Iván PalomoFacultad de Ciencias de la Salud

Universidad de Talca

II Congreso Científico de Estudiantes de Tecnología Médica del Sur

Universidad de la Frontera

PLAQUETAS Y

ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS

Octubre, 2005

Figuras blanco-negro: libro Hematología: Fisiopatología y Diagnóstico, 2005

Plaquetas

Megacariopoyesis

Remoción fisiológica de plaquetas desde la circulación

Marcadores de envejecimiento:

Serotonina

Densidad

Médula ósea

Trombopoyesis

Megacariocitos

Sangre

Hemostasia

(8-10 días)

Bazo, Hígado, MO

Remoción

Macrófagos?

PAIgG en plaquetas humanas separadas en gradiente de densidad (n:18)

PBD vs PAD p<0.01

1200

1000

800

600

400

200

PBD PDI PAD

Mo

lécu

las

IgG

/ Pla

que

ta

(Jóvenes) (Envejecidas)

Expresión de PS, GPIV y P-Selectina en plaquetas humanas de diferente densidad

Recuento de plaquetas y exposición de PS

Inyección de estradiol en perros (n:7)

Recto Plaquetas

Exposición de PS*

*, citometría de flujo

Recto plaquetas y potencial de mb mitocondrial

Inyección de estradiol en perros (n:13)

RectoPlaquetas

DIOC, MFIψm

Remoción fisiológica de plaquetasmecanismo inmune y no inmune

IgG

FS

FcR

MacrófagoScavenger R

P selectinaFvW, fibronectina VitronectinaTrombospondinaFV, HMWK Fibrinógeno, FXIProteína S, PAI-IPF4PDGF, TGF

ADPATPSerotoninaCalcio

Estructura plaquetaria

Función plaquetaria

Ac Antifosfolípidos

• Grupo heterogéneo de anticuerpos

• IgG, IgM, IgA

Ac Antifosfolípidos

• ELISA de fase sólida (aCL)

• Anticoagulante Lúpico (AL)

• Trombosis (venosa y arterial)

• Abortos espontáneos a repetición

• Trombocitopenia

CLASIFICACIÓN DEL SAF

• Primario

• SecundarioEnf.Auntoinmunes LES

Lupus probable Otras mesenquimopatías

Neoplasias Tumores sólidos Neoplasias hematológicas

Inducido por drogasAsociado a infección

• Variantes del SAFSAF catastróficoAsociado a otros Sínd.microangiopáticosSíndrome de hipoprotrombinemia

• SAF seronegativo

Antígenos

• Beta-2 Glicoproteína I (2GPI)

• Protrombina (PT)

• Proteínas del Sistema Proteína C • PC, PS, Trombomodulina

• Anexina-V

• Kininógeno de alto peso molecular

• Fosfolípidos aniónicos: FS, CL

Patrón de PM 2GPI kDa

200

97

68

50

43

29

≈60aa

≈60aa

≈60aa

≈60aa

≈80aa

2GPI

12 Lis, 1 Arg, 1 His

326 aa

Glicoproteína5 dominios

Ac antiβ2GPI

Ac antiβ2GPI - β2GPI: Baja afinidad en solución Ausencia de CI séricos en SAF

****

Epítopos

*

β2GPI – Superficie FL: Baja afinidad

Aumenta con Ac antiβ2GPI

Protrombina• 72 kDa

• 579 aa

Dominios Gla

Complejo Protrombinaa

Complejo protrombinasa

Ac anti-Protrombina (aPT)

Acción anticoagulante: Interfire acción C. Protrombinasa

Fragmento 1.2 A B

s-s

Epítopos

• Aumentan unión PT a superficie FL, sin interferir C. Protrombinasa.

• Inhiben acción de Antitrombina.

• Interferen acción de la Plasmina.

2GPI

Ac anti-2GPI (dominio I)

Complejos Ac antiβ2GPI – β2GPI

Ac anti-2GPI (dominio II)

Reversible

Irreversible

Similar en Ac antiPT - PT

Ac aFL en pacientes con LES

145(5): 336-340

Ac aFL en pacientes con trombosis* y controles

Palomo I, Pereira J, Alarcón M, Vasquez M, Pinochet C, Velez MT, Sandoval J, Icaza G, Pierangeli S. Prevalence and isotype distribution of antiphospholipid antibodies in unselected Chilean patients with venous and arterial thrombosis. Clin Rheumatol. 23(2):129-33, 2004.

aCL 57 25.2 4 4.2 4.8 0.01 (1.4-16.1)

aPT 31 13 .7 3 3.2 8.9 0.004 (2.1-38.5)

Pacientes (n=226) Controles (n=95) n % n % OR** p*

anti-2GPI 14 6.2 2 2.1 3.2 0.2

(0.5-19.5)

*, Trombosis Venosa o Arterial **, ajustado por edad y sexo

Continua

Prevalencia y Distribución Isotípica de Anticuerpos aCL, anti-2GPI y aPT en Pacientes con Trombosis* (n=226) (cont.)

Cualquier isotipo 57 25.2 14 6.2 31 13.7

IgG 23 10.2 5 2.2 12 5.3

IgM 27 11.9 4 1.8 19 8.4

aCL anti-2GPI aPT n % n % n %

IgA 22 9.7 7 3.1 3 1.3

*, Trombosis Venosa o Arterial

Palomo I, Pereira J, Alarcón A, Vásquez M, Pinochet C, Poblete F, Mendez E, Sandoval J, Vidal R, Pierangeli S. Val/Leu247

and Trp/Ser316 polymorphisms in β2 glycoprotein Ι and their association with thrombosis in unselected Chilean patients. (enviado)

Patients(n:149)

Control group (n:160) Odds Ratio p

Polymorphism n % n %

Val/Leu247 133 89.3 117

73.1 3.1 (1.6 – 6.0) 0.0003

Trp/Ser316 15 10.1 6 3.8 2.9 (1.1 – 8.6) 0.027

Prevalence of Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms of β2GPI among patients with thrombosis and controls.

Mecanismos protrombogénicos de los Ac aFL

Inhibición de anticoagulantes naturales Sistema PC, AT, IVE Anexina V

• Monocitos Aumento expresión de FT en monocitos circ.

• Plaquetas

Activación celular• Células endoteliales Up regulation de Moléculas de Adhesión Activación celular Aumento expresión FT Aumento unión de Protrombina

Inhibición del Sistema Fibrinolítico

CE

CE

Ac aFL

APCPSPC

PS

Plaqueta

Plaqueta

Plaqueta

Plaqueta

PT

PT

TM

AT

T

T

T

TF

Anexina A5

β2GPI

TFPI

tPA PAI-1

Plasmina

Plg

Xa

VIIa

Va

Xa

X

EPCR

Mecanismos protrombóticos de los Ac aFL

Bárbara FuentesForastiero R, Martinuzzo ME. Antigen Specificity and Clinical Relevance of Antiphospholipid Syndrome. Current Rheumatology Reviews, 2005, 1,

Ac Antifosfolípidosy

Plaquetas

Unión de Ac aFL a plaquetas

• Plaquetas con algún grado de activación o envejecidas

• Células apoptóticas unen β2GPI. Podrían generan epítopos que inducen respuesta del tipo autoinm.

• Ac aFL se unen a plaquetas en reposo (separ. por filtración en gel)

• Elución de Ac aFL desde plaquetas de pacientes con LES

• En presencia de β2GPI y PT, Ac aFL se unen a plaquetas activadas.

• Unión de Ac aFL IgG a plaquetas incub. con colágeno o cong-desc.

Interacción de los Ac aFL a las plaquetas

• Región Fab con antígenos específicos de plaquetas.

• Región Fc (de C. inmunes Ag-aFL) a FcγRII.

• Región Fab a β2GPI (dímero) unida a apo ER2.

• Aumento de la agregación plaquetaria (con concentraciones subagregantes de ADP, trombina o colágeno).

Efecto de los Ac aFL en las plaquetas

• Mayor expresión de CD63.

• Mayor liberación de P-selectina (CD62P).

• Aumento expr. GPIIb-IIIa c/ bajas dosis de TRAP y aFL.

• Aumento de micropartículas plaquetarias.

• Aumento de síntesis in vitro de TXA2

Efecto de los Ac aFL en las plaquetas (cont)

F(ab’)2 de Ac aFL aumentan:

• Fosforilación de la p38MAPK

• Fosforilación de fosfolipasa A2

• TXB2

ApoR2 ApoE2

TXA2R

P2Y1P2Y12

I

II

III

IV V

I

II

III

IV V

Dímero

β2GPI

Anti-β2GPI

PP

Ac aFL y Plaquetas

CD62P

CD63

GPIIb-IIIa

ADP

TXA2

MAPp38 Kinasa

Activación