6- MONOGRAFÍAS - ANALITOS Y TECNICAS TOXICOLOGICAS Estas monografías dan la información práctica sobre la detección e identificación de algunos venenos comunes o grupos de venenos. ACIDO SALICÍLICO Y DERIVADOS

• Acido salicílico Acido 2-hidroxibenzoico; C7H6O3; la masa molecular relativa, 138,

Figura 1 : ESTRUCTURA QUÍMICA El ácido Salicilico se usa para tratar en forma de tópicos varias alteraciones dermatológicas. Aparece en el plasma como el metabolito principal del ácido acetilsalicílico y puede también provenir del salicilato de metilo y salicilamida. El ácido salicílico es excretado en la orina, como un conjugado con glicina (ácido salicilúrico). Los derivados del ácido salicílico descriptos debajo son los que normalmente se encuentran.- • Acido Acetilsalicilico Aspirina; C9H8O4; masa molecular relativa, 180,

Figura 2 : ESTRUCTURA QUÍMICA

El ácido acetilsalicílico es el más frecuentemente usado como derivado de ácido salicílico. Se usa como un analgésico y también es el metabolito de aloxiprina y benorilato. La dosis letal mínima estimada en un adulto es 15 g. El ácido acetilsalicílico se metaboliza rápidamente por esterasas del plasma in vivo a ácido salicílico quien a su vez se excreta principalmente por la orina como un conjugado con glicina (el ácido salicilúrico). Acido 4-Aminosalicilico Acido p-Aminosalicilico PAS; ácido 4-amino-2-hidroxibenzoico: C7H7NO3; masa molecular relativa, 151,

Figura 3: ESTRUCTURA QUÍMICA El Acido 4-aminosalicilico se usa en el tratamiento de tuberculosis.

Metil salicilato Metilo 2-hidroxibenzoato; ácido salicílico metil éster; C8H8O3; masa molecular relativa, 152,

Figura 4: ESTRUCTURA QUÍMICA El salicilato de metilo (aceite de wintergreen) es un líquido fuerte a temperatura ambiente y es ampliamente usado en productos tópicos medicinales. Cuando se ingiere es más tóxico que el ácido del acetilsalicílico porque se absorbe más rápidamente. Las muertes han ocurrido en los niños

después de la ingestión de una dosis tan pequeña como 4 ml; en adultos la dosis fatal es de 30 ml. El salicilato de metilo se metaboliza parcialmente a ácido salicílico in vivo.-

• Salicilamida 2-Hidroxibenzamida; C7H7NO2; masa molecular relativa, 137,

Figura 5: ESTRUCTURA QUÍMICA La salicilamida se usa como un analgésico. Con hidrólisis, forma el ácido salicílico. Los salicilatos dan un color púrpura con iones férricos y esta reacción es la base de la prueba descripta.. Una simple prueba es colocar una tira que tiene impregnado el ion férrico en la orina y da la reacción.- En cambio el ácido Acetilsalicilico y salicilatos de metilo no se hacen reaccionar con los iones férricos, ya que el contenido estomacal y residuos de la escena deben ser hidrolizados antes que el análisis sea desarrollado. La salicilamida es sólo detectable después de la hidrólisis incluso en muestras de orina.- Test cualitativo Aplicable a orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos Reactivo de Trinder. Mezcle 40 g de cloruro mercúrico disuelto en 850 ml de agua destilada con 120 ml de solución acuosa de ácido clorhídrico (1 mol/l) y 40 g de nitrato férrico hidratado, y diluir a 1 litro con agua destilada.- Método Agregue 0.1 ml del reactivo de Trinder a 2 ml de muestra y mezcle para 5 segundos. Para probar para ácido acetilsalicilico o salicilato de metilo en contenido estomacal y residuos de la escena, y para salicilamida en orina, contenido estomacal y residuos de la escena, primero hervir 1 ml de muestra con 1 ml de solución acuosa de ácido clorhídrico (0.1 mol/l) durante 10 minutos, enfriar,

filtrar si fuera necesario, y entonces neutraliza con 1 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio (0.1 mol/l). Resultados Un color violeta fuerte indica la presencia de salicilatos. Los preservantes azidas reaccionan fuertemente con este test y pueden dar reacciones falsas positivas en orina conteniendo altas concentraciones de cetonas (cuerpos cetónicos) Esta prueba es sensible y detectará dosis terapéutica con ácido salicilico, el ácido acetilsalicílico, 4-amonosalicílico, metilsalicilato y salcilamida.- Sensibilidad Salicilato, 10 mg/l. Ensayo cuantitativo Aplicable a plasma o suero (1 ml). Reactivo Reactivo de Trinder (vea anteriormente). Estándares Soluciones acuosas que contienen ácido salicilico en las siguientes concentraciones de 0, 200, 400 y 800 mg/l. Mantener a 4°C cuando no se use.- Método 1. Agregue 5 ml del reactivo de Trinder a 1 ml de muestra o estándar.- 2. Mezclar en vortex por 30 segundos y centrifugar durante 5 minutos. 3. Medir la absorbancia del sobrenadante a 540 nm contra blanco del plasma . Resultados Luego de graficar la curva con las concentraciones de los estándares, calcular la concentración de salicilatos del plasma extrapolando en el gráfico. Algunos metabolitos interfieren, pero las concentraciones en plasma de estos compuestos son usualmente bajos. Por ejemplo, los oxalatos y los fluoruros en la sangre cuando se agregan como anticoagulantes interfieren en esta prueba.- Sensibilidad

Salicilatos, 50 mg/l. Interpretación clínica El uso tópico del ácido salicílico y salicilato de metilo y la ingestión de salicilatos puede dar lugar a síntomas de salicilismo. La alcalosis respiratoria seguida de acidosis metabólica es característica, aunque en la práctica es frecuente un disturbio ácido base. Los resultados de gases en sangre son una guía importante para intoxicaciones severas . Si se sospecha envenenamiento agudo, la concentración de salicilatos en el plasma debe medirse usando el método descrito anteriormente. Dentro de las medidas para corregir el estado ácido-base se puede considerar la alcalinización urinaria para reforzar la eliminación del venenoque va a depender de la condición del paciente y la concentración de salicilato que haya en el plasma. Se puede emplear dosis seriadas de carbón activado . Las medidas seriadas de pH en orina y sangre es un buen monitoreo. Una guía para la interpretación de los resultados de salicilatos en el plasma se da en la Fig. 13. Concentraciones más altas que 300 mg/l durante la terapia en los adultos.

ACIDO FÓRMICO Y FORMIATOS El ácido fórmico (HCOOH; masa molecular relativa, 46), solución incolora muy corrosiva. Los formiatos como el formiato de sodio (HCOONa) se usan como sustancias sintéticas intermedias en el tiñendo, imprimiendo en las industrias de curtiembre El ácido fórmico es un metabolito del metanol y formaldehído. La dosis letal mínima de ácido fórmico en un adulto es aproximadamente 30 ml La prueba inicial dada debajo debe usarse si se sospecha de ácido fórmico. En la prueba de confirmación del ácido fórmico y formiatos están reducido a formaldehído con que puede descubrirse entonces por la reacción del ácido cromotrópico. Prueba cualitativa Muestra : contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Reactivo ácido cítrico /acetamida. Ácido cítrico (5 g/l) y acetamida (100 g/l) en propan-2-ol. 2. Solución de acetato de sodio (300 g/l). 3.Anhídrido acético. Método 1.Agregar 0.5 ml de la solución de la muestra a 1 ml de reactivo ácido cítrico/acetamida, luego agregar 0.1 ml de solución del acetato de sodio y 3.5 ml de anhídrido acético. 2.Mezclar durante 5 segundos y calentar en un baño de agua hirviente durante10 minutos. Resultados Una coloración roja indica la presencia de ácido fórmico. El formaldehído y las sales del formiato no reaccionan en esta prueba. Sensibilidad Ácido fórmico, 50 mg/l. Prueba confirmatoria Muestra : contenido estomacal y residuos de la escena.

Reactivos 1.Solución de ácido clorhídrico (2 mol/l). 2.Magnesio en polvo 3.Ácido cromotrópico (sólido). 4.Ácido sulfúrico concentrado(1.83). Método 1. Agregar 0.1 ml de solución diluida de ácido clorhídrico a 0.1 ml de solución de la muestra y mezclar durante 5 segundos. 2. Suavemente agregar aproximadamente 100 mg de polvo de magnesio hasta que cese la emanación de gas. 3.Agregar aproximadamente 100 mg de ácido del cromotrópico y mezclar por 5 segundos 4. Cuidadosamente agregue 15 ml de ácido sulfúrico concentrado y caliente en un baño de agua a 60°C durante 10 minutos. Resultados Un color púrpura-violeta indica la presencia de formiatos o ácido fórmico. El formaldehído reacciona sin la reducción anterior. Sensibilidad Formiato, 50 mg/l. Interpretación clínica El ácido fórmico es muy corrosivo para los tejidos, y la ingestión puede causar quemaduras y ulceración de boca y garganta, corrosión de glotis, esófago y estómago, acidosis metabólica, hemólisis intravascular, hemolisis, coagulación intravascular diseminada, fallo circulatorio, renal y respiratorio. El tratamiento es sintomático y de sostén.

Alcanfor Bornan-2-uno; C10H16O; masa molecular relativa, 152 Figura 6 : ESTRUCTURA QUIMICA

El alcanfor es un rubefaciente que es usado en bolitas para polillas. Este es obtenido por destilación de la madera de campora cinnamomun o sintéticamente y es metabolizado por hidroxilación y excretado como glucurónidos por orina.- El envenenamiento por alcanfor es usualmente por ingestión de combustibles. La dosis fatal en un adulto puede ser tanto como 4 g. No hay un estudio simple cualitativo para este compuesto. Aunque el alcamfor tiene un olor muy fuerte y la detección por el aliento o en orina puede ayudar al diagnóstico.- Interpretación clínica La ingestión de alcanfor causa náusea, vómitos, dolor de cabeza, vértigo, confusión, excitación, alucinaciones, pupilas dilatadas, en casos severos coma, convulsiones y fallo hepatorrenal. El tratamiento es sintomático y de sostén.

AMINOFENAZONAS Amidopirina, aminopirina, 4-dimetilamino -1,5-dimetil -2-fenil - 4-pirazolin-3-uno; C13H17N3 O; masa molecular relativa: 231. Figura 7 : ESTRUCTURA QUÍMICA

La Aminofenazona es un analgésico y antipirético poco utilizado en la actualidad desde que se conoció su toxicidad potencial sobre la médula ósea que provoca agranulocitosis y necrosis tubular renal pueden después de la dosificación terapéutica. La ingestión de aproximadamente 10 g puede causar severo envenenamiento agudo en un adulto. Prueba cualitativa Muestra: orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución de Hidróxido de sodio (1 mol/l). 2. Solución de nitrato de plata (100 g/l). 3. Solución de ácido clorhídrico (5 mol/l). 4. Nitrito de potasio (sólido). Método 1. Agregar 1 ml de solución del hidróxido de sodio a 5 ml de muestra y agregar 10 ml de cloroformo. 2. Mezclar durante 5 minutos, centrifugar y desechar la fase acuosa superior.

3. Filtrar el extracto de cloroformo a través de papel de filtro a un tubo limpio, evaporar a la sequedad bajo aire comprimido o nitrógeno, y reconstituir el residuo con 1 ml de agua purificada. 4. Agregar 0.5 ml de solución del nitrato de plata a 0.5 ml del extracto reconstituido. 5. Agregar 1 ml de ácido clorhídrico y aproximadamente 1 mg de nitrito de potasio sólido a la porción restante del extracto. Resultados Con el agregado de nitrato de plata (paso 4), una solución azul que se torna negra indica presencia de aminofenazona. En el paso 5, el nitrito de potasio imparte una coloración azul-violeta que rápidamente desaparece. La aminofenazona también puede detectarse por cromatografía capa delgada a partir de un extracto básico de orina, contenido estomacal o residuos de la escena, y esto siempre debe realizarse además de la prueba colorimétrica. Sensibilidad Aminofenazona, 50 mg/l. Interpretación clínica La sobredosis de aminofenazona puede causar hipotensión, convulsiones, y delirio. El tratamiento es sintomático y de sostén. Determinaciones cuantitativas no se requieren para el tratamiento.

AMITRIPTILINA 3-(10,11-dihidro-5H-dibenzo[a,d]cicloheptan-5-ylidene);C20H23N masa molecular relativa: 277. Figura 8 : ESTRUCTURA QUÍMICA

La amitriptilina es un antidepresivo triciclico ampliamente usado. Es metabolizado por N-demetilación a nortriptilina que es un antidepresivo propiamente dicho. La protriptolina es un análogo de amitriptilina. No hay ninguna prueba cualitativa simple para la amitriptilina, pero este compuesto y otros antidepresivos triciclicos pueden detectarse e identificarse fácilmente por cromatografía en capa delgada a partir de un extracto de solvente básico de orina, contenido estomacal o residuos de la escena Interpretación clínica El envenenamiento agudo con amitriptilina y otro antidepresivos triciclicos pueden causar midriasis, hipotensión, hipotermia, arritmias cardíacas, respiración deprimida, coma, convulsiones y fallo cardiorespiratorio. La retención urinaria también es un rasgo de envenenamiento con estos compuestos, y esto puede demorar la obtención de la muestra para el análisis apropiado. El tratamiento es generalmente sintomático y de sostén. El uso generalmente de agentes antiarrítmicos deben evitarse, pero puede emplearse alcalinización usando bicarbonato de sodio. La cuantificación en sangre normalmente no se requiere para el manejo de esta intoxicación.

ANFETAMINAS Alfa-Metilfenetilamina; C9H13N; Masa molecular relativa:135, Figura 9: ESTRUCTURA QUÍMICA

La anfetamina y los análogos del N-metilo, la metanfetamina, son estimulantes del sistema nerviosos central y se abusa ampliamente. No hay ninguna prueba cualitativa simple para las anfetaminas, pero este y otros compuestos similares pueden detectarse e identificarse por cromatografía en capa delgada a partir de un extracto de solvente básico de orina, contenido estomacal o residuos de la escena. Sin embargo, el extracto debe acidificarse con el agregado de 0.5 ml de solución metanólica de ácido clorhídrico (2 ml/l) para prevenir la pérdida de bases volátiles a la evaporación.- Prueba cualitativa Muestra: orina, contenido estomacal y residuos de la escena, polvos A) Reactivo de Marquís

1. Solución de formaldehído al 40% 2. Ácido sulfúrico concentrado

Método 1. Colocar una pequeña cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) en una placa y agregar el reactivo de Marquís gota a gota no más de tres gotas.- Resultados La aparición de un color anaranjado que cambia al pardo indica la presencia de anfetamina como metanfetamina. - Sensibilidad Anfetaminas , 1 ug. B) Reactivo de ninhidrina

1.- Solución acetónica de ninhidrina (0,5 grs. de ninhidrina en 40 ml de acetona)

Método 1. Colocar una pequeña cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) en un papel de filtro y agregar una gota de reactivo. Calentar a 110°C sobre una plancha calefactora, con el calor el color cambia a rosado-naranja. No es un ensayo muy sensible.- Resultados La aparición de un color rosado-anaranjado luego de calentar indica la presencia de anfetaminas.- C) Reactivo de Simon

1.- Solución acuosa de carbonato sódico al 20%.- 2.- Solución etanólica de acetaldehído al 50%.- 3.- Solución acuosa de nitroprusiato de sodio al 1%.-

Método Colocar una pequeña cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) sobre una placa de ensayo y agregar una gota de la solución 1, Agregar a continuación una gota de la solución 2 y unas cuantas gotas de la solución 3 . Resultados Produce un color azul para la metanfetamina y otras aminas secundarias. La anfetamina y otras aminas primarias producen un color rosado que cambia lentamente a rojo cereza. Este ensayo puede utilizarse para diferenciar la metanfetamina de la anfetamina. Algunos agentes reductores pueden dar falsos negativos.- - D) Cromatografía de capa delgada (CCD) Disolventes de desarrollo 1.-Sistema A (metanol:amoníaco concentrado) (100:1,5) 2.-Sistema B (ciclohexano:tolueno:dietilamina) (75:15:10)

SOLUCIONES ACUOSAS DE LAS MUESTRAS Aplicar las muestras y testigos sobre las placas de TLC. Colocar en las cubas de cromatografía en los dos solventes utilizados. Soluciones patrones Anfetaminas 5mg /ml en metanol VISUALIZACION Las placas deben secarse antes del examen visual a temperatura ambiente o utilizado corriente de aire se debe eliminar todo vestigio de amoníaco en la placa.- Metodos de visualización 1.- Luz ultravioleta a 254 nm 2.- Reactivo de ninhidrina.( 0.1% en alcohol isopropílico) 3,.-Reactivo de yodoplatínato potásico acidificado. (0.25 grs de cloruro platínico más 5 grs de yoduro potásico llevar a 100 ml con agua destilada y agregar 2 ml de ácido clorhídrico concentrado) Primero se observa la placa al UV. Pulverizar con ninhidrina y calentar en un horno a 110°C durante 5 minutos. Las aminas primarias como las anfetaminas producen manchas violetas o rosadas, mientras que las aminas secundarias como la metanfetamina, produce manchas de color más claro. A continuación se pulveriza con solución de iodoplatínato acidificado. Las anfetaminas y metanfetaminas dan un color gris-violeta –pardo sobre un fondo rosado.- Advertencia: Tener mucho cuidado porque la volatilidad de las bases libres de anfetaminas, a la temperatura empleada en los disolventes de evaporación de la placa se puede perder la muestra.- Interpretación clínica La sobredosis de anfetaminas oral o intravenosos pueden causar hipertermia, convulsiones, coma, falla respiratoria y/o cardíaca, pero muerte por intoxicación aguda por anfetaminas es raro. El tratamiento es generalmente sintomático y de sostén. La cuantificación en sangre normalmente no se requiere para el manejo de esta intoxicación.

ANILINA Fenilamina; C6H5NH2; masa molecular relativa: 93. La anilina se usa principalmente como un intermediario en la fabricación de las tinturas y otros químicos. Se metaboliza a p-aminofenol y p-acetamidofenol que se excreta en orina como sulfato y glucurónidos conjugados. Por la hidrólisis de la orina, el p-aminofenol es reformado, y puede detectarse usando la prueba del o-cresol/amoniaco. La anilina y otras aminas aromáticos primarias forman diazo compuestos con el ácido nitroso los cuales se unen con 1-naftiletilendiamina para formar derivados muy coloreados. Esta reacción es la base de la prueba confirmatoria descripta a continuación. Prueba cualitativa Muestra: orina. Prueba: o-cresol/amoniaco. Reactivos 1. Acido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1.18). 2. Solución de o-cresol (10 g/l). 3. Solución de hidróxido del amonio (4 mol/l). Método 1. Agregar 0.5 ml de ácido clorhídrico a 0.5 ml de muestra, hervir por 10 minutos y enfriar. 2. Agregar 1 ml de solución del o-cresol a 0.2 ml del hidrolizado. 3. Agregar 2 ml de solución de hidróxido de amonio y mezclar durante 5 segundos. Resultados Una coloración azul fuerte, desarrollada rápidamente indica la presencia de p-aminofenol. Metabolitos del paracetamol (y fenacetina) y los nitrobencenos también dan p-aminofenol en la hidrólisis y pueden interferir. El etilenediamino (por ejemplo de la aminofilina da un color verde con esta prueba. Sensibilidad p-Aminofenol, 10 mg/l.

Prueba confirmatoria Muestra: Contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución de nitrito de sodio (2 g/l, preparar en el momento). 2. Solución de ácido clorhídrico (2 mol/l). 3. Solución acuosa de sulfato de amonio (10 g/l). 4. Solución dihidroclorhídrica de N-(1-naftil)etilendiamina (2 g/l, preparar en el momento). Método 1. Mezclar 0.1 ml de solución del nitrito de sodio y 0.2 ml de ácido clorhídrico diluido en un tubo de prueba de 5 ml. 2. Agregar 0.1 ml de muestra, mezclar y dejar descansar 2 minutos. 3. Agregar 0.2 ml de solución de sulfato de amonio seguidos por 0.1 ml de solución N-(1-naftil)etilendiamina dihidroclorhídrica. Resultados Una coloración purpúrea después de 1 minuto indica la presencia de anilina. Sensibilidad Anilina, 10 mg/l. Interpretación clínica Normalmente el envenenamiento con anilina es el resultado de la inhalación o la absorción dérmica. Los síntomas ocurren dentro de 1-3 horas de exposición e incluyen confusión, náuseas, vómitos y diarrea, convulsiones, coma y daño hepático y renal en los casos severos. Hemólisis, metahemoglobinemia (sangre color chocolate) puede observarse . Las pruebas de la función hepáticas y renales son esenciales, sin embargo el tratamiento puede incluir azul de metileno intravenoso, pero esto está contraindica en pacientes con deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, por el alto riesgo de inducir hemólisis.

ANTIMONIO Las sales de antimonio (Sb) trivalente y el pentavalente se usan parenteralmente en el tratamiento de esquistosomiasis y leishmaniasis. También se usan las sales del antimonio en los pigmentos y abrasivos. El antimonio como el bismuto, mercurio y el arsénico pueden investigarse en la prueba de Reinsch. Prueba cualitativa Muestra: Orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Ácido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1.18). 2. Solución de ácido clorhídrico (2 mol/l). 3. Lamina o malla de cobre (5 Î 10 mm) o alambre (2-3 centímetro). 4. Solución del ácido nítrico (500 ml/l). Método 1. Inmediatamente antes de usar, limpie la lamina, malla o alambre con ácido nítrico hasta que el cobre adquiere una superficie luminosa. 2. Enjuague el cobre con el agua destilada y agregue 10 ml de ácido clorhídrico concentrado y 20 ml de solución de la prueba en un frasco cónico de 100 ml. 3. Calentar en un baño de agua hirviente durante 1 hora. Mantenga el volumen de la solución agregando ácido clorhídrico diluido cuando sea necesario. 4. Enfriar y suavemente lavar la laminilla de cobre con el agua destilada. Resultados Las manchas en el cobre pueden interpretarse como sigue: Negro purpúreo - Antimonio Negro embotado - Arsénico Negro brillante - Bismuto

Plateado - Mercurio El selenio y el telurio también pueden dar depósitos oscuros, mientras que concentraciones elevadas de azufre pueden dar una apariencia manchada a la lamina de cobre. Una estimación de la concentración de antimonio en la muestra puede realizarse por la comparación del depósito en la lámina de cobre con el obtenido con una solución que contiene una concentración conocida del elemento. Sensibilidad Antimonio, aproximadamente 2 mg/l. Prueba confirmatoria Aplicable a la laminilla de cobre (negro purpúreo) de la prueba anterior. Reactivos 1. Solución de cianuro de potasio (100 g/l).. 2. Solución del sulfito de sodio (50 g/l, recientemente preparada). 3. Solución de ácido nítrico (3 mol/l). 4. Reactivo de Quinina/ yoduro de potasio. Disuelva 1 g de sulfato de quinina en 100 ml de agua destilada que contiene 0.5 ml de ácido nítrico concentrado (densidad 1.42 relativa). Cuando la quinina este completamente disuelto, agregue 2 g de yoduro de potasio. Método 1.Colocar la laminilla de cobre en la solución de cianuro de potasio y dejar 10 minutos. 2. Lavar cualquier mancha no disuelta con agua destilada y agregar 1 ml de la solución del sulfito de sodio y 1 ml de solución de ácido nítrico. 3. Agitar frecuentemente durante 5 minutos y agregar 1 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo de Quinina/ yoduro de potasio.

Resultados Las manchas debido al arsénico se disuelven en la solución de cianuro de potasio, mientras que las manchas de bismuto y antimonio no lo hacen. El bismuto en forma lenta forma una suspensión anaranjada – marrón con el reactivo de Quinina/ yoduro de potasio. Sensibilidad Antimonio, aproximadamente 2 mg/l. Otra prueba La lámina de cobre se introduce en un tubo de ensayo, cuyo fondo se calienta vigorosamente; se extrae la laminilla y se deja enfriar bien. Luego se agrega al tubo una gota de ácido clorhídrico concentrado, una gota de nitrito de sodio al 30%. Agitar y dejar dos minutos. Luego tres gotas de rodamina B. Si hay Antimonio se observa coloración violeta. Compare con el color del reactivo. Esta reacción se puede sensibilizar agregando benceno o tolueno y 1ml de agua, agitar, la coloración violeta pasa a la fase bencénica, mientras que la coloración debida al reactivo desaparece luego de un cierto tiempo. La reacción expuesta debe ser llevada paralelamente con un ensayo de blanco para apreciar debidamente la variación de color Interpretación clínica La administración parenteral de sales del antimonio puede llevar a cardiotoxicidad, colapso y muerte por shock anafiláctico. El envenenamiento industrial es normalmente debido a la inhalación de vapores o polvos de los compuestos de antimonio Los síntomas de una intoxicación aguda por antimonio se parecen a la intoxicación aguda por arsénico e incluye dolor abdominal, vómitos y diarrea. La cuantificación de las concentraciones del antimonio en sangre es útil en el diagnostico de la intoxicación aguda, pero esto requiere espectrofotometría y de absorción atómica.

ARSÉNICO Varios pesticidas contienen arsénico (As) en la forma de ácido, el ácido dimetilarsenico, arsenito, arseniato y sales de metaarseneato. Los compuestos arseniacales también se usan en la fabricación de cerámicas y de vidrio. El gas arsina (AsH3) se usa en ciertos procesos industriales y también puede ser liberado accidentalmente de otros productos arsenicales. Como con el antimonio, bismuto y el mercurio, el arsénico puede detectarse e identificarse con la prueba de Reinsch. El método descripto a continuación es el ensayo cuantitativo para medir las concentraciones de arsénico urinario. Es un procedimiento modificado por Gutzeit. La arsina se genera por la reacción de los compuestos que contienen arsénico en la muestra con hidrógeno naciente. La arsina es transportada en corriente de hidrógeno a través de un filtro impregnado con acetato de plomo (para eliminar los sulfidrilos), y el arsénico es atrapado en un tubo acodado con solución de dietilditiocarbamato de plata en piridina. Prueba cualitativa Aplicable a orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Prueba de Reinsch – ver monografía de antimonio Sensibilidad Arsénico, aproximadamente 5 mg/l. Prueba confirmatoria. Reactivo Solución de cianuro de potasio (100 g/l). Método Colocar la laminilla de cobre en la solución de cianuro de potasio y dejar por 10 minutos. Resultados Las manchas de arsénico se disuelven en la solución de cianuro de potasio mientras las manchas debido al bismuto y antimonio no lo hacen.

Sensibilidad Arsénico, aproximadamente 5 mg/l. Ensayo cuantitativo Aplicable a orina. Reactivos 1. Solución del dietilditiocarbamato de plata (5 g/l) en piridina. 2. Solución de acetato de plomo (200 g/l). 3. Cloruro de estaño (II) (330 g/l) en solución de ácido clorhídrico (200 ml/l). 4. Ácido clorhídrico concentrado (densidad 1.18 relativa).

5. Yoduro de potasio (sólido). 6. Cinc granulado. Estándar. Disolver 2.4 g de tricloruro de arsénico en 1 litro de ácido clorhídrico diluido (1mol/l); esto da una solución que contiene una concentración de arsénico de 1

g/l. Diluir con agua destilada para dar soluciones que contienen concentraciones de arsénico de 0.5, 2.0, 5.0 y 10.0 mg/l. Método. 1. Limpiar el aparato de Gutzeit modificado con acetona y secar. 2. Embeber un tapón de lana de vidrio en solución de acetato de plomo y dejar que se seque a temperatura ambiente. 3. Colocar la lana de vidrio tratada en la parte superior del extremo del tubo de seguridad (capilar). 4. Colocar 3.0 ml de solución de dietilditiocarbamato de plata en el tubo acodado. 5. Agregar 2 g de yoduro de potasio y 50 ml de muestra en un frasco cónico de 100 ml, mezclar hasta disolución, agregar 2 ml de la solución del cloruro de estaño y 10 ml de ácido clorhídrico concentrado. 6. Mezclar bien, agregar 10 g de cinc granulado y rápidamente armar el aparato controlando que no halla pérdida en las uniones. 7. Dejar desprender hidrógeno durante 45 minutos a temperatura ambiente. 8. Desconectar el equipo y suavemente disolver cualquier complejo formado en las paredes, mezclar la solución. Resultados En presencia de arsenamina el reactivo argéntico modifica paulatinamente su color hasta adquirir un tono rojo. Determinar la absorbancia de la solución a 540 nm contra blanco de reactivo y calcular la concentración de arsénico usando una curva de calibración previamente preparado. Es lineal hasta concentraciones de arsénico de 10 mg/l. El germanio y antimonio interfieren en este ensayo. Sensibilidad Arsénico, 0.5 mg/l. Interpretación clínica La ingestión aguda de sales arsenicales produce dolor abdominal, vómitos y diarrea copiosa, sangrienta. La muerte es por colapso circulatorio. La inhalación de arsina produce hemólisis masiva y fallo renal. El tratamiento con agentes quelantes está indicado.

ATENOLOL 2-[-4-(2-hidroxi-3-isopropilaminopropoxi)fenil]acetamida;C14H22N2O3; masa molecular relativa:266, Figura 10 : ESTRUCTURA QUÍMICA

El atenolol es un ß-adrenoceptor cardioselectivo que bloquea a agentes ß-bloqueantes utilizados en el tratamiento de la hipertensión. No hay ninguna prueba cualitativa simple para el atenolol, pero puede ser identificado por cromatografía en capa delgada a partir del producto original de una extracción con solventes de la orina, contenido estomacal o residuos de la escena .- Interpretación clínica En dosis excesiva, el atenolol pueden causar broncoconstricción, hipotensión y fallo cardíaco. El tratamiento es sintomático y de sostén, y puede incluirse el uso de ß-agonistas. No se requiere normalmente la cuantificación en sangre de este compuesto para su tratamiento.

ATROPINA (1R,3R,5S)-tropan-3-YL(±)- tropato , C17H23NO3, masa molecular relativa:289. Figura 11 : ESTRUCTURA QUÍMICA

La atropina es un alcaloide que se encuentra en las plantas como Atropa Belladona y Datura Stramonium. Tiene actividad anticolinérgica potente y produce reducción de las secreciones bronquiales y salivales antes de la anestesia. Se la utiliza para tratar los espasmos gastrointestinales y para producir midriasis en procedimientos oftálmicos. La atropina también se usa como antídoto en envenenamientos con inhibidores de colinesterasa, como pesticidas organofosforados y carbamatos y algunos agentes químicos de guerra. La atropina es muy potente y la dosis de 10 mg o más pueden causar severo envenenamiento. No hay ninguna prueba cualitativa simple para la atropina, pero puede ser identificado por cromatografía en capa delgada a partir del producto original de una extracción con solventes de la orina, contenido estomacal o residuos de la escena . Interpretación clínica La dosis excesiva de atropina puede causar taquicardia, hipertensión, pirexia, delirio y alucinaciones. La fisostigmina es un eficaz antídoto.No se requiere normalmente la cuantificación en sangre de este compuesto para su tratamiento.

BARBITÚRICOS Los barbitúricos son un derivado del 5,5'-disubstituído del ácido barbitúrico. Además, el átomo de nitrógeno en posición 1 puede estar metilado como en el metilfenobarbital, mientras la substitución de azufre por el oxígeno en posición 2 da el tiobarbiturato como el tiopental. Figura 12 : ESTRUCTURA QUÍMICA Acido Barbitúrico

Algunos barbitúricos encontrados se listan en la Tabla 18. Otros barbitúricos que se pueden encontrar incluyen el ciclobarbital, el ciclopentobarbital, heptabarbital, hexobarbital, metohexital y el vinbarbital. El ácido barbitúrico ya no se usa como droga tal. Tabla 18. Hipnóticos barbitúrico Nombre de Químico Compuesto masa molecular Amobarbital 5-etilo- 5 - ácido isopentilbarbiturico 226 Barbital Acido dietilbarbiturico 184 Pentobarbital 5-etilo- 5 (1-metilbutil) ácido barbiturico 226 Fenobarbital 5-etilo- 5 - ácido fenilbarbitúrico 232 Secobutabarbital 5-n-Butil- 5 - ácido etilbarbitúrico 212 Secobarbital 5-Alil-5-(1-metilbutil) ácido barbitúrico 238 Tiopental 5-etilo-5-(1-metilbutil)-2- ácido tiobarbitúrico 242 Los barbitúricos son hipnóticos y sedantes potentes, pero en muchos países sólo el fenobarbital y el tiopental (intravenoso) se utilizan. También pueden usarse los barbitúricos para eutanasia en medicina veterinaria, y se usa el barbital sódico como buffer en los laboratorios. En el envenenamiento agudo puede ser importante determinar si el barbitúrico implicado es un barbital o fenobarbital (barbitúricos llamados de acción larga), o se ha tomado compuestos de acción corta o media. Esto es importante porque una diuresis alcalina puede reforzar la excreción del barbital y del fenobarbital, pero no de otros barbitúricos.

No hay ninguna prueba simple fiable para estos compuestos y un análisis cualitativo se realiza mejor por cromatografía en capa delgada a partir de un extracto con solvente de orina, contenido estomacal o residuos de la escena . Esto también debe permitir la identificación del tipo de barbitúrico presente. El método dado debajo permitirá medir el barbitúrico total en un extracto solvente del espécimen, y ver el cambio espectral característico mostrado por los barbitúricos que va de pH 11 a pH 2, para lo cual se necesita un espectrofotómetro uv-visible. Para tener la medida exacta de un barbitúrico en un individuo se requiere cromatografía gas-líquido o cromatografía HPLC de alto rendimiento.- Ensayo cuantitativo Aplicable a sangre entera, plasma o suero (5 ml). Reactivos 1. Buffer borato, pH 8.4. Mezclar 22.4 g de tetraborato disodico con 76 ml de solución acuosa de ácido clorhídrico (1 mol/l) y diluir a 2 litros con el agua destilada. 2. Solución acuosa de ácido clorhídrico (2 mol/l). 3. Acido sulfúrico concentrado (densidad relativa 1.83). 4.Hidroxido de amonio concentrado (densidad relativa 0.88). 5.Mezclar sulfato de sodio/carbón activado. Agregue 100 mg de carbón activado a 100 g de sulfato de sodio anhidro, mezcle completamente y caliente en una cubeta evaporándose a 100°C durante 8 horas. Enfriar y guardar en un frasco hermético oscuro. Estandares Soluciones que contienen barbital en las concentraciones de 5, 10, 25 y 50 mg/l en el plasma humano pálido, preparar una dilución acuosa de barbital sódico (1.12 g/l, equivalente al ácido dietilbarbiturico a una concentración de 1.00 g/l). Método 1. agregue 5 ml de muestra, 2 ml de ácido clorhídrico y 60 ml de éter dietílico (con cuidado) a una ampolla de decantación de 250-ml de capacidad. 2. Lubricar con agua destilada el tapón del embudo tapar y mezclar por inversión durante 2 minutos. 3. Dejar descansar 5 minutos, y entonces deseche la capa de abajo fase acuosa por la parte de abajo del embudo donde está la válvula.

4. Agregue el extracto de éter dietílico a 10 ml de buffer borato en un segundo el embudo de separación y mezclar durante 1 minuto. 5. Dejar descansar 5 minutos y de nuevo desechar la fase acuosa la de abajo por la parte de debajo de la ampolla.- 6. Lavar el embudo con 5 ml de agua destilada, dejar decantar 5 minutos y de nuevo desechar por abajo la fase acuosa. 7. Agregue aproximadamente 4 g de mezcla de sulfato de sodio/carbón activado al éter que está en la ampolla , agite, y fíltre el extracto a través de papel de filtro en un frasco de 150-ml cónico de capacidad.- 8. Agregue 20 ml de éter dietilico a la ampolla de decantación, agite y agregue al extracto en el frasco a través de papel de filtro. 9. Evapore el extracto a sequedad en un baño de agua a 40°C o bajo una corriente de aire comprimido o nitrógeno. 10.-Agregue 5.0 ml de agua destilada al extracto seco en el frasco, mezclar suavemente y dejar descansar 5 minutos. 11. - Fíltrese el extracto reconstituido a través de papel de filtro en un tubo de 12.5-centímetro.

12. Verifique que el espectrofotometro esté en 0 a 240 nm con agua destilada tanto en la muestra como en los estándares

13. Agregue 4 ml de filtrado de la prueba en una cubeta limpia y seca, agregue 50 µl de hidróxido del amonio concentrado y mezclar con una varilla de plástico. Chequear que el pH esté en aproximadamente 10 (con papel indicador universal). 14. Rápidamente mida la absorbancia a 240 nm contra el blanco de agua destilada . Si fuera necesario, diluir una porción del extracto con agua destilada y leer nuevamente. Si tiene un espectrofotómetro de barrido espectral hacerlo entre 200 –450 nm.- 15. Repita la lectura o examine después de 5 minutos. 16. Agregue 0.1 ml de ácido sulfúrico concentrado a la cubeta, mezclar usando, una varilla plástica y chequear el pH a aproximadamente 2 (con papel indicador universal ). 17. Repita la lectura (240 nm) o scannear entre (200-450 nm).

Resultados Varios compuestos pueden interferir. Glutetimida es hidrolisada rápidamente a valores de pH alcalinos, al igual que la absorbancia a 240 decrecerá notablemente después de 5 minutos a pH 11 (paso 15 de arriba) si este compuesto está presente. La presencia de otros compuestos, como metacualona o fenazona (por ejemplo, dicloralfenazona), puede revelarse escanneando en la región 200-450 nm. Agregando 0.1 ml de hidróxido de sodio acuoso (2 mol/l) al extracto amoniacal (paso 14 ) produce un cambio espectral característico (Fig. 10) que puede ser útil en el trabajo cualitativo. Imagen: FIGURA 10

Para realizar la medida cuantitativa, medir la diferencia entre la absorbancia a pH 10 y a pH 2, construya un gráfico de calibración con el análisis de las soluciones estándares del barbitúrico, y calcular la concentración del barbitúrico en la muestra. Alternativamente, use la siguiente fórmula : (absorbancia a pH 10) - ( absorbancia a pH 2)) x el factor de dilución (cualquiera) x 25 = barbitúrico ( mg/l) Pruebe los volúmenes de no menos de 5 ml , ya que el espectrofotómetro no lo leerá salvo que haya uno que lea menos cantidad de muestra.-. Sensibilidad Barbitúrico, 2 mg/l.

Interpretación clínica Los barbitúricos son muy tóxicos en dosis excesiva y puede causar vasodilatación periférica, hipotensión, shock, hipoventilación, hipotermia, coma, convulsiones y fracaso renal agudo. La muerte normalmente sobreviene por paro respiratorio o cardiorespiratorio o complicaciones respiratorias. Las concentraciones de barbitúrico en plasma mayores que 10 mg/l (50 mg/l de barbital y fenobarbital) puede asociarse con toxicidad aguda. Las dosis orales repetidas de carbón activada y/o diuresis alcalina pueden ser importantes en el envenenamiento severo con el barbital y fenobarbital. La hemoperfusión del carbón activado ha sido usado para tratar el envenenamiento agudo - y los barbitúricos .-

BARIO La fuente más importante de bario (Ba) es el sulfato del bario (BaSO4) que es sumamente insoluble en agua. Las sales de bario, como el nitrato del bario (BaNO3) y el cloruro del bario (BaCl2), son más solubles y tienen varios usos industriales y son relativamente tóxicas. El sulfuro de bario (BaS) ha sido empleado como agente depilatorio. No existe un método simple para la medición de Bario en material biológico. De todos modos la prueba descripta a continuación puede utilizarse para indicar la presencia de sales de bario en contenido estomacal u otras muestras que contienen relativamente concentraciones altas de este elemento. La prueba confirmatoria se basa en el hecho que el sulfato de plomo es relativamente soluble en ácido acético diluido pero se precipita en presencia de sales de bario solubles. Esto refuerza eficazmente la sensibilidad de la reacción entre el bario y los iones sulfato. Prueba cualitativa Aplicable a contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Acido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1.18). 2. Alambre de platino. Método 1. Introducir el extremo del alambre de platino en el ácido concentrado. 2. El extremo humedecido del alambre se lo introduce en el material de la prueba. 3. Colocar el material en la parte caliente de la llama en un mechero de Bunsen. Resultados Una llama amarillo verdosa indica presencia de sales del bario. Sales de cobre y de talio dan una llama verde en esta prueba. Si existen concentraciones elevadas de sales de sodio, una coloración amarillo anaranjada disimulará todo lo demás.

Sensibilidad Bario, 50 mg/l. Prueba Confirmatoria Aplicable para digerir volúmenes y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución acuosa de ácido sulfúrico (1 mol/l). 2. Solución de acetato de plomo (100 g/l). 3. Solución de ácido acético (50 ml/l). 4. Acetato de amonio (sólido). Método 1. Mezclar 2 ml de solución de acetato de plomo y 2 ml de ácido sulfúrico diluido, agregar acetato de amonio suficiente para disolver el precipitado sulfato de plomo. 2. Agregar 0.1 ml de ácido acético diluido a 1 ml de muestra, agregar 1 ml de la solución de sulfo-acetato de plomo (del paso 1), mezclar por 5 segundos. 3. Centrifugar durante 2 minutos y observar el tubo sobre fondo negro. Resultados Una turbiedad blanca o un precipitado blanco indica la presencia de bario. El calcio y estroncio interfieren en esta prueba. Sensibilidad Bario, 100 mg/l. Interpretación clínica La ingestión de sales del bario solubles puede producir gastroenteritis, fibrilación ventricular y parálisis muscular. La hipocalemia es un rasgo importante en envenenamientos severos de bario .

BENZODIAZEPINAS Estructura general de las benzodiacepinas. Figura 13 : ESTRUCTURA QUÍMICA

Algunas benzodiacepinas comunes se listan en tabla 19. Alprazolam, camazepam, clorazepate, flunitrazepam, ketazolam, loprazolam, lormetazepam, medazepam, midazolam, prazepam y triazolam son entre los 60 miembros de este grupo. Tabla 19. Benzodiazepinas más comunes. Compuesto Nombre químico masa molecular Clordiazepoxido 7-Cloro-2-metilamino-5-fenil-3H1,4-benzodiazepina 4-óxido 300 Clobazam 7-Cloro-1-metil-5-fenil-1H-1,5 benzodiazepina-2,4(3H,5H)-diona 301 Clonazepam 5-(2-Clorofenil)-1,3-dihidro-7-nitro-2H1,4-benzodiazepina-2-uno 316 Diazepam 7-Cloro-1,3-dihidro-1-metil-5-fenil 2H-1,4-benzodiazepina-2-uno 285 Flurazepam 7-Cloro-1-(2-dietilaminoetil)-5-(2fluorofenil) 1,3-dihidro-2H-1,4 benzodiazepina-2uno ..........................................................................................................................................388 Lorazepam 7-Cloro-5-(2-clorofenil)-1,3-dihidro 3-hidroxi-2,H-1,4-benzodiazepina-2-uno 321 Nitrazepam .....1,3-Dihidro-7-nitro-5-fenil-2H-1,4 benzodiazepina-2-uno ................................281 Oxazepam 7-Cloro-1,3-dihidro-3-hidroxi-5 fenil-2H-1,4-benzodiazepina-2-uno ................287 Temazepam 7-Cloro-1,3-dihidro-3-hidroxi-1-metilo 5-fenil-2H-1,4-benzodiazepina-2-uno. 301 Las benzodiazepinas se utilizan como tranquilizantes, como clobazam, clonazepam, y también se usa diazepam como anticonvulsivantes. Con el temazepam se ha abusado, a menudo junto con otras drogas. La mayoría de las benzodiazepinas se metabolizan completamente y muchos miembros de estos grupos son metabolitos de otros compuestos. Así, diazepam da nordazepam, oxazepam (3-hydroxynordazepam), y temazepam (3-

hidroxidiazepan), que se excreta en la orina como glucuronido o sulfatos conjugados.- No hay ninguna prueba de color fiable para estos compuestos. Sin embargo, la hidrólisis de la mayoría de las benzodiazepinas y su conjugado da lugar a aminobenzofenonas que puede extraerse y puede analizarse por cromatografía de capa delgada. Se usan dos reactivos diferentes para aumentar el poder que distingue finamente del método, el p-dimethylaminocinnamaldeido, y el acido nitroso N-(1-naftil)etilendiamina Prueba cualitativa Aplicable a la orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. -Acido clorhídrico concentrado ( densidad relativa 1.18 ). 2. Eter de petróleo (ebulle a 40-60°C ). 3. Cromatografía de capa delgada ( vea sección 4.4.1). 4. Solución acuosa de Acido clorhídrico (1 mol/l). 5. Tolueno:acido acético glacial (97:3). 6. Solución acuosa de p-dimetilaminocinnamaldehido (5 g/l). 7. Solución acuosa de ácido tricloroacetico (500 g/l). 8. Solución acuosa de ácido sulfúrico (500 ml/l). 9. Solución acuosa de nitrito de sodio (10 g/l, recientemente preparado). 10. Solución acuosa de sulfamato de amonio (50 g/l). 11. Hidrocloride de N-(1-Naphthyl)etilenediamino (10 g/l) en acetona: agua (4:1). Estandares Flurazepam y nitrazepam, ambas en concentraciones de 100 mg/l en ácido clorhídrico diluído (1 mol/l). 1. Mezclar 3 ml de ácido clorhídrico concentrado y 10 ml de muestra o estándar en un tubo de vidrio de 30-ml de capacidad con tapón . 2. Colocar bajo campana en agua hirviente durante 30 minutos. 3. Enfriar y agregar 10 ml de éter de petróleo, tapar el tubo y rotar cuidadosamente durante 10 minutos.

4. Centrífugar durante 5 minutos y transferir la capa superior, orgánica a un tubo limpio. 5. Evaporar el extracto a sequedad bajo una corriente de aire comprimido o nitrógeno a 60°C. Cromatografía en capa delgada 1. Reconstituir el extracto en 100 µl de éter de petróleo. 2. Sembrar aproximadamente 25-µl de cada uno de los estándares y de los extractos de las muestras .- 3. Desarrolle el cromatograma (dejar correr 10 cm) usando como solvente de corrida tolueno:acido acetico (saturar la cuba).- 4. Sacar la placa y dejar secar.- Tener mucho cuidado ya que todos los reactivos que se utilizan de revelado son muy tóxicos. Cuando se revelan las placas se deben hacer bajo campana.- 5. Primero revelar con solución de p-dimetilaminocinnamaldehido seguido por ácido tricloroacetico. 6. Rociar con los siguientes reactivos, secando entre cada fase,: ácido sulfúrico, solución de nitrito de sodio, solución de sulfamato de amonio y solución de naftiletilenediamina. Resultados Tabla 20 Valores de Rf y reacciones de color de las benzofenonas más comunes. Benzofenonas Derivado Origen hRf color Aa Bb Metilaminocloro - Diazepam Diazepam 66 Púrpura Rosa Ketazolam Medazepam Aminocloro - Oxazepam Oxazepam 40 Púrpura Púrpura Diazepam Medazepam Ketazolam Chlordiazepoxide Clorazepato dipotasico Aminodicloro -Lorazepam Lorazepam 45 Púrpura Purpura Lormetazepam

Aminoclorofluoro - Desalquilflurazepam Flurazepam 31 Púrpura Púrpura Aminonitro - Nitrazepam Nitrazepam 34 Púrpura Rosa Diamino - 7-Aminonitrazepam Nitrazepam 52 Azul Purpura Aminonitrocloro - Clonazepam Clonazepam 34 Azul Rosa

Loprazolam y Loprazolam metabolitos a) Reactivo de Visualización: solución de p-dimetilaminocinnamaldehido seguida por ácido tricloroacetico. b) Reactivo de Visualización: ácido sulfúrico seguido por la solución del nitrito de sodio, solución de sulfamato de amonio y solución del naftilletilendiamino .- La interferencia de otros productos de hidrolisis puede minimizarse extrayendo el extracto de éter de petróleo (paso 4) con solución de hidróxido de sodio (2 mol/l) mezclando durante 5 minutos. Luego separar las fases por centrifugación durante 5 minutos, y evaporar el extracto de éter de petróleo a sequedad como fue descrito anteriormente (paso 5). La interpretación de los resultados puede ser difícil ya que muchos compuestos dan metilaminoclorobenzofenonas y/o el aminoclorobenzofenona por hidrolisis de orina. Por ejemplo, puede que no sea posible diferenciar entre temazepam u oxazepam y diazepam o nordazepam ya que estos compuestos dan un modelo similar del benzofenonas. Los siguientes compuestos no se forman benzofenones por hidrolisis: el medazepam, el triazolam, el clobazam, el norclobazam, y midazolam. Sensibilidad Nordazepam (como el aminoclorobenzofenona), 1 mg/l. Interpretación clínica El envenenamiento agudo con benzodiazepinas es común pero, en los adultos, causa sólo adormecimiento, confusión, ataxia, alteración en el habla, incoordinación y a veces coma. La depresión respiratoria es rara en los adultos exceptuando el flurazepam. Sin embargo, la depresión respiratoria puede ocurrir si la enfermedad respiratoria ya está presente, y en los niños pequeños y ancianos. Las Benzodiazepinas también tienen efecto de depresión respiratoria sinergista que se produce cuando se ingiere etanol u otro depresor del sistema nervioso central. El tratamiento es sintomático y de sostén, aunque pueden usarse flumazenil como un antagonista específico . No es muy importante medir las concentraciones de benzodiazepinas en el plasma en el envenenamiento agudo.

BISMUTO El bismuto (Bi) tiene usos industriales en pigmentos y en la producción de aleaciones. En medicina, las principales aplicaciones son las sales del bismuto, tal como el subsalicilato de bismuto, para el tratamiento gastrointestinal de gastritis, úlcera péptica y diarrea. Como con el antimonio, el arsénico y el mercurio el bismuto puede identificarse con la prueba de Reinsch. Prueba cualitativa Aplicable a orina, contenido estomacal y residuos de la escena. La Prueba Reinsch: ver monografía de antimonio: sección 6.5 Sensibilidad Bismuto, aproximadamente 2 mg/l. Interpretación clínica El envenenamiento agudo con el bismuto puede causar daño renal, encefalopatías y neuropatías periféricas. También se puede observar neurotoxicidad después del tratamiento crónico con sales de bismuto, pero es reversible si se suspende la medicación.

Bisulfuro de Carbono El bisulfuro de carbono (CS2)es usado como un intermediario sintético , un solvente ( especialmente en manufactura del rayón) en granos y fumigantes de tierra, como insecticida, inhibidor de corrosión y desengrasado. Unos 50-90% de una dosis ingerida de bisulfuro de carbono se metaboliza y es excretado en la orina como sulfato inorgánico, tiourea, 2-mercapto-2 -uno y 2-tiotiazolidina-4-ácido carboxílico (TTCA).El bisulfuro de carbono tiene un olor particularmente picante. La ingestión de 15 ml pueden provocar la muerte en un adulto. No hay ningún método simple para identificar el bisulfuro del carbono en las muestras biológicas , por el olor puede identificarse. Sin embargo, el método dado debajo puede usarse para evaluar la exposición y puede ponerse en evidencia en el hecho que TTCA de que cataliza la decoloración de una solución de yodo por la azida de sodio. Test cualitativo Aplicable a la orina. Reactivos 1. Rreactivo de ioduro-azida. Disolver 3 g de azida de sodio en 25 ml de agua destilada y agregar 50 ml de una solución acuosa de ioduro (24.5 g/l) y ioduro de potasio (50 g/l),y diluir a 100 ml. 2. Solución acuosa de ortofosfato de sodio dihidratado. (110 g/l). Método 1. Agregar 0.2 ml de solución de ortofosfato de sodio dihidratado a 1 ml de orina y a 1 ml de blanco de orina en tubos separados.-

2. Mezclar por 2 segundos, y agregar 20 µl de azida de ioduro a cada tubo y otra vez mezclar por 2 segundos.-

Resultados El color amarillo-marrón de ioduro es decolorado en 30 segundos con la presencia de TTCA a temperatura ambiente. Esto es especialmente importante para analizar el blanco de orina tanto como el testigo de orina la orina toma un color amarillo-marrón. Sensibilidad TTCA, 10 mg/l. Interpretación clínica El bisulfuro de carbono es un solvente excelente para la grasa, y el contacto dérmico puede causar enrojecimiento, quemaduras, se siente crujir la piel y se

pela. En el envenenamiento agudo por ingestión o la o por inhalación puede dar irritación de membranas mucosas, visión borrosa, dolor de cabeza, náuseas, vómitos, coma, convulsiones y paro cardiorespiratorio. La exposición crónica sigue con neuropatía periférica, fatiga, sueño, perturbación, anorexia, pérdida de peso, depresión, diabetes mellitus y puede ocurrir enfermedad isquémica del corazón. El tratamiento es generalmente sintomático y de sostén.-

BROMATOS Los bromatos, como el bromato de sodio (NaBrO3), se usan como ingrediente en los equipos para permanente del pelo y son agentes oxidantes fuertes. La prueba de difenilamina identifica otros compuestos similares como cloratos, hipocloritos, yodados, nitratos y nitritos. Prueba cualitativa Aplicable a contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivo Difenilamina (10 g/l) en ácido sulfúrico concentrado (densidad 1.83). Método 1. Filtrar, 5 ml del contenido estomacal en un tubo de ensayo de 10 ml 2. Agregar 0.5 ml del filtrado o residuo de la escena a un tubo limpio y lentamente agregar 0.5 ml de solución del difenilamina por las paredes del tubo de modo que se forme una capa debajo de la muestra. Resultados Un resultado positivo se indica por una coloración azul fuerte que se desarrolla inmediatamente en la unión de las dos capas. Una coloración azul suave se producirá por la mayoría de las muestras de contenido estomacal y se debe a presencia de material orgánico. Los agentes oxidantes fuertes son rápidamente reducidos en las muestras biológicas, por lo que la determinación debe realizarse tan pronto como sea posible después de recibida la muestra. Sensibilidad Bromato, 10 mg/l. Prueba confirmatoria Aplicable a orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución acuosa de ácido nítrico (2 mol/l). 2. Solución acuosa de nitrato de plata (10 g/l).

3. Solución acuosa de nitrito de sodio (50 g/l, recientemente preparado). 4. Hidróxido de amonio concentrado (densidad relativa 0.88). Método 1. A 1 ml de la muestra agregar 0.2 ml de ácido nítrico diluido y 0.2 ml de solución del nitrato de plata y mezclar durante 5 segundos. 2. Si se forma un precipitado, centrifugar durante 1 minuto y mantener el sobrenadante claro. 3. Agregar más solución de nitrato de plata, dejar caer gota a gota, para asegurar la eliminación completa de cualquier precipitado, y luego agregar 0.2 ml de solución de nitrito de sodio. 4. Si se formas precipitado agregan 0.2 ml de hidróxido de amonio concentrado. Resultados Un precipitado cremoso débilmente soluble en hidróxido de amonio indica la presencia de bromato. Sensibilidad Bromato, 10 mg/l. Interpretación clínica El envenenamiento agudo de bromatos pueden causar náusea, vómitos, diarrea, dolor abdominal, confusión, coma y convulsiones. Se produce a menudo metahemoglobinemia y esto puede indicarse por el color chocolate de la sangre .- El tratamiento es sintomático y de sostén.

BROMUROS Las sales como el bromuro de sodio (NaBr) son empleadas en el proceso fotográfico. El bromuro del metilo se usa como un fumigante en naves y silos de grano, y sé metaboliza en parte al ion del bromuro in vivo. La prueba cualitativa indica la presencia de bromuro inorgánico o yoduro. Prueba cualitativa Aplicable a la orina, volúmenes del estómago y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución acuosa de ácido nítrico (2 mol/l). 2. Solución acuosa de nitrato de plata (10 g/l). 3. Hidróxido del amonio concentrado (densidad relativa 0.88). Método 1. Agregar 0.1 ml de ácido nítrico a 1 ml de solución de la prueba , mezclar por 5 segundos y agregar 0.1 ml de solución del nitrato de plata. 2. Centrifugar para separar cualquier precipitado significante, decantar y tratar con 0.1 ml de hidróxido del amonio concentrado. Resultados Un precipitado blanco soluble con el hidróxido de amonio indica presencia de cloruros, un precipitado blanquecino en hidróxido amonio indica presencia bromuros, y un precipitado amarillo cremoso, insoluble indica yoduro. Sensibilidad Bromuro, 50 mg/l. Prueban confirmatoria Aplicable a orina, volúmenes del estómago y residuos de la escena.

Reactivos 1. Solución saturada de fluoresceína en solución de ácido acético (600 ml/l). 2. Acido sulfúrico concentrado (densidad relativa 1.83). 3. Permanganato de potasio (sólido) Método 1. Embeber una tira de papel de filtro en la solución de fluoresceína. 2. Agregar aproximadamente 50 mg de permanganato de potasio a 2 ml de la solución de prueba en un tubo de 10 ml. 3. Agregar 0.2 ml de ácido sulfúrico concentrado y sostener el papel de filtro impregnado en la fluoresceína en la boca del tubo. Resultados El bromuro se oxida al bromo libre. Esto reacciona con el amarillo de la fluoresceína para dar eosina (tetrabromofluoresceina) que tiene un color rosado a rojo. Sensibilidad Bromuro, 50 mg/l. Ensayo cuantitativo Aplicable a plasma o suero (2 ml). Reactivos 1. Acido acuosa cloroaurica. Disolver 0.5 g de ácido cloroaurico (cloruro de oro, HAuCl4 x H2O) en 100 ml de agua destilada. 2. Solución de ácido tricloroacetico (200 g/l).

Estándares Disolver 1.29 g de bromuro de sodio en 500 ml de agua destilada (ion bromuro 2g/l). Preparar una serie de diluciones en agua destilada conteniendo concentraciones de ion de bromuro de 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.2 y 1.6 g/l. Método 1. Agregar 6 ml de solución ácida de tricloroacetico a 2 ml de muestra en un tubo de 10 ml, mezclar durante 30 segundos y dejar descansar por 15 minutos. 2. Centrifugar durante 5 minutos y filtrar el sobrenadante a través del papel de filtro en un tubo. 3. Agregar 1 ml de la solución cloroaurica ácida a 4 ml del sobrenadante claro mezclar durante 5 segundos. 4. Registrar la absorbancia a 440 nm contra un blanco de agua destilada . Resultados Construya un gráfico de calibración de concentración del bromuro contra absorbancia, y calcule la concentración de ion del bromuro en la muestra. La calibración es lineal para concentraciones de 25 mg/l a 2.5 g/l. Este método no es fiable con muestras que den turbio o en los sobrenadantes, por ejemplo muestras de cadáveres. Sensibilidad Bromuro, 25 mg/l. Interpretación clínica La intoxicación aguda con bromuros pueden causar náusea, vómitos y diarrea, pero la absorción es pobre y la toxicidad sistémica es más común después de ingestión o exposición crónica. En estos casos se observa, fatiga, irritabilidad, anorexia, dolor abdominal, pigmentación superficial, alucinaciones visuales i auditivas, delirio, temblor, ataxia y coma . Las concentraciones normales de bromuro en suero son de 10 mg/l pero administraciones terapeúticas continuas con bromuros pueden llegar concentraciones del orden de 80 mg/l. La toxicidad normalmente se asocia con concentraciones del bromuro mayores a 500 mg/l. El Tratamiento normalmente es sintomático y de sostén.

Bromuro de metilo El bromuro de metilo es usado como un fumigante bodegas de buques (CH3Br), en grandes silos y otras áreas cerradas. El bromuro de metilo sufre un metabolismo parcial dando bromuro inorgánico in vivo. Desde las concentraciones de estos iones encontrados en intoxicaciones de bromuro de metilo son mucho menos que las intoxicaciones serias con bromuros inorgánicos, esto es porque el bromuro de metilo asímismo es un tóxico primario.- El test cualitativo dado abajo sirve para indicar la presencia de bromuros inorgánciso o iodados, y la confirmación apropiada es usar un test en sangre para medir bromuros. No hay un método simple para medir sin cambios el bromuro de metilo. Test cualitativo Aplicable a orina. Detecta bromuros inorgánicos.- Reactivos 1. Solución acuosa de ácido nítrico (2 mol/l). 2. Solución acuosa de nitrato de plata (10 g/l). 3. Hidróxido de amonio concentrado (densidad relativa 0.88). Método 1. Agregar 0.1 ml de ácido nítrico a 1 ml de test de solución limpia, mezclar por 5 segundos y agregar 0.1 ml de solución de nitrato de plata.- 2. Centrifugar para aislar alguna precipitación significativa y tratar con 0.1 ml de hidróxido de amonio concentrado.- Resultados Un precipitado blanco soluble en hidróxido de amonio indica la presencia de cloruros, y un precipitado grisáceo parcialmente soluble en hidróxido de amonio indica la presencia de bromuro y un precipitado insoluble crema amarillento indica ioduros.- Sensibilidad Bromuro, 50 mg/l. Test confirmatorio Aplicable a orina. Detecta bromuros inorgánicos.

Reactivos 1. Solución acuosa de ácido acético saturado con fluoresceína. (600 ml/l). 2. Acido sulfúrico concentrado (densidad relativa 1.83). 3. Permanganato de potasio (sólido) Método 1. Impregnar un papel de filtro con solución de fluoresceína. 2. Agregar cerca de 50 mg de permanganato de potasio a 2 ml de solución de test en un tubo de 10 ml.

2. Agregar 0.2 ml de sulfúrico concentrado y colgar el papel de filtro impregnado con fluoresceína en un tubo de boca ancha.

Resultados El bromuro se oxida al bromo libre. Este reacciona con la fluoresceína de color amarillo para dar eosina (tetrabromofluoresceina) qué tiene color rosa-rojo.- Sensibilidad El bromuro, 50 mg/l. Ensayo cuantitativo Aplicable a plasma o suero (2 ml). Reactivos

1. Acido acuoso cloroaurico. Disuelva 0.5 g de ácido cloroaurico (cloruro de oro, HAuCl4ÀxH2O) en 100 ml de agua destilada.-

2. Acido tricloroacetico acuoso (200 g/l). Estándares Disuelva 1.288 g de bromuro de sodio en 500 ml de agua destilada ( ion del bromuro 2 g/l). Preparar las diluciones de serie en el agua destilada conteniendo concentraciones de ion de bromuro de 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.2 y 1.6 g/l. Método 1. Agregue 6 ml de tricloroacetico solución ácida a 2 ml de muestra en un tubo de 10-ml de capacidad, mezclar en vortex durante 30 segundos y dejar en reposo 15 minutos.

2. Centrífugar durante 5 minutos y filtrar el sobrenadante a través del filtro de papel en un tubo limpio.

3. Agregar 1 ml de cloroaurico de la solución ácida a 4 ml del sobrenadante,

mezclar en vortex durante 5 segundos.

4. Registrar la absorbancia a 440 nm leyendo contra un blanco de agua destilada.-. Resultados Construya un gráfico de calibración de concentración del bromuro vs absorbancia de acuerdo a las lecturas de bromuros, y calcular la concentración de ion del bromuro en la muestra. La calibración es lineal para las concentraciones de 25 mg/l a 2.5 g/l. Este método no es confiable con muestras que pueden dar turbio el sobrenadante, por ejemplo las muestras obtenidas por necropsia. Sensibilidad Bromuro, 25 mg/l. Interpretación clínica Los síntomas de envenenamiento debido a bromuro del metilo se desarrollan luego de varias horas después de la exposición e incluye confusión, vértigo, dolor de cabeza, náuseas, vómitos, dolor abdominal, visión borrosa, hiporeflexia y parestesia. El coma y las convulsiones pueden ocurrir en los casos severos, y también se han descripto edema pulmonar, ictericia y oliguria. El tratamiento es sintomático y de sostén.- Las concentraciones de bromuro en sueros normales están por debajo de 10 mg/l. Después de la administración terapéutica de bromuros inorgánicos, las concentraciones, pueden aumentar hasta 80 mg/l; la toxicidad está normalmente asociada con las concentraciones mayores a 500 mg/l. por otro lado, se han informado concentraciones de 90-400 mg/l en la sangre en envenenamientos graves con bromuro de metilo.-

CADMIO El cadmio (Cd) forma las sales no coloreadas con propiedades químicas similares a compuestos de cinc. El óxido del cadmio y sales del cadmio se usan en aleaciones como níquel-cadmio en productos como baterías secas, soldadura, pintura y pigmentos plásticos. El envenenamiento agudo debido al cadmio es sumamente raro, pero la toxicidad crónica ha sido vista después de la exposición profesional y en algunos casos después de una contaminación a través de la dieta o el suministro de agua como sucedió en Japón con la enfermedad de itai-itai . No hay ninguna prueba cualitativa simple para cadmio que pueda ser realizada en muestras biológicas o residuos de la escena. Interpretación clínica La exposición crónica al cadmio puede llevar al daño tubular renal y daño en la función pulmonar. Se han observado casos de osteomalacia en aquellos pacientes con dietas deficientes en el calcio. La ingestión de sales del cadmio causan dolor abdominal, vómitos y diarrea, hipotensión, acidosis metabólica, respiración deprimida, edema pulmonar, oliguria y muerte en casos severos. El tratamiento es sintomático y de sostén, y puede incluir terapia de quelación.

Cafeína Metilteobromina, 7-metilteofilina, 1,3,7-trimetilxantina; C8H10N4O2; masa molecular relativa, 194

Figura 14 : ESTRUCTURA QUIMICA La cafeína es un alcaloide que está presente en el té, café , cola y otros brebajes. Una taza de té o café contiene aproximadamente 100 mg de la droga.- La cafeína es un ingrediente con propiedad estimulante en preparaciones y también es usado para el tratamiento de apnea neonatal. Las reacciones metabólicas incluyen N-demetilación y oxidación a derivados del ácido úrico. Aproximadamente el 85% de una dosis oral es excretada sin cambios en la orina. La cafeína es un metabolito importante de teofilina en neonatos, y en adultos con hábitos de drogas emparentadas.- No hay un análisis simple para detectar cafeína, pero este compuesto puede ser detectado e identificado por cromatografía de capa delgada en extractos de solventes básicos de orina, contenidos estomacales, y residuos de la escena . Aunque la cafeína se visualiza con el reactivo de iodoplatinato acidificado esta sensibilidad es pobre.- Interpretación clínica. La sobredosis con cafeína puede causar palpitaciones, hipertensión, diuresis, estimulación del sistema nervioso central, náuseas, vómitos, marcada hipocalemia, acidosis metabólica y convulsiones. El tratamiento es sintomático y de sostén.-

Carbamatos pesticidas Estos compuestos tienen la fórmula general que se muestra debajo. La substitución de azufre por el oxígeno, hace que tenga la actividad insecticida más baja. Algunos carbamatos más comunes se encuentran listados en la tabla 21.-

Figura 15 : ESTRUCTURA QUÍMICA Tabla 21. Algunos pesticida derivados del carbamato Nombre R1 R2 R3 Compuesto químico Masa molecular ALDICARB H CH3 CH3SC(CH3)2CH:N 190 CARBARYL H CH3 1-NAPHTHYL 201 METHIOCARB H CH3 3,5-DIMETHYL-4-(METHYLTHIO)PHENYL 225 PIRIMICARB CH3 CH3 2-DIMETHYLAMINO-5,6 - dimethylpyrimidin-4-yl 238 PROMECARB H CH3 3-ISOPROPYL-5-METHYLPHENYL 207 PROPOXUR H CH3 2-ISOPROPOXYPHENYL 209 Los carbamatos son usados ampliamente como insecticidas, herbicidas y fungicidas. Los insecticidas de Carbamatos inhiben la acetilcolinesterasa y así la evidencia de exposición al producto puede obtenerse midiendo la actividad de la colinesterasa . Los carbamatos herbicidas y fungicida, como el ditiocarbamatos, no producen inhibición tan importante de la colinesterasa por lo que lo hacen menos tóxicos en los humanos. La prueba descripta aquí está basada en una reacción general del carbamatos con el furfuraldehido con la presencia de cloruro de hidrógeno. Prueba cualitativa Aplicable a contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución de ácido clorhídrico (2 mol/l).

2. Solución de Furfuraldehido (100 ml/l) en metanol, recientemente preparado. 3. Acido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1.18 ). Método: 1. Acidificar 1 ml de muestra con 0.5 ml de dilución de ácido clorhídrico y extrae con 4 ml de cloroformo y mezclar cuidadosamente por 5 minutos. 2. Centrifugar durante 5 minutos, desechar la capa superior acuosa y filtrar el extracto del cloroformo a través de un papel de filtro en un tubo limpio. 3. Evapore el extracto a sequedad bajo una corriente de aire o nitrógeno a 40°C. 4. Disolver el residuo en 0.1 ml de metanol, aplicar una mancha de la solución en un papel de filtro dejar secar. 5. Aplicar 0.1 ml de la solución de furfuraldehido a la mancha, dejar secar y exponer el papel a los humos del ácido clorhídricos concentrados por 5 minutos bajo campana.- Resultados Los carbamatos dan una mancha negra. El meprobamato y otros carbamatos no-pesticida interfieren en esta prueba. Sensibilidad Carbamato, 100 mg/l. Interpretación clínica La exposición a carbamatos puede causar anorexia, dolor abdominal, náuseas, vómitos, diarrea, lagrimeos, hipersalivación, sudor, ansiedad, ataxia y edema pulmonar agudo. Para la terapia puede indicarse la Atropina que es un antídoto, la pralidoxima no deben ser usada.

Carbamazepina 5H-Dibenz[b,f]azepine-5-carboxamide; C15H12N2O; relativa molecular masa, 236

Figura 16 : ESTRUCTURA QUIMICA Las Carbamazepina son ampliamente usadas como anticonvulsivantes. Las reacciones metabólicas incluyen epoxidación dando carbamazepina-10,11-epoxido (que es farmacológicamente activo), formación diol, hidroxilación y conjugación. Menos del 10% de una dosis se excreta por orina como compuestos similares. La dosis letal mínima estimada en un adulto es de 5 grs.- Test cualitativo Aplicable a contenido estomacal y residuos de la escena.- Reactivos 1. Solución acuosa de ácido clorhídrico (2 mol/l).

3. Reactivo de hipobromito de sodio. Disolver 0.5 ml de bromo elemental cuidadosamente y enfriando en 5 ml de solución de hidróxido de sodio (400 g/l). Recientemente preparada.-

Método 1. Agregar 1 ml de la solución de ácido clorhídrico a 5 ml de cloroformo, mezclar por 1 minutos y centrifugar por 5 minutos.- 2. Descartar la capa superior acuosa y agregar el cloroformo a 0.2 ml de agua de bromo en un tubo limpio y mezclar por 30 segundos.- Resultados Un color azul-violeta en la capa del cloroformo indica la presencia de carbamazepina. Este compuesto y sus metabolitos puede también ser detectados por cromatografía de capa delgada en extracto solvente ácido de orina (ver secciòn 5.2.3).

Sensibilidad Carbamazepina, 250 mg/l. Interpretación clínica El envenenamiento por carbamazepina puede causar dolor de cabeza, vómitos, dolor abdominal, diarrea, constipación ataxia, nistagmus, diplopía, hipotensión, coma, convulsiones, y depresión respiratoria. El tratamiento es sintomático y de sostén.-

CIANURO El envenenamiento agudo con cianuro (CN -) puede producirse después de la inhalación de cianuro de hidrógeno (HCN) o después de la ingestión de ácido cianhídrico o cianuro de potasio o de sodio. Las soluciones complejas de cianuro se usan en galvanoplastia y la acidificación de tales soluciones a menudo las llevan a la producción de cianuro de hidrógeno. Los glicosidos cianogenéticos y otros compuestos que contienen nitrilos, como la amigdalina, que libera cianuro en el organismo ocurra también en varios tejidos de la planta, incluso el melocotón y los granos del albaricoque, raíz de la yuca y frijoles de la lima. Los insecticidas con tiocianato (tiocianato de etilo, tiocianato del metilo) también se metabolizan a ion cianuro en el organismo y pueden causar serios problemas de toxicidad. El cianuro también es un metabolito del nitroprusiato de sodio (usado como vasodilatador) y otros compuestos que contienen nitrilos, pero envenenamientos con cianuro en estos casos son raros. El tiocianato inorgánico y las sales de ferricianuro y de ferrocianuro no liberan cianuro en el organismo y es relativamente poco tóxico. Prueba cualitativa Se basa en la formación de un complejo azul de ferriferrocianuro (azul de Prusia) con los iones ferrosos. Muestra Contenido estomacal y residuos de la escena. Tener cuidado con las muestras que contienen cianuros ya que liberan ácido cianhídrico si se acidifica. Reactivos 1- Solución acuosa de hidróxido de sodio (100 g/l). 2- Solución acuosa de sulfato ferroso (100 g/l) recientemente preparada. 3- Solución acuosa de ácido clorhídrico (100 ml/l). Método 1. Diluir 1 ml de muestra con 2 ml de solución del hidróxido de sodio. 2. Agregar 2 ml de solución de sulfato ferroso

3. Agregar ácido clorhídrico suficiente para disolver el precipitado de hidróxido ferroso. Resultado Un color azul indica la presencia de cianuro. No existen fuentes comunes de interferencia. Sensibilidad Cianuro, 10 mg/l. Ensayos cuantitativos Muerta: sangre entera heparinizada (0.1 - 1.0 ml) que puede ser guardada a 4°C durante 1-2 días si el análisis se tarda por cualquier razón. (El cianuro en sangre es menos estable si se guarda a temperatura ambiente o a -20°C.) Método de microdifusión Se basa en la liberación de cianuro de hidrógeno y la formación subsecuente de un complejo coloreado: A - Método del p-nitrobenzaldehido / o-dinitrobenceno, puede usarse para dar un resultado rápido semicuantitativo B - Método de la piridina / ácido barbitúrico. Método para un análisis cuantitativo. A. Método del p-nitrobenzaldehído / o-dinitrobenceno Reactivos 1. Solución acuosa de hidróxido de sodio (0.5 mol/l). 2. Solución acuosa de ácido sulfúrico (3.6 mol/l). 3. p-nitrobenzaldehído (0.05 mol/l) en 2-metoxietanol. 4. o-dinitrobenceno (0.05 mol/l) en 2-metoxietanol.

Estándares Solución acuosa de cianuro de potasio (10 mg/l, es decir, la concentración del ion de cianuro, 4 mg/l. Método 1- Tomar tres cápsulas de microdifusión y agregar cada uno en la parte central: (a) 0.5 ml de solución del p-nitrobenzaldehido. (b) 0.5 ml de solución del o-dinitrobenceno. (c) 0.1 ml de solución del hidróxido de sodio. 2. En la parte exterior agregar 0.1 ml de: Cápsula Nº 1- agua destilada Cápsula Nº 2 solución de cianuro de potasio Cápsula Nº 3 Muestra de sangre problema 3. A cada cápsula en la parte exterior agregar 0.5 ml de agua destilada y en el lado opuesto del mismo sector, 1.0 ml de ácido sulfúrico diluido. 4. Se tapa cada cápsula usando silicona y cuidadosamente se mezclan los componentes de la parte externa. 5. Incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos y agregar 1 ml de solución acuosa de metanol (1:1) a la parte central. 6. Transferir las sustancias de la parte central de la cámara a un tubo volumétrico de 5.0 ml y llevar a volumen con solución acuosa de metanol (1:1). Resultados El color rojo obtenido con las soluciones que contienen cianuro son estables durante aproximadamente 15 minutos. Medir la absorbancia de las soluciones de las cámaras 2 y 3 a 560 nm contra blanco de agua destilada (cápsula Nº 1). Calcular la concentración del ion cianuro en la muestra por la comparación con la lectura obtenida de los estándares. Sensibilidad El cianuro, 0.5 mg/l.

B. Método Piridina / ácido barbitúrico Reactivos 1. Solución acuosa de oxido de sodio (0.1 mol/l) 2. Solución acuosa de cloramina T (2.5 g/l). (La Cloramina T sólida es

inestable, las soluciones deben prepararse en el momento de usar.). 3. Solución acuosa de ortofosfato de hidrógeno de sodio (1 mol/l. 4. Reactivo Piridina - Ácido barbitúrico: Disolver 6 g de ácido barbitúrico (no el

dietil del ácido barbitúrico, en 6 ml de ácido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1.18), y diluir con 30 ml de piridina. Diluir la solución resultante a 100 ml con el agua destilada. Esta solución debe ser preparada en el momento de la reacción.

5. Solución acuosa de ácido sulfúrico (1 mol/l). Estándares 1..Solución estándar de cianuro. Disolver 50 mg de cianuro de potasio en 100 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio (0.1 mol/l):Concentración del ion de cianuro : 200 mg/l. Tener precaución cuando se usan soluciones de cianuro.. 2.. Solución de calibración de cianuro: Diluir (1:99) la solución estándar del ion cianuro (200 mg/l) en solución acuosa de hidróxido de sodio (0.1 mol/l); obteniendo una solución de concentración de ion cianuro de 2 mg/l. Método 1. Rotular siete cápsulas de microdifusión desde (a) a (g) y agregar los reactivos que se muestran en la tabla 25. en la parte exterior de la cápsula, y reactivo 5 (ácido sulfúrico diluido) en el lado opuesto de la misma. 2. Agregar 2 ml de solución del hidróxido de sodio al compartimiento interno. Se tapa cada cápsula usando silicona y cuidadosamente se mezclan los componentes de la parte externa y se incuban a temperatura ambiente durante 20 minutos. 3. Pipetear 1.0 ml de la solución del hidróxido de sodio de cada uno de los compartimentos internos en tubos enumerados.

4. Agregar los reactivos siguientes secuencialmente y agitar para mezclarlos. (a) 2 ml de Buffer fosfato (b) 1 ml de solución de cloramina T (c) 3 ml de reactivo piridina - ácido barbitúrico. Tabla 25. Cápsula Solución de

Cianuro (ml)

Agua (ml) Acido Sulfúrico (ml)

Sangre (ml)

(a) Blanco de reactivo (b) Muestra problema (c) Muestra problema (d) Cianuro, 0.2 mg/l (e) Cianuro, 1.0 mg/l (f ) Cianuro, 2.0 mg/l (g) Cianuro, 4.0 mg/l

-------- -------- -------- 0.1 0.5 1.0 2.0

2.0 1.0 1.0 1.9 1.5 1.0 -----

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

--------- 1.0 1.0 --------- --------- --------- ---------

Resultados La presencia de cianuro se indica por un color rojo/azulado. Medir la absorbancia a 587 nm de cada solución contra los blancos de agua diluyendo si necesario para permitir que entre en escala. Construya un gráfico de la calibración con las concentraciones que se obtuvieron de las soluciones estándar de cianuro y calcular la concentración de cianuro en la muestra. Sensibilidad Cianuro, 0.2 mg/l. 3. DETERMINACION CUANTITATIVA DE CN POR MICRODIFUSION (Método de Tompsett) Reactivos: SO4 H2 6N:16ml de ácido sulfúrico concentrado llevarlo a 100ml con agua destilada. NaOH : disolver 4g de NaOH llevando a 100ml con agua destilada. Agua de bromo a saturación. Ácido acético puro. Solución de arsenito de sodio: disuelva 1g de As2O3 en el mínimo volumen posible de solución de NaOH 2 N y completar luego a 50ml.

Reactivo piridina – bencidina: disuelva 0,36g de bencidina en 10ml de HCL 0,5N. Por otra parte en una probeta se colocan 12 ml de piridina pura y se llevan a 20 ml con agua destilada agregando luego 2 ml de HCL concentrado. El reactivo se prepara agregando 5ml de la solución de bencidina a 20ml de la solución de piridina ácida. La mezcla debe prepararse en el momento de su uso. Técnica: En una cámara de Conway convenientemente preparada colocar en el compartimiento interno 1ml de NaOH 1 N y en el compartimiento externo 2ml de sangre (puede adaptarse al método utilizando en lugar de sangre 1 a 2g de macerado de tejido). Cubrir la cámara con la tapa de vidrio dejando únicamente el lugar necesario para agregar 0,5ml de SO4H2 6N al compartimiento externo. Una vez agregado el sulfúrico tapar inmediatamente y mezclar con cuidado. Dejar en reposo a temperatura ambiente durante 2 horas. Transcurrido dicho lapso agregar en el compartimiento interno 0,1 ml de arsenito de sodio. Después de la reducción total del bromo agregar 0,5ml del reactivo piridina – bencidina. Mezclar bien y con una pipeta o gotero se transfiere la solución coloreada a un tubo de ensayo. Se efectúan dos lavados del compartimento interno con 0,6ml de agua destilada cada vez juntando estos lavados cuantitativamente con la solución del tubo de ensayo. Se mezcla y se deja en reposo durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se determina la absorbancia a 520nm contra un blanco de reactivos. Testigo: Utilice un testigo de sangre que contenga 10ug de NaCN por cada 2ml de sangre. Dos mililitros de ese testigo se procesan de la misma manera y simultáneamente con la muestra problema. (En otra cámara). Preparación de la sangre testigo: Solución madre de NaCN: pesar 100mg de NaCN, disuelva y lleve a 100 ml en matraz aforado con agua destilada. Solución hija de NaCN: se toman 10ml de la solución madre y se llevan a 100 ml en matraz aforado con agua destilada. Esta solución contiene 100ug de NaCN por mililitro. En un tubo de ensayo se colocan 9,5 ml de sangre y se agregan 0,5ml de la solución hija. Mezclar. Nota: Debe tenerse la precaución de utilizar un NaCN de buena calidad. Además el frasco que lo contiene debe haber estado perfectamente tapado puesto de no ser así, en función del tiempo, se produce una carbonización con liberación de HCN. Resultado: Exprese el resultado como ug de NaCN por 100ml de sangre. En las intoxicaciones por inhalación de HCN pueden registrarse valores de 100ug o más por 100 ml de sangre.

En los casos de muerte por ingestión de dosis elevadas (200mg de NaCN) la concentración sanguínea puede ser del orden de los miligramos por 100ml. Mecanismo de la reacción: El agregado del ácido sulfúrico a la sangre hace que se libere HCN que difunde en la atmósfera de la cámara. El hidróxido de sodio del compartimiento interno fija el HCN formando NaCN. El bromo actúa sobre el cianuro dando bromuro de cianógeno: CN- + Br2 BrCN + Br- Este bromuro de cianógeno reacciona con la piridina para originar el bromuro de cianopiridina: Br CN + N Br- N + CN Este compuesto por hidrólisis sufre la apertura del anillo piridina dando lugar al aldemidoglutacónico: Br - + H2O O + Br - + H+ + NH2 CN N + HOHC C H CN Si este derivado se acopla a aminas cíclicas (bencidina, anilina, etc.). Se obtienen compuestos coloreados (bases de Schiff): + 2 R – NH2 + 2 H2O O HN – HC CH = N - R HO HC O H

Interpretación clínica El envenenamiento agudo con cianuro se caracteriza por ataxia, dolor de cabeza, ansiedad, disnea, confusión, coma, colapso, acidosis metabólica, edema pulmonar y paro respiratorio. La cianosis puede no estar presente. El tratamiento de soporte incluye la administración de oxígeno. Un número de antídotos se ha usado, incluso la hidroxocobalamina, nitrito de sodio y tiosulfato de sodio, edetato de dicobalto. En el envenenamiento agudo con sales de cianuro o ácido cianhídrico, las concentraciones del ion cianuro en sangre normalmente son del orden de 2-10 mg/l. La prueba cualitativa descripta anteriormente tiene insuficiente sensibilidad para descubrir estas concentraciones y sólo deben usarse para contenido estomacal y residuos de la escena. Las medidas cuantitativas de cianuros tienen muy poca relevancia en la intoxicaciones agudas ya que la terapia debe comenzare tan pronto como sea posible. El cianuro también puede estar presente en la sangre de víctimas de incendios debido a la inhalación de cianuro de hidrógeno de la combustión parcial de lana, seda y los polímeros sintéticos como poliuretanos y poliacriilonitrilos. En tales casos, las concentraciones de cianuro en sangres pueden ir desde 0.2 a 1.0 mg/l. El monóxido del Carbono puede también estar presente. Las concentraciones de cianuro en sangre en los grandes fumadores de cigarrillos puede ser tan alto como 0.3 mg/l.

Clormetiazole Clormetiazole; 5-(2-cloroethl)-4-metiltiazole; C6H8ClNS; la masa molecular relativa, 162,

Figura 17 : ESTRUCTURA QUÍMICA El clometiazol se usa como un hipnótico en paciente mayores como un anticonvulsivante, y en el tratamiento de dependencia al alcohol y droga. Menos del 5% de una dosis oral se excreta sin alteración en la orina, y un número grande de metabolitos. El clometiazol tiene un olor característico en la respiración y en el contenido estomacal.- No hay ninguna prueba cualitativa simple para investigar el clometiazol, pero este compuesto y sus metabolitos pueden identificarse por cromatografía en capa delgada en un extracto solvente básico de orina .- Interpretación clínica El envenenamiento agudo con el clometiazol puede causar estornudos, aumento de la salivación, irritación de la conjuntiva, hipotensión, hipotermia, coma, depresión respiratoria. El etanol potencia los efectos depresivos del clometiazol en el sistema nervioso central, y estos compuestos se encuentra a menudo juntos en los casos fatales. El tratamiento es sintomático y de sostén.-

Cloratos El clorato de sodio (NaClO3) se usa como un herbicida y fósforos, fuegos artificiales. También se usan los cloratos en cantidades pequeñas en gárgaras y pastas dentífricas. En un adulto, el envenenamiento agudo puede seguir luego de la ingestión de 15 g de clorato de sodio. Los cloratos son muy buenos agentes oxidantes y la prueba dada debajo también descubrirá los compuestos con similares propiedades, como los bromatos, hipocloritos, yodatos, nitratos, y nitritos. Prueba cualitativa Aplicable para contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos Difenilamina (10 g/l) en ácido sulfúrico concentrado ( densidad 1.83). Método 1. Filtrar 5 ml de contenido estomacal en un tubo de vidrio de 10-ml 2. Agregue 0.5 ml del filtrado o residuo de la escena a un tubo limpio y agregue cuidadosamente 0.5 ml de solución de difenilamina por las paredes del tubo para que forme una capa bajo la muestra. Resultados Un verdadero positivo se indica por un color azules fuertes que desarrolla inmediatamente a la unión de las dos capas. Un azul más claro serán dados por la mayoría de las muestras de contenidos estomacal que tiene presencia de material orgánico. Debido a que es un agente fuertemente oxidante en muestras biológicas la prueba tiene que realizarse tan pronto como sea posible.- Sensibilidad Clorato, 10 mg/l. Prueba confirmatoria Aplicable para contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Reactivo de sulfato manganoso. Mezclar sulfato de manganeso saturado con ácido o-fosfórico (1:1). 2. Difenilcarbazida (10 g/l) en metanol.

Método 1. a 0.1 ml de solución de la prueba agregar 0.2 ml del reactivo de sulfato de manganeso y calentar brevemente con lámpara . 2. Enfriar y agregar 0.1 ml de solución del difenilcarbazida.- Resultados Un color púrpura-violeta que se intensifican después de enfriar y agregar la difenilcarbazida indica la presencia de clorato. Los persulfatos y periodatos dan una reacción similar; el persulfato puede eliminarse evaporando la solución de la prueba con 0.1 ml de ácido sulfúrico concentrado ( densidad relativa 1.83 ) y 0.1 ml de solución de nitrato de plata (10 g/l). Sensibilidad Clorato, 100 mg/l. Interpretación clínica El envenenamiento agudo con los cloratos puede causar náuseas, vómitos, diarrea, dolor abdominal, confusión, coma y convulsiones. La metahemoglobinemia se produce a menudo y esto puede indicarse por el color de la sangre chocolate . La metahemoglobina en sangre pueden medirse pero es inestable si no se guardó en heladera.- El tratamiento es sintomático y de sostén.

Cloralose alfa-Cloralose; (R)-1,2-O-(2,2,2-tricloroetilideno)-alfa-D - el glucofuranosa; C8H11Cl3O6; la masa molecular relativa, 310,

Figura 18: ESTRUCTURA QUÍMICA El cloralose es una droga hipnótica y se ha usado como anestésico en cirugía de animales del laboratorio. También se usa como repelente para granos de semilla de pájaro , como un rodenticide, sobre todo contra los ratones, en refrigeración. La dosis asociada con la toxicidad en los adultos es aproximadamente 1 g. El cloralose puede ser oxidado con ácido periódico a acido tricloroacético, quien puede ser detectado por el método de Fujiwara como el tetracloruro de carbono. Se piensa que el chloralose sufre una hidrólisis en el ser vivo, y en la orina de pacientes que habían ingerido el cloralose da una reacción positiva sin la oxidación del periodato. Sin embargo, trabajo recientes sugieren que éste no sea el caso. Prueba cualitativa Aplicable a plasma o suero, orina, contenido estomacal y residuos de la escena Esta prueba debe realizarse bajo una campana.- Reactivos 1. Reactivo del ácido periódico. Mezcle 3 g de periodato de sodio y 3 ml de solución acuosa de ácido sulfúrico (0.5 mol/l) y diluir a 100 ml con agua destilada.- 2. Solución acuosa de hidróxido de sodio (5 mol/l, es decir, 200 g/l). 3. Solución acuosa del ácido tricloroacetico (10 mg/l). Método

1. Agregue 1 ml de reactivo ácido periódico a 1 ml de solución de la prueba (o a una porción de un residuo sólido extraído con 1 ml de agua) en un tubo de vidrio de 10-ml de capacidad.- 2. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. 3. Separar los tubos y agregar 2 ml de: (a) solución testigo; (b) agua destilada; (c) solución acuosa del ácido tricloroacético 4. Agregue 1 ml de solución de hidróxido de sodio y 1 ml de piridina a todos los tubos (cuatro) mezcle suavemente y tapar con tapón algo suelto.- 5. Calentar en baño de agua hirviente durante 2 minutos. Resultados Un intenso color rojo púrpura en la capa superior de piridina en el tubo periodato tratado indica la presencia de cloralose. El tubo que tiene la prueba del análisis sin el periodato se realiza para excluir la presencia de los compuestos, como hidrato de cloral que da lugar al tricloroacético, el ácido en el ser vivo. El tubo del análisis blanco excluye la contaminación clorofórmica de la atmósfera del laboratorio. Sensibilidad Tricloroacetato, 1 mg/l. Interpretación clínica La ingestión de cloralose puede causar adormecimiento, hipotonía y coma. El tratamiento es generalmente sintomático y de sostén.-

Cloroformo Triclorometano; CHCl3;masa molecular relativa 119 El cloroformo fue usado como un anestésico y como solvente en general, pero es relativamente tóxico desde que es metabolizado a fosgeno (COCl2)que es un potente tóxico hepatorrenal.- El cloroformo puede ser detectado usando el reactivo de Fujiwara. Aunque este test detectará la ingestión o exposición de cualquier compuesto que sea metabolizado a ácido tricloroacético como el hidrato de cloral, dicloroalfenazona y tricloroetileno. Test cualitativo Aplicable a orina. Reactivo de Fujiwara -ver monografía de tetracloruro de carbono. Este test debe ser realizado bajo campana.- Resultados Un intenso color rojo/púrpura en la capa superior de piridina indica la presencia de compuestos del tricloro. El blanco con agua destilada excluye la contaminación con los compuestos como el cloroformo de la atmósfera del laboratorio. Otros compuestos reaccionan con esta prueba pero el tricloroacético es el más común. Sensibilidad Tricloroacetato, 1 mg/l. Interpretación clínica La intoxicación aguda con cloroformo es rara. Los síntomas clínicos incluyen ataxia, nauseas, vómitos, coma, convulsiones, depresión respiratoria, arritmias cardíacas y daño hepatorrenal. El tratamiento es sintomático y de sostén. La acetilcisteína protege para el daño hepatorrenal. (ver Tabla 4).

Clorofenoxi Herbicidas Estos compuestos tienen una fórmula general que se muestra abajo. Algunos herbicidas clorofenoxi más comunes se muestran en la tabla 23.-

Figura 19 : ESTRUCTURA QUIMICA 2,4-D (no debe ser confundido con DNOC, i.e. dinitro-o-cresol, estos compuestos son usados en el control de extensiones en los céspedes y cosechas de cereal y control de vegetación para que no crezca mucho. Se encuentran como mezclas, ambos con otros miembros de este grupo y con otros pesticidas. Test cualitativo Aplicable a contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos 1. Solución acuosa de ácido clorhídrico (1 mol/l). 2. Nitrito de sodio (100 g/l) en ácido sulfúrico concentrado (densidad relativa 1.83), recientemente preparada. Tener cuidado porque liberan humos de dióxido de nitrógeno.- 3. Acido cromotrópico (2,5-dihidroxinaftaleno-2,7-ácido disulfónico)(2 g/l) en ácido sulfúrico concentrado (densidad relativa 1.83). Tabla 23. Algunos herbicidas clorofenoxidos Compuesto Nombre químico R1 R2 R3 Masa Molecular 2,4-D 2,4-acido-diclorofenoxiacetico Cl H CH2COOH 221 2,4-DP 2-(2,4-acido Diclorofenoxi) Cl H CH(CH3)COOH 235 MCPA 4-Cloro-2-acidometilfenoxiacetico CH3 H CH2COOH 201 MCPP acido(4-Cloro-2-metilfenoxipropiònico)CH3 H CH(CH3)COOH 215 2,4,5-T 2,4,5-acido Triclorofenoxiacetico Cl Cl CH2COOH 256 2,4,5-TP 2-(2,4,5-acidoTriclorofenoxipropìonico)Cl Cl CH(CH3)COOH 270

Metodo 1. Agregue 1 ml de solución de ácido clorhídrico a 10 ml de muestra, y extraer con 20 ml de tolueno mezclar durante 5 minutos. 2. Centrífugar durante 5 minutos, sacar la parte superior de tolueno y extraer el residuo con una segunda porción de 20-ml de tolueno. 3. Combinar el extracto de tolueno y evaporar a sequedad bajo un corriente de aire comprimido o nitrógeno en un baño de agua a 60°C. 4. Disolver el residuo en 0.2 ml de ácido sulfúrico concentrado y dividir entre dos pocillos de porcelana . 5. Agregar 0.1 ml de solución de nitrito de sodio a uno y 0.1 ml de solución de ácido cromotrópico al otro pocillo. 6. Calentar la placa de porcelana con una tapa en baño de agua hirviente a 80°C. Resultados Los colores dados por algunos compuestos de clorofenoxi más comúnes son indicados en la tabla 24. Estas pruebas no son específicas y sólo pueden usarse para indicar la presencia de compuestos del clorofenoxi. Tabla 24. Reacciones de color de algunos compuestos de clorofenoxi Compuesto Con nitrito de sodio Con acido cromotrópico 2,4-D marrón púrpura 2,4,-DP marrón oscuro púrpura claro MCPA marrón claro púrpura claro MCPP marrón claro púrpura 2,4,5-T no reacciona púrpura 2,4,5-TP no reacciona rosa claro/púrpura Nombre químico ver tabla 23 Sensibilidad Compuestos clorofenoxi , 500 mg/l. Interpretación clínica La absorción de herbicidas clorofenoxi producen vómitos, diarrea, arreflexia, calambres musculares, edema pulmonar, y coma, con muerte en casos severos.- La alcalinización incrementa la excreción renal de 2,4-D y otros compuestos clorofenoxi y lo que protege la toxicidad sistémica.

Cloroquina 7-Cloro-4-(4-dietilamino-1-metilbutilamino)quinolona; C18H26ClN3; la masa molecular relativa, 320,

Figura 20 : ESTRUCTURA QUÍMICA La cloroquina es un derivado de 4-aminoquinolina y normalmente se usa en el tratamiento de la malaria. La Cloroquina tiene una vida media larga en el cuerpo (25-60 días) y se forman varios productos metabólicos, inicialmente por N-dealquilación y deaminacion. Una dois tan pequeña como 1 g de cloroquina puede causar la muerte en un niño joven, y las fatalidades en los adultos han ocurrido después de la ingestión de entre 3 y 44 g. No hay ninguna prueba simple para identifica la cloroquina en fluidos biológicos, pero este compuesto y sus metabolitos pueden ser identificados por cromatografía en capa delgada en un extracto solvente básico de orina . Una vez que la placa se saca del tanque cromatografíco se seca y observa al UV (254 nm y 366 nm)en donde la quinina, el cloroquina tienen fluorescencia lo que representa, una característica adicional para ayudar la identificación. Interpretación clínica Los envenenamientos agudos por cloroquinas pueden aparecer luego de 30 minutos de la ingestión. Los síntomas clínicos incluyen náuseas, vómitos, dolor abdominal, diarrea, tinnitus, visión borrosa, vértigo, agitación, hipotensión, coma, convulsiones y depresión respiratoria. La muerte súbita y el fallo cardiorespiratorio puede ocurrir en los casos severos. El tratamiento es sintomático y de sostén, aunque la combinación específica de diazepam y epinefrina ha demostrado ser eficaz.-

COBRE Las sales de cobre como el sulfato, cloruro, y carbonato de cobre(II) las sales de cupramonio como el carbamato de cupramonio (Cu(NH3)2CO3) se usan como insecticidas y fungicidas. Como con las sales de hierro, las sales de cobre imparten a menudo un color azul o verde en el contenido estomacal. Las sales de Cupramonio son mucho más tóxico que sales de cobre debido a la rápida absorción y a la toxicidad intrínseca del ion del cupramonio. El envenenamiento agudo también puede producirse por inhalación de humos de cobre metálicos o el polvo. Prueba cualitativa Aplicable al contenido estomacal y a residuos de la escena. Reactivos 1. Ditiooxamida en el metanol (10 g/l). 2. Hidróxido del amonio concentrado (densidad relativa 0.88). Método 1. Suavemente colocar 0.1 ml de muestra en un papel de filtro para producir

una mancha no mayor de 1 centímetro de diámetro, secando con secador si es necesario.

2. Exponer la mancha a vapores de hidróxido de amonio concentrado en

campana y agregar 0.1 ml de ditiooxamida para la resolución de la mancha.

Resultados Las sales de cobre dan una mancha color verde - aceituna. Las sales del cromo también dan una mancha verde que es normalmente visible antes del agregado de ditiooxamida. Varios otros metales dan amarillo- castaño o colores del rojo-castaño con este reactivo. Sensibilidad Cobre, 1 mg/l. Prueba confirmatoria Aplicable para contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos

1. Solución acuosa de acetato de cinc (10 g/l). 2. Reactivo de mercuritiocianato de amonio. Mezcle 8 g de cloruro mercúrico y 9 g de tiocianato de amonio en 100 ml de agua destilada. 3. Solución acuosa de ácido clorhídrico (0.01 mol/l). Método 1. Colocar 0.1 ml de muestra en un pocillo de placas de toque de porcelana y agregar 0.05 ml de ácido clorhídrico diluido. 2. Mezclar 0.1 ml de reactivo de mercuritiocianato de amonio con 0.1 ml de la solución de acetato de cinc y agregársela al pocillo con la muestra. Resultado Un precipitado violeta de mercuritiocianato de cinc indica presencia de sales de cobre. Sensibilidad. Cobre, 50 mg/l. Ensayo cuantitativo. Aplicable a plasma o suero (1 ml). Reactivos. 1. Reactivo de Oxalil dihidrazida Mezclar 8 ml de oxalil dihidrazida acuoso saturado con, 12 ml de hidróxido de amonio concentrado (densidad 0.88), 20 ml de acetaldehido (400 ml/l) y 20 ml de agua destilada. 2. Solución acuosa de ácido tricloroacetico (200 g/l). 3. Solución acuosa de ácido clorhídrico (2 mol/l). Estándar Disuelva 1.00 g de la lamina de cobre, malla o alambre en un volumen mínimo de ácido nítrico (500 ml/l) y llevar a 1 litro con ácido nítrico diluido (10 ml/l).

Diluya porciones de esta solución con agua para dar soluciones que contengan concentraciones del ion cobre de 1.0, 2.0 y 5.0 mg/l. Método 1. Agregar 0.7 ml de ácido clorhídrico a 1 ml de muestra y al estándar en un

tubo del centrífugo plástico, mezclar y dejar reposar por 15 minutos. 2. Agregar 1 ml de solución de ácido tricloroacetico y mezclar. 3. Esperar 15 minutos y centrifugar durante 5 minutos. 4. Agregar 3 ml de reactivo de oxalil dihidrazida a 1 ml del sobrenadante. Dejar descansar por 20 minutos. Resultados Leer la absorbancia de la solución a 542 nm contra un blanco de agua (ver sección 4.5.2) Trazar una curva de absorbancia vs concentración de cobre de las soluciones estándar, interpolar el valor hallado de absorbancia en la curva de calibración y calcular la concentración en la muestra. El gráfico es lineal para las concentraciones de cobre de 1-25 mg/l. Sensibilidad Cobre, 1 mg/l. Interpretación clínica La ingestión de cobre o sales de cupramonio producen inicialmente síntomas gastrointestinales (sabor metálico, náuseas, vómitos, dolor epigástrico y diarrea). En los casos severos, daño hepático (particularmente en los niños), daño renal, hemolisis, coma y colapso circulatorio. Las concentraciones normales de cobre en suero son de 0.7-1.6 mg/l, pero en envenenamiento agudos severos concentraciones mayores de 5 mg/l pueden encontrarse. El tratamiento es sintomático y de soporte pero también puede incluir terapia del quelacion.

Cocaina Metil benzoilecgonina; (1R,2R,3s,5S)-2-metoxicarboniltropan- 3-yl benzoato; C17H21NO4;masa molecular relativa , 303

Figura 21 : ESTRUCTURA QUIMICA La cocaína es un alcaloide obtenido de la coca, las hojas secas de Erythroxylon y otras especies de Erythroxylon, o por la síntesis de ecgonina. La sal hidroclorhídrica es un anestésico local muy eficaz , el anestésico se usa en concentraciones de 10-200 g/l, pero normalmente es aplicado en forma de tópicos debido al riesgo de toxicidad sistémica. El abuso de cocaína frecuentemente es por inyección o inhalación (aspirando); la cocaína ingerida tiene menos efecto porque se hidroliza en el tracto gastrointestinal.;. La base libre (crack) es rápidamente absorbido cuando fue inhalado por vía nasal o fumado. La dosis mínima fatal en un adulto es de 1-2 g, pero en un adicto debe tolerar por encima de 5 g/día. El metabolito principal es la benzolilecgonina, ecgonina y metil ester ecgonina..Sólo el 1-9% de una dosis intravenosa es excretada en la orina como cocaína, mientras que el 35-55% es excretado como benzoilecgonina.- No hay ninguna prueba cualitativa simple para identificar la cocaína, pero este compuesto y sus metabolitos pueden determinarse por cromatografía de capa delgada en un extracto solvente básico de orina con testigos indubitables . Por métodos inmunoquìmicos.- Interpretación clínica Los envenenamientos agudos por cocaína causan euforia, inquietud, vómitos, pirexia, midriasis, delirio, temblor, hiperreflexia, hipertensión, hiperventilation, convulsiones y fallo cardiorespiratorio. El tratamiento es sintomático y de sostén.-

Codeina Metil éster morfina; 3-O-metilmorfina monohidratada; C18H21NO3ÀH2O; masa molecular relativa 317

Figura 22 : ESTRUCTURA QUIMICA La codeína es un analgésico narcótico obtenido del opio o por DImetIlacion de la morfina. La codeína es metabolizada por O-demetilacion y N-demetilacion para dar morfina y norcodeina, respectivamente, y por conjugación forma glucuronidos y sulfatos de ambas drogas y metabolitos. La dosis fatal estimada de codeína en un adulto es 800 mg., aunque la codeína es mucho menos tóxica que la morfina, la muerte por codeína es rara. No hay ninguna prueba cualitativa simple para la identificar codeína, pero pueden determinarse este compuesto y norcodeina por cromatografía en capa delgada en un extracto solvente básico de orina .- Interpretación clínica La sobredosis aguda de codeína produce pupilas mióticas, hipotensión, hipotermia, coma, convulsiones, edema pulmonar y arritmias cardíacas. La muerte puede ocurrir por depresión respiratorio profunda. La Naloxona revierte rápidamente el efecto tóxico central de la codeína.(ver sección 2.2.2).

Actividad de la colinesterasa Algunos insecticidas como los carbamatos y organofosforados interfieren en la transmisión nerviosa inhibiendo la acetilcolinesterasa. La medida semicuantitativa en el plasma de la actividad de la colinesterasa es una medida simple de exposición a estos compuestos.- Método cualitativo Aplicable a plasma o suero. Reactivos 1. Reactivo ditiobisnitrobenzoato . 5,5'-Ditiobis(más 2-nitrobenzoico) (0.2 g/l) en buffer ortofosfato de sodio dihirogenado (0.1 mol/l, pH 7.4). 2. Solución acuosa de acetiltiocolina iodada (5 g/l). 3. Solución acuosa de cloruro de pralidoxima (200 g/l). 4. Plasma o suero de un expuesto (control plasma). Método 1. Agregar 2.0 ml de reactivo de ditiobisnitrobenzoato y 1.0 ml de solución de acetilcolina iodada en cada uno de los tres tubos de 10 ml.- 2. Agregar 20 µl del plasma control a uno tubo y 20 µl del plasma testigo a un segundo tubo.- 3. Agregar 20 µl de solución de pralidoxima y 20 µl de plasma testigo al tercer tubo. 4. Mezclar el contenido de todos los tres tubos y dejar descansar a temperatura ambiente por 2 minutos.- Resultados La presencia de un inhibidor de acetilcolinesterasa se indica con el color amarillo en el tubo testigo y es más profundo que en el tubo problema.- Si el color en el tubo que contiene la pralidoxima es similar al tubo testigo, esto proporciona la confirmación extensa que un inhibidor de acetilcolinesterasa está presente en la muestra .- Interpretación clínica La exposición a los pesticida organofosforados puede causar broncorrea, dolor respiratorio, salivación excesiva, náuseas, debilidad

muscular, y finalmente la parálisis. El tratamiento es de sostén, pero también debe incluirse la administración de atropina y pralidoxima.- La exposición a los pesticidas carbamatos causa anorexia, dolor abdominal, náusea, vómitos, diarrea, lagrimación, aumento de la salivación, sudor profuso, ansiedad, ataxia y edema pulmonar agudo. La terapia con antídoto es con atropina , pero la pralidoxima no deben ser usada.- Método cuantitativo SECCIÓN DEL PROCEDIMIENTO 1. Aplicación 1.1 Este método es aplicable a la determinación de acetilcolinesterasa

(AcChe) en muestras de sangre. 1.2 El límite de detección de este método es el resultante de considerar el �

absorbancia del equipo (en la mayoría de los casos es igual a 0,001 y corresponde a 287 UI/l)

1.3 El coeficiente de variación se considera aceptable cuando es menor o

igual al 5%. 1.4 Mediante este método se puede determinar la actividad de la

acetilcolinesterasa en un rango de 287 a mayor de 11760 UI/l. 2. Resumen del método 2.1 La AcChe hidroliza a la acetiltiocolina siendo los productos de hidrólisis

acetato y tiocolina. La tiocolina reacciona con el ácido 5,5-ditiobis-2 nitro benzoico (DTNB) formando el compuesto coloreado 2-nitro-5-mercaptobenzoato, el cual puede medirse espectrofotométricamente a 405 nm.

2.2 La actividad de la enzima varía con la temperatura por lo cual se

recomienda efectuar la determinación a temperatura constante ± 2º C 2.3 Las temperaturas recomendadas: 25 ó 30º C. 3. Precauciones de seguridad 3.1 Se requiere guantes, anteojos de protección y todas las medidas de

precaución adecuadas para el manipuleo de muestras biológicas. 3.2 Material adecuado para el descarte del material biológico.

3.3 Cada reactivo debe ser considerado como un peligro potencial a la salud y la exposición a estos compuestos debe ser minimizada por buenas prácticas de laboratorio.

4. Precauciones 4.1 Solución Tampón- cromógeno: ácido 5,5'-ditiobis-2 nitro benzoico

(DTNB) : 0,26 mmol/l Conservar en heladera y al abrigo de la luz. Estabilidad 1 mes

aproximadamente. 4.2 Solución de yoduro de acetil tiocolina (sustrato) 156 mmol/l.

Mantener al abrigo de la luz y en heladera. En estas condiciones es estable durante 7 a 12 días.

4.3 Verificar que la celda de vidrio esté limpia y no presente rayaduras e

imperfecciones. 4.4 Se recomienda efectuar determinaciones con muestras controles cada

vez que los reactivos son renovados. 4.5 Lavado del material de vidrio

Los frascos utilizados para el almacenamiento de las muestras pueden ser de vidrio borosilicato o polietileno y deben ser lavados y enjuagados de la siguiente manera: a) Se lava con solución de detergente especial (extrán alcalino Merck o

similar) para limpieza de material de vidrio. b) Se enjuaga con abundante agua de grifo para remover los residuos

de detergente. c) Se enjuaga finalmente con agua destilada. d) Se seca en estufa a 50 º C.

5. Instrumental/materiales

5.1 Espectrofotómetro UV-Visible con celda portacubeta termostatizada. 5.2 Pehachímetro. Precisión : ± 0,1 unidad de pH. 5.3 Frascos de vidrio de 100 ml y 50 ml. 5.4 Probetas de 100 y 50 ml. 5.5 Pipetas graduadas de 50 y 0,2 ml. 5.6 Pipetas automáticas de 100 y 20 �l 5.7 Frascos volumétricos de 50 y 100 ml.

6. Reactivos

Nota: Se debe utilizar reactivos de grado analítico o superior y que cumplan con normas internacionales de calidad (ACS, ISO).

Nota: Todos los reactivos se deben almacenar en recipientes adecuados, provistos de etiquetas indicando el nombre del reactivo, fecha de preparación e iniciales del analista.

6.1 Solución de Na2HPO4 .12H2O 52 mmol/l.

Pesar 1,86 g de la droga sólida y llevar a 100 ml con agua destilada.

6.2 Solución de NaH2PO4 .2H2O 52 mmol/l. Pesar 0,405 g de la droga sólida y llevar a 50 ml con agua destilada.

6.3 Solución Tampón fosfato: Na2HPO4 / NaH2PO4 : 52 mmol/l pH= 7,2

Colocar aproximadamente 65 ml de la solución de Na2HPO4 y 35 ml de la solución de NaH2PO4 en un vaso de precipitado de 250 ml. Ajustar el pH a 7,2.

6.4 Solución Tampón- cromógeno: ácido 5,5-ditiobis-2 nitro benzoico

(DTNB) : 0,26 mmol/l Pesar 10,3 mg del DTNB y disolverlos en 100 ml de la solución tampón.

6.5 Solución de yoduro de acetil tiocolina (sustrato) (Sigma - Nº de catálogo

A 5751) 156 mmol/l. Pesar 90 mg de la droga sólida y disolverla en 2 ml de agua destilada.

7. Calibración del equipo 7.1 Para el manejo del espectrofotómetro UV-visible, consúltese el manual

de operación del equipo. 7.2 Se enciende la computadora 7.3 Se enciende el espectrofotómetro UV-visible, el monitor y la impresora. 7.4 Se ingresa el nombre del analista. 7.5 Se introducen los siguientes datos:

a) Longitud de onda (λ): 405.0 nm. b) Nombre del analito:acetilcolinesterasa. c) Tipo de reacción: cinética. d) Reporte de datos:delta absorbancia / minuto.

7.6 Se coloca la celda de vidrio con los reactivos excepto la solución de

sustrato y se ajusta la temperatura a 25 ó 30 º C. Esperar que la temperatura se estabilice.

7.7 Agregar la solución del sustrato. Agitar bien. 7.8 Se realizan las lecturas de absorbancia cada 30 segundos o por minuto. 8. Muestra 8.1 Sangre entera heparinizada (5 ml). Otros anticoagulantes como citrato,

fluoruro u oxalato producen una leve inhibición de las enzimas. 8.2 Centrifugar la muestra de sangre a fin de separar el suero del paquete

globular. 8.3 Lavar el paquete globular 3 veces con solución fisiológica, centrifugando

cada vez la suspensión y descartar los líquidos de lavado. 8.4 Tomar 100 �l del paquete globular de la parte media del centrifugado,

colocarlo en otro tubo y agregarle 2,4 ml de agua destilada a fin de obtener una dilución 1/25.

8.5 Se produce en estas condiciones la hemólisis de los glóbulos rojos.

Homogeinizar bien. 9. Procedimiento de análisis 9.1 En la cubeta del espectrofotómetro mantenida a 25º ó 30º C colocar 3 ml

de la solución tampón fosfato - cromógeno y 20 �l del hemolisado de la muestra

9.2 Se agita y se Incuba durante 3 minutos. 9.3 Si agregan 100 �l de la Solución de yoduro de acetil tiocolina (sustrato)

y se mezcla bien. 9.4 Leer la absorbancia inicial y cada 30 segundos durante 2 -3 minutos a

405 nm

Tampón fosfato -cromógeno

3 ml

Hemolisado de la muestra 20 �l Incubar 3-4 minutos Sustrato 100 �l Mezclar bien Leer a � 405 nm

10. Análisis de datos 10.1 La actividad de la acetilcolinesterasa se expresa en UI/l según el

siguiente cálculo: UI/l = �Abs/min. x106x vol. final del ensayo (l) x f de dil. �x paso óptico(cm) x vol. de muestra (l) Vol. final del ensayo = 0.00312 l Vol. de muestra = 0.000020 l Paso óptico = 1 cm f. de dil. = factor de dilución �=coeficiente de extinción molar =13600 l /mol x cm 106 = por pasar micromoles a moles

UI/l = �Abs/min x106x 0.00312 x f dil 13600x1 x 0.00002 (l) UI/l = �Abs/min x 11470x f dil.

10.2 Valores de Referencia (30 ºC): 7120 – 11760 U/l SECCIÓN DE CONTROL DE CALIDAD 1. Control de la exactitud

Para comprobar la exactitud del análisis se puede usar una muestra de control externo de la actividad de la esterásica y/o de control interno, (un pool de plasma o suero de individuos sanos no expuestos a sustancias inhibidoras de las enzimas colinesterasas). Se compara el resultado con su valor de referencia y límites de aceptación. Cuando el resultado no se encuentre dentro del rango de los límites, se debe revisar el procedimiento y repetir el análisis.

2. Control de la precisión

En el caso del análisis de una serie de muestras, se debe realizar un duplicado en cada lote de 6 muestras. La diferencia entre la muestra y el duplicado no debe ser mayor de 15 %.

3. Cartas de control

Se debe mantener al día las cartas de control para las muestras duplicadas y el estándar de control interno.

CUMARINA (ANTICOGULANTE) Fenprocoumon:4-hidroxi-3-(1-fenilpropil)cumarina:C18H16O3; masa molecular relativa:280 y warfarina (4-hidroxi-3-(3-0xi-1fenilbutil)cumarina, C19H16O4; masa molecular relativa:308) son sustituidos por 4-hidroxicumarina. Figura 23 : ESTRUCTURA QUÍMICA

Estos compuestos se usan ampliamente como agentes terapéuticos. La warfarina es también usada como un rodenticida. Las dos sustancias inhiben la coagulación de la sangre por interferencia de la síntesis de los factores de coagulación vitamina-K-dependiente Su acción es acumulativa por lo tanto la toxicidad normalmente resulta de la administración crónica. En el contraste, la toxicidad aguda puede ocurrir con una sola dosis grande de un rodenticida "superwarfarinico" como el difenacuom o brodifacuom. El tiempo de protombina proporciona un método simple no especifico de medición de la severidad de envenenamientos de anticoagulantes y para el monitoreo del tratamiento. El método siguiente puede usarse para evaluar las concentraciones en plasma de fenprocoumon y warfarina. Prueba cualitativa Aplicable a plasma o suero (1.0 ml). Reactivos 1. Solución acuosa de ácido clorhídrico (1 mol/l). 2. n- butil acetato: cloroformo : solución acuosa de ácido fórmico(850 ml/l) (60:40: 10). 3. Trietilamina (50 g/l) en n-hexano. 4. Cromatografía en capa fina . Estándares Suero de concentraciones de fenprocoumon o de warfarina de 0,1, 5 y 10 mg/l.

Método 1. A 1.0 ml de la muestra o estándar se agrega 0.9 ml de ácido clorhídrico diluido, 0.1 ml de acetona y 5 ml de cloroformo.

2. Mezclar durante 2 minutos en un agitador mecánico y centrifuga por 10 minutos. 3. Retira la capa superior acuosa, filtrar el extracto a través de papel de filtro.El extracto se evapora a sequedad bajo aire comprimido o nitrógeno. Cromatografia en capa delgada. 1. Disolver el residuos en 50 µl de cloroformo, sembrar en la placa y desarrollarla hasta una altura de 10 centímetros. Solvente de corrida: n-butil acetato: cloroformo: ácido fórmico. Saturar la cuba . 2. Permitir que el solvente se evapore completamente, desarrollar de nuevo en Solvente de corrida: Trietilamina:n-hexano, observar bajo la luz ultravioleta (366 nm). Resultados La Warfarina (Rf aproximadamente 87) muestra una fluorescencia purpúrea oscura, el fenprocoumon (Rf aproximadamente 95) una púrpura más brillante. Las concentraciones plasmáticas de cualquier compuesto pueden ser evaluadas por la comparación con los resultados obtenidos de las estándares normales Sensibilidad Warfarina o fenprocoumon 0.5 mg/l. Interpretación clínica Las características de envenenamiento agudo con los anticoagulantes incluyen la aparición de petequias, formación del hematomas y hemorragia franca, sobre todo de los tractos genitourinarios y gastrointestinales. Las concentraciones de suero de cualquier compuesto mayor que 5 mg/l son acompañados a menudo por complicaciones hemorrágicas. El fenprocoumon y la warfarina tienen una vida media en plasma larga (6 - 7 días y 0.5 - 3 días respectivamente), y pacientes con concentraciones altas en el suero deben tratarse rápidamente. La terapia consiste en suplementacion con vitamina K hasta que el tiempo de protombina llegue al rango normal. En los casos muy severos pueden considerarse la administración intravenosa de plasma fresco o los factores de la coagulación purificados.