Introduccion a La Histologia
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Que es la Histología?
Es la rama de la Anatomía que se encarga de estudiar los tejidos celulares de un organismo. También se le llama Anatomía microscópica.
El cuerpo humano esta compuesto por células, matriz intercelular y liquido tisular.
El liquido tisular transporta los nutrientes y oxigeno, así como drena a la sangre y vasos linfáticos los productos de desecho y el dióxido de carbono.
Microscopia de luz
Preparación de los tejidos
Los pasos para preparar los tejidos son:
Fijacion
Deshidratacion y aclaramiento
Inclusion
Corte
Montaje y tincion de los cortes
Fijación Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no sólo retardan las alteraciones tisulares subsecuentes a la muerte sino que también conservan su configuración normal.
Deshidratación y aclaramiento
Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se aplica una serie gradual de baños de alcohol iniciando con alcohol al 50% y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100% para eliminar el agua (deshidratación). A continuación, el tejido se trata con xileno,una sustancia química que es miscible con parafina fundida. Este proceso se conoce como aclaramiento, ya que el tejido se torna transparente en xileno.
A las células les falta rigidez y se les proporciona con un soporte adecuado antes del corte, convencionalmente por inclusión.
Inclusión
Un medio de inclusión debe:
*Infiltrar el tejido en medio líquido
*Solidificarse por enfriamiento o polimerización para dar el soporte
a los pequeños detalles del interior de la muestra.
Con una buena técnica se pueden obtener secciones de unas 5 micras e incluso menores.
Sección o corte
Rehidratación
No se debe permitir que la muestra se seque porque se causarían daños por tensión superficial.
Hematoxilina eosina
Hematoxilina:*Tinte básico*Se une a ácidos nucleicos: ADN y ARN*Da color azuloso
Eosina:*Tinte ácido*Se une a componente básicos*Da color rosado
Tricrómica
Azul oscuro: núcleo
Rojo: músculo, queratina, citoplasma
Azul claro: mucinógeno, colágena
deMasson
Microscopía de luzGrupos de lentes que amplifican una imagen .
Luz: bombilla eléctrica.Lentes de objetivo.
Lentes del ocular aumentan la imagen en un factor de 10.Macro y micro métricos.
Imagen invertida.
El advenimiento de la computadora proporcionó un medio para capturar imágenes en forma digital.
Ventajas: Observacion inmediata de la imagen adquirida
Modificación digital de la imagen
Capacidad para realzar la imagen mediante el uso de programas de computadora disponibles en el comercio
Histoquímica
Método de tinción de tejidos que proporciona información sobre la presencia y localización de macromoléculas intracelulares y extracelulares.
*Ácido peryódico de Schiff (PAS).*
“INMUNOCITOQUIMICA”
En esta se utilizan anticuerpos marcados con fluoresceína o rodamina y anti anticuerpos para identificar una localización intracelular y extracelular de las macromoléculas mas precisa de la que es posible con la histoquímica.
Existen dos métodos de marcado con anticuerpo:
Directo: se marca el anticuerpo contra la macromolécula con un colorante fluorescente, se espera la reacción y el complejo resultante se puede observar con un microscopio de fluorescencia.
Indirecto: se prepara un anticuerpo marcado con fluorescencia contra el anticuerpo primario especifico para la macromolécula de interés. Una vez que reacciona el anticuerpo primario con el antígeno, se lava la preparación para eliminar el anticuerpo primario no unido, en seguida se añade el anticuerpo marcado y reacciona con el complejo antígeno-anticuerpo.
Es un método en el que se incorporan isotopos radioactivos en macromoléculas, que a continuación se observan con el uso de una película de emulsión superpuesta.
“AUTORRADIOGRAFIA”
Esta se da mediante el uso de electrones como fuente de luz lo que permite lograr una amplificación y resolución mucho mayores que las obtenidas con la microscopia de luz.
“MICROSCOPIA ELECTRONICA”
Microscopia electrónica de transmisión.
•cortes mas delgados.•Tinción con técnicas de precipitado de
metales pesados.•Fijadores especiales: preservan los
detalles estructurales y actúan como un colorante electrodenso.
•Perdida de energía cinética de los electrones.
Microscopia electrónica de barrido.
•Proporciona una imagen tridimensional del espécimen.
•Se utiliza para observar la superficie de un espécimen solido.
•El objeto que se observa se prepara de una forma especial.
Técnica de fractura por congelación (criofractura).
•La estructura macromolecular de las superficies interna de la membrana.
•Los especímenes congelados con criopreservadores no crean cristales de
hielo durante la congelación.•El tejido no sufre daño.
•Permite mostrar las proteínas transmembranales de membranas
celulares.