Inoculos
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INOCULOS
PREPARACIÓN DE INOCULOS PARA DISTINTOS PROCESO FERMENTATIVOS:
o FERMENTACIÓN LACTICA:
Preparación del inoculo:PARA Lactobacillus delbrueckii ssp. Y Streptococcus thermophilus
- Muestra: Leche fresca
- Pre tratamiento de la muestra:Para aislamiento de S. thermophilus calentar la leche a 60 °C, durante 30 minutos.
- Enriquecimiento:Homogenizar la muestra de lecheSembrar 1 mL de cada una de las muestras en tubos con 9 mL de caldo MRSIncubar los tubos a 30 °C en una atmosfera de 5 a 8 % de CO2durante 24 horas.
- Aislamiento: Tomar una asada de la muestra de leche enriquecida y sembrar mediante
la técnica de agotamiento y estría sobre agar Rogosa(placas de Petri) Incubar en jarra de Brewer a 30 °C por 24 horas Seleccionar las colonias brillantes, convexas, de 1 a 2 mm de diámetro
(Lactobacilos) y las colonias puntiformes (Streptococcus) Subcultivar en viales conteniendo agar Rogosa inclinado, para obtener
cultivos puros y proceder a su identificación
o FERMENTACIÓN ALCOHOLICA :
Preparación del inoculo:PARA Saccharomyces cerevisiae
- Obtención de mosto fermentado: Adquirir 0.5 kg de uva dulce tinta (pulpa y hollejo purpura) o tintórea
(hollejo purpura) Proceder al desgranado: Manualmente separar los granos del raspón en
cada racimo y colocarlos en un depósito limpio. En simultáneo eliminar los frutos deteriorados.
Realizar el estrujado: Triturar los granos de uva, lo suficiente para lograr la separación total de hollejo y la pulpa pero no para deteriorar las pepas
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Depositar el material resultante o mosto en un matraz de fermentación previamente esterilizado. Tapar con algodón e incubar a 30°C durante 24 horas. Cambiar el algodón por una tapa hermética de goma que presenta un agujero en el centro para permitir la salida del CO2 a través de una cánula que desemboca en un frasco conteniendo una solución de NaCl al 20%. Incubar a 30 °C durante 72 horas.
- Aislamiento de levaduras Tomar una alícuota del mosto fermentado y sembrar mediante la técnica
de agotamiento y estría sobre agar Sabouraud glucosado con antibiótico (placas de Petri)
Incubar a 30 °C durante 24 a 48 horas. Seleccionar las colonias redondas, blancas o cremosas, convexas, con
bordes enteros, de consistencia mantecosa, con un diámetro aproximado de hasta 5 mm.
Subcultivar las colonias levaduriformes en viales conteniendo agar Sabouraud glucosado inclinado e incubar a 30 °C durante 24 horas.
o FERMENTACIÓN ACETICA:
Preparación del inoculo:PARA Acetobacter y Gluconobacter
- Muestra:Frutas acidas: limón, naranja, lima, uva
- Enriquecimiento de la muestra: Depositar a 20 mL de cerveza en frascos de boca ancha. Sumergir por 15 minutos y en frascos separados de uva, manzana, limón y
naranja. Retirar los frutos Cubrir los frascos con gasa o malla para evitar la entrada de insectos Mantener la temperatura ambiente por 4 días Observar el crecimiento bacteriano en forma de un velo o película
blanquecina sobre la superficie
- Aislamiento: Tomar una pequeña porción de la película bacteriana desarrollada en las
muestras enriquecidas y sembrarla mediante la técnica de agotamiento y estría sobre agar Lee.
Incubar en aerobiosis a 30 °C durante 24 horas Realizar la tinción Gram Replicar a viales conteniendo Agar Manitol o un frasco con 25 mL de
cerveza
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