Investigación Clínica

ISSN: 0535-5133

riclinicas@gmail.com

Universidad del Zulia

Venezuela

Morillo, Daniela Alejandra; González, Beatriz Elena; Sulbarán Larrarte, Adriana Josefina; Ibarra, Alba;

Álvarez, Carmen; Colmenares, María Victoria; Bonfante-Cabarcas, Rafael Armando

La infección por Trypanosoma cruzi disminuye el desarrollo del melanoma maligno e incrementa la

supervivencia en ratones C57BL/6.

Investigación Clínica, vol. 55, núm. 3, septiembre, 2014, pp. 227-237

Universidad del Zulia

Maracaibo, Venezuela

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=372937032004

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Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

La infección por Trypanosoma cruzidisminuye el desarrollo del melanomamaligno e incrementa la supervivenciaen ratones C57BL/6.

Daniela Alejandra Morillo1, Beatriz Elena González1, Adriana Josefina SulbaránLarrarte, Alba Ibarra1, Carmen Álvarez2, María Victoria Colmenares yRafael Armando Bonfante-Cabarcas1.

1Unidad de Bioquímica, Decanato de Ciencias de la Salud.2Laboratorio de Toxicología, Decanato de Ciencias Veterinarias,Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado”. Barquisimeto, estado Lara, Venezuela.

Palabras clave: T. cruzi, melanoma, cáncer, inmunización, enfermedad de Chagas.

Resumen. Diversos agentes infecciosos interfieren en la progresión delcáncer. En esta investigación se estudió el efecto de la infección o inmuniza-ción con Trypanosoma cruzi (Tc) sobre el desarrollo del melanoma maligno.Se utilizaron 258 ratones machos C57BL/6 divididos en 5 grupos melanoma:melanoma control, melanoma Tc inmunizado, melanoma Tc agudo, melano-ma Tc crónico y melanoma Tc infectado; 3 grupos controles: control sano,control Tc agudo, control Tc crónico. 100.000 células de melanoma B16-BL6fueron inoculados vía intramuscular a los grupos melanoma; 3 ó 20 tripomas-tigotes/g de peso fueron inoculados vía intraperitoneal a los grupos Tc cróni-cos o Tc agudos previo a la inoculación del melanoma, respectivamente, elgrupo melanoma Tc inmunizado fue inoculado con 30.000 epimastigotes fija-dos en formol y suspendidos en adyuvante completo de Freund, y el grupo me-lanoma Tc infectado fue inoculado con células de melanoma obtenidas de ra-tones melanoma Tc agudo. Se evaluó volumen tumoral, supervivencia, parasi-temia e histopatología tumoral. Los grupos melanoma Tc: agudo, crónico ymelanoma infectado, respectivamente, mostraron una disminución significati-va del desarrollo tumoral y de la supervivencia al ser comparados con los gru-pos melanoma control e inmunizado. Los estudios histopatológicos mostraronáreas de necrosis asociadas con depósitos de melanina, degeneración citopáti-ca tumoral y amastigotes intracelulares contenidos en vacuolas parasitofóri-cas. En conclusión, Tc inhibe el desarrollo tumoral del melanoma maligno yaumenta la supervivencia de ratones C57BL/6, fenómeno que podría estar re-

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Autor de correspondencia: Rafael Armando Bonfante-Cabarcas. Unidad de Bioquímica, Decanato de Cienciasde la Salud, Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado”. Barquisimeto, estado Lara, Venezuela. Correoelectrónico: rcabarca@ucla.edu.ve

lacionado con la capacidad invasiva tumoral del parásito y a la respuesta in-mune generada.

Trypanosoma cruzi infection decreases malignant melanomadevelopment and increases survival in C57BL/6 mice.Invest Clin 2014; 55(3): 227 - 237

Keywords: T. cruzi, melanoma, cancer, immunization, Chagas disease.

Abstract. Some infectious pathogens have the capacity to affect cancerprogression. In the present paper we studied the effect of infection or immu-nization with Trypanosoma cruzi (Tc) against malignant melanoma develop-ment. We worked on 258 C57BL/6 male mice divided in five melanomagroups: control melanoma, melanoma Tc acutely infected, melanoma Tcchronically infected, melanoma Tc immunized and infected melanoma; andthree control groups: healthy, Tc acutely infected and Tc chronically infected.100.000 B16-BL6 melanoma cells were inoculated in the thigh of melanomagroups; 3 or 20 trypomastigotes/g were inoculated intraperitoneally inchronic or acute Tc groups, before the melanoma injection, respectively; mel-anoma Tc immunized were subcutaneously inoculated with 30.000formaldehide-fixed epimastigotes diluted in complete Freund´s adjuvant andthe infected melanoma group was inoculated with melanoma cells obtainedfrom melanoma Tc acutely infected mice. We evaluated survival, parasitemia,tumor volume and tumor histopathology. Results showed that in mice in-fected with Tc, the tumor development and survival were significantly lower ascompared with control melanoma and melanoma Tc immunized.Histopathologically, the tumor displayed necrosis areas with melanin deposits,cytopathic degeneration and amastigotes in parasitophorous vacuoles. In con-clusion, Tc inhibits the development of malignant melanoma, increasingC57BL/6 survival, a phenomena that could be related to the parasite tumoralinvasive capacity, its ability to produce melanoma cell lysis and to induce a ro-bust immune response.

Recibido: 27-11-2013 Aceptado: 8-05-2014

INTRODUCCIÓN

El melanoma es un tumor maligno demelanocitos y a pesar de ser el cáncer depiel menos común, es el causante de la ma-yoría de las muertes producidas por estetipo de cáncer (1); de acuerdo con la Orga-nización Mundial de la Salud, el melanomamaligno produce el 75% de las muertes aso-

ciadas al cáncer de piel (2). En Venezuela,para el año 2009, el Ministerio del PoderPopular para la Salud (MPPS) registró unatasa de mortalidad del 19,87% (4.031 pa-cientes) para el melanoma maligno, en rela-ción a todos los cánceres (3). En otros paí-ses como Brasil y Estados Unidos se regis-traron para el año 2012 tasas de mortalidaddel 0.9% (1.959 muertes) y 1,7% (10.224

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muertes), en relación a mortalidad causadapor todos los tipos de cánceres desarrolla-dos en cada país (4).

Diferentes estudios han demostradoque diversos agentes infecciosos pueden in-terferir en la progresión del cáncer; entre es-tos agentes se encuentra el parásito Trypa-nosoma cruzi (T. cruzi), cuya infección re-trasa el desarrollo del tumor al presentar afi-nidad por las células cancerígenas (5).

La relación entre el parásito T. cruzi yel cáncer fue establecida por primera vezpor Roskin y col. en la década de 1930 (6),cuando demostraron que este parásito tienela capacidad de invadir y destruir las célulasde melanoma mediante efectos mecánicoso la liberación de toxinas. Estas investiga-ciones culminaron con el desarrollo de unavacuna denominada KR (Kliuvea-Roskin), lacual llegó a ser aplicada en tratamientosclínicos, logrando la reducción de tumoreshasta un nivel operable o, incluso, la com-pleta regresión de algunos tipos de cánce-res (6, 7).

Los estudios de Roskin y col. (6, 7) nolograron impactar lo suficiente a la comuni-dad científica, debido al surgimiento de laquimioterapia y el entorno socio-político ycultural de la guerra fría. Estudios realiza-dos posteriormente en diferentes institucio-nes han resumido, reproducido y sustenta-do los datos de Roskin y col. en experimen-tos llevados a cabo in vitro (8-11), modelosanimales (12, 13) y ensayos clínicos (14).Sin embargo, a pesar de que estos estudioshan reproducido las investigaciones de Ros-kin, se requiere una mayor atención haciaeste interesante fenómeno a los fines de di-lucidar los mecanismos con fines inmunote-rapéuticos.

En esta investigación se evaluó el efec-to de la infección con una cepa de T. cruzi,aislada en Venezuela a partir de un casoagudo de enfermedad de Chagas, sobre laevolución del melanoma maligno B16-BL6en ratones C57BL/6.

MATERIALES Y MÉTODOS

MuestraEstuvo constituida por 258 ratones

machos de la cepa C57BL/6, los cuales fue-ron divididos en ocho grupos denominados:control sano (n = 10), control T. cruzi (Tc)agudo (n= 38), control T.cruzi crónico(n=39), melanoma control (n = 40), mela-noma T. cruzi inmunizados (n = 40), mela-noma T. cruzi agudo (n = 20), melanomaT. cruzi crónico (n = 29) y melanomaT.cruzi infectado (n = 9). Los ratones fue-ron distribuidos en un número de 8-10 ani-males por jaula, las cuales eran de aceroinoxidable de 33×35×14 cm, con libre ac-ceso al agua y comida (Perrarina, Proti-nal®, Venezuela), con ciclos diurnos y noc-turnos de 12 h y una temperatura media de27°C.

El grupo control sano fue inoculadocon solución salina isotónica, vía intramus-cular (im) e intraperitoneal (ip), con volú-menes similares a los inóculos de T. cruziy/o melanoma. Los grupos control Tc agu-do, control Tc crónico, melanoma Tc agu-do y melanoma Tc crónico fueron infecta-dos con tripomastigotes sanguíneos, a ladosis de 20 y 3 parásitos/g de peso, vía ip,para inducir infecciones agudas y crónicas,respectivamente. La cepa de T. cruzi utili-zada fue la M/HOM/VE/92/YBM, la cualfue ha sido mantenida mediante pasajessucesivos en el vector (Rhodnius prolixus,ninfas de III estadio) a ratones albinos dela cepa NMRI. Los grupos melanoma con-trol, melanoma Tc inmunizado, melanomaTc agudo y melanoma Tc crónico fueroninoculados con 100.000 células del mela-noma B16-BL6, vía im, en el muslo dere-cho. Los ratones del grupo melanoma Tcinmunizado fueron inmunizados a nivelsubcutáneo con 30.000 epimastigotes fija-dos en formol y resuspendidos en 0,1 mLde adyuvante completo de Freund; se apli-caron tres dosis, con una semana de inter-

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valo entre cada una; el melanoma fue ino-culado una semana después de la últimainmunización. Los ratones del grupo mela-noma Tc crónico fueron, inicialmente, in-fectados con el parásito y se dejaron evolu-cionar espontáneamente por un período dedos meses, de tal forma que superaran laetapa aguda, antes de inocularles el mela-noma. Los ratones del grupo infectadoscon el parásito en etapa aguda fueron in-fectados con el parásito tres días antes dela inoculación del melanoma. El grupo me-lanoma Tc infectado fue inoculado con cé-lulas de melanoma obtenidas de ratonesinfectados con características similares algrupo melanoma Tc agudo.

El desarrollo tumoral se evaluó pormedio de la medición del tumor semanal-mente, a partir de la segunda semana deinoculación con melanoma. Se midió elalto, ancho y largo de cada tumor por me-dio de un vernier digital marca RUN® (Ma-racay, Aragua, Venezuela). La mortalidadde cada grupo se registró diariamente.

Todos los procedimientos experimen-tales realizados en esta investigación se ba-saron en los principios establecidos en elManual de Bioética y Bioseguridad del Fon-do Nacional para la Ciencia y Tecnología,Ministerio del Poder Popular para la Cien-cia y la Tecnología de Venezuela (15).

HistologíaEl tumor de cada ratón fue disecado,

lavado con PBS (buffer fosfato salino) frío yfijado en PBS-10% formaldehído a pH 7,4,deshidratado, incluido en parafina, cortadoen secciones de 4 µm, desparafinado y teñi-do con hematoxilina-eosina.

Análisis estadísticoLos datos obtenidos son presentados

en valores absolutos ± error estándar, lasignificancia estadística observada entre losdiferentes grupos fue determinada porANOVA, seguida de un post-test de Bonfe-

rroni. Por otra parte, las fracciones de su-pervivencia fueron analizadas utilizandocurvas de supervivencia de Kaplan-Meier,mientras que la significancia estadística, alcomparar la mortalidad de los grupos expe-rimentales respecto al grupo control, fuecalculada utilizando el log-rank test. En am-bos casos se aceptó como significativo unap<0,05. Estos datos fueron analizados utili-zando el programa Graph Pad Prism 4®.

RESULTADOS

Las curvas de supervivencia de los gru-pos de ratones infectados con Tc, de losgrupos agudo y crónico son mostrados en laFig. 1, donde se observa que los ratones in-fectados con el parásito en etapa aguda pre-sentaron una supervivencia media de 24días, a diferencia del grupo control T. cruzicrónico, donde el 77% de los ratones sobre-vivió en un período de 2 meses, con unamortalidad temprana del 23,07% (n=9) en-tre los días 28 a 35 y una mortalidad tardía(n=8; 20,51%) entre los días 108 a 125;claramente las curvas de supervivencia deambos grupos son significativamente dife-rentes (p<0,0001).

En el grupo melanoma control el tu-mor es visible y palpable a partir de la se-gunda semana cuando alcanza un volumende 14 cm3, luego crece progresivamente auna tasa de 2,16 cm3 por día hasta alcan-zar, en la tercera semana, un volumen de34 cm3. El grupo melanoma Tc inmunizadopresentó un desarrollo tumoral similar alpresentado por el grupo melanoma controlhasta la tercera semana, posteriormente elgrupo melanoma Tc inmunizado tuvo unmenor desarrollo tumoral presentando unadiferencia significativa a la cuarta semanarespecto al melanoma control. Los gruposmelanoma Tc agudo, melanoma Tc crónicoy melanoma Tc infectado presentaron undesarrollo tumoral significativamente me-nor (p<0,05) al observado en el grupo me-

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lanoma control, durante todas las semanasexperimentales (Fig. 2, Tabla I).

En la Fig. 3 se muestra la curva de su-pervivencia de los grupos controles y experi-mentales. Los ratones del grupo melanomacontrol alcanzaron el 50% de mortalidadpara el día 27, muriendo la totalidad de losindividuos entre los días 22 a 32 (11 días).El grupo melanoma Tc inmunizado, presen-tó una mortalidad media similar al grupocontrol melanoma; sin embargo, el rangode tiempo para la mortalidad total fue de 7días. Los grupos melanoma Tc agudo, mela-noma Tc crónico y melanoma Tc infectadopresentaron una supervivencia mayor res-pecto al grupo melanoma control, con valo-res de supervivencia media de 37, 33 y 43días, respectivamente, los cuales fueron sig-nificativamente mayores al presentado porel grupo melanoma control (p<0,0001). Alcomparar los rangos de mortalidad entre

los grupos infectados, se observa que el gru-po melanoma Tc crónico tuvo una mortali-dad temprana (n = 7; 30,43%) entre losdías 7 a 24 (18 días), y una mortalidad tar-día (n = 16; 69,56%) entre los días 36 a 37(2 días); en el melanoma Tc agudo la mor-talidad total ocurrió entre los días 33 a 39(7 días); por el contrarío la mortalidad enel grupo melanoma Tc infectado ocurriómás tardíamente y durante un período ma-yor (41 a 54 días; 15 días) (Fig. 3).

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Fig. 1. Supervivencia de los grupos control T.cruzi agudo y T. cruzi crónico. Las cur-vas fueron trazadas utilizando el métodode Kaplan-Meier y el log-rank test acep-tando una p<0,05 para curvas de super-vivencia Los grupos se representancomo: control T. cruzi agudo (rombosblancos) y control T. cruzi crónico(rombos negros). El grupo infectadocon el parásito en etapa crónica presen-tó una supervivencia significativamentemayor a la presentada por el grupo agu-do.

Fig. 2. Evolución del desarrollo tumoral de losgrupos experimentales. El volumen tu-moral fue medido con un vernier digital.Los símbolos en la gráfica representan alos grupos melanoma control (círculosnegros), melanoma Tc inmunizado(rombos grises), melanoma Tc agudo(cuadrados blancos) melanoma Tc cró-nico (cuadrados negros), y melanomaTc infectado (triángulos negros). Sepuede observar que los grupos infecta-dos con T. cruzi (agudo y crónico) o ino-culados con células de melanoma infec-tadas con T. cruzi (melanoma Tc infec-tado) presentan el menor desarrollo tu-moral durante todas las semanas de ex-perimentación, siendo significativamen-te (p<0,05) diferentes al grupo melano-ma control. Los ratones inmunizados(melanoma Tc inmunizado) tuvieron uncrecimiento significativamente menor algrupo melanoma control en la cuartasemana.

Las características histopatológicasdel tumor de los ratones del grupo melano-ma fueron las normalmente observadas paraeste tipo de tumor, observándose homogé-neo y compacto, con pequeños focos de ne-crosis y depósitos de melanina alrededor de

pequeños vasos sanguíneos, los cuales seobservan dispersos en el campo microscópi-co. Las células de melanoma fueron de as-pecto epiteliode, fusiforme, con bordes biendefinidos, citoplasma anfofílico y núcleoalargado con varios nucléolos (Fig. 4A). Lostumores obtenidos de los ratones infecta-dos, mostraron áreas de necrosis más ex-tensas, con abundantes vénulas congestivasy dilatadas y los depósitos de melanina te-nían una distribución difusa. Las células demelanoma tenían apariencia edematosa yvariados grados de degeneración citopática(Fig. 4B). Se observaron formas amastigo-tas de T. cruzi dentro de vacuolas parasito-foras en el interior de las células tumorales(Fig. 4C). No se observaron infiltrados infla-matorios intratumorales, mientras que si seencontró inflamación peritumoral, predo-minantemente en los ratones infectados, locual estuvo asociado con la presencia delparásito.

DISCUSIÓN

El objetivo de este trabajo fue demos-trar las propiedades anti-proliferativas, dela cepa de T. cruzi M/HOM/VE/92/YBM,aislada en Venezuela, sobre las células delmelanoma maligno B16-BL6. Los resulta-dos obtenidos permiten confirmar que la in-fección por T. cruzi inhibe el desarrollo delmelanoma maligno.

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TABLA IEVOLUCIÓN DEL VOLUMEN TUMORAL

Semana Controlmelanoma

MelanomaTc inmunizado

MelanomaTc agudo

MelanomaTc crónico

MelanomaTc infectado

Promedio ±EEM

Promedio ±EEM

Promedio ±EEM

Promedio ±EEM

Promedio ±EEM

2 3,41 ± 0,20 3,7 ± 0,2 1,53 ± 0,1* 1,25 ± 0,07* 0,39 ± 0,06*

3 14,09 ± 0,61 12 ± 0,71 3,92 ± 0,22* 4,86 ± 0,17* 1,37 ± 0,19*

4 33,68 ± 2,38 25 ± 1,93* 7,8 ± 0,29* 10,59 ± 0,64* 5 ± 0,22**Significa p< 0,05 cuando los grupos experimentales se comparan con el grupo control. EEM: Error Estándar dela Media

Fig. 3. Supervivencia de los grupos experimen-tales. Las curvas fueron trazadas utili-zando el método de Kaplan-Meier paracurvas de supervivencia. Los grupos serepresentan: melanoma control (círcu-los negros), melanoma Tc inmunizado(círculos blancos), melanoma Tc agudo(cuadrados blancos) melanoma Tc cró-nico (cuadrados grises), y melanoma Tcinfectado (triángulos grises). Medianteel log-rank test aceptando una p<0,05,los grupos melanoma Tc agudo, melano-ma Tc crónico y melanoma Tc infectadopresentaron una supervivencia signifi-cantemente mayor.

Inicialmente, se observó que la infec-ción aguda por T. cruzi reduce el desarrollotumoral. Este resultado podría ser explica-do por la habilidad que tiene el T. cruzi deinvadir y proliferar dentro de las células tu-morales; esta presunción es sugerida al ob-servar la presencia de amastigotes dentrode las células tumorales (Fig. 4). La habili-dad del T. cruzi de invadir y proliferar den-tro de células tumorales fue descrito porprimera vez por Roskin y col. en los años1930 (6, 7), quienes observaron que la pre-sencia de agregados de T. cruzi en los vasossanguíneos tumorales se asociaba con ne-crosis licuefactiva de las células tumorales;además observaron también que estos pará-sitos eran capaces de invadir las células tu-morales, cuyos núcleos presentaban signosde degeneración, en contraste con célulassanas de tejidos vecinos que mostraban po-cos parásitos intracelulares.

Sin embargo, el efecto observado en elpresente trabajo en ratones en la etapa cró-nica de la enfermedad de Chagas no puedeser adjudicado a la capacidad invasiva de T.cruzi, ya que, durante esta etapa, la prolife-ración de T. cruzi está reducida como con-secuencia de la respuesta inmunológica delhuésped (16). En este sentido, se ha demos-trado que la infección con T. cruzi induce

una potente respuesta inmunológica innataen el hospedador, a través de la activaciónde receptores tipo Toll (TLR) (17). Los re-ceptores TLR son muy importantes para lavinculación de la inmunidad innata con laadquirida y funcionan como eficientes de-tectores de agentes patológicos infecciososy residuos de cáncer (18). Recientemente,se han desarrollado vacunas basadas en an-tígenos de microorganismos oportunistas,los cuales son ligandos de los receptoresTLR 1/2, 4, 5/6, 9; estos activan la respues-ta inmune innata al inducir la maduraciónde las células dendríticas y la expresión demoléculas co-estimuladoras (CD40+,CD80+, CD86+) en su membrana, molécu-las de diferenciación terminal (CD83) y re-ceptores presentadores de antígenos (MCHde las clases I y II); todo ello conlleva al in-cremento de la actividad citotóxica de linfo-citos sobre las células de melanoma B16 ydel carcinoma pulmonar de Lewis (19). Enla infección por T. cruzi se ha reportado al-teraciones en la expresión de receptoresTLR 2, 4 y 9 que conlleva a una respuestainflamatoria exacerbada, lo cual a su vez po-dría favorecer la citolisis tumoral (17).

Por otra parte, las células de melano-ma obtenidas de ratones infectados con T.cruzi en etapa aguda, mostraron una dismi-

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A B C

Fig. 4. Histopatología de T. cruzi en células. Características celulares de un tumor de melanoma ob-tenido del grupo control melanoma (A) y del grupo melanoma Tc agudo (B), donde se observala degeneración celular en el tumor del ratón infectado con T. cruzi; en ambos casos la flechaseñala depósitos de melanina. En la imagen C, la flecha señala células neoplásicas infectadascon amastigotes de T. cruzi, lo que indica la capacidad del parásito de invadir células de mela-noma maligno.

nución en la capacidad proliferativa al serrepicadas en ratones sanos, lo cual se tradu-jo en un menor crecimiento tumoral y enuna mayor sobrevida. Para explicar este re-sultado, se podría plantear que las célulasde melanoma infectadas con amatigotes deT. cruzi se encontraban en proceso de ne-crosis o apoptosis y que, al ser inoculadas,las células tumorales deberían ser fagocita-das por células presentadoras de antígenospara iniciar la respuesta inmune. Las célu-las dendríticas inmaduras fagocitan eficien-temente tanto células apoptóticas como ne-cróticas. La fagocitosis de las células apop-tóticas proveen de péptidos antigénicospara su presentación por los complejos dehistocompatibilidad de las clases I y II,mientras que las células necróticas inducenla maduración de las células dendríticas,evitando el fenómeno de tolerancia inmuno-lógica (20). En comparación con las célulasapoptóticas, las células necróticas inducenuna mayor maduración y una activaciónmás eficiente de las células dendríticas. Dehecho la inoculación de células tumoralesapoptóticas sin células necróticas induciríatolerancia (21, 22).

El proceso de apoptosis inducido porT. cruzi es controversial; por una parte hasido demostrado que los glicoinositolfosfoli-pidos (GIPL) encontrados en la membranadel T. cruzi inducen apoptosis en macrófa-gos infectados (23, 24); de la misma mane-ra ha sido demostrado que la pérdida decardiomiocitos en la miocardiopatía chagá-sica crónica es debido a la apoptosis (11), yque la infección con T. cruzi induce laapoptosis de linfocitos T y B, explicando elfenómeno de inmunosupresión observadoen la etapa aguda (25). Por otra parte, seha reportado que la infección por T. cruziinhibe las primeras etapas de la apoptosismediada por los receptores de muerte, unefecto que involucra la inhibición de la cas-pasa-8 (26). La invasión de las células deSchwann y de cardiomiocitos por T. cruzi,

suprime la apoptosis de la célula huéspedinducida por deprivación de factores de cre-cimiento; este efecto parece ser mediadopor enzimas trans-sialidasas a través de laruta de señalización de PI3K/AkT y NF-kap-paB (27,28) y por la enzima cuzipaína víaestimulación de la arginasa-2, respectiva-mente (29). No obstante, la discrepancia deresultados puede ser el resultado de las di-ferentes cepas de T. cruzi utilizadas; en estesentido, De Souza y col. (30), demostraronque durante la infección por T. cruzi, la ex-tensión de la apoptosis varía de acuerdocon el tipo de célula huésped y la cepa deparásitos utilizada, siendo los parásitos dellinaje I más apoptogénicos que los del linajeII y exhibiendo los macrófagos infectadosmayor probabilidad de entrar en apoptosisque los cardiomiocitos, mientras que los fi-broblastos no entran en apoptosis. En elpresente trabajo la cepa de T. cruzi utiliza-da pertenece al linaje I (31).

Los resultados presentados no preten-den plantear el T. cruzi como agente tera-péutico del melanoma maligno, sino –por elcontrario– plantear que la infección poreste protozoario genera una potente res-puesta inmune capaz de potenciar y direc-cionar una respuesta inmune eficiente con-tra las células de melanoma.

En este sentido, Junqueira y col. (32),utilizando un clon de T. cruzi altamenteatenuado (CL-14) capaz de expresar unaproteína antigénica del cáncer testicular(NY-ESO-1), indujeron una protección com-pleta en ratones inoculados con una líneacelular singénica y transgénica de melano-ma capaz de expresar NY-ESO-1, demos-trando que T. cruzi es un efectivo vectorpara la liberación de antígenos e inducciónde una potente inmunidad medida por célu-las T, efecto que debería ser estudiado mása fondo para el desarrollo de vacunasanti-cancerígenas.

Adicionalmente, los antígenos de T.cruzi poseen epitopes comunes con las mu-

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cinas de mamíferos (33) y con glicoproteí-nas que comparten estructuras tipo sia-lil-Tn (estructuras especificas humanas aso-ciadas con cáncer) (34). Además, se ha de-mostrado que la inmunización con tripano-somas lisados o con mucinas de mamíferostipo II o III, poseen un efecto oncoprotecti-vo, el cual ha sido reproducido por la trasfe-rencia pasiva de esplenocitos de animalesinmunizados. Este fenómeno se ha asociadocon el efecto antitumoral de T. cruzi, rela-cionado con la respuesta inmune mediadapor células (11), concepto que podría serexplotado para el desarrollo de nuevas in-munoterapias basadas en antígenos de T.cruzi.

En conclusión la infección por T. cruziinhibe el desarrollo de células de melanomamaligno ya que tiene la capacidad de inva-dir, proliferar y provocar una potente res-puesta inmunológica antitumoral.

AGRADECIMIENTOS

Proyecto financiado por el “Consejo deDesarrollo Científico, Humanístico y Tecno-lógico”, numero 004-ME-2005.

REFERENCIAS

1. Parkin D, Bray F, Ferlay J, Pisani P.Global cancer statistics, 2002. CA CancerJ Clin 2005; 55: 74-108.

2. Wartman D, Weinstock M. Are we overem-phasizing sun avoidance in protectionfrom melanoma? Cancer Epidemiol Bio-markers Prev 2008; 17: 469-470.

3. Capote L. Aspectos epidemiológicos delcáncer en Venezuela. Rev Venez Oncol2006; 18:269-281.

4. Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M,Dikshit R, Eser S, Mathers C, Rebelo M,Parkin DM, Forman D, Bray, F. Cancer In-cidence and mortality worldwide. Interna-tional Agency for Research on Cancer;2013. GLOBOCAN 2012 v1.0 Disponibleen: http://globocan.iarc.fr, consultado el10/04/2014.

5. Darani HY, Yousefi M. Parasites and can-cers: parasite antigens as possible targetsfor cancer immunotherapy. Future Oncol2012; 8:1529-1535.

6. Krementsov N. The cure: a story of cancerand politics from the annals of the ColdWar. The University of Chicago Press, Chi-cago, IL, USA. 277 pags; 2002.

7. Krementsov N. T. cruzi, cancer and theCold War. Hist Cienc Saude Manguinhos2009; 16 (Suppl 1):75-94.

8. Kallinikova VD, Matekin PV, OgloblinaTA, Le�kina MI, Kononenko AF, SokolovaNM, Pogodina LS. Anticancer propertiesof flagellate protozoan Trypanosoma cruziChagas, 1909. Izv Akad Nauk Ser Biol2001; 3:299-311.

9. Sheklakova LA, Kallinikova VD,Karpenko LP. Genetic heterogeneity ofTrypanosoma cruzi and its directanticancer effect in cultured human tumorcells. Bull Exp Biol Med 2003; 135:89-92.

10. Batmonkh Z, Kallinikova VD,Pakhorukova LV, Kravtsov EG, KarpenkoLP, Dalin MV. In vivo anticancer activity oflysates from Trypanosoma cruzi of differ-ent genetic groups. Bull Exp Biol Med2006; 142:470-473.

11. Zenina AV, Kravtsov EG, TsetsegsaikhanB, Yashina NV, Dalin MV, KarpenkoLP,Sheklakova LA, Kallinikova V. Thestudy of immunological component inantitumor effect of Trypanosoma cruzi.Bull Exp Biol Med 2008; 145:352-354.

12. Malisoff WM. The action of the endotoxinof Trypanosoma cruzi (KR) on malignantmouse tumors. Science 1947;106:591-594.

13. Hauschka TS, Goodwin MB.Trypanosoma cruzi endotoxin (KR) in thetreatment of malignant mouse tumors.Science 1948; 107:600-602.

14. Coudert J. Clinical and experimental in-vestigation on the effect of lyophilizedTrypanosoma cruzi extracts on certainforms of cancer. Antibiotiki 1961;6:99-105.

15. Ministerio del Poder Popular para Cien-cia, Tecnología e Industrias IntermediasFondo Nacional de Ciencia, Tecnología eInnovación. Código de Bioética y Biosegu-

Vol. 55(3): 227 - 237, 2014

T. cruzi inhibe el desarrollo del melanoma en ratones C57BL/6 235

ridad. 3ra Ed. Caracas, 2009. Disponibleen: http://www.miproyecto.gov.ve/ane-xos/bioetica.pdf, consultado el 23/04/14.

16. Menezes C, Teixeira M, Dutra W. La res-puesta inmunológica de los pacientes cha-gásicos. Rev Esp Salud Pública 2013;87:17-23.

17. Carrera-Silva EA, Carolina CR, Natalia G,Pilar AM, Andrea P, Gea S. TLR2, TLR4and TLR9 are differentially modulated inliver lethally injured from BALB/c andC57BL/6 mice during Trypanosoma cruziacute infection. Mol Immunol 2008; 45:3580-3588.

18. Gast A, Bermejo JL, Claus R, Brandt A,Weires M, Weber A. Association of inher-ited variation in Toll-like receptor geneswith malignant melanoma susceptibilityand survival. PLoS One 2011; 6:e24370.

19. Egorova NB, Kurbatova EA, Gruber IM,Semenova IB, Mikha�lova NA, Zverev VV.Novel type of vaccine with a combinationof Toll like receptor agonists-TLR 1/2, 4,5/6, 9. Zh Mikrobiol Epidemiol Immuno-biol 2011; 4:40-46.

20. Sauter B, Albert ML, Francisco L,Larsson M, Somersan S, Bhardwaj N.Consequences of cell death: exposure tonecrotic tumor cells, but not primary tis-sue cells or apoptotic cells, induces thematuration of immunostimulatory den-dritic cells. J Exp Med 2000; 191: 423-434.

21. Steinman RM, Turley S, Mellman I, InabaK. The induction of tolerance by dendriticcells that have captured apoptotic cells. JExp Med 2000; 191: 411-416.

22. Onishi H, Morisaki T, Baba E, NakamuraM, Inaba S, Kuroki H, Matsumoto K,Katano M. Long-term vaccine therapy withautologous whole tumor cell-pulsed den-dritic cells for a patient with recurrent rec-tal carcinoma. Anticancer Res 2011;31:3995-4005.

23. Martins GA, Cardoso MA, Aliberti JC,Silva JS. Nitric oxide-induced apoptoticcell death in the acute phase ofTrypanosoma cruzi infection in mice.Immunol Lett 1998; 63: 113-120.

24. Freire-de-Lima CG, Nunes MP, Corte-RealS, Soares MP, Previato JO, Mendonça-Previato L, DosReis GA. Proapoptotic ac-

tivity of a Trypanosoma cruzi ceramide-containing glycolipid turned on in hostmacrophages by IFN-gamma. J Immunol1998; 161: 4909-4916.

25. DosReis G, Lopes M. The importance ofapoptosis for immune regulation in Cha-gas disease. Mem Inst Oswaldo Cruz 2009;104 (Suppl. I): 259-262.

26. Nakajima-Shimada J, Zou C, Takagi M,Umeda M, Nara T, Aoki T. Inhibition ofFas-mediated apoptosis by Trypanosomacruzi infection. Biochim Biophys Acta2000; 1475:175-183.

27. Chuenkova MV, Furnari FB, Cavenee WK,Pereira MA. Trypanosoma cruzi trans-sialidase: a potent and specific survival fac-tor for human Schwann cells by means ofphosphatidylinositol 3-kinase/Akt signal-ing. Proc Natl Acad Sci USA 2001; 98:9936-9941.

28. Petersen CA, Krumholz KA, Carmen J,Sinai AP, Burleigh BA. Trypanosomacruzi infection and nuclear factor kappa Bactivation prevent apoptosis in cardiaccells. Infect Immun 2006; 74:1580-1587.

29. Aoki MP, Guiñazú NL, Pellegrini AV,Gotoh T, Masih DT, Gea S. Cruzipain, amajor Trypanosoma cruzi antigen, pro-motes arginase-2 expression and survival ofneonatal mouse cardiomyocytes. Am JPhysiol Cell Physiol 2004; 286:C206-212.

30. De Souza EM, Araújo-Jorge TC, Bailly C,Lansiaux A, Batista MM, Oliveira GM,Soeiro MN. Host and parasite apoptosisfollowing Trypanosoma cruzi infection inin vitro and in vivo models. Cell Tissue Res2003; 314:223-235.

31. Alvarado-Tapias E, Miranda-Pacheco R,Rodríguez-Bonfante C, Velásquez G, LoyoJ, Gil-Oviedo M, Mogollón N, Pérez-Aguilar MC, Recchimuzzi G, Espinosa R,Carrasco HJ, Concepción JL, Bonfante-Cabarcas RA. Electrocardiography repolar-ization abnormalities are characteristicsigns of acute chagasic cardiomyopathy.Invest Clin 2012; 53:378-394.

32. Junqueira C, Santos LI, Galvão-Filho B,Teixeira SM, Rodrigues FG, DaRochaWD. Trypanosoma cruzi as an effectivecancer antigen delivery vector. Proc NatlAcad Sci USA 2011; 108:19695-19700.

Investigación Clínica 55(3): 2014

236 Morillo y col.

33. Osinaga E. Expression of cancer-associ-ated simple mucin-type O-glycosylated an-tigens in parasites. IUBMB Life 2007;59:269-273.

34. Parodi AJ, Lederkremer GZ, MendelzonDH. Protein glycosylation in Trypanosomacruzi. The mechanism of glycosylation andstructure of protein-bound oligosaccha-rides. J Biol Chem 1983; 258:5589-5595.

Vol. 55(3): 227 - 237, 2014

T. cruzi inhibe el desarrollo del melanoma en ratones C57BL/6 237