La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción

enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia

específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la

secuencia blanco es copiada fielmente.

† Inventada en 1985 por KaryB.Mullis

† Premio Nobel de Química, 1993

La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un fragmento de ADN

utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, ya que proviene

de la bacteria Thermus aquaticus que vive a altas temperaturas (79°C a 85°C), de ahí su

nombre comercial mas conocido: taq polimerasa.

† DNA molde o templado:contiene la región que queremos amplificar.

† Primers: Secuencias cortas de DNA (oligonucleótidos) que delimitan la zona que queremos amplificar. Deben ser complementarios a cada uno de los extremos de la región a amplificar. Se sintetizan in vitro de un modo preciso para que a partir de su región 3‟, la polimerasa inicie la síntesis en dirección correcta

† Mezcla de los 4 deoxirribonucleótidos trifosfato que componen el DNA.

† DNA Polimerasa: polimerasa capaz de resistir elevadas temperaturas (TaqPol)

† Termocicladora: Una máquina que haga ciclos controlados de temperatura (Máquina de PCR, PCRra)

95° C 1 minuto

54° C 45 segundos

72° C 2 minutos

Al final de la PCR, para saber si la reacción transcurrió eficientemente, los

ampliaciones son visualizados a través de una electroforesis en geles de agarosa.

PCR anidada

En esta variante de PCR, el producto de una amplificación es utilizado como molde

para realizar una segunda amplificación con iniciadores que se ubican dentro de la primera

secuencia amplificada. Este tipo de PCR es altamente específica

PCR múltiple.

Se lleva a cabo la reacción de PCR tradicional, pero con mas de 2 primers, para amplificar

varias regiones al mismo tiempo.

PCR in situ

Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consiste

en una reacción de PCR en secciones histológicas o células, donde los productos generados

pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Se realiza para ello una primera amplificación

del ADN blanco y luego detección mediante hibridación in situ convencional con sondas de

ADN/ARN. De esta manera puede detectarse cantidades pequeñísimas del material genético

PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR).

Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de una transcriptasa

inversa, para realizar la conversión del ARN a un tipo de ADN llamado ADNc.

1.er paso: retrotranscripción a partir del ARN.

2º paso: amplificación a partir de la primera hebra de ADNc.

3.er paso: PCR estándar.

La PCR cuantitativa o PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena

de la polimerasa utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el

producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico

PCR en tiempo real.

† Huella digital genética

† Test de paternidad

† Detección de enfermedades hereditarias

† Comparación de la expresión génica

† Clonamiento de genes

† Análisis de ADN antiguo