Gram

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    28-Nov-2014
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    Science

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  • 1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS CIRCULO DE ESTUDIANTES DE MICROBIOLOGIA Aislamiento e identificacin de Bacterias Gram (+) CURSO: TECNICAS EN MICROBIOLOGIA 1

2. ESTRUCTURA DE Staphylococcus aureus 2 3. ESTRUCTURA 3 4. Factores de Virulencia de S. aureus 4 5. FACTORES DE VIRULENCIA DE S.aureus 5 6. A: disposicin clsica del antgeno en el receptor de linfocitos T B: disposicin del superantgeno (SAg) en la regin Vb lateral. 6 7. ESTRUCTURA DE Streptococcus pyogenes 7 8. FACTORES DE VIRULENCIA DEFACTORES DE VIRULENCIA DE S.S. pyogenespyogenes 8 9. FACTORES DE VIRULENCIA DEFACTORES DE VIRULENCIA DE S.S. pyogenespyogenes 9 10. Protena M 10 11. 11 12. Ayudan a la bacteria a invadir al husped, evadir las defensas del husped para poder llegar a su diana. 12 13. 13 14. 14 15. Colocar una gota de H2O2 en la lamina porta objeto Tomar una asada de la muestra Hacer una suspensin Cultivo de Staphylococcus (+) = Aparicin de burbujas (-) = No hay cambios (+) = Aparicin de burbujas (-) = No hay cambios 15 16. CATALASA +CATALASA +Staphylococcus 16 17. El perxido de hidrgeno se produce cuando la bacteria utiliza el azcar por va oxidativa. Al ser ste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la produccin de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + O2). El perxido de hidrgeno se produce cuando la bacteria utiliza el azcar por va oxidativa. Al ser ste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la produccin de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + O2). CATALASA Esta enzima descompone el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. Esta enzima descompone el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. QumicamenteQumicamente es una hemoprotena de estructura similar a la de la hemoglobina, excepto por que los 4 tomos de hierro que posee la molcula estn es estado oxidado (Fe+++ ) en lugar de reducido (Fe+ + ). es una hemoprotena de estructura similar a la de la hemoglobina, excepto por que los 4 tomos de hierro que posee la molcula estn es estado oxidado (Fe+++ ) en lugar de reducido (Fe+ + ). De esta manera las bacterias se protegen del efecto txico del H2O2, presente en los fagocitos como principal bactericida De esta manera las bacterias se protegen del efecto txico del H2O2, presente en los fagocitos como principal bactericida 17 18. El perxido de hidrgeno ;s i se deja acumular, ste puede ser letal para las clulas bacterianas. El perxido de hidrgeno ;s i se deja acumular, ste puede ser letal para las clulas bacterianas. CATALASA protege a los microorganismos del H2O2 txico que re acumula durante el metabolismo bacteriano y es liberado despus de la fagocitosis. protege a los microorganismos del H2O2 txico que re acumula durante el metabolismo bacteriano y es liberado despus de la fagocitosis. Transforma el perxido de hidrogeno en agua y oxgeno de acuerdo a la siguiente reaccin: Transforma el perxido de hidrogeno en agua y oxgeno de acuerdo a la siguiente reaccin: H2O2 ----------------> H2O + O2 (burbujas de gas)H2O2 ----------------> H2O + O2 (burbujas de gas) 18 19. Puncin cardaca 4.5 mL 0.5 mL de citrato de Sodio 3.8% Sangre + citrato de Sodio 3.8% Separacin del plasma 19 20. Incubar a 37 CCultivo puro de S. aureus Controlar la aparicin de coagulo a partir de los 5 min hasta las 24 hrs Controlar la aparicin de coagulo a partir de los 5 min hasta las 24 hrs plasma citratado de conejo 20 21. RESULTADOPOSITIVO: S.aureus RESULTADOPOSITIVO: S.aureus Se debe observar continuamente para evitar reportes negativos, debido a que usualmente la bacteria posee otra enzima la fibrinolisina la cual acta revirtiendo el proceso de coagulacin 21 22. 22 23. Tipos de Coagulasa 23 24. Staphylococcu s aureus c c c c c COAGULOS DE FIBRINA Causa agregacin del fibringeno sobre S. aureus. Aglutinacin rpida de las clulas. FIBRINOGENO PRESENTE EN EL PLASMA FIBRINOGENO PRESENTE EN EL PLASMA COAGUL ASA EN LA SUPERFI CIE DE LA PRED CELULAR COAGUL ASA EN LA SUPERFI CIE DE LA PRED CELULAR ACTUA DE MANERA DIRECTA MODIFICAMODIFICA 25. FIBRINAFIBRINA FIBRINOGENOFIBRINOGENO No es dependiente de Ca2+ No es dependiente de Ca2+ Staphylococcus aureus 25 26. Pesar 120 g de Agar base Disolver en 110 mL de agua destilada Agar Base 26 27. Licuar el Agar base (45 C) Agregar inmediatamente del 6 7 % de sangre al medio .. .. Verter en placas petri .. Asegurar que las placas queden secas antes de la siembra 27 28. Produce una zona clara, incolora, alrededor de la colonia del microorganismo por destruccin completa de la hemoglobina. no se produce actividad hemoltica o decoloracin por la colonia del microorganismo. Es la parcial destruccin de los glbulos rojos cerca de la colonia, ejerce su accin a nivel de la hemoglobina, la que puede transformarse en biliverdina o bilirrubina de color amarillo verdoso. 28 29. 2929292929 30. - Hemolisis - Hemolisis Es una esfingomielinasa que actua en el complejo esfingolmielina lipocarbohidrato. Requiere de iones magnesio y la especificidad de sustrato esta restringida a esfingomielina y lisofosfatidilcolina Es una esfingomielinasa que actua en el complejo esfingolmielina lipocarbohidrato. Requiere de iones magnesio y la especificidad de sustrato esta restringida a esfingomielina y lisofosfatidilcolina La sensibilidad variable de los eritrocitos de diferentes especies de animales se deba a diferencias en el contenido de esfingomielina de la membrana La sensibilidad variable de los eritrocitos de diferentes especies de animales se deba a diferencias en el contenido de esfingomielina de la membrana 30 31. Posteriormente la enzima biliverdina reductasa, que tambin requiere NADPH, reduce la biliverdina a bilirrubina. Diariamente se producen unos 300 mg de este compuesto de intenso color amarillo que tiene como nico destino su excrecin. Posteriormente la enzima biliverdina reductasa, que tambin requiere NADPH, reduce la biliverdina a bilirrubina. Diariamente se producen unos 300 mg de este compuesto de intenso color amarillo que tiene como nico destino su excrecin. El ncleo tetrapirrlico del grupo hemo sufre la accin de la hemo oxigenasa, un sistema enzimtico que produce ruptura entre los anillos A y B de la protoporfirina, liberando el hierro y dando lugar a un tetrapirrol lineal, la biliverdina. El sistema requiere NADPH y O2. El ncleo tetrapirrlico del grupo hemo sufre la accin de la hemo oxigenasa, un sistema enzimtico que produce ruptura entre los anillos A y B de la protoporfirina, liberando el hierro y dando lugar a un tetrapirrol lineal, la biliverdina. El sistema requiere NADPH y O2. hemolisis hemolisis Halo Transparent e Halo amarillo verdoso 31