F.I.S.H.De la sigla inglesa Fluorescence In Situ Hybridization, conocida en espaol como hibridacin in situ con fluorescencia, es una tcnica de citogentica molecular que se basa en la hibridacin de una sonda de ADN marcada con una sustancia fluorescente sobre su secuencia complementaria del genoma, bien en la metafase cromosmica o en el ncleo en interface. Posee una alta sensibilidad, especificidad y rapidez por lo que la convierte en una tcnica importante de estrategia diagnostica.Los dos componentes principales de la tcnica de FISH convencional son la sonda de ADN marcada con fluorescencia y la secuencia diana en la muestra tumoral para la cual es especfica. Es muy importante destacar que no es una tcnica de bsqueda de nuevas alteraciones cromosmicas, sino que nicamente detecta aquello que buscamos, permaneciendo el resto del genoma oculto.Podemos utilizar sondas de ADN de distintos tipos: centromricas (marcan nicamente las zonas centromricas), de pintado cromosmico (marcan todo un cromosoma) y de secuencias especficas de locus (marcan regiones cromosmicas de secuencia nica)Esta tcnica complementa perfectamente a la citogentica convencional en todas aquellas situaciones en que no ha sido posible realizar un cariotipo: al disponer de metafases de poca calidad, o no haber obtenido metafases, o bien en los casos en que las alteraciones cromosmicas asociadas a un diagnostico son cripticas no visibles en el cariotipo, como el caso de la t(12:21) en leucemia aguda linfoblstica infantil.Ventajas No requiere clulas en divisin, ya que permite el anlisis no solo de metafases sino tambin de ncleos en interfase. Puesto que no es imprescindible analizar metafases, adems de tejidos frescos permite emplear muestras congeladas y tejido incluido en parafina, lo que hace esta tcnica muy til en estudios retrospectivos de tumores slidos. Es una tcnica rpida (24 horas) y en poco tiempo pueden ser analizadas un gran nmero de clulas. Tiene una sensibilidad y especificidad altas. Detecta anomalas cromosmicas numricas y estructurales siempre que dispongamos de las sondas. Permite la identificacin de cromosomas, de origen no determinado por el cariotipo, si se tiene alguna pista de que cromosomas pueden ser implicados, ya que debe elegirse una o mas sondas de ADN. Es muy til para descartar alteraciones cripticas concretas o microdeleciones, no visibles en el cariotipo. Permite la monitorizacin: seguimiento de una terapia antitumoral, deteccin de enfermedad mnima residual, deteccin temprana de recadas y cuantificacin de clulas genticamente alteradas. Es de gran utilidad en el anlisis de trasplantes de medula sea heterlogos. Se pueden utilizar sondas centromricas de los cromosomas X e Y y analizar las seales de ambos cromosomas en un gran nmero de ncleos. Permite la deteccin de deleciones gnicas y amplificaciones gnicas. Por ltimo es de gran utilidad en investigacin gentico-medica, ya que permite determinar la localizacin precisa de los puntos de rotura cromosmicos en tumores en la bsqueda de nuevos genes implicados en el cncer, y detectar y localizar genes de inters ya conocidos.Inconvenientes No es una tcnica de screening (la sonda se elige en funcin de la anomala cromosmica que queramos detectar). No suele emplearse, excepto en casos especiales como el comentado de los trasplantes, como tcnica nica sino complementaria al cariotipo, si este no resulta informativo. Tiene un elevado coste econmico, tanto en sondas de DNA como en analizadores de imagen. Su utilizacin depende de la disponibilidad de sondas de DNA. Debido a hibridaciones inespecficas, es necesario calcular para cada sonda la tasa de falsos positivos y falsos negativos. No pueden detectarse muchas alteraciones simultneamente.