Datos y resultados nº 13. Recuento y estudio bioquímico del Clostridium perfringens

FECHA: 21 de febrero de 2014

GRUPO: 2

NOMBRE: Beatriz Henao, Alejandra RománNOMBRE: Leisa Gómez Vélez

Parte uno de la práctica (siembras)

1. Tres objetivos:

Determinar la presencia de esporas de clostridium sulfito reductores es una muestra de carne de cerdo.

Familiarizarse con los métodos de aislamientos de bacterias anaeróbicas en alimentos.

Tomar conciencia de los peligros que ocasionan la presencia de estos microorganismos en los alimentos.

Describa brevemente lo que realizo en el laboratorio:

Se toman 10 g de muestra escogidos de diferentes partes, en 90 ml de agua peptonada que siempre será una dilución 10:10

Homogenizar en stomacher y dejar reposar por 5 min. Se toma 1 ml de esta solución madre en tubos que contengan agar sulfito,

polimixina sulfadiazina ( s.p.s ) Llevar las diluciones a baño maría a 85°C por 10 min. Cumplido el tiempo pasar de inmediato a recipiente con hielo hasta que los tubos

estén fríos. Incubar a 35°C por 24 a 48 horas.

Parte dos de la práctica (lecturas)

Resultados:

De la muestra del alimento se pudo aislar las esporas de Clostridium sulfito-reductores, donde la presencia de sulfuro de hierro se puso de manifiesto en la dilución 10 -3 con la formación de colonias color negro.Para el recuento, se contó el número de colonias negras crecidas en el agar y se multiplico por el factor de dilución del tubo, la cifra obtenida fue:

Recuento u.f.c de esporas de clostridium sulfito reductoras 500/g

Medio de cultivo utilizado, temperatura y tiempo de incubación:

Para el recuento de clostridium sulfito reductores se ha dispuesto medios específicos tales como el sulfito, polimixina sulfadiazina ( s.p.s ).

este después de licuado y regenerado debe enfriarse a una temperatura de 45°C y pH ajustado a 7,2 +/- 0,2.

El crecimiento óptimo en una incubación de este microorganismo se da a 37 °C por 24 a 48 horas.

Descripción de las colonias:

Colonias de color negro y bordes redondos en la parte de la anaerobiosis y producción de sulfito en el medio.

Características microscópicas de las colonias en el Gram.

Bacilos Gram positivos con esporas terminales y subterminales.

Reacciones bioquímica:

Movilidad (+) El sulfuro se expandió por todo el tubo.

Reducción de Nitrato (-) no hubo cambios en el caldo, y al adicionar el reactivo gris tampoco se evidencio cambio de color.

Licuefacción de gelatina (-) no hubo licuefacción de la gelatina, el agar se encuentra sólido.

Fundamento de los nitratos:

Es un medio para estudiar simultáneamente la reacción de oxidación o fermentación de glucosa y la reducción de nitratos a nitritos, por bacilos Gram negativos de fácil desarrollo. Esta prueba es útil para diferenciar especies bacterianas.La reducción del nitrato a nitrito o gas nitrógeno por medio de la enzima nitrato reductasa, es un proceso de oxidación por el cual el nitrato proporciona oxígeno para ser usado como aceptor de electrones. El nitrito presente en el medio puede detectarse con el reactivo de Griess A (B15-501-61) y Griess B (B15-502-61) Britania, dando un compuesto diazoico coloreado.Si se observan burbujas en el medio, éstas son de gas nitrógeno, ya que el nitrito intermediario inhibe las decarboxilaciones. Los resultados pueden ser:

-Positiva: desarrollo de color rosado-rojo luego del agregado de los reactivos Griess A y B.- Negativa: ausencia de color rosado rojo luego del agregado de los reactivos Griess A y B.

Fundamento de lactosa – gelatina:

Se usa para valorar la licuefacción o licuación de la gelatina por acción de las gelatinasas bacterianas producidas por algunas Enterobacterias. La reacción positiva hace que el medio permanezca líquido después de la incubación aún después de dejarse en refrigeración durante media hora. La reacción negativa permite nuevamente la solidificación.

PROTEASAS O GELATINASAS (+): En esta prueba se determina la producción de enzimas de carácter proteolítico en un medio nutritivo de gelatina; donde la gelatina ha se hidroliza por proteasas extracelulares de la bacteria. Dando como resultado la licuefacción de la gelatina dado que ha sido hidrolisada hasta aminoácidos individuales.

PROTEASAS O GELATINASAS (-): En esta prueba se determina la producción de enzimas de carácter proteolítico en un medio nutritivo de gelatina. En el video se observa la prueba de gelatinasas NEGATIVA en donde la gelatina continúa siendo un polipeptido y por lo tanto NO hay proteasas extracelulares que puedan degradarla hasta aminoácidos individuales. Se observa que la gelatina continúa en estado Sólido y no pierde su consistencia.

Parámetros según la legislación Colombiana:

Instituto colombiano de normas técnicas 1325

Requisitos microbiológicos para productos cárnicos procesados no enlatados Recuento de esporas clostridium sulfito reductes UFC/g

n m M C3 <10 100 0

PREGUNTAS

1. ¿En qué condiciones favorecen el crecimiento de este microorganismo en carnes cocidas? Explique.

Las condiciones que favorecen el crecimiento y la producción de toxinas de Clostridium son:

• Alta cantidad de proteínas•Baja concentración de sal•pH ligeramente ácido o alcalino (superior a 4,6)•Ausencia de oxígeno, multiplicándose en alimentos envasados al vacío o en atmósfera modificada •Bajas temperaturas.

2. ¿Mencione dos características morfológicas importantes de este microorganismo?

Bacilar, G+, anaerobias estrictas, capaces de formar esporas y con capacidad de reducir el sulfito a sulfuro.

Conclusiones.

Al comparar la muestra de carne con los parámetros de calidad establecidos por la NTC 1325 se concluye que el producto se encuentra contaminado por bacterias esporuladas lo cual indica que dicho establecimiento no cuenta con una buena calidad higiénico sanitaria, ya sea que la contaminación provenga del manipulador o del ambiente, lo cual es de cuestionarse ya que estas esporas podrían ser transmitidas los consumidores y generarles una toxiinfección alimentaria.

REFERENCIAS

1. http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/gluconitragar.htm 2. Microbiología Alimentaria: Metodología Analítica para Alimentos y

Bebidas. By María del Rosario Pascual Anderson, Vicente Calderón y Pascual Recuperadode http://books.google.com.co/books?id=9EIfkks8uxMC&pg=PA74&lpg=PA74&dq=como+son+las+colonias+de+clostridium+sulfito+reductores&source=bl&ots=RHfN-Yikcj&sig=70S16SB0gI8ENFBqAf5TgC5iIh8&hl=es-419&sa=X&ei=RlAFU46wEZOHkQfU9YDoBg&ved=0CCYQ6AEwAA#v=onepage&q=como%20son%20las%20colonias%20de%20clostridium%20sulfito%20reductores&f=false

3. http://kathe-microblog.blogspot.com/2008/06/pruebas-bioquimicas.html 4. http://www.slideshare.net/jamesdays/ntc1325-10521142