppm

del insecticida methomyl durante 10 días de evaluación ....................................................... 39

Anexo 10: Crecimiento radial promedio de B. bassiana (cm), a la concentración 2225 ppm

del insecticida methomyl durante 10 días de evaluación .................................................... 40





Anexo 13: Porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana frente a las diferentes

concentraciones del insecticida methomyl, a los 10 días de evaluación. ................. 44



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

xiii

Anexo 14: Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de crecimiento de B. bassiana

frente a las diferentes concentraciones del insecticida methomyl, utilizando el método

Duncan .......................................................................................................................... 48



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

1

INTRODUCCIÓN

Las enfermedades de las plantas se conocen desde que el hombre empezó a cultivar la

tierra, existen numerosas plagas que han provocado épocas de hambruna, un desarrollo

agrícola lento, y el déficit alimentario mundial.1 Se consideran como plaga agrícola a

diversas poblaciones de animales fitófagos, se trata de un criterio esencialmente económico

puesto que disminuyen la producción de los cultivos, reducen el valor de las cosechas e

incrementa sus costos de producción. Las plagas agrícolas se encuentran agrupadas en

categorías: primarias o plagas clave, secundarias o potenciales, ocasionales, migratorias,

directas e indirectas.2

Los insectos patógenos o malezas, son responsables del 37 al 50% de las perdidas

reportadas en la agricultura mundial.3 Los agricultores durante años han tratado de

mantener las poblaciones de plagas a densidades menores que aquellas que comienzan a

producir daños, con el fin de evitar deterioro en los cultivos, en el aspecto del producto

cosechado, disminución del valor nutritivo u otra cualidad que influya en el cultivo. Al ser

necesario buscar una alternativa de solución debido a que las plagas reducen el valor o

beneficio económico que se obtiene de la cosecha, se han buscado diferentes controles

utilizando recursos naturales, técnicas artificiales, entre otros, siendo el más predominante

el control químico.2

El control químico usa diversas sustancias las cuáles interfieren en el desarrollo de las

plagas ya sea en su ciclo de vida, en su comportamiento, reprimiendo sus poblaciones, estos

químicos son denominados pesticidas o plaguicidas. Existen pesticidas con números

compuestos y tienen un uso específico para la plaga a tratar, según esto se denominan:

insecticidas, acaricidas, nematicidas, fungicidas y también se incluye a los herbicidas, los

cuáles se utilizan para combatir las malezas.4

Desde los años 90 el uso de plaguicidas ha tenido una gran demanda económica,

obteniendo un crecimiento del 11% por año, alcanzando a distribuirse millones de

toneladas en diferentes partes del mundo5,6.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

2

Los carbamatos son sustancias orgánicas de síntesis conformadas por un átomo de

nitrógeno unido a un grupo lábil, el ácido carbámico. Este tiene un efecto neurotóxico,

actúan al igual que los organofosforados inhibiendo al acetilcolinesterasa en las sinapsis

nerviosas, en la dosis correspondiente conlleva a la muerte. Sus características principales

son su alta toxicidad, su baja estabilidad química y su nula acumulación en los tejidos,

característica que lo posiciona en ventaja con respecto a los organoclorados de baja

degradabilidad y gran acumulación7,8,9, existen más de 50 grupos carbámicos son usados

como insecticidas, herbicidas y fungicidas. Los carbamatos utilizados como insecticidas

son los alquilcarbamatos.10

El Methomex 90PS, es un insecticida sistémico pertenece a la familia de los carbamatos, su

ingrediente activo es el methomyl, de amplio espectro de acción y efecto inmediato por

contacto e ingestión. En la planta tiene actividad sistémica ascendente y aplicada al follaje

tiene movimiento translaminar. Es recomendado para el control de insectos masticadores

(lepidópteros) y picadores-chupadores (trips) en sus estados de larvas y adultos, acción

ovicida en lepidópteros y al ser absorbida por las plantas actúa rápidamente por ingestión

en larvas recién eclosionadas. Actúa sobre el sistema nervioso del insecto mediante la

inhibición de la enzima acetilcolinesterasa bloqueando la transmisión de los impulsos

nerviosos y acumulación de acetilcolina provocando excitación, hiperactividad,

descoordinación, temblores y muerte rápida de los insectos. 11

Durante las últimas décadas han ocurrido diversos cambios en cuanto al uso de la

protección química de los cultivos, y esta ha sido dirigida a la utilización de compuestos

menos tóxicos y más selectivos.12 El control químico constituye uno de los campos que más

ha avanzado y se ha desarrollado, se han invertido grandes cantidades de dinero para su

implementación, han sido considerados compuestos inevitables para el control de plaga,13

pero el fracaso del control químico como única arma contra las plagas es que carece de base

ecológica y por tanto interfiere o destruye las probabilidades de regulación

natural2.Actualmente los organismos de la unión Europea están restringiendo la

importación de productos vegetales los cuáles hayan sido tratados con químicos, las

preferencias de los consumidores europeos es por productos agrícolas naturales que



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

3

cumplan con un desarrollo sostenible. Todos los procesos de cambio incitan a las empresas

agrarias a adaptarse a los requerimientos de los consumidores.14

La implementación del Manejo Integrado de Plagas (MIP) busca que las plagas y las

enfermedades se controlen de manera más eficiente, haciendo uso de diversas formas de

control y de forma integrada, los tipos de control que se puede utilizar son: control

biológico, cultural, mecánico, etiológico y químico.15 Según la Organización de las

Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura, el MIP es un sistema de

manipulaciones de las plagas que, en el contexto del ambiente relacionado y la dinámica de

población de la especie dañina, utiliza todas las técnicas y métodos apropiados de la manera

más compatible posible y mantiene la población de la plaga a niveles inferiores a los que

causarían daño económico.16

El control biológico es un método que emplea organismos vivos, denominados también

enemigos naturales, estos reducen la densidad de la población de otros organismos plaga.

Los organismos que son utilizados en el control biológico de invertebrados, se clasifican en

cuatro categorías: parasitoides, depredadores, patógenos y competidores. Los agentes que

forman parte del control provienen de diversos grupos taxonómicos, incluyendo a los

insectos, ácaros, nematodos y microorganismos, tales como las bacterias, los virus, los

hongos y los organismos unicelulares. Al pertenecer a distintos grupos poseen diferentes

propiedades biológicas y comportamientos variados, estas diferencias hacen que unos u

otros sean más o menos exitosos como biocontroladores en una estrategia de control

determinada.17

Los hongos entomopatógenos, tienen un gran potencial para ser empleados como

biocontroladores, debido a la gran variedad de especies y amplio rango de hospedantes así

como por su crecimiento microscópico sobre la superficie de su huésped. Ciertos hongos

poseen características peculiares que les permiten sobrevivir en forma parasítica sobre los

insectos y en forma saprofita sobre material vegetal en descomposición. Todos los insectos

son susceptibles de ser afectados por algún hongo. Entre los principales hongos que

presentan estas características están: Beauveria, Metarhizium y Paecilomyces.18



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

4

Beauveria bassiana, es un hongo entomopatógeno el cuál fue descubierto causando la

muerte de gusanos de seda, se encuentra de forma natural en suelos y sobre diversos

insectos (coleópteros, dípteros, heterópteros, homópteros, lepidópteros, tisanópteros).

Según su clasificación taxonómica es un hongo imperfecto19 y al colonizar a su hospedero

le causa diversos síntomas como pérdida de sensibilidad, falta de coordinación, letargo,

inapetencia, melanización y parálisis. Con la muerte del insecto, el beneficio del control

biológico se incrementa pues la esporulación del hongo sobre el insecto y su posterior

dispersión del hongo, le permite un control más allá de la aplicación.20

Mediante la implementación del MIP, se han ido realizando diversos estudios de

interacción entre controladores biológicos y sustancias químicas, se probaron

combinaciones de DDT con Beauveria bassiana sin encontrar un efecto significativo de la

micosis en la larva del escarabajo de la papa Leptinotarsa decemlineata, otros estudios han

indicado que los insecticidas pueden inhibir el crecimiento de B. bassiana.21 Además se

probó combinaciones de B. bassiana con diversos insecticidas (carbaryl, fenvalerate,

anamectin, triflumuron y thuringiensen) observándose una compatibilidad de estos

químicos con el hongo.22

En otro estudio se estableció el efecto de los insecticidas endosulfan, clorpirifos,

fenitrotion, diazinon PM, diazinon EM, malation, isazofos y pirimifosmetil sobre B.

bassiana en el manejo de la broca, Hypothenemus hampei, observándose que tenía un

efecto fungistático.23 En aislados de B. bassiana con plaguicidas de uso común en la

práctica agrícola como carbofurán y malatión como insecticidas, benomil (Benlate) y bis,

ditiocarbamato de zinc (Manzate) como fungicidas; se evaluó la compatibilidad,

encontrando en general que los aislados presentaron una inhibición mayor con los

insecticidas (en ambas concentraciones) que con los fungicidas. Con respecto a los

plaguicidas, benomil inhibió considerablemente a todos los aislados, los insecticidas

redujeron ligeramente todos los aislados.24 Por otro lado sé enfrento a B. bassiana y M.

anisopliae con Nimkol-L® para el combate de Heterotermes tenuis, encontrándose que B.

bassiana era menos sensible al químico por lo tanto más compatible que Metarhizium.25



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

5

La compatibilidad con hongos entomopatógenos como Beauveria bassiana, 26-31

Metarhizium,32 Paecilomyces fumosoroseus 33 y Lecanicillium lecanii34 De acuerdo a estos

estudios, el efecto que producen diversos agroquímicos está relacionado con la

germinación, que es de carácter irreversible y el desarrollo micelial de estos hongos.

Investigaciones se han enfocado en la influencia de varios agroquímicos en la germinación

y el crecimiento de hongos controladores in vitro, ya que todas las clases de agroquímicos

son potencialmente inhibitorios

No es posible dar conclusiones específicas acerca de la compatibilidad de todas las

sustancias químicas con lo diferentes hongos entomopatógenos, debido a que cada

microorganismo reacciona de diferente forma frente a un control químico, pero los

resultados de las diferentes investigaciones, pueden ayudar al agricultor en la

implementación de la integración de controles, así mismo estás investigaciones facilitan la

identificación de los impactos adversos del control químico sobre el biológico, por lo tanto

es necesario obtener más información sobre la compatibilidad de cepas específicas de

hongos con los agroquímicos usados en un determinado agroecosistema. Debido a lo

expuesto, el objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de las concentraciones de

2250, 3375 y 9000 ppm de Methomyl sobre la germinación, el crecimiento y la actividad

entomopatógena de Beauveria bassiana, en condiciones de laboratorio.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

6

MATERIAL Y MÉTODO

1. Material de estudio

• Cultivo puro de B. bassiana proporcionado por el Laboratorio de Fitopatología del

Departamento Académico de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias

Biológicas Universidad Nacional de Trujillo.

Larvas de Spodoptera frugiperda

• Methomex 90PS, cuyo componente activo es el methomyl

2. Procedimiento

2.1. Evaluación del efecto del methomyl sobre la germinación de esporas de B.

bassiana.

2.1.1. Resiembra del cultivo de B. bassiana

A partir del cultivo puro de B. bassiana se sembró por puntura en tres tubos de

ensayo de 16 x 180 mm con Agar Papa Sacarosa, los cuales se incubaron a

25ºC durante 10 días, obteniéndose cultivos jóvenes.

2.1.2. Propagación del cultivo de B. bassiana.

A partir del cultivo joven de B. bassiana se preparó una suspensión de esporas

la cual se sembró en un frasco plano conteniendo Agar Papa Sacarosa y se

incubó a 25ºC durante 10 días.

2.1.3. Preparación del inóculo de esporas

El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de solución Tween 80 al

0.1% a cada frasco plano con Agar Papa Sacarosa que contenía a B. bassiana.

Luego se trató de liberar las esporas del hongo con la ayuda de un asa

bacteriológica, la suspensión obtenida se colocó en un matraz estéril.

Se determinó la concentración de esporas mediante el recuento en cámara de

recuento celular y se estandarizó a una concentración de 105 esporas/mL.

2.1.4. Inoculación e incubación

Se colocó 2mL de caldo papa sacarosa y el insecticida methomyl (doble

concentrado) en frascos pequeños de vidrio estériles boca ancha, 3 frascos

para cada concentración; a estos frascos se le agregó 2mL del inóculo de



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

7

esporas de B. bassiana en cada frasco; obteniendo una concentración de

methomyl de 2250 ppm, 3375 ppm, 9000 ppm y de 1 x 105 esporas/mL.

Además, se preparó una suspensión de esporas control 0 ppm a la cual no se le

agregó insecticida. Posteriormente cada frasco se incubó a una temperatura

promedio de 25ºC, durante 24 horas.

2.1.5. Lectura

Transcurrido el tiempo de incubación se agregó gotas de azul de lactofenol en

cada uno de los frascos, luego se realizó el recuento en la Cámara de recuento

celular, contándose todas las esporas germinadas para cada concentración del

insecticida a evaluar, incluyendo el control. Con el fin de determinar el

porcentaje de germinación el recuento control fue tomado como el 100 %.

2.2. Evaluación del efecto de methomyl sobre el crecimiento de B. bassiana

2.2.1. Preparación del medio de cultivo

Se prepararó Agar Papa Dextrosa en cuatro matraces conteniendo 100 mL de

medio cada uno. El medio de cultivo fue esterilizado en autoclave y se dejó

enfriar hasta una temperatura aproximada de 45°C. Estando aún fundido el

medio, a tres de los matraces se les adicionó methomyl en cantidad suficiente

para obtener una concentración final 2250 ppm, 3375 ppm, 9000ppm

respectivamente. Al medio de cultivo contenido en el matraz restante no se le

agregó el methomyl, a fin de utilizarlo como control. Luego, los medios de

cultivo de cada uno de los cuatro matraces se sirvieron en placas de Petri

estériles (tres placas por cada concentración, incluyendo el control).

2.2.2. Siembra e incubación

A partir del cultivo joven de B. bassiana, se sembró por puntura en la parte

central de las placas Petri conteniendo Agar Papa Dextrosa previamente

preparadas en el paso anterior (tres placas por concentración incluidas las

placas del control); estas placas se incubaron a temperatura promedio de 25°C

durante 10 días.

2.2.3. Lectura.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

8

A partir del tercer día hasta el décimo día de incubación, se midió el radio de

crecimiento micelial en milímetros (mm) del hongo en cuatro direcciones,

obteniendo un radio promedio de crecimiento por día y por cada

concentración del insecticida y el grupo control. Los resultados del

crecimiento se expresaron en mm y en porcentaje de crecimiento (%C),

teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%) de la

siguiente manera:

* La fórmula es una regla de tres simple.

2.3. Evaluación del efecto de methomyl sobre la patogenicidad de B. bassiana.

2.3.1. Recolección e identificación de adultos de Spodopthera frugiperda

Los ejemplares en su estado larval fueron recolectados en frascos de vidrio de

boca ancha y trasladados al laboratorio de Entomología de la Facultad de

Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo para su

identificación mediante claves taxonómicas.

Posterior a su identificación, estos fueron trasladados al laboratorio de

Fitopatología donde se les retiró residuos vegetales y restos de suelo que

puedieron haber quedado impregnados en ellos.

2.3.2. Crianza de S. frugiperda.

Los insectos fueron colocados en placas de Petri y observados diariamente por

un lapso de cinco días (cuarentena).

La alimentación consistió en pedazos de hojas de lechuga, las cuales también

sirvieron para mantener la humedad. El alimento fue lavado previamente con

agua así mismo diariamente se limpiaron las placas retirando los ejemplares

muertos y colocándoles alimento fresco.

2.3.3. Propagación del cultivo de B. bassiana

Se realizará según el procedimiento dado en el punto 2.1.2.

2.3.4. Preparación del inóculo de esporas de B. bassiana.

El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de solución Tween 80 al

0.1% a cada frasco plano con Agar Papa Dextrosa que contenía a B. bassiana.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

9

Luego se trató de liberar las esporas del hongo con la ayuda de una asa

bacteriológica, la suspensión obtenida se colocó en un matraz estéril.

Se determinó la concentración de esporas mediante el recuento en Cámara de

recuento celular y se estandarizó a una concentración de 107 esporas/mL.

2.3.5. Inoculación de S. frugiperda.

Los ejemplares adultos de S. frugiperda se colocarón en placas de Petri de, en

grupos de 3 ejemplares.

La inoculación de la solución acuosa conteniendo una concentración de 1 x

107 esporas/mL de B. bassiana se realizó por aspersión; un grupo fue

inoculado con esporas de B. bassiana que crecieron en medio de cultivo sin

methomyl y los otros tres grupos fueron inoculados con B. bassiana que

creció en medio con las tres concentraciones evaluadas. Se siguió

proporcionando alimento en forma equitativa al número de poblaciones de S.

frugiperda.

2.3.6. Observación de síntomas y/o signos de S. frugiperda

Después de la inoculación, se evaluó durante 10 días a los cuatro grupos para

determinar síntomas de ataque por B. bassiana como pérdida de apetito,

parálisis, muerte y momificación del insecto.

2.3.7. Aislamiento de B. bassiana a partir de S. frugiperda infectados

experimentalmente.

Los ejemplares muertos se colocaron en placa de Petri y fueron incubados en

cámara húmeda estéril a una temperatura aproximada de 25°C, hasta la

aparición del micelio en la superficie del insecto.

Posteriormente se procedió a la identificación microscópica y macroscópica

de la colonia resultante.

2.4. Análisis de datos

La determinación del efecto del insecticida methomyl sobre Beauveria bassiana, se

realizó analizando el porcentaje de germinación y el porcentaje de crecimiento

Beauveria bassiana en las diferentes concentraciones del insecticida, y los datos

fueron procesados en base a la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional

(ANOVA), según el paquete estadístico SPSS v.22



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

10

RESULTADOS

En la Fig. 1 se observa, la tendencia decreciente del porcentaje de germinación de

Beauveria bassiana en relación al control, conforme va aumentando la concentración del

insecticida Methomyl. En la Fig. 2 se observan las esporas germinadas de Beauveria

bassiana en las diferentes concentraciones de Methomyl.

En la Fig. 3 se observa, el decrecimiento del porcentaje de crecimiento de Beauveria

bassiana, conforme va aumentando la concentración del insecticida Methomyl. En la Fig. 4

se observa el crecimiento radial en placa, de Beauveria bassiana en las diferentes

concentraciones de Methomyl.

En las Fig. 4 se observa los síntomas y signos causados por Beauveria bassiana al ser

inoculado en larvas de Spodoptera frugiperda. En las Fig. 5 se observa las características

macroscópicas y microscópicas del hongo reaislado del insecto, luego de su muerte causado

por Beauveria bassiana al ser inoculado en larvas de Spodoptera frugiperda.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

11

Fig.1. Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana en las concentraciones de 2250,

3375 y 9000ppm del insecticida methomyl, a las 24 horas de incubación.

a: p<0.05 Existe diferencia significativa



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

12

Fig.2. Observaciones microscópicas de esporas germinadas de Beauveria bassiana en las

concentraciones de 0, 2225 y 3375ppm del insecticida Methomyl, aumento de 10x.

g: Espora germinada



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

13

Fig.3. Porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana en las concentraciones de 2250,

3375 y 9000ppm del insecticida Methomyl, a las 24 horas de incubación a una temperatura

de 25°C.

a: p < 0.05 Existe diferencia significativa

100%

39.05%

11.72%



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

14

Fig.4. Crecimiento radial, en placa, de Beauveria bassiana, frente a diferentes concentraciones del insecticida Methomyl, a los 10

días de incubación.

CONTROL

0 ppm

Methomyl

2250 ppm

Methomyl

3375 ppm Methomyl

9000 ppm



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

15

Fig. 5. Síntomas y signos observados en las larvas de Spodoptera frugiperda colonizadas

con B. bassiana procedentes de 0, 2250 y 3375 ppm de Methomyl.

SINTOMAS/ SIGNOS

0 PPM

2250PPM

3375PPM

Presencia de micelio blanco

algodonoso

+

+

+

Melanización + + +

Regurgitación + + +

Diarrea + + +

Pérdida del apetito + + +

Movimiento errático + + +

Letargo + + +



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

16

Fig. 6. Larvas de Spodoptera frugiperda colonizadas con B. bassiana procedente de A.

Medio con 0 ppm de Methomyl. B. Medio con 2250 ppm de Methomyl C. Medio con 3375

ppm de Methomyl. D Conidias y conidióforo típico de B.bassiana, observadas al aumento

de 40 X.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

17

DISCUSIÓN

Según los datos obtenidos se observa que a diferentes concentraciones de

methomyl la germinación de Beauveria bassiana presenta una tendencia decreciente,

encontrándose que a medida que aumenta la concentración del insecticida, el porcentaje de

germinación del hongo disminuye (Fig. 1). Estadísticamente se observa que hay diferencia

significativa en las tres concentraciones utilizadas de methomyl, lo cual nos indica que en

las diferentes concentraciones utilizadas hay un efecto diferente en la germinación de

Beauveria bassiana.

El efecto de las diferentes concentraciones del insecticida sobre el porcentaje de

germinación de Beauveria bassiana puede deberse a que la espora pasa por dos fases de

germinación importantes, la fase inicial se denomina hinchamiento hidrostático, debido a

que la espora empieza a hincharse, lo cual se debe al efecto de la hidratación, en este

proceso la espora empieza a absorber los nutrientes de su medio35. En los ensayos

realizados se utilizó el medio papa sacarosa en el cuál se diluyó al insecticida methomyl,

esté presenta una alta solubilidad en agua11, 36 favoreciendo su dilución, ingresando a la

espora y evitando que está siga la siguiente fase denominada hinchamiento metabólico, en

la cual la espora utiliza los nutrientes absorbidos para la generación de su pared interna, la

cual formara parte del tubo germinativo37.

En los resultados obtenidos también se observa que en las concentraciones de

2250ppm y 3375 ppm hay un porcentaje de germinación, esto puede haberse dado debido a

que las esporas son capaces de absorber compuestos orgánicos y transformarlos por medio

de enzimas en compuestos asimilables para su desarrollo, además debido a la variabilidad

genética entre esporas se puede dar un proceso de diferentes niveles de resistencia a

diversos compuestos químicos por varios mecanismos38, 39.

En relación al efecto de las diferentes concentraciones del insecticida methomyl

sobre el crecimiento de B. bassiana, estadísticamente se puede observar que existe



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

18

diferencia significativa en las concentraciones evaluadas. A mayor concentración se pudo

observar un efecto inhibitorio en el crecimiento del hongo en comparación con el control

(Fig. 3), se evidencia que en las concentraciones de 2250 y 3375 ppm hubo crecimiento

pero el hongo pasó por un proceso fungistático es decir su crecimiento se retardó, esto se

debe a que el insecticida interfiere en los mecanismos que están implicados en la

producción de nuevos materiales celulares además el hongo utiliza vías metabólicas

alternas para reducir o evitar la adsorción del compuesto químico 35,40.

Methomyl, es un insecticida sistémico de amplio espectro de acción perteneciente al

grupo químico de los carbamatos, su nombre químico según la IUPAC se encuentra

registrado como S-metil (EZ)-N-(metilcarbamoiloxi) tioacetimidato. Es utilizado en

diferentes cultivos entre ellos alcachofa, alfalfa, espárrago, frijol, maíz y tomate con el fin

de controlar insectos masticadores (lepidópteros), picadores-chupadores (trips) en sus

estados de larvas y adultos36, 41.

Este insecticida tiene un efecto inmediato por contacto e ingestión, se adhiere a la

enzima acetilcolinesterasa evitando que está pueda hidrolizar el neurotransmisor

acetilcolina, esté al no hidrolizarse se sintetiza constantemente con lo consiguiente no se

interrumpe el impulso nervioso, ocasionando excitación, hiperactividad, descoordinación,

temblores y muerte rápida en los insectos42. En las plantas tiene actividad ascendente y

aplicada al follaje presenta un movimiento translaminar, así mismo al ser absorbido por las

plantas su acción es inmediata por ingestión de larvas eclosionadas36.

En la evaluación de la actividad entomopatógena, se tuvo en cuenta utilizar las

concentraciones en las que se observó crecimiento, es así que se utilizó esporas de B.

bassiana las cuáles fueron aisladas de los medios con concentraciones de 2250ppm y

9000ppm. Así mismo se utilizó larvas de S. frugiperda estás al ser inoculadas por B.

bassiana presentaron la sintomatología típica, como el movimiento errático, la

momificación y el crecimiento micelial del hongo sobre la superficie del insecto, luego de

la muerte de éste43 (Fig. 5).



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

19

Methomyl, según los ensayos realizados tiene un efecto decreciente en la

germinación y en el crecimiento de B. bassiana pero se determinó que el hongo no perdió

su capacidad entomopatógena a pesar de a ver crecido en un medio envenenado; el hongo

posiblemente utilizó al insecticida soló como fuente de nutrientes pero no afecto en el

mecanismo de acción de B. bassiana es así que según las investigaciones esté hongo

entomopatógeno desarrollaría el siguiente mecanismo; la espora se adhiere a la cutícula de

la larva de S. frugirperda, posteriormente desarrolla su tubo germinativo el cuál penetrara

al interior del cuerpo del insecto y un apresorio ayudándole a la fijación en la cutícula del

insecto, en esta fase se produce un mecanismo físico y químico, siendo el físico la presión

ejercida por la hifa, la cual permite el rompimiento de la área esclerosada y membranosa de

la cutícula. El mecanismo químico se da debido a la acción enzimática, dónde proteasas,

lipasa y quitinasas causan descomposición del tejido en la zona de penetración44, 45.

Además el hongo puede ingresar al insecto a través de las aberturas corporales como,

espiráculos, cavidad bucal y otras aberturas externas. En estos ambientes las esporas se

desarrollan con mayor facilidad debido a la humedad46, 47.

Posterior a la penetración, la hifa llega al hemocele en dónde se producen reacciones

de defensa por parte del insecto como fagocitosis y formación de compuestos

antimicrobianos el hongo en defensa produce blastosporas las cuáles se multiplican y

dispersan produciendo micotoxinas, B. bassiana produce una toxina llamada beauvericina

la cual paraliza las células del insecto bloqueando la respuesta inmunológica., así mismo

estás actúan en el sistema circulatorio utilizando la hemolinfa como sustrato, en el sistema

digestivo provocan regurgitación, diarrea, pérdida de apetito y en el sistema respiratorio se

obstruyen los espiráculos48, 49, 50 .

Como efecto entomopatógeno del hongo se producen una serie de comportamientos

anormales en el insecto como: convulsiones, descoordinación, deja de alimentarse, entra en

un estado letárgico finalmente produciéndose la muerte.

Al morir el insecto, el hongo forma masa micelianas, las cuales permiten al hongo

esparcirse al salir por las regiones intersegmentales siendo así un inóculo potencial para

infectar a otros insectos51, 52, 53.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

20

Según estudios sobre compatibilidad, se ha demostrado que el insecticida methomyl

no ejerce efectos letales sobre los hongos entomopatógenos54, así mismo nos proporcionan

información sobre la capacidad que tiene B. bassiana para poder utilizar productos

fitosanitarios como fuente de alimento, siendo menos sensible al químico por lo tanto más

compatible25, 55. En otros estudios se observó efectos fungistático del insecticida sobre B.

bassiana, inicialmente se observó un ligero retardo en la germinación y crecimiento del

hongo, especialmente en las pruebas sobre germinación conidial, sin embargo pasadas 24

horas se observó homogeneidad en el crecimiento al comparar el resultado con los

controles56. En los ensayos realizados se puede comprobar la compatibilidad de methomyl

en las concentraciones de 2250ppm y 3375 ppm, el hongo utilizó la composición química

del insecticida en su germinación y crecimiento, así mismo se observó el efecto

fungistático en el crecimiento de B. bassiana el cuál se dio por un tiempo de 24 horas para

la concentración de 2250ppm y 120 horas en 3375ppm.

B. bassiana fue evaluada con diversos insecticidas (carbaryl, fenvalerate, anamectin,

triflumuron, thuringiensen entre otros), a dosis subletales observándose una compatibilidad

de estos químicos con el hongo22, 23. En los ensayos realizados se utilizó dosis letales

observándose compatibilidad pero pasando por un efecto fungistático, por lo cual se puede

determinar que el uso de concentraciones bajas con respecto a las utilizadas

convencionalmente en el control de insectos hace que sea posible utilizar un agente

biocontrolador.

Otros autores no explican la importancia de la acción conjunta de un hongo

entomopatógeno y un agente químico, está unión introduce múltiples factores de

mortalidad sobre los insectos objetivo, lo que puede representar una ventaja en el manejo

de plagas y retrasar alguna expresión de resistencia a nuevos insecticidas, especialmente

cuando se piensa en reducir las poblaciones de insectos plaga con una ecología compleja57.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

21

CONCLUSIONES

Al incrementarse la concentración de methomyl de 2250 a 9000 ppm disminuye

significativamente la germinación y el crecimiento de Beauveria bassiana.

El methomyl a las concentraciones de 2250, 3375 y 9000 ppm de methomyl no afecta

significativamente la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana sobre

Spodoptera frugiperda.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

22

RECOMENDACIONES

Evaluar la compatibilidad de methomyl y B. bassiana en campo, teniendo en cuenta las

condiciones ambientales, el tipo de cultivo, la densidad de la plaga a controlar y la

concentración del insecticida.

Investigar el efecto del insecticida methomyl frente a otros hongos usados como

controladores biológicos.

Determinar la concentración exacta para la dosis en campo teniendo en cuenta la

compatibilidad con B. bassiana.

Aislar hongos entomopatógenos en cultivos expuestos a insecticidas, con la finalidad de

obtener cepas nativas resistentes.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

23

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Gonzales LC. Introducción a la fitopatología.1 Ed. Costa Rica: IICCA; 1976

2. Aguilar Fernández PG. Apuntes sobre el control biológico y el control

integrado de las plagas agrícolas en el Perú. Rev Per.1980; 23(1):83-110

3. Barrera JF. Manejo holístico de plagas: más allá del MIP. En: Memorias XXX

Congreso Nacional de Control Biológico- Simposio del IOBC. México:

IICA/PROMECAFE; 2007.

4. Cisneros Vera F. Control de plagas agrícolas. 2 Ed. Perú: SOLVIMA GRAF

SAC; 1995

5. Carvalho FP, Nhan DD, Zhong C, Tarares T, Klaine S. Tracking Pesticides in

the Tropics. IAEA. 1998; 40(3): 24-30

6. Carvalho FP, Hance RJ. Pesticides in Tropical Marine Environments:

Assessing Their Fate. IAEA.1993; 2:14-19

7. Andrea Brechelt. Manejo Ecológico de Plagas y Enfermedades. 1Ed.

República Dominicana: Fundación Agricultura y Medio Ambiente (FAMA);

2004

8. Hayes WJ. Jr.Toxicology of pesticides. USA: The Williams and Wilkins

Company.1975

9. Wilkinson CF. Insecticide biochemistry and physiology. USA-UK: Plenum

Press.1976



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

24

10. Rendón Morán MG. Determinación de residuos de carbamatos mediante LC-

ESI-MS/MS en tomates riñon (Lycopersicum esculentum) expendidos en

mercado de Guayaquil. [Tesis de grado]. Ecuador: Escuela superior

politécnica del litoral. 2013

11. ADAMA agiculture Perú. Ficha Técnica de Methomex 900 PS Agosto 2014

12. Dierksmeier, G. Plaguicidas, residuos, efectos y presencia en el medio. 1 ed.

La Habana: Científico-Técnica; 2001.

13. Orta Arrazcaeta L. Contaminación de las aguas por plaguicidas químicos.

Fitosanidad. 2002; 6(3):55-62

14. Pere Sabate Prats. Efecto medioambiental de las prácticas agrícolas y su

contabilización. Técnica contable.2001; 53(635):850-860

15. Jiménez Martínez E. Manejo integrado de plagas.1Ed.Nicaragua: Universidad

Nacional Agraria; 2009.

16. FAO (2017) Disponible en: http://www.fao.org/agricultura/crops/core-

themes/theme/pests/imp/en/

17. Villacide JM, Corley JC. Introducción a la teoría del control biológico de

plagas. INTA. 2012; 15:1-21

18. García MA, Capello García S, Lesher Gordillo JM, Molina Martínez RF.

Hongos entomopatógenos como una alternativa en el control biológico.

KUXULCAB’. 2008;15(27):25-27

19. Vergara RR. Enfoque agroecológico del empleo de entomopatógenos para el

control de plagas. Conferencia dictada en el octavo seminario de Agroecología,



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

http://www.fao.org/agricultura/crops/core-themes/theme/pests/imp/en/

http://www.fao.org/agricultura/crops/core-themes/theme/pests/imp/en/

25

agromedicina y medio ambiente: Tunja: Universidad Pedagógica y Tecnológica

de Colombia. 2004; 34P (3)

20. Malpartida Zevallos J, Narrea Cango, Dale Larraburre W. Patogenicidad de

Beauveria bassiana (Bals) Vuill., sobre el gusano defoliador del maracuyá

Dione juno (Cramer) (Lepidoptera: Nymphalidae) en laboratorio. Ecol.

2013;12(2):75-81

21. Fargues, J. Sensibilite des larves de Leptinotarsa decemlineata Say (Col.,

Chrysomelidae) a Beauveria bassiana Vuill. (Fungi Imperfecti, Moniliales) en

prescence de doses reduites d'insecticide. Annales de Zoología. Ecología

Animal 1973; 5: 231-246.

22. Anderson TE, Hajek AE, Roberts DW, Preisler HK, Robertson JL. Colorado

Pótalo beetle (Coleóptera: Chrysomelidae): Effects of Combinations

of Beauveria bassiana with insecticides. Journal of Economical Entomology.

1989; 82 (1): 83-89.

23. Rivera, M. Estudio sobre la compatibilidad del hongo Beauveria

bassiana (Bals) Vuill. con formulaciones comerciales de fungicidas e

insecitidas. Revista Colombiana de Entomología 1993; 19 (4): 151-158

24. Ibarra AM, Varela A. Aislamiento, identificación y caracterización de hongos

como agentes potenciales de control biológico en algunas regiones

Colombianas. Rev. Col Entomol. 2002; 28 (2):129-137

25. Castiglioni E, Djair Vendramim J, Batista Alves Sergio. Compatibilidad de

Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae con Nimkol-L ® para el combate



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

26

de Heterotermes tenuis. Manejo Integrado de Plagas y Agroecología. 2003;

69:38-44

26. Anderson T, Roberts D.Compatibility of Beauveria bassiana Isolates with

Insecticide Formulations Used in Colorado potato beetle (Coleoptera:

Chrysomelidae) control. Journal of Economic Entomology.1983; 76 (6):1437-

1441.

27. Moino A, Alves S. Efeito de imidacloprid e fipronil sobre Beauveria bassiana

(Bals.) Vuill. e Metharhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. no comportamento de

limpeza de Heterotermes tenuis (Hagen). Anais Sociedade Entomológica do

Brasil.1998; 27(4):611-619.

28. Todorova S, Coderre D, Duchesne R, Côté J. Compatibility of Beauveria

bassiana with selected fungicides and herbicides. Environmental Entomology.

1998; 27(2):427-433.

29. Tanzini R, Alves B, Setten A, Augusto N. Compatibilidad de agentes

tensoactivos con Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae. Manejo

Integrado de Plagas. 2001; 59:15-18.

30. Oliveira C, Neves P, Kawazoe L. Compatibility between the entomopathogenic

fungus Beauveria bassiana and insecticides used in coffee plantations. Scentia

Agrícola, Piracicaba. 2003; 60(4):663-667.

31. Andálo V, Moino A, Souza, G. Compatibilidade de Beauveria bassiana com

Agrotóxicos Visando o Controle da Cochonilha-da-Raiz-do-Cafeeiro

Dysmicoccus texensis Tinsley (Hemiptera: Pseudococcidae). Neotropical

Entomology. 2004; 33(4): 463-467.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

27

32. Hokkanen H, Kotiluoto R. Bioassay of sideeffects of pesticides on Beauveria

bassiana and Metarhizium anisopliae, standardized sequencial testing

procedure. In: WORKING GROUP PESTICIDES AND BENEFICIAL

ORGANISMS. 1992; p. 148-151.

33. Correia A, Bernardo E, Silva R, Pazini W. Compatibilidade de agrotóxicos com

o fungo entomopatogênico Paecilomyces fumosoroseus (Wise) Brown & Smith

in vitro. In: Simpósio de Controle Biológico, 7, 2, Poços de Caldas. Resumos.

Poços de Caldas: PJ. Eventos. 2001; p. 113.

34. Olmert I, Kenneth R. Sensitivity of entomopathogenic fungi, Beauveria

bassiana, Verticillium lecanii, and Verticillium sp. to fungicides and

insecticides. Environ. Entomol. 1974; 3: 33-38.

35. Deacon JW. Introducción a la micología moderna. México. Ed. Limusa. 1990.

36. ROTAM AGRO. Ficha Técnica de Metomil 90 SP Agosto 2014

37. Gandarilla FL. Evaluación de aislados nativos de hongos entomopatógenos de

zonas citrícolas sobre Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera:

Psyllidae).Universidad Autónoma de Nuevo León. 2012.

38. Castiglioni E, Vendramim JD, Alves SB. Compatibilidad de Beauveria bassiana

y Metarhizium anisopliae con Nimkol – L para el combate de Heterotermes

tenuis. Manejo Integrado de plagas y Agroecología 2003; 69: 38-44.

39. Rodrigues Moraes Ana Paula; Elias Pinheiro Bittencourt Vania Rita; Bittencourt

Avelino José. Patogenicidade de Beauveria bassiana sobre estágios imaturos de

Stomoxys calcitrans. Cienc. Rural. 2010; 40 (8).



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

28

40. Alves SB, Lopes RB. Controle microbiano de pragas na América Latina:

avanços e desafios. Piracicaba: FEALQ. 2008.

41. DuPont. Ficha Técnica de Lannate.

42. Pitti SQ, Tabanino R, Rueda A. Control de adultos de mosca blanca Bemisia

tabaci con los insecticidas XDE-204, XDE-203, Imidacloprid y Acetamiprid.

Zamorano .Escuela agrícola Panamericana 2012

43. José A. Muñoz, William De La Rosa (†) y Jorge Toledo. Mortalidad de Ceratitis

capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) por diversas cepas de Beauveria

bassiana (Bals.) Vuillemin, en condiciones de laboratorio. Acta Zool.

Mex vol.25 no.3 Xalapa dic. 2009

44. Tanada Y, Kaya HK. Insect pathology. Academic Press. San Diego, California

(USA). 1993

45. Pedrini, N, Crespo R, Juárez MP. Biochemistry of insect epicuticle degradation

by entomopathogenic fungi. Comparative Biochemistry and Physiology, Part C.

2007; 146:124–137.

46. Samuels RI, Paterson IC. Cuticle degrading proteases from insect moult ing

fluid and culture filtrates of entomopathogenic fungi. Comparative Biochemistry

Physiology.1995; 110:661–669



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

29

49. Pucheta M, Flores A, Rodríguez S, De la Torre M. Mecanismo de acción de los

hongos entomopatógenos. Interciencia. 2006; 31:856–86

50. Jorge W. Arboleda V. 1, Fernando Delgado B. 2, Arnubio Valencia J. Deteccion

de beauvericina en el hongo entomopatogeno Beauveria bassiana mediante el

uso de anticuerpos policlonales. Rev. Colomb.

Entomol. vol.30 no.2 Bogotá Jul./Dec. 2004

51. Gillespie, A.T., N. Claydon, The use of entomogenous fungi for pest control and

the role of toxins in pathogenesis. Pesticide Science. 1989; 27:203–21

52. Lecuona, R. Microorganismos patógenos empleados en el control microbiano de

insectos plaga. 338 p. Talleres Gráficos Mariano Mas, Buenos Aires, Argentina.

1996.

53. Alves, S. Fungos entomopatogénicos. p. 289-381. In Alves (ed.). Controle

microbiano de insectos. 2nd ed. Fundacao de Estudos Agráios Luiz de Queiroz,

Piracicaba, Brasil. 1998

54. Tanada, Y. y H. Kaya, Insect Pathology. Academic Press. San Diego, California.

(USA). 1993; 666 p



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

30

55. Freimoser, F.M., A. Grundschober, U. Tuor, M. Aebi. Regulation of hyphal

growth and sporulation of the insect pathogenic fungus Entomophthora

thripidum in vitro. FEMS Microbiology Letters. 2003. 222:281–287

56. Tang¸L y R. Hou Potencial application of the entomopathogenic fungus,

Nomuraea rileyi, for control of the corn earorm, Helicoverpa armiguera.

Entomol. Exp. Appl. 1998; 88:25-30

57. M.A. Tamai1, S.B. Alves, R.B. Lopes, M. Faion1, L.F.L. Padulla. Toxicidade

de produtos fitossanitários para Beauveria bassiana (bals.) vuill. Departamento

de Entomologia, Fitopatologia e Zoologia Agrícola, ESALQ/USP, CP 9, CEP

13418-900,



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

31

ANEXOS



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

32

Anexo 1. Ficha técnica Methomex 90 PS



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

33



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

34

Anexo2. Insecticida Methomex, principio activo methomyl.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

35

Anexo 3. Estructura y fórmula química de methomyl.

FÓRMULA UIMICA: C5H10N2O2S

TIPO DE PLAGUICIDA: Insecticida

CLASIFICACIÓN : Carbamato

PESO MOLECULAR: 162.21



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

36

Anexo 4. Reactivación de cepa de B. bassiana utilizada en el estudio.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

37

Anexo 5. Evaluación de la germinación, frascos con caldo papa sacarosa e insecticida los

cuales fueron inoculados con B.bassiana.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

38

Anexo 6. Conteo de las esporas de B. bassiana en cámara de Neubauer.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

39

Anexo 7. Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana frente a las diferentes

concentraciones del insecticida methomyl, a las 24 horas de evaluación.

Concentración

methomyl

(ppm)

Germinación (%) de Beauveria bassiana

1 2 3 4 Promedio Porcentaje

0 15.97 16.12 16.18 14.39 15.67 100%

2275 4.84 4.70 3.31 2.43 3.82 24%

3375 0.95 0.75 0.70 0.66 0.77 5%

9000 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0%



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

40

Anexo 8: Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de germinación de B. bassiana

frente a las diferentes concentraciones del insecticida methomil, utilizando el método

Duncan.

Pruebas post hoc Subconjuntos homogéneos

Germinación de Beauveria bassiana

Duncana

Concentración de Methomyl N

Subconjunto para alfa = 0.05

1 2 3 Methomyl 9000ppm 4 ,0000 Methomyl 3375ppm 4 ,7650 Methomyl 2250ppm 4 3,8200 Methomyl 0ppm 4 15,6650

Sig. ,160 1,000 1,000

Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.

a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 4,000.

ANOVA Germinación de Beauveria bassiana

Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig. Entre grupos 632,217 3 210,739 404,774 ,000 Dentro de grupos

6,248 12 ,521

Total 638,465 15



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

41

Anexo 9: Crecimiento radial promedio de B. bassiana (cm), a la concentración 0 ppm del

insecticida methomyl durante 10 días de evaluación.



Ensayo

Radio de la colonia (cm)

Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7 Día 8 Día 9 Día 10

1 0.34 0.43 0.50 0.54 0.64 0.73 0.83 0.91 1.03 1.05

2 0.33 0.42 0.49 0.54 0.61 0.73 0.80 0.91 0.99 1.11

3 0.42 0.63 0.81 1.00 1.19 1.58 1.78 1.99 2.31 2.72

Promedio 0.37 0.49 0.60 0.69 0.81 1.01 1.14 1.27 1.44 1.63

Ensayo



1 0.16 0.25 0.34 0.38 0.47 0.48 0.60 0.57 0.61 0.71

2 0.00 0.00 0.14 0.18 0.25 0.27 0.29 0.33 0.33 0.39

3 0.00 0.00 0.14 0.25 0.35 0.49 0.59 0.63 0.74 0.81

Promedio 0.05 0.08 0.21 0.27 0.36 0.41 0.50 0.51 0.56 0.64



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

42





Ensayo



1 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.10 0.14 0.14 0.18 0.18

2 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.10 0.13 0.16 0.16 0.18

3 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.23 0.21 0.22

Promedio 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.07 0.09 0.18 0.18 0.19

Ensayo



1 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

2 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

3 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

Promedio 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

43

Anexo 13: Porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana frente a las diferentes

concentraciones del insecticida methomyl, a los 10 días de evaluación.

Tratamientos ppm

Día 10 Porcentaje

0 1.63 100%

2250 0.64 39.05%

3375 0.19 11.72%

9000 0.00 0.00%



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

44

Anexo 14: Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de crecimiento de B. bassiana

frente a las diferentes concentraciones del insecticida methomyl utilizando el método

Duncan.

Pruebas post hoc

Subconjuntos homogéneos

ANOVA

Crecimiento de Beauveria bassiana

Suma de

cuadrados gl Media

cuadrática F Sig. Entre grupos 5,543 3 1,848 32,707 ,000 Dentro de grupos

2,034 36 ,056

Total 7,577 39

Crecimiento de Beauveria bassiana

Duncana

Concentración de Methomyl N

Subconjunto para alfa = 0.05

1 2 3 Methomyl 9000ppm 10 ,0000 Methomyl 3375ppm 10 ,0710 Methomyl 2250ppm 10 ,3590 Methomyl 0ppm 10 ,9450

Sig. ,508 1,000 1,000

Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.

a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 10,000.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

45



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS ESCUELA ACADÉMICA ...

Documents

Transcript of FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS ESCUELA ACADÉMICA ...