Kit para Pruebas de Alergias Inserto

REF I031-1011 Español

Un ensayo de inmunotransferencia para la determinación cualitativa de la circulación de

alérgeno específico de inmunoglobulina E (IgE) en el suero humano. Sólo para uso

profesional de diagnóstico in vitro.

USO PREVISTO

El kit de alérgeno prueba es un ensayo de inmunotransferencia para la determinación cualitativa de alérgeno específico inmunoglobulina E circulante en suero humano.

RESUMEN Una encuesta nacional en los Estados Unidos encontró que el 56,4% de todos los ciudadanos de

Estados Unidos dan positivo a uno o más alérgenos. Un aumento progresivo de la prevalencia de las enfermedades alérgicas a nivel mundial se ha producido con un 30-40% de la población mundial ahora se vean afectados por una o más condiciones alérgicas. La Inmunoglobulina E es especialmente importante para las alergias alimentarias que es parte de la hipersensibilidad tipo I. Ordinariamente Se produce al combatir las infecciones causadas por parásitos. Esta molécula también se produce frente a

los seres inofensivos como el polen, el polvo y los alimentos que pueden causar enfermedades alérgicas como asma, rinitis alérgica y alergia a los alimentos.

PRINCIPIO El kit de prueba de alérgenos NIC un ensayo de inmunotransferencia para la detección cualitativa de

anticuerpos IgE al alérgeno en el suero humano. La superficie de viaje de la membrana de nitrocelulosa de la prueba se recubre con alérgenos específicos. Durante las pruebas, se añade la muestra a la tira de ensayo y se incuban. Si la muestra contiene anticuerpos IgE específicos de alérgeno, puede reaccionar con los alérgenos y se unen a la membrana de nitrocelulosa de la tira. El material no unido se elimina mediante lavado. Los anticuerpos detectores (anticuerpo anti-IgE humana

junto con biotina) se añaden a la tira y se incuban. Los anticuerpos del detector se unirán a la respectiva IgE específica que se une a la banda en la primera incubación. Anticuerpos detectores no unidos se eliminan por lavado. A continuación, la estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina se añade a la tira de prueba y se incuba. Esto se unirá a la biotina, que se une a la tira en la segunda incubación. El conjugado de estreptavidina no unido se elimina mediante lavado. Entonces se añade el

sustrato y se incuba, lo que provocará una reacción de color enzimática específica de la fosfatasa alcalina. La intensidad del color que corresponde a la cantidad de alérgeno anticuerpo específico se interpreta mediante comparación con una carta de color. Para servir como control de productos, una línea coloreada aparecerá siempre en la zona de control que indica el procedimiento correcto.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Sólo para uso profesional de diagnóstico in vitro. No utilizar después de la fecha de caducidad. No mezcle reactivos de otros kits con diferentes números de lote.

Evite la contaminación cruzada entre los reactivos para asegurar resultados válidos. Muestras de seres humanos deben considerarse potencialmente peligrosas y manipularse usando

prácticas de trabajo bien establecidos en el laboratorio.

Algunos componentes de este kit contienen ProClin 300. Evitar cualquier contacto con la piel o los ojos.

Conjugado contiene Metilisotiazolinona y bromonitrobenceno en concentraciones subtóxicas como conservantes.

Use guantes desechables y ropa de protección, tales como batas de laboratorio y protección para los ojos durante la manipulación de los reactivos del kit y muestras. Lávese bien las manos cuando termine.

No comer, beber o fumar en el área donde las muestras o kits son manejados. No pipetear con la

boca. Aparatos que no sean desechables deben ser esterilizados después de su uso. El método preferido

es el autoclave durante una hora a 121 °C. Los materiales desechables debe ser tratados en

autoclave o incinerados. No esterilice en autoclave materiales que contengan hipoclorito de sodio. Maneje y disponga de todos los Especímenes y materiales utilizados para realizar la prueba como

si contuvieran agentes infecciosos. Observar las precauciones habituales contra riesgos microbiológicos durante todos los procedimientos y seguir los procedimientos estándar para la

eliminación adecuada de los especímenes.

Observar buenas prácticas de laboratorio al manipular productos químicos y material potencialmente infeccioso. Deseche todos los materiales contaminados, las muestras y los

reactivos de origen humano después de la descontaminación adecuada y siguiendo los reglamentos locales, estatales y federales.

Los ácidos neutralizados y otros líquidos deben descontaminarse mediante la adición de un volumen suficiente de hipoclorito de sodio para obtener una concentración final de al menos 1%.

A 30 minutos de exposición a un hipoclorito de sodio al 1%, puede ser necesario para asegurar una descontaminación eficaz.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Kits de prueba sin abrir deben almacenarse a 2-8 °C. Todos los reactivos no abiertos son estables

hasta la fecha de caducidad impresa a través de la casilla si se conserva entre 2-8 °C. Una vez abiertos, los reactivos deben mantenerse de 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

Permita que la bolsa sellada que alcance la temperatura ambiente antes de abrir la bolsa. Buffer de Lavado Concentrado puede almacenarse a temperatura ambiente para evitar la

cristalización. Si los cristales están presentes, calentar la solución en un baño de agua a 37 °C. La Solución de Trabajo de lavado es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente.

No exponga los reactivos, especialmente el sustrato, a la luz fuerte o vapores de hipoclorito durante las incubaciones. Si el sustrato adquiere color, ya no será adecuado para su uso.

RECOGIDA PREPARACIÓN Este kit se puede realizar utilizando sólo muestras de suero humano. Las muestras de sangre

deben ser adquiridos usando venopunción y separar el suero después de la coagulación (30-40 min.) por centrifugación durante 10 minutos a 4000g.

Separar el suero de la sangre lo antes posible para evitar la hemólisis. Hemolítica Macroscópicamente, las muestras lipídicas o turbias no debe utilizarse. Las muestras con extensas partículas deberán aclararse por centrifugación antes de su uso. No utilizar muestras con partículas de fibrina o contaminados con el crecimiento microbiano.

No deje las muestras a temperatura ambiente durante períodos prolongados. Las muestras de suero se pueden almacenar a 2-8 °C por hasta 7 días antes de ensayo. Para el almacenamiento a largo plazo, las muestras deben mantenerse congeladas a temperaturas por debajo de -20 °C.

Traiga las muestras a temperatura ambiente antes de la prueba. Las muestras congeladas deben

descongelarse completamente y se mezclaron bien antes de la prueba. Las muestras no deben ser congeladas y descongeladas repetidamente.

Si las muestras deben ser enviadas, deben ser empacados en el cumplimiento de las normas

locales que cubren el transporte de agentes etiológicos. REACTIVOS Y COMPONENTES

Materiales suministrados

No. Reactivo Descripción del Componente Cantidad

Tiras de prueba

Tiras de prueba de reacción de plástico,

membranas de nitrocelulosa revestidos con material de alérgeno

10

1 Buffer de Lavado Concentrado (25x)

Tris/NaCl, contiene o.1% Proclin™ 300, los rendimientos de 1 x tampón de lavado 500 ml, pH = 7,5

1x20 ml

2 Detector de anticuerpos Botella con tapón blanco, listo para su uso. Con biotina cabra conjugado Anti-anticuerpos IgE Humanos

1x4 ml

3 Conjugado

Botella con tapa de color rojo, listo para su

uso. Estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina contiene 0,02% y 0,02% metilisotiazolinona Bromonitriidodxane

1x4 ml

4 Sustrato

Botella con tapón negro, listo para su uso.

BCIP/NBT (Bromocloroindolyl fosfato/Nitro Azul Tetrazolium)

1x4 ml

Carta de Colores. 1

Inserto 1

Guía de inicio rápido 1

NOTA: Use solo los componentes con el mismo número de lote.

Configuración de la Tira de Prueba

Ubi. Abreviatura Productos de prueba

1 Línea Control Para comprobar si el ensayo se ha

llevado a cabo correctamente.

2 D1/D2 Der. pteronyssinus, Der. farinae

3 W1/W6 Ambrosia, Artemisa

4 E1/E5 Caspa de gato, caspa de perro

5 Línea de separación (rojo claro)

5 I6 Cucaracha

6 M1/M2/M3/M6

Penicillium chrysogenum, Cladosporidium herbarum, Aspergillus fumigatos, Alternaria

alternata.

7 W22 Hop Japonés

8 T7/T8/T11/T12/T14 Roble Blanco, Ulmus, Ficus, Sauce, Álamo.

10 Línea de separación (rojo oscuro)

11 F1 Clara de Huevo

12 F2 Leche de Vaca

13 F3/F24/F23 Pescado, Camarón, Cangrejo

14 F27/F88 Carne de res, Carne de cordero

15 Línea de separación (rojo oscuro)

16 F202/F13/F14 Nueces, Maní, Soja

17 F91 Mango

18 F4 Trigo

19 IgE Total IgE Total

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Agua Recién destilada o agua desionizada • Vortex mezclador Cilindros graduados para la dilución tampón de lavado • Cronómetro

Botella de 500 ml para lavado • Secador De Pelo Depósitos de reactivos desechables • Agitador Caja de incubación (para la incubación en la oscuridad) • Guantes desechables

INSTRUCCIONES DE USO

Deje que los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente (18-25 °C) antes de la prueba. Los reactivos se deben mezclar bien antes de usar. La reproducibilidad de los resultados depende en

gran medida de la exactitud de pipeteo, el mantenimiento de los tiempos de incubación y la temperatura, así como la uniformidad de lavado de las tiras de prueba. El procedimiento se debe seguir estrictamente. Ensayo deberá concluirse dentro de los plazos. NOTA: 1. Asegúrese de que la cubeta de reacción está completamente cubierta por soluciones durante cada

uno de los pasos de amortiguación, de incubación y lavado. 2. La incubación del sustrato debe ser llevada a cabo en la oscuridad para evitar la auto-coloración

del sustrato. Se recomienda encarecidamente a incubar las tiras de prueba en una caja de incubación durante cada proceso de incubación.

Paso Procedimiento detallado

1 Preparar trabajo tampón de lavado diluyendo el tampón de lavado concentrado 1:25. Diluir 1 volumen de Buffer de Lavado Concentrado (25x) con 24 volúmenes de agua recién destilada en una botella de lavado. Mezclar bien antes de usar.

2

Añadir 250 µl de la solución de lavado de trabajo en la pila de reacción; mojar la cubeta de

reacción; mojar la cubeta de reacción sacudiéndolo (en un agitador) a temperatura ambiente (18-25 °C) durante 5 minutos. Retire el tampón de lavado de trabajo y limpie el exceso de agua en la superficie de plástico usando un papel absorbente.

3

Primera Incubación: Añadir 250 µl de las muestras de suero en las cubetas de reacción

entonces se incuba en el agitador a temperatura ambiente (18-25 C) durante 45 minutos. Retire las muestras de suero después de la incubación.

NOTA: Deseche la muestra de suero con cuidado y evitar la contaminación cruzada de la cubeta de incubación.

4

Lave las tiras reactivas 6 veces con tampón de lavado de trabajo mientras se mantienen el

canal de reacción en diagonal. Agitar la solución en la cubeta manualmente durante unos 10 segundos y luego retire el tampón de lavado de trabajo. Limpiar el exceso de solución en la superficie de plástico utilizando tejido absorbente. NOTA: lavado completo es importante. Agite la solución de lavado de trabajo en el canal durante varios segundos antes de verterla a cabo para asegurar el lavado eficaz.

5 Segunda Incubación: Añadir 5 gotas (250 µl) del anticuerpo detector luego incubar en el agitador a temperatura ambiente (18-25 C) durante 45 minutos. Retire el exceso de anticuerpo detector después de la incubación.

6 Repetir el Paso 4.

7 Tercera Incubación: Añadir 5 gotas (250 µl) de Conjugado luego incubar en el agitador a temperatura ambiente (18-25 °C) durante 20 minutos. Retire el exceso de conjugado después de la incubación.

8 Repetir el Paso 4.

9

Cuarta Incubación: Añadir 5 gotas (250 µl) de sustrato luego incubar (en la oscuridad) en

el agitador a temperatura ambiente (18-25 C) durante 20 minutos en oscuridad. Retire el exceso de sustrato después de la incubación. NOTA: La incubación del sustrato debe ser llevada a cabo en la oscuridad para evitar la auto-coloración del sustrato.

10 Enjuague la tira bajo el agua que fluye para detener la reacción del substrato. Limpiar el

exceso de agua sobre la superficie de plástico utilizando tejido absorbente.

11

Seque la tira en el aire o mediante el uso de un secador de Hait convencional que acelerará el proceso de secado. El color azul-púrpura del fondo desaparece a medida que la tira reactiva seca. NOTA: La tira de prueba se debe secar completamente antes de leer los resultados

12

Comparar la tira de la muestra con la tira con la carta de colores. Una evaluación cualitativa de esas líneas es posible por comparación visual de la intensidad de color de cada línea de la tira con la carta de colores. NOTA: La línea de control debería aparecer ahora, que se utiliza para comprobar si el

ensayo se ha llevado a cabo correctamente.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

IgE Alérgeno-específica

Clase Intensidad del color Interpretación

- No aparece línea de color. Negativo

+ Línea de color tenue. Baja concentración de IgE específica de Anticuerpos

++ Línea de color media. Concentración media del alérgeno específico IgE Anticuerpos

+++ Línea de color fuerte. Alta concentración de IgE específica de anticuerpos

1. Un resultado negativo indica que el paciente es no atópica. 2. Un resultado positivo indica que el paciente puede ser atópica a este alérgeno. 3. La mayor concentración de alérgenos específicos anticuerpo IgE es decir, el grado más alto es el

paciente está sufriendo la atópica. IgE Total

Clase Intensidad del color Interpretación

- No aparece línea de color.

La concentración de IgE total es menor que el límite de detección.

+ Línea de color tenue. Baja concentración de anticuerpos IgE total

++ Línea de color media.

+++ Línea de color fuerte. Alta concentración de anticuerpos IgE total

1. Resultado es positivo, que indica que el paciente puede ser atópica. 2. La prueba IgE total de este kit no puede reemplazar el sistema único, cuantitativa ELISA prueba. NOTA: Los resultados de las pruebas no se consideran válidas si no se cumplen los requisitos de

validación de abajo.

REQUISITOS DE VALIDACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD

Una línea roja que aparece en la línea de control que aparece en la zona de control se considera como un procedimiento de control interno. Confirma realizado correctamente la técnica. La prueba debe ser considerada como válida si la intensidad del color de la línea de control es inferior en comparación con

la carta de colores. Compruebe la fecha de caducidad del kit de prueba y asegurarse de que todos los reactivos no se han abierto durante más de 1 mes. Revise el procedimiento para asegurarse de que el procedimiento de prueba se ha seguido correctamente y repita la prueba con una nueva prueba con una nueva tira reactiva. Si el problema persiste, deje de utilizar ese lote y contacte con su distribuidor local.

LIMITACIONES 1. El equipo de pruebas de alérgenos se utiliza para la determinación de hacer circular alérgeno

específico de inmunoglobulina E (IgE) en el suero humano: El diagnóstico no debería establecerse sobre la base de un único ensayo. Además las pruebas deben realizarse en la evaluación de la

situación clínica. 2. Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, los resultados deben ser interpretados junto

con otra información clínica disponible al médico. 3. Los pacientes ingresados con resultados positivos de Alérgenos Test Kit pueden no tener síntomas

clínicos relacionados si sólo son durante un período de sensibilización y sin relevancia clínica.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO 1. Sensibilidad: 0.35 UI/mL 2. Especificidad: la tasa de la reactividad cruzada de la IgA, IgG y IgM humana, etc. <0.21%. 3. Precisión: Intra para repetitivos >99.9%

BIBLIOGRAFIA

1. Arbes SJ y colaboradores. Las prevalencias de pruebas cutáneas positivas a 10 alérgenos comunes en la población de Estados Unidos: Los resultados de la Encuesta de Nutrición Salud Tercer Examen Nacional; J Allergia Clin Immuniol. 2005; 116: 377-383

2. Wao (Organización Mundial de Alergia) Libro blanco de 2011.

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