fitohemagluttininas

8/10/2019 fitohemagluttininas

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Citogentica

Estudio del cariotipo humano.Descripcin y metodologa.Criterios de clasificacin.

Tcnicas de bandeo.Hibridacin in situ (FISH)-Tipos de sondas- Multifish (SKY), (CGH).

Tema 14


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Citogentica humanaEstudia el conjunto de cromosomas de un individuo

Cromosomas metafsicos

1956 Tjio y Levan Demuestran que elncleo de las clulas humanas hay 46

cromosomas

1959 Lejeune & cols Asocian unaalteracin cromosmica con un Sndromeclnico:Trisoma 21- Sndrome de Down

Desde entonces se han descrito muchasalteraciones cromosmicas comoresponsables de la etiologa de muchossndromes polimalformativos


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Cromosomas metafsicosSon cromosomas formados por dos cromtidashermanas = dos molculas de ADN idnticas

Pedculos


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Cromosoma metafsico

Cromtida

Centrmero

Microscopiaelectrnica debarrido


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Cariotipo : conjunto de cromosomas que caracteriza a una especie.

Cariotipo humano46 cromosomas

23 pares de homlogos

22 pares de autosomas1 par de gonosomas

24 tipos cromosmicos


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24 tipos cromosmicos

Se clasifican de mayor amenor tamao y segn su

morfologa en 8 grupos


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Cada cromosoma interfsico equivale auna molcula de ADN asociada a

protenas

Las molculas de ADN de loscromosomas tienen entre 50 y 250 Mb

Un gen tiene entre 15 Kb y 2000 Kbla media es 28 Kb

Cada cromosomas metafsico esta formadopor dos cromtidas hermanas y equivale a dos

molculas de ADN idnticas asociadas aprotenas


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Material

Mtodo

Procesamiento

Metodologa citogentica

Linfocitos de sangreperifrica Mdula sea Lquido amnitico Vellosidades coriales

Piel

Directo:

Indirecto: cultivo antesdel procesamiento


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Sembrar en 125ml de RPMI +fitohemaglutinina

Incubar a 37 Cdurante 3 das

Aadir colchicinaSolucinhipotnicasalina

Fijacin delas clulas

SDispersin celularsobre un portaobjetospor goteo

Tincin

FotografaCariotipo

ClK 0,075M Carnoy


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Criterios de clasificacin

Denver 1960 -Tamao-Posicin del centrmero

-Presencia o ausencia de satlites

Pars 1971

-Patrn especficode bandas


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Bandas Q:(Casperson y cols., 1970)

Tratamiento con QuinacrinaRegiones ricas en AT, cromosoma Y


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Bandas G:(Seabright, 1971)

Tratamiento con tripsina + GiemsaRegiones ricas en AT (bandas oscuras)


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Patrn de

Bandas Q y G(1971)


14/38Frmula cromosmica: 46, XY

Idiograma con bandas G


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Bandas R:(Dutrillaux y Lejeune, 1971)

Patrn reverso al de bandas Q y GRegiones ricas en CG (bandas oscuras)


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Bandas: G R (Reverso)

Par 3

Par 16


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Bandas C:(Arrighi y Hsu, 1971)

Heterocromatina constitutiva


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Bandas C


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Patrn de

Bandas C(1971)


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Idiograma con bandas C

Frmula cromosmica: 47, XY, +13


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Limitaciones de la Citogentica Convencional :

Alternativa : Citogentica Molecular

1. FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia) Requiere saber lo que se busca Tener la sonda adecuada

2. Otras tcnicas: Requieren equipos muy sofisticados y apoyoinformtico

SKY (Cariotipo espectral multicolor, multifish) CGH (Hibridacin Genmica Comparada)

Requiere metafases

No siempre la calidad de las metafases es optima

Resolucin limitada (en el mejor de los casos 2-5 Mb )


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FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)


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Se puede realizar enncleos interfsicos oen divisin

Se suelen utilizarsimultneamente distintas sondas,marcadas conflurorocromos dediferentes colores :Rojo: rodamina

Verde: fluorescena

Azul: dapi


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Tipos de sondas

Especificas de regiones: Sondas telomricas

Sondas centromricas

Especificas de cromosomas: Pintados cromosmicos

Especificas de secuencia: Sondas nicas, Sondas gnicas


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Sondas telomricas

Especificas de regiones


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Sondas centromricas

Repeticiones Alfoides:(secuencias repetidas delcentrmero que sonespecficas de cromosomas)

tiles para localizarcromosomas concretos

Centrmero delcromosoma 21


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Pintadoscromosmicos

Especificas de cromosomas

Pintan completamente elcromosoma elegido

tiles en la deteccinde reorganizacionescromosmicas

t (2;8)

cromosoma 8 rosa

cromosoma 2 verde


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Pintados cromosmicos


pintado del cromosoma Yen rosa, el resto con dapi


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Pintado delcromosoma X




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cromosoma X rosa

cromosoma Y verde


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Pintado delcromosoma 22


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Sndrome de Williams(del 7q11.23)

7q11.23 rojo, centrmerocromosoma 7 verde

Sondas especficasde secuencia

Dirigidas a una reginconcreta

tiles para detectarsndromes pormicrodeleccin


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Cariotipo Espectral Multicolor (SKY)

Hibridacin in situ con sondas especficas decada cromosoma (El aparato es capaz dediferenciar 24 colores).

Identificacin unvoca del material cromosmicoreordenado en translocaciones y marcadorescomplejos


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Hibridacin Genmica Comparada (CGH)

Deteccin de prdidas y ganancias genmicas porhibridacin competitiva de ADN tumoral y normal dereferencia


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Utilidad clnica de la citogentica

Uno de cada 150 o 160 recin nacidostiene una anomala cromosmica

Al menos el 50% de los abortosespontneos durante el primer trimestretiene una anomala cromosmica

Aproximadamente el 2% de losembarazos en mujeres de ms de 35aos tiene una anomala cromosmica

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