PRÁCTICA N°3: MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOSPARTE 1: ESPECTROSCOPIA EN LA REGIÓN INFRARROJA

1. OBJETIVOS:

1.1. GENERAL:

Determinar las características del comportamiento en la región infrarroja de una muestra de aspirina en capsulas y compararla con la que se encuentra en literatura.

1.2. ESPECÍFICOS:

Identificar el diseño y funcionamiento del instrumento usado para la práctica. Describir las características de cada una de las bandas obtenidas en el infrarrojo. Identificar el compuesto en mención y caracterizar cualitativamente una muestra patrón y una

muestra problema de la sustancia. Discutir las diferencias en el comportamiento de una muestra cuando se usan distintos

vehículos para su lectura.

2. METODOLOGÍA:

2.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:

2.2. TRATAMIENTO CON NUJOL:

Macerar 3 tabletas de

aspirina (100mg) hasta obtener un

polvo fino

Pesar aproximadament

e 300mg

Extraer con 10mL de etanol

y filtrar (x3)

El filtrado se lleva a

calentamiento para evaporar el

solvente

Tomar una pequeña cantidad de aspirina

(patrón/muestra)

Adicionar 1-2 gotas de nujol

Incorporar el aceite formando una

suspensión

Se aplica entre las placas de NaCl

(previamente limpias)

Colocar la placa en el equipo y leer el

espectro

2.3. TRATAMIENTO CON KBr:

3. CARACTERÍSTICAS DE LOS EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y MATERIALES:

3.1. EQUIPOS E INSTRUMENTOS:

3.1.1. EQUIPOS:

Mattson ATI Genesis FTIR (Transformada de Fourier):

Ancho de Banda: 1 cm Rango espectral: 6000-350nm.Componentes: Fuente, muestra, selector de onda, detector, amplificador, transformada de Fourier. Es un espectrómetro de infrarrojo medio con un compartimiento de la muestra de tamaño completo y una placa base que es capaz de acomodar la mayoría de los accesorios estándar de muestreo. Su funcionamiento se basa en el calentamiento eléctrico hasta temperaturas de 1.500 K con una radiación estable entre 1 y 40 μm (10.000-250 cm-1) y una emisión del 75% respecto al cuerpo negro. Su fuente es de tipo globar, la cual consiste en una barra de carburo de silicio de 5cm de longitud y 0,5cm de diámetro y posee una resolución de 1cm-1.Software: Mattson's WinFIRST

a. b. c.

d.

Tomar una pequeña cantidad de aspirina

(patrón/muestra)

Mezclar en un mortero de ágata con KBr (10

veces cantidad de aspirina)

Comprimir en la prensa, a una presión de 10

toneladas por 5 minutos

Generar descompresión lenta para no quebrar la

muestra

Poner la placa en el portamuestras y leer el

espectro

Fig 1. . (a) y (d) Espectrofotómetro Genesis Series FTIR MATTSON (b) Prensa para la obtención de pastillas de KBr, (c) Soporte desmontable usado para la lectura de la suspensión de Nujol.

3.1.2. INSTRUMENTOS:

Vasos de precipitado:

1 vaso de 25mL 1 vaso de 400mL

Embudo Mortero de porcelana Mortero de ………. (el del nujol) Mortero de ágata

3.2. MATERIALES:

3.2.1. ETANOL AL 96%[1]:

Información sobre producto:

Fórmula empírica (según Hill): C2H6OFórmula química: C2H5OHNúmero HS: 2207 10 00Número CE: 200-578-6Masa molar: 46.07 g/molNúmero CAS: 64-17-5

Datos químicos y físicos:

Temperatura de ignición: 425 °CSolubilidad en agua (20 °C): solublePunto de fusión: -117 °CDensidad (20 °C): 0.805 - 0.812 g/cm3 Valor de pH: 7.0 (10 g/l, H2O, 20 °C)Punto de ebullición: 78 °CPresión de vapor: 59 hPa (20 °C)Limite de explosión: 3.5 - 15 %(V)Temperatura de inflamabilidad: 17 °CAbsorción de agua: 1000 g/kg

Información de seguridad:

Frase R: R 11. Fácilmente inflamable.Frase S: S 7-16. Manténgase el recipiente bien cerrado. Conservar alejado de toda llama o fuente de chispas - No fumar.Características de peligrosidad: Fácilmente inflamable

3.2.2. NUJOL [2]:

Información sobre producto:

Sinónimos: Parafina LíquidaNúmero HS: 2710 19 85Número CE: 232-384-2Número CAS: 8012-95-1

Datos químicos y físicos:

Solubilidad en agua (20 °C): insoluble

Densidad: 0.860 g/cm3 (20 °C)Punto de ebullición: 300 - 500 °CPresión de vapor: < - 0.01 Pa (20 °C)Temperatura de inflamabilidad: 230 °CViscosidad cinemática: 42.5 mm2/s (40 °C)

Información de seguridad:

Clase de almacenamiento: 10 - 13 Otros liquidos y sustancias sólidasWGK: WGK 1 contamina ligeramente el aguaDisposición de Residuos: 3. Los reactivos orgánicos líquidos relativamente no reactivos desde el punto de vista químico se recogen en la categoría A. Si contienen halógenos se les asigna la categoría B. Residuos sólidos: categoría C.

Datos toxicológicos:

LD 50 oral: DL50 rata > 5000 mg/kgLD 50 dérmica: DL50 conejo > 3000 mg/kg

3.2.3. KBr [3]:

Información sobre producto:

Fórmula empírica (según Hill): BrKFórmula químico: KBrNúmero HS: 2827 51 00Número CE: 231-830-3Masa molar: 119.00 g/molNúmero CAS: 7758-02-3

Datos químicos y físicos:

Solubilidad en agua: 650 g/l (20 °C)Punto de fusión: 730 °CDensidad: 2.75 g/cm3 (20 °C)Densidad Aparente: 900 - 1000 kg/m3

Valor de pH: 5.5 - 8.5 (50 g/l, H2O, 20 °C)Punto de ebullición: 1435 °CPresión de vapor: 1.3 hPa (795 °C)

Información de seguridad:

WGK: WGK 1 contamina ligeramente el aguaDisposición de Residuos: 14 Sales inorgánicas: categoría I. Soluciones neutras de estas sales: categoría D; antes del vaciado controlar el valor del pH con tiras indicadoras universales de pH (art. 109535).

Datos toxicológicos:

LD 50 oral: DL50 rata 3070 mg/kg

3.2.4. ÁCIDO ACETILSALICÍLICO:

Estructura Química:

Fórmula Química: C9H8O4

Pureza del Patrón: 99,9% Solubilidad [4]:

Agua 1 parte de ASA en 300 partes de aguaEtanol 1 parte de ASA en 7 partes de etanolCloroformo 1 parte de ASA en 17 partes de cloroformoÉter 1 parte de ASA en 20 partes de éter

Punto De Fusión [5]: Aproximadamente 143 °C (método instantáneo). Apariencia [5]: Blanco ó casi blando, polvo cristalino ó cristales incoloros Indicaciones: Utilizada como analgésico, anti-inflamatorio, antipirético y antitrombótico [6]. LD50: Oral, mouse: LD50 = 250 mg/kg; Oral, rabbit: LD50 = 1010 mg/kg; Oral, rat:

LD50=200mg/kg [7]. Incompatibilidades: Bases Fuertes, se hidroliza en presencia de mucho aire, se

descompone en agua caliente.[7]

Especificaciones: Las Tabletas de Aspirina contienen no menos de 90,0 por ciento y no más de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de aspirina. Las Tabletas de más de 81 mg no contienen edulcorantes u otros saborizantes [8].

Datos de las tabletas: Laboratorio: Anglopharma Registro Sanitario INVIMA: 2005 M-0004989 Cantidad: 3 tabletas de 100mg c/u

ESPECTROS DEL ASA [9]:

Fig.1. Espectro IR de la aspirina en Nujol

Fig.2. Espectro IR de la aspirina en KBr4. RESULTADOS:

4.1. BACKGROUND:

Tabla 1. Barrido IR del Nujol:

NÚMERO DE ONDA (cm-1) % DE EMISIVIDAD2348,16 12,62612348,16 12,62611690,30 36,45511529,39 37,58281173,74 60,89841173,74 60,8984662,07 46,9264

Fig 4. Espectro Infrarrojo para el Nujol:

4.2. BARRIDO IR PARA EL NUJOL:

Tabla 2. Barrido IR del Nujol:

NÚMERO DE ONDA (cm-1) % DE TRANSMITANCIA2950,73 0,88482926,37 0,22042855,14 0,98112726,35 55,99882674,25 58,75752359,61 55,03042341,12 59,02361462,59 5,01291376,99 14,68231304,59 57,6761721,78 47,0271

Fig 5. Espectro Infrarrojo para el Nujol:

4.2.1. BARRIDO IR PARA EL PATRÓN DE ASA EN NUJOL:

Tabla 3. Barrido IR para el patrón de ASA en Nujol:

NÚMERO DE ONDA (cm-1) % DE TRANSMITANCIA2924,69 0,99642853,74 3,29372670,58 26,81072586,35 28,67132358,32 32,70421753,25 23,9296

1685,40 19,55331604,34 22,34021457,45 8,05751376,05 13,68531304,45 18,13951219,26 23,19251186,11 17,53861092,88 28,41161011,82 29,1632915,55 23,4140839,68 31,0489754,61 28,8187703,79 28,7724665,43 29,4122

Fig 6. Espectro Infrarrojo para el patrón de ASA en Nujol:

4.2.2. BARRIDO IR PARA LA MUESTRA DE ASA EN NUJOL:

Tabla 4. Barrido IR para la muestra de ASA en Nujol:

NÚMERO DE ONDA (cm-1) % DE TRANSMITANCIA3322,93 35,68153159,67 32,57902924,84 0,76882853,62 2,70722670,12 31,69582361,72 37,60471753,12 30,81981686,12 28,2983

1605,36 27,71061565,06 35,59981507,03 36,04161456,93 8,79961376,14 16,68131304,73 24,58951220,51 29,19371186,92 26,14911093,87 37,42941012,94 37,6906916,58 33,7378839,25 39,8153791,16 43,0082754,91 38,6215704,65 38,3731666,21 37,6651

Fig 7. Espectro Infrarrojo para la muestra de ASA en Nujol:

4.3. BARRIDO IR PARA EL KBr:

4.3.1. BARRIDO IR PARA EL PATRÓN DE ASA EN KBr:

Tabla 5. Barrido IR para el patrón de ASA en KBr:

NÚMERO DE ONDA (cm-1) % DE TRANSMITANCIA3503,18 3,56963043,73 1,21172920,86 1,09892842,56 1,16522684,05 1,45782587,30 1,50712536,77 1,72762292,27 4,20661754,42 0,2801

1682,56 0,15421605,51 0,50441457,86 0,29961419,12 1,13271370,02 1,17171305,77 0,18121219,81 0,42131187,70 0,09491094,16 1,40871012,70 1,5829916,84 0,5068839,88 1,6118803,31 1,7248754,98 1,4703704,08 1,4671665,92 1,8515598,37 2,3476541,88 3,2706514,62 3,2163421,94 3,6597

Fig 8. Espectro Infrarrojo para el patrón de ASA en KBr:

4.3.2. BARRIDO IR PARA LA MUESTRA DE ASA EN KBr:

Tabla 6. Barrido IR para la muestra de ASA en KBr:

NÚMERO DE ONDA (cm-1) % DE TRANSMITANCIA2920,61 2,09572685,29 3,04182587,57 3,13312546,35 3,24632369,07 4,79741753,73 1,0880

1692,46 0,76501605,37 1,54551575,19 5,04971458,02 1,35901419,06 2,93501370,20 3,18541306,12 0,95781220,11 1,60111187,39 0,66471134,69 3,55671094,01 3,60031038,56 5,3673916,86 1,9134839,60 3,9879790,14 4,9979754,78 3,6309703,98 3,9047666,02 4,7812598,40 5,7156542,24 7,4438423,27 8,7330

Fig 9. Espectro Infrarrojo para la muestra de ASA en KBr:

5. ANÁLISIS DE RESULTADOS:

La espectroscopia de infrarrojo es una herramienta bastante útil para identificación química y dilucidar algunas características esenciales de la estructura molecular. Esta región abarca desde los 0,75μm hasta los 1000μm aproximadamente. En la zona del infrarrojo fundamental se puede obtener gran cantidad de información tanto cualitativa como cuantitativa sobre los grupos funcionales y la estructura molecular, se encuentra en un intervalo de 2,5μm a 15μm (4000 a 667 cm-1) [10], por ésta razón decidimos escoger dicha zona para realizar el análisis de nuestra muestra de aspirina.

Para que una molécula pueda absorber la radiación infrarroja deben cumplirse dos requisitos: 1. La radiación debe tener la energía precisa para satisfacer los requerimientos energéticos del material, y 2. Deben producirse interacciones entre la radiación y la materia (experimentar cambio en el momento dipolar) [10]. En el caso del ácido acetilsalicílico presenta las dos condiciones, por lo tanto, es posible observar los cambios vibracionales de la molécula. El espectro obtenido lo podemos dividir en dos partes, la primera abarca la región de frecuencias de grupo (4000 a 1250 cm -1 aproximadamente), podemos observar la absorción característica de ciertos grupos de átomos y que son relativamente independientes de la composición del resto de la molécula, además se presentan la mayoría de las vibraciones de tensión, la otra región es la de huella dactilar (1250-400 cm-1 aproximadamente), que es la más importante para identificar la molécula, ya que se presentan frecuencias de vibraciones que se ven afectadas por la estructura molecular, es decir, que se analiza como un todo [10].

El equipo utilizado en este caso es el Matsson FTIR, el cual es un espectrómetro de Transformada de Fourier. Este sistema se basa en una espectroscopia de dominio en el tiempo, es decir, que no se usan los datos de longitud de onda para la obtención de datos, sino que se mide la potencia de radiación mediante variación en el tiempo. Mediante un instrumento llamado interferómetro de Michelson se obtiene un interferograma que ofrece una representación de la intensidad radiante frente al tiempo. Mediante una serie de operaciones matemáticas realizadas por métodos computacionales llamadas de Transformada de Fourier es posible transformar esta información en una función que en lugar del tiempo, relacione la intensidad radiante con frecuencias específicas, hallando así bandas espectrales características para cada grupo funcional que compone la sustancia. Para obtener el interferograma se realiza un movimiento de un espejo móvil de ida y regreso y mediante un programa de software se gradúan la velocidad y posición de este, las cuales inciden en la resolución obtenida. Para obtener un espectro satisfactorio es importante realizar primero un barrido o background (Figura 4) del equipo, es decir, de todas las interferencias que se puedan dar debido a sustancias como H2O, CO2 o al mismo solvente. Al realizar este barrido el equipo resta inmediatamente mediante el software y se obtiene un resultado más preciso. Se deben tener en cuenta varias consideraciones al momento de preparar la muestra: 1) Para obtener la muestra a partir de las tabletas se hizo necesario realizar una extracción del principio activo, puesto que las tabletas contienen una gran cantidad de excipientes y de otras sustancias que si no son excluidas también contribuyen a generar bandas en el espectro. Este proceso se realizó unas cuatro veces con etanol para asegurar una máxima extracción del principio activo. 2) Se lleva nuevamente a reconcentración mediante calentamiento, pero este calentamiento no debe ser excesivo, ya que puede generar una degradación térmica de la sustancia. 3) Es importante que la muestra se encuentre en una concentración alta, pues para que se conserve la ley de Lambert-Beer la delgada anchura en la celda se compensa con la amplia concentración que tiene la muestra. 4) Es necesario escoger un solvente que no vaya a reaccionar con el ASA, pues generalmente se pueden generar hidrólisis, solvataciones, hidrataciones o incluso formación de redes cristalinas que pueden interferir con la formación de nuevos compuestos o con inconvenientes en el método de extracción. 5) Es también importante regular la humedad en el campo de trabajo ya que además de interferir generando hidrólisis con la muestra, es inconveniente en cuanto a su uso en el equipo, pues la presencia de humedad es muy dañina para las celdas utilizadas, las cuales se componen de de sales como KBr y KCl, que al contacto con agua reaccionan y se corroen fácilmente. 6) La limpieza de las celdas debe realizarse con un liquido volátil como el cloroformo que no interfiera en la absorción de bandas ni que reaccione con la celda 7) Las celdas deben permanecer en el desecador cuando la cubeta no se encuentra en uso, para prevenir su interacción con la humedad ambiental.

La muestra y el patrón de acido acetilsalicílico se evaluaron mediante dos métodos: la elaboración de una suspensión en Nujol y la elaboración de pastillas de KBr en estado sólido. Los espectros obtenidos se pueden observar en los numerales 4.2 y 4.3. Al comparar los espectros realizados en los distintos medios de ambas sustancias se observa que son bastante similares.

En el caso del espectro realizado en Nujol la muestra tiene en común todos los valores a excepción de una banda en 2586 (que presenta el patrón) y en la muestra bandas adicionales en 3323, 3160, 1565, 1507 y 791 cm-1. A continuación se detallan los grupos funcionales y el tipo de vibraciones de las bandas encontradas, que son comunes para la muestra y el patrón:

Bandas Espectrales (cm-1)

Característica

2924 Estiramiento enlace O-H, la banda es estrecha2854 Estiramiento enlace CH3, del metilo del éster (intensa)≈2000 Sobretono característico de los aromáticos (no muy nítido)1753 Estiramiento –C=O de un éster1686 Estiramiento –C=O de un ácido carboxílico

1605, 1457 Estiramiento –C=C- del aromático (dos o más bandas)1376 Deformación simétrica del CH3

1220-1187 Estiramiento antisimétrico –C-O-C- del éster (dos bandas intensas)917 Deformación de C-OH (intensa)755 Flexiones fuera del plano para el benceno o-sustituido 704 Flexión –O-C=O del ácido carboxílico

Para los espectros realizados en KBr la mayoría de las bandas fueron comunes entre sí, difieren en las bandas adicionales que presenta el patrón de 3503, 3044, 2537, 2292,1682, 1012, 803 y 514cm -1 y las adicionales en la muestra de 2546, 2369, 1692, 1575, 1134, 1039 cm-1. A continuación se detallan los grupos funcionales y las vibraciones que se pudieron observar en este medio (son comunes para el patrón y la muestra):

Bandas Espectrales (cm-1)

Característica

2924 Estiramiento enlace O-H, muy ancha la banda2843 Estiramiento enlace CH3, del metilo del éster (intensa)≈1900 Sobretono característico de los aromáticos1754 Estiramiento –C=O de un éster

1683 y 1692 Estiramiento –C=O de un ácido carboxílico 1605, 1458 Estiramiento –C=C- del aromático (dos o más bandas)

1370 Deformación simétrica del CH3

1220-1187 Estiramiento antisimétrico –C-O-C- del éster (dos bandas intensas)917 Deformación de C-OH (intensa)755 Flexiones fuera del plano para el benceno o-sustituido704 Flexión de O-C=O del ácido carboxílico (intensa)598 Flexión de O-C=O del éster (intensa)542 Flexión de C-C=O del ácido carboxílico (intensa)

≈580-422 Deformación del anillo aromático fuera del plano (dos bandas media-intensa)

Como se puede observar se presenta mayor cantidad de bandas características del ácido acetilsalicílico comparado con la obtenida en literatura mediante el método de preparación de KBr, ya que esta sal tiene poca absorción en la región del Infrarrojo (4000-400cm-1) debido a su carácter iónico y por lo tanto las interferencias con la molécula de interés son mínimas. Es importante tener en cuenta que la concentración de muestra en las pastillas puede incidir en la intensidad radiante de la muestra, pues si se añade una alta o muy poca cantidad de muestra es probable que la intensidad sea muy alta o mínima en la lectura del espectro (Figura 10). También, una presión excesiva sobre las pastillas o una pequeña adición de la mezcla de sólidos para la preparación de la pastilla puede generar que la pastilla se fragmente.

Fig. 10. Espectro IR para una pastilla de bromuro [11]

En cuanto a la suspensión de Nujol, se puede observar que esta presenta absorción entre ≈3000-2650 cm-1, ≈2300 cm-1, 1500-1300 cm-1 y 700-400 cm-1,(Figura 4) lo que explica que no aparezcan definidos los picos entre el rango de 700-400 cm-1.Por ello, para la evaluación de los grupos funcionales de un compuesto mediante este método sería preferible realizarlo mediante el método de pastillas de KBr, debido al apantallamiento que presenta el Nujol y que al ser un Hidrocarburo presenta también inestabilidad en cuanto a cambios en temperatura. Sin embargo, en la región de la huella digital los resultados son prácticamente invariables en cualquiera de los dos métodos para la muestra y el patrón. Por lo tanto la identificación del compuesto se puede realizar en cualquiera de los dos medios. Si se comparan los espectros de la literatura se tienen bandas similares, aunque en algunos casos varíe un poco la intensidad de las bandas.

La comparación de la muestra patrón con la muestra problema nos permite identificar la identidad de la muestra y la posible presencia de excipientes que pudieran interferir en el método de extracción. En vista de que la muestra y el patrón, presentan espectros similares y la región de la huella digital prácticamente presenta los mismos valores (incluso bajo los distintos métodos de preparación) se puede decir que el proceso de extracción fue realizado de una manera correcta, pues no existen bandas características que indiquen presencia de otros compuestos extraños, a menos que se encuentren dentro de las mismas longitudes de onda que incidan con el KBr o el Nujol. Se podría decir entonces que este espectro tiene un buen margen de comparabilidad y que si sería un método adecuado para realizar la práctica de análisis cualitativo de la muestra.

6. CONCLUSIONES:

La espectroscopía de Infrarrojo para el caso de aspirina brinda un buen método de identificación del compuesto y de sus grupos funcionales que son útiles en cuanto a su elucidación estructural.

La comparación entre la muestra patrón y la muestra en tabletas de aspirina, indica que el método de extracción del principio activo con etanol es indicado y correcto porque no se presentan interferencias visibles de excipientes u otros compuestos y que generen picos adicionales en los espectros.

El método preferible para la evaluación de los grupos funcionales del compuesto sería el de la realización de las pastillas de KBr, puesto que este compuesto no presenta tantas interferencias en la región de estudio como la preparación de la suspensión de Nujol.

Los dos métodos de preparación de muestra: suspensión de Nujol y pastillas de KBr son indicadas para la evaluación de la huella digital de la muestra, ya que no se presentan interferencias (a excepción de la zona de los 700-400 cm-1).

Es importante tener en cuenta varios detalles para obtener espectros adecuados como la escogencia del solvente, el calentamiento de la muestra, la regulación de la humedad del ambiente de trabajo y la limpieza y mantenimiento de las celdas.

7. BIBLIOGRAFÍA:

1. Merck-Chemicals. Etanol 96%. URL: http://www.merck-chemicals.com/colombia/etanol-96%25/MDA_CHEM-159010/p_W.Sb.s1LthUAAAEWtOEfVhTl?WFSimpleSearch_NameOrID=etanol&BackButtonText=search+results.

Fecha de Consulta: 21 de Abril de 2012. Hora:1:30 pm2. Merck-Chemicals. Parafina Líquida para espectroscopía Uvasol®. URL:

http://www.merckmillipore.com/colombia/chemicals/parafina/MDA_CHEM-107161/p_Wmub.s1L3dcAAAEW8eEfVhTl?WFSimpleSearch_NameOrID=8012-95-1+&BackButtonText=search+results. Fecha de Consulta: 21 de Abril de 2012. Hora: 1:30 pm.

3. Merck-Chemicals. Potasio Bromuro para espectroscopía IR Uvasol®. URL: http://www.merckmillipore.com/colombia/chemicals/potasio-bromuro/MDA_CHEM-104907/p_Wmub.s1L3dcAAAEW8eEfVhTl?WFSimpleSearch_NameOrID=Potasio+bromuro+para+espectroscopia+IR+Uvasol

%C2%AE&BackButtonText=search+results. Fecha de Consulta: 21 de Abril de 2012. Hora: 1:30 pm.

4. British pharmaceutical codex. Eleventh Edition. Pharmaceutical Press. 1979. Páginas 63-645. British Pharmacopoeia Commission. “British Pharmacopoeia”. Crown. 2009. Páginas 446. Avogadro. Material Safety Data Sheet: Acetylsalicylic Acid 99%. URL:

http://avogadro.chem.iastate.edu/MSDS/aspirin.htm. Fecha de Consulta: 21 de Abril de 2012. Hora:1:50 pm

7. Vademecum. Ácido Acetil-salicílico. URL: http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/a015.htm. Fecha de Consulta: 21 de Abril de 2012. Hora:1:50 pm

8. United States Pharmacopeial Convention.”Farmacopea de los Estados Unidos de América, USP 30 -NF 25”. Council of Experts.2007. Página 1446

9. S.Kinugasa, K.Tanabe y T. Tamura. Spectral Database for Organic Compounds SDBS. URL: http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/cgi-bin/direct_frame_top.cgi. Fecha de Consulta: 18 de Abril de 2012. Hora:6:30 pm

10. E.D. Olsen. “Métodos Ópticos de Análisis”. Editorial Reverté S.A. Barcelona, España. 1986. Páginas 176-178.

11. Universidad de la Habana. Espectroscopía Infrarrojo. URL: http://www.fq.uh.cu/dpto/qf/docencia/pregrado/estruc_2/ir/descargas/1_ir_tecnica.pdf. Fecha de Consulta: 25 de Abril de 2012. Hora: 08:00 pm