Guassia Lusiferasa como marcador biologico

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GUASSIA LUCIFERASA COMO MARCADOR BIOLÓGICO PARA MONITOREO DE LA PROGRESIÓN DEL TUMOR Y RESPUESTAS AL TRATAMIENTO DE LA METÁSTASIS A DISTANCIA INTEGRANTES: Chipana, Stefani Chavez , Regina Gallegos, Gisella Marcas, Ñaupas, Sonia Portal, Jhimmy Riques, Erlinda

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utilidad de la enzima guassia lusieferesa como marcodor biologico en monitoreo de la pregresion tumurol

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TIEMPO REAL DE SEGUIMIENTO DE LA PROGRESION DEL TUMOR METASTASICO CON SANGRE DE GLUC Y LOCALIZACION DE METASTASIS CON IMAGEN DE BIOLUMISCENCIA DE GLUC

Guassia luciferasa como marcador biolgico para monitoreo de la progresin del tumor y respuestas al tratamiento de la metstasis a distanciaINTEGRANTES:Chipana, StefaniChavez , ReginaGallegos, GisellaMarcas, Marleniaupas, SoniaPortal, JhimmyRiques, Erlinda

1 ERLINDA RIQUESBIOLUMINISCENCIAluciferase=

Es la luz producida por una reaccin qumica dentro de un organismo.Al menos 2 elementos se requieren. El que produce la luz "luciferina" y otro que cataliza la reaccin "luciferasa.LUZLa energa de una fuente de luz es absorbida y remitida como otro fotn.Es una radiacin de vida media ms prolongada y est asociada con la intensidad de la luz absorbida.

FLUORESCENCIAFOSFORESCENCIAALGUNAS ESPECIES CON ACTIVIDAD BIOLUMINISCENTE Bacterias, Hongos, dinoflagelados,radiolarios, Cnidarios, Hydrozoa, Anthozoa, Ctenforos, Nemertinos, udibranquios,pulpos, anlidos, picnognidos, Quetognatos, crustceos (Coppodos, Ostrcodos, Anfpodos, Eufsidos), Equinodermos, Tunicados, Larvceos, PecesCiempis, Milpis, Insectos.2. Gaussia, mide unos 27mm. Producen la luz cuando hacen un giro al escaparse.

1. Hidromedusa Aequorea victoria

3. Dinoflagelado Pyrocystis fusiformis.

4.Japetella sp. la hembra usa su bioluminiscencia alrededor de su boca, solo cuando busca pareja.

5.Poliqueto Tomopteris sp. Luminiscencia amarilla. Cuando es perturbado muestra la ioluminiscencia en sus parapodios.

7.Ctenforo batipelgico Bathyctena sp. (2000 m). La bioluminiscencia amarilla aparece cuando el animal es perturbado.

COELENTERACINAEs una luciferina, molcula responsable de la emisin de luz en algunas bacterias , algas, hongos y animales.

Es el sustrato de muchas luciferasas y fotoproteinas incluyendo luciferasa de Renilla reniformis (Rluc), Gaussia luciferase (Gluc), aequorina y obelina.

GAUSSIA LUCIFERASEEs una protena luminiscente con rendimientos cunticos ms altas que las luciferasas deRenilla sp.y lucirnaga.Es independiente de ATP, lo que requiere slo coelenteracina y O2como sustratos.

LUCIFERASA DE LUCIRNAGA

CNCER METASTSICOCncer que se ha diseminado de su lugar de origen a otro lugar en el cuerpo.

Los lugares ms comunes de metstasis del cncer son los pulmones, los huesos y el hgado.

El tratamiento del cncer metasttico depende, usualmente, del tipo de cncer y del tamao, ubicacin y nmero de tumores metastticos.

GLOSARIOOrtotpico: Que est situado en su lugar normal.Se usa con frecuencia para describir un tejido u rgano que se trasplanta a su lugar normal en el cuerpo

MDA-MB-231: una sublnea de la lnea celular de adenocarcinoma de mama humano; es decir, clulas se cultivaron con el fin de estudiar el papel de la acetilacin y extra-celular ubicacin de 90alpha protena de choque trmico en la invasin de clulas tumorales.

Marcador biolgico: molcula biolgica que se encuentra en la sangre, otros lquidos o tejidos corporales, es un signo de un proceso normal o anormal, o de una afeccin o enfermedad

GLOSARIOInoculacin: introduccin de una sustancia en el cuerpo para producir o aumentar su inmunidad ante una enfermedad o proceso asociado a dicha sustancia.

Luminmetro: excelente para monitoreo de limpieza en planta, equipo porttil, su avanzado sistemapermite leer la cantidad de ATP, cuenta con un software para realizar anlisis estadsticos y llevar un control

RLU( unidad relativa de luz) : la luz emitida desde los hbridos ARN:ADN marcados se mide como seales de fotones en un luminmetro y se incluye en el informe como unidades deluz relativa.

Valor umbral: separa los objetos de una imagen que nos interesan del resto

HER2Receptor del factor de Crecimiento epidrmico Es el nombre de una protena producida por un gen especfico.Las protenas HER2 son receptores en las clulas mamariasAyudan a controlar la manera en que una clula mamaria sana crece, se divide y se repara as misma

EGFRReceptor del factor de Crecimiento epidrmicoEs el receptor celularde la Superficie de la clulade los Miembros de la Familia del factor de crecimiento epidrmico(familia EGF) de los ligandos de las Protenas extracelulares.

LAPATINIB

Es un agente quimioteraputico, un inhibidor dual de la tirosina quinasa de EGFR y HER2Acta sobre una enzima especfica que se encuentra en las clulas cancerosas y detiene el crecimiento de las clulas.Se usa en forma de ditosilato de lapatinib.

Resultado N1Comparacin de la actividad Gluc en sangre, plasma y orina

Resultado

RESULTADO N 2Seguimiento de la actividad Gluc en la sangre, la orina e imgenes de bioluminiscencia (BLI) del modelo ortotpico de cncer de mama.

TIEMPO REAL DE SEGUIMIENTO DE LA PROGRESION DEL TUMOR METASTASICO CON SANGRE DE GLUC Y LOCALIZACION DE METASTASIS CON IMAGEN DE BIOLUMISCENCIA DE GLUCResultado 3: La sangre de ensayo Gluc refleja la carga tumoral viable.

3C MARLENI

Ratones de laboratorioLos ratones fueron anestesiados con ketamina/xilazina(100/10mg/kg), Inyeccin intraperitonialMATERIALES Y MTODOLnea celular humana 231 Br y HER2 con sobreexpresin de contraparte, donde ambos expresan la protena verde fluorescenteLas clulas 231 BR y 231BR - HER2 se mantuvieron en el medio modificado de Dulbecos complementado con suero bovino fetal al 10%.

1% de penicilina estreptomicina solucin

LNEA CELULAR Y CULTIVO CELULARTRANSFECCION DE GLUCEs el vector lentiviral lleva un casett de expresin que codifica la proteina Gluc y Ceruleo fluorescente.Esta separado por un sitio interno de entrada ribosomal que se ha generado previamente Las clulas 231BR y 231BR Her2 fueron transducidas con LV-Gluc-PPC 231BR-G y 231BR-HER2-G a una multiplicidad de infeccin.MODELO DE ALMOHADILLA DE GRASA MAMARIA Se ha diseado clulas MDA-MB-231BR (231BR), la cual se administra en un volumen de 200 a 300 mm3 en la almohadilla de la grasa mamaria (MFP).

Ratones femeninos de 5 a 7 semanas de edad.

El tamao del tumor se midi mediante una pinza calibrador.

Los tumores se resecaron y se utilizo la tincin H & E.

Modelo de metstasis experimental (modelo de inyeccin intracardiaca)

Ratones femeninos de 6 -7 semanas de edad desnudos fueron inyectados con: 0.25 x 106 231 BR- HER2-G clulas en 0,1 ml de PBS a travs del ventrculo izquierdo.Fueron sacrificados los ratones que mostraron sntomas clnicos de dolor prolongado.El cerebro, los huesos y los dems rganos se recogieron y se evalan de inmediato para GFP mediante microscopa de fluorescencia.

ANALISIS DE GLUCOSA EN SANGRE/ ORINA1)Se extrajo sangre de hacer una ligera incisin en al vena de la cola2)La orina se recoge directamente de las aberturas de la uretra3)10 L de sangre se recogi y se mezcl con 2L de 50 mM de EDTA.4)Las muestras de sangre u orina se transfiri luego a una placa de 96 pocillos.5)La actividad de la Glu se midi utilizando un luminmetro placa.

CUANTIFICACIN DE TUMOR VIABLESe utilizo la tincin hematoxilina-eosina (H & E)La cual nos permite contrastar el ncleo del citoplasma, tiendo el ncleo de color azul y el citoplasma de un color rosado.BIOLUMISCENCIA DE IMGENES (BLI)Tecnologa la cual representa una poderosa herramienta para su uso con bacterias modificadas Para expresar genes reporteros como lux (unidad del nivel de iluminacin).Se utiliza tradicionalmente como una modalidad 2D.Que resulta en imgenes que estn limitados en su capacidad para localizar anatmicamente las poblaciones de clulas

32Adler, K., J. Gifford, y R. Sumner.