UNIVERSIDAD NACIONAL DETRUJILLO

E.A.P. Microbiología y Parasitología

Curso : Genética

Docente : Gina

Tema : Informe de práctica

Ciclo : I – 2015

Alumna :

Ruíz Vidaurre Cynthia

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Universidad Nacional de Trujillo

OBTENCIÓN DE POLIPLOIDES(Con técnica de Tjio y colchicina)

I. INTRODUCCIÓN

En Genética, la poliploidía se define como el fenómeno por el cual se originan células, tejidos u organismos con tres o más juegos completos de cromosomas de la misma o distintas especies o con dos o más genomas de especies distintas. Tales células, tejidos u organismos se denominan poliploides. Si los genomas de una especie poliploide provienen de la misma especie ancestral, se dice que es autopoliploide o autoploide; si provienen de dos especies ancestrales diferentes se dice que es alopoliploide o aloploide. Dependiendo del número de juegos cromosómicos completos que posee la especie se denomina como triploide (3X), tetraploide (4X), pentaploide (5X) hexaploide (6X) y así sucesivamente, siendo X el número monoploide, no debiendo confundirlo con el número haploide.

La poliploidía es un suceso bastante frecuente en la naturaleza, si bien es más frecuente en plantas y algas que en animales y hongos. Para la realización de esta práctica utilizaremos las raicillas de Allium cepa (cebolla); ya que esta es una especie ideal para estudios citológicos debido a que cuenta con un numero de cromosomas (16 = 2n).

Para una correcta determinación de células poliploides es necesario contar con que las células de cebollas deberán ser colectadas en estado de metafase.

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II. OBJETIVOS

Observar la poliploidia de células de raicillas de cebolla, que se deberán encontrar en estado de metafase.

Observar el efecto de la colchicina sobre el estado de división celular de las células de cebolla.

Determinar el uso de HCl sobre las células de la cebolla.

III. MATERIALES Y MÉTODO

1. MATERIALES

MATERIAL BILOGICO:

- raicillas de Allium cepa

MATERIAL DE LABORATORIO :

- 1 lamina porta objetos- 1 lámina - Orceína acética- Microscopio óptico

- Mechero de bunsen- HCl- La colchicina

2. MÉTODO

PROCEDIMIENTO PREVIO A LA ACTIVIDAD EXPERIMENTAL (EN CASA)

1. Se colocó las raíces y fibras de la base del bulbo de cebolla pequeña (5- 7 cm de diámetro).

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2. Se Inserto 3 palillos de forma que el bulbo de cebolla se pueda suspender en un frasco con agua. 3. Se coloco el bulbo de cebolla tapando la boca de un frasco, y luego se lleno con agua hasta que toque la base de la cebolla.

Nota: Este procedimiento deberá realizarse cinco días antes de la actividad experimental, con la finalidad de permitir el crecimiento de los meristemos.

METODO DE UTILIZACIÓN DE COLCHICINA PARA LA OBSERVACIÓN CELULAS POLIPLOIDES EN RAICILLAS DE CEBOLLA

1. Se Corto 2 a 3 centímetros de las raicillas con la navaja de afeitar y se las deposito en un vidrio de reloj.

2. Se Cubrió la muestra con de HCl (para romper la pared celular).

3. Se colocó estas raicillas en un frasquito con colchicina y se dejo por un tiempo allí.

4. Se Tomó un vidrio de reloj y se sacó del frasco con las pinzas unas cuantas raicillas.

5. Estas luego fueron sometidas a la coloración con orceína acética y también se calentaron suavemente a la llama del mechero, evitando la ebullición (prueba de los tres humos).

6. Luego se colocó las raicillas ya tratadas sobre el portaobjetos y se cubrió con el cubreobjetos, presionando suavemente, el aplastado (squash).

7. Seguidamente se elimino el exceso de colorante con una toalla de papel.

8. Se Observa y enfoca la preparación al microscopio óptico con el objetivo 10x.

9. Observar a mayores aumentos (40x, 100x) recorriendo diversos campos para descubrir en las células observadas la poliploidía.

IV. RESULTADOS

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Observación de celulas poliploides con orceina y cochicina a 2x Observación de celulas de cebolla a 4x Observación de celulas poliploides con orceina y cochicina a 4x

V. CONCLUSIONES

Se observó la poliploidia de células de raicillas de cebolla en estado metafásico.

Se resalta una característica importante observada en esta poliploidia ya que se observó las raicillas hinchaditas, esto se debe a que colchicina tiene por efecto hacer que en las células se detenga el proceso de división celular y por ende se encuentren las células en metafase, esto ayuda mucho en la observación de células poliploides y la elaboración de un en cariotipo.

El uso de HCl es muy importante debido a que ayuda al ablandamiento de las paredes células, que serán destruidas después con el calor, para la mejor retención de colorante en las células

VI. REFERENCIAS WEBGRÁFICAS

https://es.wikipedia.org/wiki/Poliploid %C3%ADa

http://www.unavarra.es/genmic/genetica %20y%20mejora/Problemas%20de%20genetica%20y%20mejora/practicas_pgm08-09.pdf

https://es.wikipedia.org/wiki/Colchicina

https://es.scribd.com/doc/95683185/Manual- Citologia-2009-04-17-B

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ANEXOS

Fig.1 Toma de muestra de raíces de cebolla, hidrolisis con HCl y colocación a la colchicina

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Fig.2 Coloración con orceína acética, aplastado (squash)