•Guerrero Merino Lizbeth

•López Uribe Ángel René

•Ramos Mora Luis Alberto

•Ruiz Gayosso Ana Karen

ClonaciClonacióón n Se refiere al proceso de aislar una secuencia de ADN de

interés, insertarlo en un plásmido o vector de clonación y

obtener múltiples copias de ella en un organismo

(generalmente procariota) por acción de la DNA

polimerasa.

Vector de clonaciVector de clonacióónn

Molécula pequeña de ADN que puede replicarse de manera autónoma en un huésped (células bacterianas o de levaduras).

Los vectores se utilizan para clonación porque pueden seguir su desarrollo normal a pesar de que secuencias adicionales de ADN sean incorporadas en su material genético.

3 Caracter3 Caracteríísticas importantessticas importantes

La mayoría de los plásmidos naturales no cumplen todas estas condiciones entonces…

ConstrucciConstruccióón de pln de pláásmidos smidos artificiales o VECTORES DE artificiales o VECTORES DE

CLONACICLONACIÓÓNN

1.Combinar en una misma molécula diversos rasgos útiles de los plásmidos naturales como:

La presencia en el plásmido del gen de resistencia permite seleccionar las bacterias que portan estos plásmidos

II. Promotores fuertesII. Promotores fuertes

Muchos genes se expresan sólo bajo ciertas circunstancias metabólicas y/o en tejidos específicos

Sustituir el promotor del donador por uno que asegure su expresión

Pueden ser inducibles bajo ciertas condiciones de crecimiento

pETpET--24 cumple con las caracter24 cumple con las caracteríísticas de un sticas de un vector de clonacivector de clonacióónn

EXISTEN DIFERENTES EXISTEN DIFERENTES VECTORES VECTORES DEPENDIENDO DE LA DEPENDIENDO DE LA LONGITUD DEL GEN DE LONGITUD DEL GEN DE INTERINTERÉÉS POR CLONARS POR CLONAR

EjemplosEjemplos

-Plásmidos-Fago lambda -Cósmidos-Fásmidos (fagémidos)-Cromosomas Artificiales:

Bacterias (BAC)Levaduras (YAC)

PlPláásmidossmidos

Moléculas de ADN circular (generalmente bacteriano) separadas del cromosoma principal y con capacidad de replicación independiente de la bacteria. Tamaño de inserto: 20 kb

Fago LambdaFago Lambda

Es un virus bacteriófago, cuya región central del genoma es prescindible y se puede sustituir por un inserto de ADN.

Tamaño de inserto 10-15 kb.

Se forma un multímero que luego se utiliza para rellenar cápsides del fago mediante empaquetamiento in vitro.

CCóósmidossmidosSon vectores híbridos entre el fago H y un plásmido. Se pueden replicar en una bacteria o empaquetarse como un fago.

Tamaño de inserto hasta 45 kb.

Se remueve casi todo el ADN del H y se deja sólo las secuencias que actúan como señales de empaquetamiento (cos). Casi todo se rellena con el inserto que queremos clonar.

Replicación a modo de plásmido

Otros vectoresOtros vectoresFásmidos: Son vectores que combinan las características de un fago filamentoso y un plásmido y contienen tanto el origen de replicación del fago como del plásmido.Cromosomas artificiales: Se desarrollaron con el objetivo de clonar grandes segmentos de cromosomas eucarióticos.

Vector recombinanteVector recombinante

Resulta de la inserción del gen de interés (transgen) en el vector de clonación.

Como insertar el gen de interComo insertar el gen de interéés en s en el vector de clonaciel vector de clonacióónn

Fragmentación del DNA vector DNA de interés (producto de PCR o de

enzimas de restricción) Ligación

Vector recombinanteVector recombinante

Vector en la prVector en la práácticactica Vector recombinante que contiene gen de la β-

lactamasa (transgene)

TransformaciTransformacióón n en cen céélulalula

ProducciProduccióón de n de Vector recombinanteVector recombinante

ClonaciClonacióónn