UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

2da PRÁCTICA

Medios de cultivo: clasificación y preparación

Curso: Microbiología pesquera

Alumna: Marilli Milagros Sosa Sarmiento

Profesora: Nancy Martinez Ordinola

Grupo: F* Mesa: 1

Fecha de ejecución: 28 marzo del 2011

Fecha de entrega: 4 abril del 2011

2011

INTRODUCCION

Medios de cultivo de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

REVISION BIBLIOGRAFICA

Refutación de la teoría de la generación espontánea

Es sorprendente el impacto que causó sobre occidente la idea creada por Aristóteles sobre la generación espontánea, aunque hoy nos parezca absurda fue tomada en tiempos atrás como única verdad sobre el origen de la vida. Esta idea permaneció durante mil años y en ese lapso sufrió grandes cambios, sobre todo los hechos por la Iglesia, gracias a santo Tomás de Aquino (cuyas ideas aún permanecen vigentes), pero no fue sino hasta después de la creación del microscopio cuando la idea de la generación espontánea fue refutada por completo, los experimentos de Francisco Redi,Lazzaro Spallanzani, Luis Pasteur y John Tyndall dieron paso a la desaparición paulatina de la errónea creencia sobre el origen de la vida.

El proceso de la extinción de la generación espontánea inicia con Francisco Redi (1626-1698) cuyos experimentos abren puerta al largo camino que significó un lucha político-religiosa e intelectual. Su inconformidad con las creencias establecidas lo llevaron a poner a prueba la veracidad de las mismas, por lo que ideó un experimento sencillo pero magistral, con el cual pudo comprobar su hipótesis. Redi colocó en varios frascos un trozo de carne; selló la mitad, después de una minuciosa esterilización y dejó abiertos la otra mitad. Al cabo de varios días descubrió que la mitad de los frascos con el trozo de carne y que no habían sido sellados tenían en su interior larvas de moscas deslizándose sobre la carne, en contraste con los otros frascos que a pesar de haberse podrido lo que contenían en el interior, no presentaban larva alguna. Redi realizó otro experimento creyendo que el aire podría ser el culpable de la aparición de las larvas, por lo que haciendo algo similar que en la ocasión pasada, pero con el único detalle de que esta vez no selló los frascos herméticamente, sino que colocó una gasa que impidiera el paso de todo organismo (moscas) pero no el del aire, esperó para ver que sucedía, encontrándose días después con los mismos resultados que el experimento anterior. Estos sencillos resultados pusieron la piedra inicial que marcó el principio de la biogénesis.

Aunque los descubrimientos de Redi sacudieron por completo todas la creencias sobre el origen de la vida, la generación espontánea resultó ser más resistente de lo pensado, esto gracias a los agregados del biólogo inglés John Needham, los cuales hablan sobre fuerzas vitales que animan la materia inerte. Muy a pesar de los descubrimientos de Lazaro Spalanzani la generación espontánea no se vio enterrada sino hasta la llegada de Louis Pasteur y su pasteurización.

Pasteur descubrió que el aire contenía organismos invisibles que eran los culpables de la descomposición de los alimentos, utilizó un matraz de cuello de cisne (matraz Pasteur) con el cual aseguró un libre flujo de aire dentro del matraz, pero no un libre flujo de los microorganismos que éste transportaba, quedando atrapados en un filtro dentro de la “u” del cuello, con este método aseguró que los alimentos perduraran durante tiempos largos sin echarse a perder. Gracias a esto y a los descubrimientos de Lazaro Spallanzani, la generación espontánea quedó bajo tierra, pero fue John Tydall quien colocó el epitafio.

John Tydall estudió física y se interesó mucho en los fenómenos de la luz, con la que pudo estudiar las partículas suspendidas en el aire y que fueron llamadas tiempo atrás por Ferdinan Cohen “bacterias”. Tyndall descubrió que estas partículas desviaban la luz y se dio cuenta de que el proceso de putrefacción estaba estrechamente relacionado con la presencia de estas partículas suspendidas.

Con esto se ha visto de manera somera la trayectoria que siguió la idea de la generación espontánea desde sus inicios hasta su desaparición total (hablando con hiperbolismo, pues aun hoy en día quedan secuelas de su paso por nuestra cultura) en la que se involucraron fuertemente Redi, Spallanzani, Pasteur y Tyndall. Creo que aunque en este trabajo no se habló con decencia sobre Spallanzani, es de menester decir que sus investigaciones junto con las de Redi, son el mazo que destruyó casi por completo la creencia de la generación espontánea.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Según su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cual ycuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura

Según su estado físico:

1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración.

2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar:Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y nose funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

Según su utilización:

1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc.

2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores  indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

MATERIALES Y MÉTODOS

-polvos de los medios de cultivo

-balanza

-incubadora

-tubos

-agua destilada

-Baño Maria (100C)

-pipetas

-autoclave

MESA 1

a) 200ML DE SOLUCION SALINA PEPTONADA

Ingredientes:

o NaCl 8.5g

o Peptona 1g

o Agua destilada 1L

Colocar la solución en tubos de 9ml. Taponar y esterilizar.Disolver los componentes hirviéndolos en aprox. 1000 ml de agua destilada .ajustar el PH de solución .Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión (121C)

b) 300ML DE PLATE COUNT AGAR

Ingredientes:

o Triptona 5g

o Glucosa 1g

o Extracto de levadura 2.5g

o Agar 15g

o Agua destilada 1L

Hacer disoluciones de la muestra al 1/10. 1/100.etc, según estime el grado de contaminación. Poner 1mL de cada disolución decimal en placas de Petri (por duplicado).Añadir 15ml de medio de cultivo (fundido, a 45°C en un baño termostático) y dar movimientos circulares y de vaivén para que se distribuya la muestra uniformemente. Incubar: una serie de placas a 20°C/ 3 días (psicrófilos) y otra serie de placas a 35°C/ 2 días (mesófilos). Para incubar las placas introducirlas invertidas en la estufa.

c) 100ML DE CALDO LAURIL SULFATO

Ingredientes:

o Triptosa 20g

o Lactosa 5g

o NaCl 5g

o Laurel sulfato de sodio 0.1g

o Fosfato dipotásico 2.75g

o Fosfato monopotásico 2.75g

Suspender 35,6g del polvo en 1litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta la disolución total. Distribuir en tubos conteniendo tubos de fermentación. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas,Químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada.

Los diferentes medios de cultivo muestran diferente crecimiento bacteriano debido a que cada medio de cultivo tiene su propia técnica de disponer a la suspensión bacteriana.

Las bacterias deben ser evaluadas luego de 24h tras ser inoculadas y estar bajo las condiciones dadas, puesto que se asume que ha asimilado todo el nutriente proporcionado por el agar en su diferente consistencia.

CONCLUSIONES

Creo que es súper importante los medios de cultivo bacterianos, ya que gracias a ellos podemos investigar los miles de tipos de bacterias, su composición, su alimentación, la manera en que se reproducen y cuan patógenos son. Gracias a estos medios podemos incubar las bacterias provenientes de cualquier lugar, pues como ya sabemos las hay en todos lados.

Es importantísima esta incubación, ya que es aquí donde se desarrollaran las bacterias, claro dependiendo de factores químicos y físicos para su desarrollo incluyendo también los múltiples agares, caldos o semi- agares, ya que estos son el medio nutricional para que nuestros microorganismos puedan crecer y así poder estudiarlos.

Por medio de esta practica y al realizar su investigación correspondiente, la preparación para un medio de cultivo de logro, a pesar de algunos errores que creo son naturales al ser la primera vez que realizamos un trabajo de este tipo.

Son muchos los progresos obtenidos a partir de estos medios, obviamente cultivando bacterias, uno de los más importantes ha sido la Pasteurización, creada por Louis Pasteur.

RECOMENDACIONES

Que el uso de los guantes y el cubre bocas, así como la limpieza del lugar donde realizaremos la practica, son aspectos muy importantes para un desempeño y resultado mucho mas favorable.

CUESTIONARIO

MANITOL SALT AGAR

Ingredientes

o Extracto de carne 1g

o Peptona de caseína 5g

o Peptona de carne 5g

o NaCl 75g

o Manitol 10g

o Rojo de fenol 0.025g

o Agar 15g PH 7.4

Preparación

Pesar 11g de esta mezcla y se deja en erlenmeyer y se añade el agua destilada 1 litro, se homogeniza en caliente, luego se esteriliza en autoclave 15 libras de presión por 15 minutos.El servido se realiza cuando el medio esta 45C a 50C, se agita suavemente el erlenmeyer para una total homogenización y con toda asepsia, junto con el mechero encendido, se vierte el medio aproximadamente 15ml dentro de la placa estéril, endurar y rotular. La siembra se practica con una buena asada, se realizan las estrías girando la placa para abarcar toda el área del medio, las placas se dejan en la estufa a 37C durante 3 días.

Microorganismos que crecen en el medio

Es un medio selectivo para el asilamiento de staphylococcus, presenta alta concentración de salinidad que inhibe el desarrollo de bacterias halofitas y el manitol es desdoblado por especies patógenas, debe sembrarse con un buen inoculo a partir de muestras donde se sospecha presencia de sthaphylococcus

BAIRD PARKER AGAR

Ingredientes

o Extracto de levadura 1g

o Extracto de carne 5g

o Triptosa 10g

o LiCl 5g

o Glicina 12g

o Piruvato de sodio 10g

o Agar 15g

o Agua destilada 1000ml

Preparación

Pesar 60 gramos de este polvo( Baird Parker agar) en 1000 ml de agua destilada, disolver en caliente y esterilizar en autoclave a 121C X 15 minutos, cuando la temperatura esta 50C añadir una emulsión filtrada de yema de huevo, disuelto en una solución salina 1+1(una yema mas una volumen de solución salina igual al de la yema), homogenizar y verter para verter sobre el frasco que contiene el medio base, lo mismo añadir 1 ml de solución de telurito de potasio al 3.5%, luego repartir el medio en placas petri, hacer el control de esterilidad por 24 horas.

Microorganismos que crecen en el medio

Este medio se desarrollan staphylococcus,bacillus,micrococcus y levaduras

SALMONELLA SHIGELLA AGAR

Ingredientes

o Extracto de carne 5g

o Peptona 5g

o Lactosa 10g

o Sales biliares 8.5g

o Citrato de sodio 8.5g

o Tiosulfato de sodio 8.5g

o Citrato ferrico 1g

o Rojo neutro 0.025g

o Verde brillante 0.033g

o Agar 12.5g

o agua destilada 1000ml

Preparación

Pesar 60g del polvo para 1 litro de agua destilada, usar papel manteca para un solo uso, espolvear directamente del frasco al papel, evitar inhalar el polvo del medio de cultivo, en el ermeleyer disolver bien el medio antes de calentar , luego continuar disolviendo sumergiendo el frasco en agua hirviente en ebullición 2 -3 minutos, este medio no es necesario esterilizar en autoclave por si solo ya inhibe a las bacterias ambientales, rotar el frasco para homogenizar bien el medio y servir en placas petri estériles,15ml X placa, dejar enfriar.

Microorganismos que crecen en el medio

Este medio se desarrollan las colonias de salmonellas grandes, húmedas y shigellas son circulares transparentes y en caso de las coliformes serán cremosas y rojizas

A. Klebsiella pneumoniae B. Escherichia coli C. Salmonella

D: Proteus mirabilis E: Pseudomona aeruginosa 

AGAR TSI (AGAR HIERRO TRES AZUCARES)

Ingredientes

o Extracto de carne 3g

o Extracto de levadura 3g

o Peptona 15g

o Proteosa peptona 5g

o Lactosa 10g

o Sacarosa 10g

o Glucosa 1g

o Sulfato ferroso 0.2g

o Tiosulfato de sodio 0.2g

o NaCl 5g

o Rojo fenol 0.024g

o Agar 12g

o Agua destilada 1000ml PH 7.4

Preparación

Pesar 60g de TSI para 1000ml de agua destilada, remueve el polvo en el erlenmeyer usando bagueta de vidrio y agitándose dentro de una olla con agua hirviente o baño maría 100C, se homogeniza el medio , luego se esteriliza en autoclave 121C X 15 minutos, al retirar el medio de la autoclave se rota el frasco para que la homogenización sea pareja, se reparte en tubos estériles , medio volumen del tubo y se semi inclina apoyándose en un soporte horizontal, el éxito de la reacción depende de cómo se sirve este medio, al sembrar debe usarse asa de siembra en punta, practicar la estría en plano inclinado y hacer la picadura hasta al fondo del tubo por la central sin

romper el medio, estos medios deben ser controlados 24 horas antes de ser sembrados, para estar seguros de su esterilidad.

Microorganismos que crecen en el medio

Es uno de los medios bioquímicos, una de las características de este medio es que no tienen inhibidores pero puede llevar indicadores de viraje de PH.

El TSI, se usa para el estudio metabólico de Enterobacterias, Bacillus, Clostridium, Vibrio, Sptreptococcus.

LIA (AGAR LISINA HIERRO)

Ingredientes

o Peptona 5go Lisina 10go Extracto Levadura 3go Tiosulfato de Sodio 0.04go Glucosa 1go Citrato de Hierro y Amonio 0.5go Púrpura Bromocresol 0.02g o Agar 14go Agua destilada 1000ml

Preparación

Suspender 23 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completaDisolución y hervir durante un minuto. Dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar en posición horizontal.

1. A partir de una colonia aislada sembrar el medio por picadura en el fondo y por estría en laSuperficie.2. Incubar a 35 ± 2°C durante 18 a 48 horas.3. Examinar los tubos para observar cambios de color y ennegrecimiento

Microorganismos que crecen en el medio

Este medio bioquimico contiene lisina, un aminoácido que puede descarboxilarse, posee 6 carbonos con un COOH y 2 NH2. Dentro de las Enterobacterias: Shigella, Salmonella, Proteus vulgaris y proteus mirabilis

CALDO SELENITO

Ingredientes

o Peptona 5go Lactosa 4go Fosfato de sodio 10go Selenito de sodio 4go Agua destilada 1000ml

Preparación

Suspender 23 g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar ligeramente hasta su disolución completa. Evite el calentamiento excesivo.No esterilizar en autoclave. Distribuir en tubos estériles un volumen no menor a 5 ml. Se recomienda guardar en heladera si no se usa de inmediato.

Microorganismos que crecen en el medio

Caldo selenito é recomendado para o enriquecimiento de Salmonella sp. selenito como inibidor da microbiota entérica, principalmente Escherichia coli e Enterococcus, favoreciendo o crecimiento das especies de Salmonella

AGAR BISMUTO SULFITO

Ingredientes

oExtracto de carne 5g

oDigerido pancreático de caseína 5g

oDigerido péptico de tejido animal 5g

oDextrosa 5g

oFosfato de sodio 4g

oSulfato ferroso 0.3g

o Indicador de sulfito de bismuto 8g

oAgar 20g

oVerde brillante 0.025g

oAgua destilada 1.000 ml

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitandoFrecuentemente y dejar hervir no más de 1 a 2 minutos. Evitar el sobrecalentamiento.Enfriar entre 50ºC y 55ºC, mezclar suavemente para que se disperse el precipitado, colocar 20 mL de medio por cada placa y dejar solidificar. Este medio no puede ser esterilizado en autoclave.

Microorganismos que crecen en el medio

Salmonella typhi Colonias con centro negro, bordes claros, a las 48 h con halo negro grisáceo y brillo metálico

Salmonella typhimurium Colonias negras a verdes Escherichia coli Crecimiento inhibido o colonias verdes Proteus mirabilis Colonias pequeñas verde pálido a veces mucoides, sin swarming Staphylococcus aureus Crecimiento inhibido

CALDO TETRATIONATO

Ingredientes

o Mezcla de Peptonas 5go Carbonato de Calcio 10go Sales biliares 1g

o Tiosulfato de Sodio 30g

Preparación

Suspender 46 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completaDisolución y hervir durante un minuto. No esterilizar en autoclave.Adicionar 20 mL de solución yodo-yodurada (6 g de yodo en cristales y 5g de yoduro de potasio en 20mLDe agua) antes de utilizarse. Dispensar en tubos estériles y utilizar inmediatamente.

Referirse a los procedimientos y Métodos Estándar para el aislamiento e identificación de Salmonella.Después de incubar a 35 °C por 12 a 24 horas, observar la presencia de desarrollo indicada por laTurbidez del medio. Subcultivar en medios selectivos apropiados.

Microorganismos que crecen en el medio

Es un medio selectivo utilizado para el enriquecimiento de Salmonella.

BILIS (CALDO LACTOSA VERDE BRILLANTE BILIS)

Ingredientes

o Peptona 10g

o Lactosa 10g

o Sales biliares 20g

o Verde brillante 0.013g

Preparación

Disolver 40g de polvo en 1000ml de agua destilada, homogenizar en caliente y repartir en tubos que contiene el tubito Durham, para que el liquido ingrese totalmenmte al tubito invertido, colocar celofan en le tubo grande y voltear con fuerza con el pulgar asegurándose que no debe quedar burbuja dentro del tubo Durham, tapar con algodón y estrelizar a 121C X 15minutos en autoclave.

Microorganismos que crecen en el medio

Medio selectivo para la detección del grupo coliforme a partir de agua, leche, derivados lácteos y otros productos de importancia sanitaria e investigar la presencia rápida de Escherichia coli por fluorescencia y confirmación por la formación de gas y prueba del indol

CALDO ESCHERICHIA COLI

Ingredientes

o Cloruro de sodio 5g

o 4-Metilumbeliferil-β-D-glucorónido 0.05g

o Fosfato dipotásico 2.75g

o Peptona biotriptasa 20g

o Fosfato monopotásico 2.75

o Lactosa 5g

o Sales biliares 1.5g

Preparación

Rehidratar 37 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el Punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Distribuir en tubos de ensayo o frascos con campana de Durham. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC. Antes de utilizar el medio verificar que en la campana no existan burbujas de aire.

Microorganismos que crecen en el medio

Para detección de coliformes y demostración rápida de Escherichia coli por fluorescencia a partir de agua, alimentos y diversas muestras, después de incubar 18 – 24 h a 35ºC.

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium

TCBS (AGAR TIOSULFATO, CITRATO, BILIS SACAROSA)

Ingredientes

o Extracto de Levadura 5go Sacarosa 20go Peptona de Caseína 5go Cloruro de Sodio 10go Peptona de Carne 5go Tiosulfato de Sodio 10go Citrato de Sodio 10go Bilis disecada 5go Colato de Sodio 3go Citrato de Hierro 1g o Azul de Timol 0.04go Azul de Bromotimol 0.04go Agar 14go Agua destilada 1000ml

Preparación

Suspender 86 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervirDurante un minuto. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas Petri estériles. No esterilizar en autoclave.

Sembrar las muestras tan pronto lleguen al laboratorio. Muestras como hisopos rectales, heces, pescado y otros alimentospueden ser depositadas directamente en el medio. Se recomiendan colocar inóculos pesados ya que los vibrios tienden amorir rápidamente, esto especialmente cuando las muestras no son frescas. Si las muestras tienen que ser transportadas alLaboratorio, se recomienda utilizar el medio de Cary Blair como medio de transporte. Las muestras no deben ser congeladas.Incubar las placas protegidas de la luz a 35 ± 2°C durante 18 a 24 horas. Si los resultados son negativos, reincubar por 24Horas más.

Microorganismos que crecen en el medio

Vibrio cholerae,vibrio parahaemolyticus, vibrio alginolyticus, Pseudomonas, Aeromonas, Enterobacteriaceas.

CALDO LAUREL SULFATO TRIPTOSA

Ingredientes

o Triptosa 20g

o Lactosa 5g

o NaCl 5g

o Laurel sulfato de sodio 0.1g

o Fosfato dipotásico 2.75g

o Fosfato monopotásico 2.75g

Preparación

Suspender 35,6 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta la disolución total. Distribuir en tubos conteniendo tubos de fermentación. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C.

Microorganismos que crecen en el medio

Medio rico en nutrientes, que permite un rápido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa, aún de los fermentadores lentos.La triptosa es la fuente de nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmóticoEs un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompañante.Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, éste último se evidencia al utilizar las campanas Durham.

BIBLIOGRAFIA

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