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INSTRUMENTOS DE MICROSCOPÍA

1. Láminas portaobjetos: Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transparente y forma rectangular. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso de coloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Este tipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebas serológicas de aglutinación.Las láminas portaobjetos estándar presentan bordes cortados o bordes esmerillados en un ángulo de 90º, estos últimos especialmente recomendados si se trabaja con material infeccioso ya que presentan bordes mucho más lisos y libres de rebabas minimizando el riesgo de sufrir cortes. Medidas estándar de 26 x 76 mm y grosor de 1 mm.

Las láminas portaobjetos con banda mate tienen en uno de los extremos una banda mate de vidrio esmerillado para la rotulación y perfecta identificación de las muestras. Bordes esmerillados 90º, medidas estándar de 26 x 76 mm y grosor

de 1 mm.

Las láminas portaobjetos con 1 o 2 cavidades para el montaje permanente de especímenes gruesos (insectos, minerales) o para aplicaciones diagnosticas en las que se desea visualizar células o partículas en suspensión. Bordes esmerillados 90º, medidas estándar de 26 x 76 mm y grosor de 1,2 mm.

Con banda mate de color son portaobjetos con bandas de rotulación en color blanco, verde, azul, amarillo y rosa. De medidas estándar de 26 x 76 mm resultan ideales para la clasificación de muestras mediante código de color según urgencia, técnica de preparación, departamento del que proceden, etc. Presentan los bordes esmeriladlos y la banda de rotulación de 20

mmLámina portaobjeto diagnostica especialmente diseñada para llevar a cabo técnica de inmunofluorescencia, presentan un recubrimiento hidrofóbico con 1, 3, 6, 8 ó 10 campos de reacción circulares hidrofílicos que permiten el análisis de un mismo tipo celular con distintos anticuerpos o distintas diluciones del mismo anticuerpo sin peligro de contaminación cruzada. El recubrimiento de los portaobjetos está constituido por una mascara de teflón azul altamente resistente a los solventes orgánicos y reactivos utilizados en las técnicas histológicas. Los portaobjetos son de medidas estándar 26 x 76 mm y presentan bordes

esmerillados 90º y banda para rotulación de las muestras de 20 mm.

Las láminas portaobjetos de tamaño especial de 76 x 50 mm y espesor aproximado de 1 mm. Permiten el montaje de muestras

de gran tamaño o de varios cortes de tejido en una misma preparación

Lámina portaobjeto con micrómetro objetivo 1/100 con dimensiones de 26 x 76 mm, con Escala de 1 mm en divisiones de 0,01 mm para ralizar mediciones del campo microscópico observado

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Hay que recordar que también las láminas portaobjetos pueden tener bordes biselados en especial para las extensiones sanguíneas.

2. Láminas cubre objetos: Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía de cuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuando son rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.Son fabricadas en vidrio soda solamente, limpio y sin impresiones digitales, prsentan un espesor estándar de 0,13 – 0,16 mm uniforme en toda su superficie. Para preservar en todo momento la limpieza de los cubreobjetos, se suministran en paquetes envasados al vacío y de fácil apertura, cada uno de los cuales contiene 10 cajas con tapa superpuesta de 100 unidades listas para su utilización. Existen cuadrados o redondos.

Los cubrecámaras son fabricados en vidrio soda y con bordes esmerillados, presentan las superficies lisas y pulidas y un grosor de 0,4 mm que los hace más robustos y resistentes que los cubreobjetos normales. Se suministran en cajas con tapa superpuesta de 10 unidades empaquetadas en bolsitas individuales.

3. Cámaras de recuento: El recuento celular es una practica de rutina en hospitales y laboratorios de investigación para determinar anomalías sanguíneas o realizar experimentos de cultivos celulares. Las cámaras de recuento son portaobjetos especiales, diseñados con este propósito a partir

de una única pieza de vidrio óptico con una retícula de medidas muy concretas grabada en superficie. Entre las cámaras más conocidas tenemos la de Neubauer, Thoma, Fuchs-Rosenthal y Bürker las cuales básicamente se diferencian en el tipo de retícula que presentan, y cubrecámaras de diverso tamaño.Las cámaras de recuento se utilizan para determinar el número de partículas por unidad de volumen de un líquido, las partículas leucocitos, eritrocitos, trombocitos, bacterias, esporas, polen etc. se cuentan visualmente con un microscopio.La placa base en vidrio óptico especial tiene el tamaño de un portaobjetos. Las ranuras fresadas en la superficie de la placa base la dividen en dos zonas anchas exteriores y 3 campos pequeños interiores. A diferencia de las zonas exteriores, que se utilizan para rotulación, los campos interiores están esmerilados y pulidos. En el campo central (= fondo cámara) están grabadas dos cuadrículas de recuento separadas una de otra por una ranura. El fondo de la cámara del campo central es usualmente 0,1 mm más bajo (= profundidad cámara) que ambos campos adyacentes. Entre campo central y cubreobjetos ya colocado existe por tanto una ranura de 0,1 mm. La limitación lateral del volumen a contar se forma mediante lassuperficies imaginadas por la proyección vertical sobre las líneas exteriores de la cuadrícula de recuento.Todas las cámaras de recuento presentan doble retícula dado que los análisis deben de realizarse por duplicado para que los resultados derivados sean significativos, y además, están disponibles en diferentes formatos: Estándar: La retícula se encuentra grabada sobre el fondo de la

cámara de recuento y bajo el microscopio aparece como una trama de líneas oscuras.

Con pinzas: Igual que el formato estándar pero en este caso la cámara de recuento dispone de un par de pinzas que asegura una óptima sujeción de cubrecámaras.

Líneas claras: El fondo de la cámara presenta un recubrimiento de rodio (fondo oscuro) sobre el que se

graba la retícula que de este modo aparece bajo el microscopio como una trama de líneas claras, consiguiendo un óptimo contraste.

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Estándar Con pinzas Líneas claras

Fórmula de valoración:

partículas contadaspartículas por μl volumen =

superf. cont. (mm2) x profundidad cámara (mm) x dilución

Ejemplo: eritrocitos en cámara: Neubauer1. células contadas: 528 eritrocitos2. superficie contada: 5 cuadrados medianos corresponden a 0,2 mm2

3. profundidad cámara: 0,1 mm4. dilución: 1 : 200

528 x 200= 5,28 x 106 eri/μl sangre = 5,28 millones de eri/μl sangre

0,2 x 0,1 x 1

Cámara Neubauer Bürker Thoma Fuchs-Rosenthal

Profundidad 0.1 mm 0.1 mm 0,1 mm 0,2 mmVolumen 0,1 L 0,1 L 0,1 L 0,2 LÁrea del cuadrado más pequeño

0,0025 mm2 0,0025 mm2 0,0025 mm2 0,0625 mm2

Recuento de Eritrocitos, trombocitos y leucocitos

Eritrocitos, trombocitos y leucocitos

Eritrocitos y trombocitos

Células de LCR

Neubauer: El sistema de cámaras de recuento preferido hoy. La profundidad de la cámara es de 0,1 mm. La cuadrícula de recuento muestra 9 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm2. Los 4 cuadrados grandes de las esquinas señalados con una "L" están divididos en 16 cuadrados con aristas de 0,25 mm. Se utilizan para el recuento de

leucocitos. El cuadrado grande central está dividido en 25 cuadrados medianos con aristas de 0,2 mm estando cada cuadrado mediano subdividido en 16 cuadrados pequeños con aristas de 0,05 mm y una superficie de 0,0025 mm2. Los 5 cuadrados medianos señalados con una "E" se utilizan para recuento de eritrocitos y de trombocitos. Tiene especial relevancia que todos los cuadrados medianos presentan en todos los lados líneas límite triples. La línea central es la frontera y decide si las células de esta zona se deben contar o no.

Burker: La profundidad de la cámara es de 0,1 mm. La cuadrícula de recuento muestra 9 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm2. Se utilizan para el recuento de leucocitos. Cada cuadrado grande está dividido por líneas dobles (a una distancia de 0,05 mm) en 16 cuadrados medianos, cada uno con aristas de 0,2 mm. Los cuadrados medianos corresponden en su tamaño a los de las cámaras Neubauer, pero sin estar a su vez subdivididos. Se utilizan para recuento de eritrocitos y de trombocitos. Las líneas dobles forman cuadrados pequeños de una superficie de 0,0025 mm2.

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Thoma: La profundidad de la cámara es de 0,1 mm. La cuadrícula corresponde al cuadrado grande central de la cámara Neubauer. La superficie de los cuadrados pequeños es de 0,0025 mm2 cada uno. Debido a que no existen cuadrados grandes exteriores, el sistema de cámaras Thoma sólo se utiliza para recuento de eritrocitos y de trombocitos.

Fuchs-Rosenthal: La profundidad de la cámara es de 0,2 mm. Esta cuadrícula de recuento se diferencia de los sistemas habituales para recuento de células sanguíneas por su gran superficie de 16 mm2. La cuadrícula de recuento muestra 16 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm2. Cada cuadrado grande está subdividido en 16 cuadrados pequeños con 0,25 mm de aristas y una superficie de 0,0625 mm2. Esta cámara de recuento es muy utilizada habitualmente, entre otros para recuento de células en líquido lumbar.

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4. Marcador para Laboratorios: El marcador es diseñado para la rotulación duradera de láminas portaobjetos y casetes de inclusión en color negro de alto contraste, es de punta ultra-fina resistente al agua, inodoro y no tóxico resistente a la mayoría de los productos químicos utilizados en laboratorios no se seca fácilmente y tiene una larga duración escribe sin tratamiento previo de las superficies. También se estila trabajar con etiquetas en algunas láminas para su rotulación, en el caso de extendidos sanguíneos y gota gruesa se trabajo con lápices de grafito.

5. Lápices diamante: Lápices con punta de diamante para escribir sobre vidrio, con mango de madera.

6. Micrótomos: Un microtomo (del griego mikros, que significa "pequeño", y temnein, que significa "cortar") es un instrumento de corte que permite obtener rebanadas muy finas de material, conocidas como secciones. Los microtomos son un instrumento importante de la microscopía porque permiten la preparación de muestras para su observación en microscopios de luz transmitida o de radiación de electrones. Los microtomos utilizan cuchillas de acero, vidrio o diamante, dependiendo del tipo de muestra que se esté cortado en lonjas y del grosor deseado de las secciones del corte. Las cuchillas de acero se utilizan para preparar secciones de tejidos blandos animales o vegetales para estudios en el contexto de la histología o de la indústria como corcho, madera balsa y otros como arcillas húmedas, gelatinas densas, poliestireno expandido para microscopía de luz. Las cuchillas de vidrio se utilizan para preparar secciones para microscopía de luz y para cortar secciones muy delgadas para microscopía electrónica. Las cuchillas de diamante (de grado industrial) son utilizadas para cortar materiales duros como el hueso, los dientes y materia vegetal como, maderas duras, etc, tanto para microscopía de luz como para microscopía electrónica.

Micrótomo eléctrico

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Técnicas en el contexto de la histología, aunque más habitualmente, tales muestras de tejidos suelen ser tejidos con patologías, removidos previamente por biopsia, y se desea saber de cual patología se trata, con fines médicos. Los órdenes de sección de corte habituales en la microtomía son de 1 a 50 micras, pero varían según el tipo de muestra y según el microscopio en el que se desee observar la muestra.Debido a que los tejidos blandos son imposibles de cortar de manera uniforme, se procede siempre a su endurecimiento. La forma de obtener este endurecimiento distingue los tres tipos principales de técnicas de microtomía:1. Técnica histológica tradicional : los tejidos son endurecidos

substituyendo el agua por parafina utilizando la técnica de infiltración y teñidos para aumentar la visibilidad de las estructuras celulares. Los cortes en esta técnica suelen tener un grosor entre 2 y 10 micrómetros. Esta técnica es lenta y laboriosa, requiriendo al menos de 15 o 16 horas para obtenerse una muestra válida para el corte.

2. Criosección: en esta técnica los tejidos son endurecidos por congelación. Esta técnica se utiliza para los tejidos que no soportan el proceso impuesto por la técnica histológica tradicional, o cuando se requiere de resultados inmediatos (esta técnica es mucho más veloz que la primera, 5-10 minutos). Se usa una variante del micrótomo denominada criostato, alojado en una cámara de congelación, que puede alcanzar temperaturas de hasta -35 °C según el modelo. Se suele trabajar a temperaturas de entre -20 y -25 °C.

3. Microscopía electrónica: los tejidos son embebidos en resina epóxica y luego se utiliza un micrótomo equipado con una hoja de vidrio o diamante para cortar secciones muy finas (típicamente de 60 a 100 nanómetros). Las secciones se tiñen y se examinan con un microscopio electrónico de transmisión. A menudo a este instrumento se lo denomina ultramicrótomo.

7. Puente (soporte) para tinción de láminas: Se emplean para colorar las láminas portaobjeto en las coloraciones, sirven de base para que las láminas portaobjetos estén suspendidas en las coloración.

8. Cubetas para tinción: Son cubetas en donde poseen colorantes para colorear muestras fijadas por inmersión u otras son cubetas que recolectan los reactivos usados en una coloración.Las Cubetas para tinción según Hellendahl, para máx. 8 o 16 (espalda contra espalda) portaobjetos 76 x 26 mm, con tapa, de plástico transparente (PMP) hay con tapa, vidrio prensado.

Las cubetas para tinción según Schiefferdecker, para máx. 20 portaobjetos 76 x 26 mm, con tapa, vidrio prensado.

Las cubetas para tinción según Coplin, para máx. 10 láminas portaobjetos 76 x 26 mm, con tapa, vidrio prensado, también hay con tapa roscada, polipropileno.

Existen otros modelos de cubetas para tinción, consistiendo de cubeta de vidrio y soporte para tinción, para máx. 10 láminas portaobjetos desde 76 x 26 mm hasta 76 x 52 mm de vidrio presnsado y acero inoxidable.

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Otras cubetas para tinción, consistiendo de cubeta de vidrio, cestillo y asa de alambre, para 10 portaobjetos 76 x 26 mm.

Cubetas para tinción según Hausser/Gedigk, consistiendo de cubeta de vidrio, tapa y cestillo, para 60 láminas portaobjetos 76 x 26 mm.

Cubetas para tinción, PVC, gris oscuro, 38 x 17 x 8 cm, sin puente para tinción reciben los colorantes, decolorantes y líquido de lavado según la coloración y las segundas (véase el dibujo del puente para tinción de láminas.

9. Gradilla para láminas portaobjetos: Se usan para secar las láminas una vez coloreadas. Existen para diferentes número de láminas portaobjeto.Las gradillas para 12 láminas portaobjetos, plexiglás, plazas continuamente numeradas y con banda rotulable.

La gradilla para porta-objetos 26 x 76 mm modelo en ABS con tapa superior transparente en policarbonato, para 100 diapositivas en posición vertical, con ranuras numeradas y tabla índice.

10. Dispensadores de láminas portaobjetos: Permiten obtener portaobjetos limpios, secos y libres de huellas digitales cuando sea posible para realizar preparaciones microscópicas.

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Los dispensadores para 50 láminas portaobjetos 76 x 26 mm, de plástico gris (ABS). Posibilita una conservación clara y limpia. ¡Colocar sólo portaobjetos secos! Los portaobjetos se extraen mediante giro de uno de los dos volantes. 1 unidad por embalaje.

11. Envases para láminas portaobjeto: Sirven para contener y trasportar portaobjetos. Hay envases de transporte para 2 láminas portaobjetos 76 x 26 mm, ovalados, polietileno (HD-PE) y envases de transporte para 5 láminas portaobjetos 76 x 26 mm, rectangulares, polipropileno.

12. Cajas de depósito para portaobjetos: Sirven para guardar portaobjeto e incluso láminas fijadas y coloreadas. De diferentes formas y cantidad.Hay cajas de depósito para portaobjetos 76 x 26 mm, marco de madera, cartón forrado con papel negro, con ranuras de plástico numeradas e índice en la tapa otras cajas de depósito para portaobjetos 76 x 26 mm, poliestireno, apilables, con ranuras de plástico numeradas y tapa separada con índice

Hay cajas de depósito para portaobjetos 76 x 26 mm, poliestireno, apilables, tapa con charnela a prueba de polvo, con cierre de plástico en la

frente, fácil de abrir, con numeraciones interiores y tabla separada con índice.

13. Bandejas para láminas portaobjetos: Presentan una ranura para dedos que facilita que facilita la extracción de los portaobjetos. Normalmente son de cartón.

14.

Asas de siembra (asas bacteriológicas): Es un filamento de metal en su extremo terminal del alambre de platino o nicrón forma un pequeño círculo en el extremo con un diámetro de 4 a 5 mm. Se esteriliza normalmente al mechero.Las asas de siembra para mangos de Kolle, de acero inoxidable.

Los mangos de Kolle, latón niquelado, 255 mm largo. Se les puede usar con asa de Kolle, aguas o incluso lanceta.

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Existen asas de siembra, para sembrar en medios de cultivo, poliestireno, esterilizadas por radiación gamma, desecheables, en bolsitas de 20 piezas. La elevada flexibilidad del material permite una siembra suave sin dañar la superficie del medio de cultivo.

También podemos ver que existen soportes para las asas de bacteriológicas.

15. Cajas o Placas Petri: Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diámetro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm de altura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente de vidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro. Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa queda descansando sobre el borde de la caja.En microcopia se suelen utilizan como recipiente para observar muestras al esteromicroscopio con diámetros de 40 a 150 mm.

16. Recipientes de transporte para muestras patológicas: Son recipientes en donde se pueden colocar las muestras que luego serán observada al microscopio u otro análisis e el laboratorio.Los recipientes de transporte para muestras patológicas, de polipropileno particularmente transparente, con base estable, con tapa rosca impermeable de polietileno (PE-HD) entregada por separado.El fondo especialmente redondeado facilita extraer pequeñas muestras. El recipiente de 35 ml de capacidad puede utilizarle como contenedor protector para el recipiente de 20 ml y el recipiente de 100 ml para los contenedores de 35 y 50 ml de capacidad.También se pueden utilizar de material de vidrio.

17. Contador de células: Estos aparatos sirven para contar células al microscopio y en el caso de contadores diferenciales de leucocitos la diferenciación de este tipo de leucocitos.El aparato eléctrico para el recuento de células con

pantalla digital. Es especialmente diseñado para el recuento de células sanguíneas pero es igualmente apto para el recuento de otras partículas. El aparato de recuento ofrece 6 teclas de función, 15 teclas de recuento individualmente nombrable así como 4 diferentes programas de recuento. Para uno de ellos, cada tipo de recuento y análisis de recuento son libremente programables. Posibilita el recuento con cifras porcentuales o reales, alcance de recuento máx. 1000. El aparato es suministrado incluso con un manual de instrucciones detallado.

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Los contadores de células más comunes poseen 4 dígitos, permiten realizar el conteo de células, como por ejemplo las células sanguíneas, que se emplean en algunas pruebas de laboratorio clínico. Tienen mecanismo de puesta a cero, son pequeños y de poca masa (35 g). Son de fácil manejo, sólo con accionar el mecanismo de conteo y al finalizar se gira el mecanismo de puesta a cero.

Los contadores manuales diferenciales de leucocitos sirven para realizar el recuento manual de glóbulos blancos con los diferentes componentes de una formula leucocitaria,. La mayoría de los modelos poseen 5 u 8 teclas con totalizador. Las 5 u 8 teclas representan los grupos normales de leucocitos con las denominaciones: BASO., EOSIN., SEG., LYMPH., MONO y añade MYELO., JUVEN., STAB. Según el modelo de contador diferencial. Cada tecla tiene el nombre y la representación gráfica de su particular célula. Display va de 0 hasta 999 en cada una de las ventanas correspondientes a cada tecla. Además tienen señal acústica que se activa al contar 100 células (100, 200). El mecanismo de puesta a cero mediante los mandos laterales. Sus pesos son variables según el modelo 950 g y 1250 g.

18. Pipetas cuentagotas: Son tubos largos de vidrio con el extremo distal má delgado y el extremo proximal donde se puede colocar una tetina de goma y poder contar gotas de líquido en las preparaciones al microscopio.Las pipetas cuentagotas, vidrio sódico-cálcico, punta recta, con borde, sin tetina. Las tetinas de goma para pipetas cuentagotas, rojas, aprox. volumen de succión aprox. 0,8 ml

19. Pipetas Pasteur: Son parecidas a las pipetas cuentas gotas pero con el extremo distal más largo y delgado, sirve para contar gotas de líquido y extravasar volúmenes d e un recipiente a otro.Las pipetas Pasteur, vidrio sódico-cálcico con punta larga y fina, con estrangulación en el tubo de aspiración apta para colocar un tapón de algodón, suministrados sin tapón.

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También hay pipetas Pasteur de polietileno, no estériles, longitud aprox. 150 mm con graduaciones.

20. Frascos lavadores: Frascos que contiene un líquido, por ejemplo agua para lavar las láminas y eliminar los excesos de colorantes en las coloraciones. Son de polietileno.

21. Frascos cuentagotas y para guardar reactivos en las coloraciones o preparados al microscopio: Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener de acuerdo a su tamaño entre 25 mL y 1 litro. La tapa del frasco puede ser de cristal esmerilado o plástica si el cierre es de rosca, lo que dependerá del tipo de reactivo que contenga. Con ambas variantes se consigue el cierre hermético del frasco. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar.

Los frascos goteros existen en el mercado diferentes modelos. Los de vidrio, tradicionalmente empleado son incoloros o ámbar. De acuerdo con su capacidad, pueden contener entre 25 y 100 mL. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular, que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco, el contenido goteará si se inclina el frasco adecuadamente.Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón de caucho, similar a los empleados en los frascos de medicamentos, en tanto que otro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido.

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22. Cuenta minutos (timer, temporizadores): Se utilizan para medir los diferentes tiempos que puedes controlar desde minutos hasta horas con señal acústica graduable. Por ejemplo al realizar coloraciones al microscopio.Hay cuenta-minutos con alarma, caja de plástico blanco, para sobremesa y colgar. Otros como DIGI-TIMER, cuenta-minutos con pantalla de 4 dígitos para minuto y segundo, función Count-Down con alarma al alcanzar "0", con imán para fijar en superficie metálico con pila (pila tipo botón SR 44 1,5 V).

El cuenta-minutos Universal, con pantalla digital y alarma, con imán y clip, pie para sobremesa y pila, dimensiones 68 x 53 x 20 mm.Realiza 3 funciones:- Cuenta-minutos desde 1 segundo hasta 24 horas- Reloj de 24 horas en pantalla digital- Cronómetro desde 1 segundo hasta 24 horas

23. Cronómetros: Al igual que los timer miden un intervalo de tiempo.El cronómetros de sobremesa PRISMA 400, reloj avisador Interval-up-down, para laboratorios, aptos para temperaturas de -10 ° hasta +55 °C- •pantalla LCD en dos líneas: arriba 3 dígitos, abajo 5 dígitos,

indicador de 6 funciones en 2 líneas, altura de los dígitos 22/8 mm

- con alarma regulable y caja sólida de plástico blanco de aprx. 175 x 130 x 40/95 mm

- 4 relojes con las funciones: Start/Stop/Reset, Addition, Flyback Count Down,Count Down

- batería: tipo mignon (AA) R 6.

24. Cámaras para guardar el microscopio: Los microscopios vienen en una caja de madera con su funda (antipolvo), pero a veces estos se deterioran, por lo que es necesario comprarles otra nueva e impedir que los agentes del ambiente como la temperatura, humedad y hongos los deterioren más rápidamente

25.

Kit de limpieza de microscopios: El cuidado diario de los elementos ópticos del microscopio permite alargar la vida del equipo manteniéndolo siempre en perfectas condiciones de uso. Para ello, se ofrece el kit para una correcta limpieza y mantenimiento de las lentes del microscopio. Es un kit que se vende en el mercado para el cuidado del microscopio Incluye:

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- Solución limpiadora de lentes (40 mL)- Papel para lentes- 5 Bastoncillos de algodón- Pera con cepillo- Gamuza

26. Mecheros: Son instrumentos de laboratorio diseñados para obtener una llama calorífica a partir de la combustión del alcohol o del gas. Los mecheros de alcohol, consisten, en un pequeño recipiente de vidrio de forma redondeada, con el fondo plano, estando provisto por su parte superior de un pequeño saliente cilíndrico por donde se enrosca un pequeño tubo metálico de unos pocos mm de diámetro a través del cual se inserta una mecha cuyo extremo posterior queda en contacto con el alcohol contenido en el recipiente. Una pequeña capucha cilíndrica de metal con el extremo superior redondeado, se utiliza para tapar el mechero y que no se evapore el alcohol.Los mecheros de gas son los mas empleados. Existen diferentes modelos, pero todos están estructurados básicamente por tres partes separables: La base, el tubo quemador y el regulador de aire. La base: Es una pieza metálica de forma

circular y fondo plano, lo que permite mantener el tubo quemador en posición vertical. Tiene un diámetro de 4 a 6 cm y presenta en la parte superior un pequeño tubito en posición horizontal de unos 6 mm de diámetro denominado tobera, donde se inserta ajustadamente, con una presilla de seguridad, una fina manguera que se inserta por su otro extremo a una llave de gas.

Tubo quemador: El tubo quemador puede tener un diámetro variable, en dependencia del modelo de que se trate. El mechero de "Bunsen" convencional, tiene aproximadamente 6 ó 7 mm de diámetro x 6 ó 7 cm de largo, en tanto que el mechero de "Fisher" es mucho más grueso con una longitud también mayor y está provisto en su extremo superior de un quemador que propicia una llama grande e intensa. En ambos tipos de mecheros, muy próximo al extremo donde se enrosca a la base, el tubo presenta un orificio de un diámetro similar al del collarín que regula la entrada de aire.

Regulador de aire: El regulador de aire está compuesto por un collarín metálico de forma anular, semejante a una alianza, que se inserta calibradamente en el extremo inferior el tubo quemador, quedando en contacto con la base. Está provisto de un orificio circular de un diámetro similar al del tubo quemador.

Mechero de Bunsen Mechero de Fisher

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Manipulación del mechero:1º. Revise que las diferentes partes del mechero, estén debidamente

acopladas y ajustadas.2º. Abra ligeramente la llave de gas. Cuando esta operación se realiza, el

gas que atraviesa la manguera y la tobera se dirige al centro de la base, donde hay un dispositivo provisto de un fino orificio, calibrado a décimas de mm que regula el paso del gas hacia el tubo quemador.

3º. Aproxima la llama de un fósforo o de una fosforera al orificio del tubo quemador por donde sale el gas para encender el mechero.

4º. Regule la salida del gas en dependencia de la intensidad de la llama.5º. Ajuste la entrada de aire hasta obtener la llama deseada, para lo

cual se hará girar al collarín hasta hacer coincidir su orificio con el del tubo quemador.

Al realizar esta operación, en mayor o en menor grado se producirá la entrada de aire en el tubo quemador lo que propiciará la mezcla gas – aire (combustible y comburente). En la medida en que se enriquezca el gas con el aire. Así será la llama. Una mezcla rica en aire produce una llama azulosa, no luminosa y de gran poder calorífico. Si empobrecemos la llama cerrando la entrada de aire, obtendremos una llama de color amarillo - rojizo, luminosa y poco calorífica.

Diferentes zonas de la llama del mechero

Uso del mechero: El mechero tiene una función utilitaria muy diversa: se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de nicrón o platino, mediante su exposición directa a la llama, que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. Para flamear la boca de los tubos de ensayo

y otras cristalerías estériles. Por su parte externa con el objetivo de eliminar los microorganismos contaminantes, como paso previo a la realización de siembras, resiembras, distribución de medios de cultivo en placas y otros procederes. El mechero también es utilizado para fijar frotis en láminas portaobjetos y calentar medios de cultivo durante su preparación.Advertencia: El empleo del mechero entraña un peligro potencial de quemaduras en

la piel o en la ropa, por lo que se debe tener sumo cuidado con su manejo. Se recomienda retirar de su alrededor, durante su uso, papeles (utilizados para la esterilización de la cristalería) así como, líquidos inflamables (alcoholes para coloraciones) y otros materiales similares. Por las mismas razones debe mantenerse el pelo recogido y concentrarse totalmente en la actividad que se esté realizando.

Los instrumentos de siembra (asas o agujas de platino o nicrón) que contengan restos de muestra o de cultivos, deben ser introducidos gradualmente en la llama del mechero de la siguiente manera: de inicio se expondrá el extremo del instrumento a la zona azul de la llama y tan pronto se ponga al rojo, se introduce gradualmente el resto del alambre hasta que también se ponga al rojo vivo. La introducción total del instrumento en la llama tiende a aumentar la intensidad de la formación de aerosoles, potencialmente peligrosos para el manipulador. Lo idóneo cuando se trabaja con muestras o cultivos, es disponer de un recipiente con arena humedecida en fenol, para introducir previamente el asa, con los restos de inoculo, antes de flamearla a la llama del mechero.

Mechero J-2000 azul universal: Para gas butano. Encendido múltiple mediante pulsador de apoyo que proporciona ignición instantánea segura. Dispositivo regulador de intensidad de llama. Sistema de bloqueo de seguridad incorporado, LOCK/ON que previene contra encendidos accidentales. Llenado de gas por una simple carga común para encendedores. Larga duración de encendidos. Alimentación por batería de 1,5 V.

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27. Instrumentos de disección (estuche de disección): Además de los trocars y las agujas hipodérmicas de diferentes calibres en el trabajo de laboratorio, ocasionalmente se requiere del empleo de diferentes agujas, bisturí y tijeras de disección, así como de charolas, una especie de bandeja donde, se realiza la disección de determinados especímenes de experimentación. Estas luego se pueden observar en el estereomicroscopio o realizar preparaciones o cortes con el micrótomo para luego fijarlas a láminas , colorearlas y llevarlas al microscopio a observar.

a) Bisturí; b) Tijeras; c) Pinzas de disección; d) Agujas de disección

a) Bisturí: Es un instrumento con hoja de filo cortante, su mango puede ser de madera, plástico o metal. Se emplea para realizar cortes sobre la piel de los animales durante la disección. Viene a ser por sus dimensiones un instrumento en forma de cuchillo pequeño y que su uso se ha extendido para practicar incisiones en tejidos blandos.

b) Tijeras: La hojas de las tijeras varían según su objetivo, rectas, en ángulo o curvas y con las puntas romas o puntiagudas. Los mangos pueden ser cortos o largos. - Tijera de disección: El tipo y localización del tejido a cortar

determina la tijera a usar; puede ser grande para tejidos duros, con ángulo para alcanzar estructuras, con mangos largos para cavidades corporales profundas y con hojas filosas.

- Tijeras de hilo: tienen puntas romas para no cortar las estructuras cercanas a la sutura y también sirven para preparar material de sutura por parte de la arsenalera.

c) Pinzas de disección: Instrumento, con o sin dientes en su parte activa, utilizado para tomar la fibromucosa bucal sin lesionarla o para estabilizar colgajos, especialmente al suturar. Ayuda a lograr una buena aproximación de los bordes de los colgajos y acelera el procedimiento de sutura, traumatizando muy poco el tejido.- Pinzas gruesas con bocado.- Pinzas finas para manipulación de estructuras delicadas.- Pinza Diente de ratón: sirve para pellizcar el objeto que está siendo

disecado.- Pinza Mosquito.

d) Agujas de disección: Es una aguja gruesa que casi siempre tiene un manguillo de color blanco o negro y sirve para separar tejidos de cualquier ser vivo sobre todo en las disecciones, algunas vienen en el estuche de disección, pero también las venden sueltas.

28. Pinzas para cubreobjetos: Estas pinzas para cubreobjetos se usan para sujetarlos, según Kuehne son de acero niquelado y curvadas.

29. Reactivos de microscopía: Se incluyen bajo esta denominación de calidad, todos los colorantes y reactivos utilizados en la preparación de las muestras para su visualización mediante microscopio. La microscopía es una técnica muy utilizada en citología, hematología y bacteriología, donde es habitual realizar tinciones selectivas de células y órganos.Dependiendo de las características de la muestra, esta se sumerge en distintos fijadores, disolventes y medios de inclusión que le proporcionan la consistencia y características adecuadas para poder ser teñida y visualizada correctamente.Existen muchos reactivos para microscopía, dependiendo que es lo que se desee observar y las características de lo que se desea observar, sólo se trataran los más importantes en el campo del Laboratorio Clínico.- Violeta de genciana- Solución de lugol

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- Alcohol acetona- Safranina- Fucsina fenicada de Ziehl- Azul de metileno

- Aceite de cedro- Wright- Giemsa- Eosina- Nigrosina- Rojo neutro- Xilol- Alcohol etílico- Bálsamo de Canadá- Hidróxido de potasio- Cloruro de sodio- Agua destilada

- Formaldehido- Glutardialdehído- Parafina- Tolueno- Isopropanol- DPX medio de montaje

30. Algodón y aplicadores y depresores: El algodón se utiliza

para taponear la boca de los tubos y otras cristalerías que van a ser sometidas a un proceso de esterilización y conjuntamente con los aplicadores de madera en la confección de hisopos finos y gruesos para extender las muestras en una lámina para su posterior coloraci´n y observación.Los aplicadores, además de ser utilizados en la confección de hisopos, se emplean también para la toma de algunas muestras, como por ejemplo: heces fecales, para su preparación en láminas destinadas a la investigación parasitológica.Los depresores, de madera o plástico, se utilizan para deprimir la lengua en la toma de muestras de exudado faríngeo y también, pueden emplearse para extraer medio de cultivo de sus frascos, para efectuar la pesada o como sustituto de los aplicadores en las preparaciones de heces en láminas para examen parasitológico.

Esto no 16

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1. Microscopios simples: Están formados por una sola lente convergente, que proporciona una imagen virtual, no invertida, varias veces mayor que el tamaño real del objeto observado.Debido a su limitada capacidad de ampliación, no se puede observar con ellos objetos microscópicos, quedando restringido su empleo para el examen de diversas estructuras u organismos microscópicos muy pequeños, cuyos detalles escapan a la agudeza visual del ojo humano, como por ejemplo: colonias muy pequeñas, desarrolladas en los cultivos, vermes de poca longitud, como el Necator americanus o el Enterovirus vermicularis, etc.Entre los dispositivos utilizados se encuentran las lupas empleadas en las prácticas de disección.Para su manejo, se debe colocar la lente de manera que su cara plana o

menos curva, quede hacia el objeto a examinar y observando por la cara opuesta, aproximar el instrumento gradualmente, hasta una distancia focal menor que la empleada si se fuera a observar directamente.

Fig.: Lupa

MICROSCOPIO

I. Concepto:La palabra microscopio proviene de la fusión de las palabras griegas micros que significa pequeño y skopien que significa ver o examinar. Dependiendo del sistema de contraste, los microscopios reciben diversos nombres. Entre los más comunes están los siguientes: Microscopio óptico de campo claro Microscopio óptico de campo oscuro Microscopio óptico de fluorescencia Microscopio óptico de contraste de fase Microscopio óptico de interferencia Microscopio óptico de luz polarizada Microscopio óptico invertido Microscopio estereoscopio

Estereomicroscopio: Instrumento que mediante la sobreposición de dos imágenes planas, una por cada ojo, permite apreciar imágenes tridimensionales o volúmenes.

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Microscopio: Instrumento que usa diversos sistemas de lentes e iluminación controlada para obtener la magnificación de un objeto.

II. Propósito del equipo:El microscopio es un instrumento de precisión conformado por subsistemas ópticos –lentes, filtros, prismas, condensadores–; mecánicos –elementos para controlar la posición de la muestra en el

espacio tridimensional X, Y, Z–; eléctricos –transformadores y sistemas de iluminación–, y electrónicos –cámaras, sistemas de televisión, etc.–, que interactúan entre sí para amplificar y controlar la formación de imágenes de objetos de tamaño reducido, cuyas características no alcanzan a ser detectadas por el ojo humano.Por lo general, para observar las muestras se requiere que estas hayan sido preparadas de acuerdo con técnicas que permiten resaltar los detalles a observar. El microscopio constituye una ayuda diagnóstica de primer orden en el área de salud, en especialidades como hematología, bacteriología, parasitología y la formación de recursos humanos. (Existen microscopios con aditamentos especializados para que los estudiantes efectúen las observaciones, dirigidos por un profesor). El desarrollo tecnológico de estos equipos ha permitido fabricar una enorme cantidad de modelos de aplicación especializada en la industria y la academia, y ha sido fundamental para el desarrollo del conocimiento humano y para entender el funcionamiento de la naturaleza.+

Ilustración: Lente positivo (convergente)

Un objeto [h´], ubicado a una distancia [a] del lente, produce una imagen [h], a una distancia [b], donde [h>h’].Relaciones matemáticas que gobiernan la construcción de lentes:1/f = 1/a+1/b, donde:f = distancia al foco. (Lugar donde se concentran las ondas luminosas); [a] = distancia del lente al objeto y [b] = distancia del lente a la imagen. La magnificación [M] de un lente se define como [M] = h/h’ = b/a.

Ilustración: Funcionamiento del lente

III. Principios de operación:El microscopio ha sido construido utilizando las propiedades físicas de los lentes al interactuar con la luz. Un lente es un elemento óptico, fabricado por lo general en vidrio, que tiene la propiedad de refractar la luz. Es de dimensiones calculadas con superficies generalmente parabólicas o esféricas. Si los rayos de luz que inciden sobre una de las superficies del lente convergen al salir del mismo en un punto F, el lente se conoce como positivo o convergente; si el lente dispersa los rayos luminosos que lo atraviesan, se denomina divergente o negativo. Los lentes positivos (convergentes), como el que se presenta a continuación, constituyen la base sobre la cual se fabrican los microscopios.

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En la ilustración es posible identificar el foco [F] –lugar donde se concentran los rayos luminosos– y la forma en que es refractada la luz al atravesar el lente. La distancia entre el lente y el foco [D] se conoce universalmente como distancia focal. La ilustración que se muestra a continuación resume los conceptos relacionados con el funcionamiento de los lentes, los cuales se aplican en el diseño y fabricaciónExplicación: Cuando un objeto bien iluminado [h’] se coloca a una distancia [a] a la izquierda de un lente convergente, los rayos de luz que provienen del mismo son refractados al cruzarlo. El rayo que proviene de la parte superior del objeto, que cruza el eje óptico del lente en el punto focal [F’], es refractado por las dos superficies del mismo y sale en una dirección paralela al eje óptico. El rayo que parte paralelo al eje óptico y cruza el lente en la parte superior es refractado y cruza, a través del punto focal [F] del lado de la imagen hasta que se cruza con el primer rayo a una distancia [b] del lente, donde se forma la imagen. En el caso presentado, la distancia [a] es mayor que la distancia focal [f’], por lo que se forma una imagen real e invertida a una distancia [b] a la derecha del lente. La distancia focal [F] está relacionada a las distancias [a] y [b] por la ecuación:

1 1 1= =

F a bLa magnificación [M] de un lente está definida por la relación que existe entre el tamaño del objeto y el tamaño de la imagen y se representa por la ecuación:

h bM = =

h’ adonde:[h] y [h’] corresponden respectivamente a las dimensiones de la imagen y del objeto, y [a] y [b] a las distancias existentes entre el lente y el punto donde se forma la imagen, y entre el lente y el punto donde se encuentra el objeto.

Diagrama del equipo (isométrico y corte)

Ilustración:Corte del microscopio

Componentes: Los componentes principales de los subsistemas son los siguientes:

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IV.Servicios requeridos:Normalmente, los microscopios utilizan energía eléctrica de 110 V/60 Hz o 220 V/60 Hz. Algunos disponen de una fuente regulada que permite variar la intensidad lumínica. También existen microscopios que, en lugar de bombillos, disponen de un espejo, mediante el cual se dirige la luz hacia la placa ubicada en la plataforma. Dichos microscopios son de máxima utilidad en regiones alejadas de los centros urbanos, donde no existen líneas de interconexión eléctricas y se utilizan en brigadas de salud. Otras clases de microscopios requieren de preinstalaciones especiales. Un microscopio de fluorescencia necesita una cabina oscura para poder efectuar las observaciones.

V. Descripción de fallas potenciales por componentes:1. Cabeza binocular:

A) Oculares: El problema más frecuente que afecta los oculares es la presencia de polvo o suciedad, la cual puede ser externa –en las superficies exteriores– o interna –en las superficies interiores–. Dicha suciedad o polvo produce sombras que interfieren con la muestra bajo análisis, especialmente cuando se usan objetivos de alto poder (40X-100X). Si la suciedad es externa, la reparación se realiza limpiando las superficies de los lentes y, si es interna, desensamblando el objetivo, limpiando las superficies internas, reensamblando y verificando el estado final.También los lentes de los oculares se ven afectados por rayones, especialmente en aquellos que ya tienen largo tiempo de servicio. Los mismos se producen por descuidos en los procedimientos de limpieza y por uso de elementos inadecuados en dichos procesos. Los rayones producen sombras en el campo visual del ocular, similares a los de una telaraña. Desafortunadamente, este tipo de defecto obliga a cambiar el ocular. Algunos disponen de mecanismos de enfoque que a veces se traban. Para reparar se desensambla el ocular, se aplica solvente a la rosca, se limpia el mecanismo de enfoque y se vuelve a ensamblar. Si los lentes del ocular presentan roturas debido a circunstancias fuera de control –golpes por caída, uso indebido–, debe cambiarse el ocular.

B)Cabeza binocular: El estado de la cabeza binocular tiene un efecto

directo sobre la calidad de la imagen del microscopio. Cualquier suciedad adherida a los componentes ópticos de la cabeza afecta la

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calidad de la imagen. Este componente puede llegar a ensuciarse debido a situaciones derivadas del trabajo normal en el laboratorio como las generadas en el cambio de oculares, la instalación de accesorios como cámaras fotográficas o el simple olvido de colocar los tapones cuando no está en uso el microscopio. Sus componentes más importantes son prismas y espejos.A) Prismas: Tienen una superficie reflectora plateada que puede

oxidarse con el tiempo y perder capacidad reflectiva. Algunos prismas solamente disponen de una capa de pintura reflectora aplicada sobre la superficie de sus caras, a través de la cual la luz entra y sale.En el caso de daños en la superficie reflectora, el prisma puede ser removido, limpiado, replateado o repintado, instalado y alineado en la cabeza binocular. Esta clase de mantenimiento es altamente complejo y solo lo realizan laboratorios especializados o empresas que brindan servicios de mantenimiento especializado. La remoción de prismas, sin el entrenamiento y la herramienta adecuada, puede producir graves desajustes en la calidad de la imagen e inclusive la rotura del componente.

B) Espejos: Tienen sus superficies reflectoras directamente expuestas y son susceptibles a la oxidación. Si es necesario repararlos, se desmonta y se retira el espejo de la cabeza binocular y se sustituye por uno nuevo, que se corta, cementa y alinea directamente en el sitio de montaje.

2. Iluminador: Es un elemento fundamental para la utilización del microscopio. Si el sistema de iluminación no funciona bien, el microscopio puede quedar fuera de uso, dado que la intensidad luminosa y el contraste son fundamentales para la identificación y observación de la muestra estudiada. Diversos factores afectan el sistema de iluminación; los más comunes son la suciedad o deterioro de los componentes ópticos como espejos y lentes, fallas en los voltajes de alimentación o la utilización de bombillos diferentes a los recomendados por los fabricantes. Las anomalías mencionadas producen pequeñas sombras en el campo de visión, intensidad de luz insuficiente o falta de homogeneidad en la iluminación.A) Suciedad interna: Aparece debido a que los sistemas de

iluminación no están sellados para impedir el ingreso de polvo y partículas. El polvo que ingresa al sistema produce difusión y disminución en la cantidad de luz proyectada sobre la muestra. Las partículas grandes producen sombras que dificultan la observación. Para corregir el problema, se desensambla el iluminador, se

limpian sus componentes, se ensamblan y alinean de nuevo sus componentes.

B) Espejos: Los espejos se caracterizan por tener una superficie reflectiva directa, aplicada sobre el cuerpo del espejo. En microscopios de fabricación reciente, generalmente se encuentra protegida por un recubrimiento. En equipos antiguos, la capa reflectora no disponía de tales recubrimientos, por lo que estaba expuesta a la oxidación.

C) Bombillo incandescente: El bombillo es un componente de consumo. Tiene una determinada vida útil y por esto se debe planificar su adquisición de forma que siempre esté disponible un repuesto en el laboratorio o en la institución donde se encuentra instalado el equipo. La instalación del bombillo se realiza siguiendo las instrucciones del fabricante. Algunos equipos, como los microscopios ópticos de fluorescencia, utilizan bombillos especiales –lámparas de mercurio o xenón– que requieren procedimientos de montaje y calibración que, aunque sencillos, se deben efectuar según las recomendaciones de los fabricantes. El voltaje suministrado al microscopio debe corresponder al especificado por el fabricante. De lo contrario, se corren riesgos innecesarios que afectan la calidad de la iluminación. Algunos

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microscopios utilizan transformadores internos o externos y sistemas de regulación de voltaje.

3. Plataforma, platina o carro portamuestras y condensador:

A) Condensador: El condensador controla la forma en que la luz se concentra o contrasta sobre la muestra bajo observación. Está compuesto por elementos ópticos y mecánicos. Los elementos ópticos están constituidos por lentes; los elementos mecánicos, por dispositivos que permiten controlar la posición de los elementos ópticos y la cantidad de luz que llega a la muestra mediante un diafragma mecánico.Normalmente, los componentes ópticos son afectados por la presencia de polvo. El mismo debe ser limpiado de forma similar a la utilizada con los sistemas de lentes. Se limpian con un pincel fino de pelo de camello, con el cual se remueve el polvo que se haya depositado sobre sus superficies. Los componentes mecánicos requieren, para su ajuste, de herramientas de características especiales. Cada fabricante dispone de sus propios diseños. Las rutinas habitualmente están enfocadas a procedimientos de limpieza, ajuste y lubricación.

D) Platina o carro portamuestras: La platina o carro portamuestras está constituido por una serie de componentes que interactúan entre sí y que tienen como propósito controlar la posición de la muestra bajo análisis. El carro dispone de movimientos de translación en sentidos X/Y, que el operador controla a través de botones macro/micrométricos independientes; además, el carro

dispone de dispositivos de tensión que permiten graduar la suavidad de los movimientos y unas guías tipo "cola de milano" que normalmente se lubrican. En la parte superior están instaladas las platinas o uñas de sujeción de las láminas portamuestras. El mantenimiento busca mantener limpios, lubricados y bien ajustados estos mecanismos.

4. Revólver portaobjetivos:

El mantenimiento del revólver portaobjetivos es sencillo. Internamente dispone de un trinquete que permite alinear cada uno de los objetivos con el tren óptico del microscopio. Simplemente, se gira con suavidad hasta que el mecanismo del trinquete ajusta la posición correcta del siguiente objetivo. Cada fabricante define el número de objetivos que pueden ser montados en el revólver; lo común es encontrar revólveres que aceptan desde tres hasta cinco objetivos. El mantenimiento busca mantener limpio, lubricado y bien ajustado el mecanismo rotatorio.Los objetivos reciben rutinas de limpieza de sus superficies ópticas externas. Los de inmersión requieren que, cada vez que se termine de utilizar el objetivo, se limpie el aceite para evitar que, por capilaridad, este invada la estructura óptica interna del objetivo.

5. Cuerpo del microscopio: El cuerpo del microscopio está diseñado para recibir y soportar los componentes ya descritos –cabeza binocular, carro portamuestras, condensador y revólver portaobjetivos– y algunos otros como el transformador y demás elementos eléctricos/electrónicos que forman parte del sistema de iluminación del microscopio. El mantenimiento del cuerpo del microscopio consiste básicamente en mantener limpia la superficie, removiendo la grasa, suciedad o elementos que hayan podido afectar su presentación y estado. Es necesario tener especial cuidado con sustancias químicas que pueden ser corrosivas y los tintes que se utilizan en los laboratorios para teñir las placas portamuestra.

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VI.Mantenimiento general del microscopio:Ante todo es necesario enfatizar que el microscopio es un equipo de alta precisión. La integridad de sus componentes ópticos, mecánicos y eléctricos debe ser observada, a fin de conservarlo en las mejores condiciones.Cada elemento del microscopio ha sido desarrollado utilizando las más avanzadas técnicas de fabricación. El ensamble de sus componentes y su ajuste se realiza en fábrica, utilizando equipos especializados que, mediante técnicas de medición avanzadas, controlan las tolerancias requeridas entre los diversos componentes del equipo. La limpieza del ambiente en el que se utiliza, su instalación y uso cuidadoso resultan fundamentales para lograr una larga vida útil.La humedad, el polvo y las malas condiciones de alimentación eléctrica, el mal uso o instalación inadecuada resultan contraproducentes para su correcta conservación. El mantenimiento del microscopio implica mucho cuidado, paciencia y dedicación. Debe ser efectuado únicamente por personal que haya recibido capacitación en el equipo y que disponga de la herramienta especializada que se requiere para intervenir. Se presentan a continuación las recomendaciones generales para la instalación y el mantenimiento necesarios para mantener un microscopio en buen estado de funcionamiento y que están al alcance del microscopista.

1. Instalación y almacenamiento: Asegurarse que el ambiente o área en que se instale el microscopio

esté protegido o protegida del polvo y la humedad. El ambiente ideal debe disponer de un sistema de aire acondicionado que garantice aire libre de polvo o partículas, control de humedad y control de temperatura de manera permanente.

Verificar que el ambiente o área en que se instale el microscopio disponga de seguridad: puerta con cerradura para evitar su sustracción no autorizada.

Confirmar que el lugar seleccionado para ubicar el microscopio esté alejado de lugares como pocetas de agua o donde se trabajen sustancias químicas, para evitar que el equipo resulte afectado por un derrame o salpicadura. También deben evitarse sitios que tengan luz solar directa.

Verificar que el lugar seleccionado cuente con una toma eléctrica en buen estado, cuyo voltaje esté ajustado en magnitud y frecuencia con los códigos y normas eléctricas, y que resulte compatible con el del sistema de iluminación del microscopio. En caso de que el microscopio utilice espejo, debe estar ubicado cerca de una ventana que permita una buena iluminación, pero sin estar directamente expuesto a la luz solar.

Instalar el microscopio sobre una superficie nivelada de estructura rígida, bajo la cual exista espacio suficiente para que el usuario –microscopista– coloque sus piernas y como consecuencia pueda acercar el cuerpo hacia el microscopio y la cabeza hacia los oculares, sin forzar la columna vertebral: cuello y espalda.

Para facilitar la colocación del microscopista, proporcionar una silla de altura variable, que le brinde un buen soporte lumbar; si es del caso, también proveer un apoyo para los pies, situado al frente del sitio de trabajo, no en la silla. El propósito es lograr que la columna vertebral esté lo más recta posible y se reduzca la flexión de los hombros y el cuello.

Evitar que en sitios cercanos al lugar de instalación del microscopio haya equipos que produzcan vibraciones como centrífugas o refrigeradores.

Procurar no mover el microscopio de su sitio de instalación y con mayor razón si el mismo se utiliza intensamente cada día.

Cubrir el microscopio con un protector de polvo si no se usa por períodos de tiempo largos; tomar precauciones para que no lo afecten excesos de humedad. Mientras más seco el ambiente, menos probabilidad de que se presente crecimiento de hongos. El

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protector puede ser de plástico o de tela similar en calidad a la utilizada en la fabricación de pañuelos, que no suelte pelusa.

En zonas de humedad alta, guardar el microscopio durante la noche, en una cabina provista de un bombillo de máximo 40 W. Esto ayuda a mantener seco el entorno y reduce la probabilidad de que se presente formación de hongos. Si se utiliza esta alternativa, verificar que disponga de orificios que permitan la ventilación del interior.

2. Procedimientos de limpieza: La limpieza del microscopio es una de las rutinas más importantes y debe considerarse un procedimiento rutinario. Para realizar la rutina de limpieza se requiere lo siguiente: Una pieza de tela limpia, de textura similar a la de los pañuelos. Una botella de líquido para limpieza de lentes. Se consigue en las

ópticas. Normalmente no afecta los recubrimientos de los lentes y tampoco afecta los pegantes o cementos utilizados para el montaje de los mismos. Entre los líquidos de limpieza más utilizados se encuentran el etil éter, el xileno y la gasolina blanca.Algunos fabricantes recomiendan no utilizar alcoholes o acetonas, debido a que pueden afectar –disolver– los cementos o pegantes utilizados para fijar los lentes.

Papel para limpieza de lentes. Se consigue normalmente en las ópticas. Si no es posible conseguir este material, se puede sustituir con papel absorbente suave o con algodón tipo medicinal. También puede utilizarse un trozo de seda suave.

Una pieza de gamuza muy fina. Se puede conseguir en peleterías. Una pera de caucho para soplar aire. Se puede fabricar en el

laboratorio un dispositivo con este propósito, acoplando una pipeta tipo Pasteur, con la pera de caucho.

Una cubierta plástica. Se utiliza para proteger el microscopio del ambiente externo cuando no está en uso. También podría utilizarse una bolsa de tela de textura similar a la de los pañuelos.

Un pincel suave de pelo de camello o un pincel fino para pintura. Lo importante es que el pelo del pincel sea natural, de longitud uniforme, textura muy suave, esté seco y libre de grasa. En los almacenes que distribuyen artículos de fotografía, es posible conseguir este accesorio. También es posible encontrar un equivalente en tiendas especializadas en suministro de cosméticos.

Un paquete 250 g de material desecante (silica gel). Este material se utiliza para mantener controlada la humedad en la caja de almacenamiento del microscopio, si la misma es hermética. Este material cambia de color cuando se encuentra saturado de humedad, aspecto que permite detectar si requiere ser sustituido o

renovado. Cuando está en buen estado, por lo general, es de color azul; cuando se encuentra saturado de humedad, es de color rosado.

Bombillos y fusibles de repuesto. De la clase instalada por el fabricante o un equivalente de las mismas características del original.

Nota: Todos los materiales requeridos para efectuar la limpieza deben mantenerse limpios y guardados en recipientes que los protejan del entorno externo.

3. Limpieza de los elementos ópticos: En un microscopio se encuentran dos tipos de elementos ópticos: los externos, que están en contacto con el ambiente que rodea el equipo, y los internos, que se encuentran dentro del cuerpo del microscopio –las partes internas de los objetivos, oculares, espejos, prismas, condensador, iluminador, etc.– y que no tienen un contacto directo con el ambiente que rodea el equipo. Los procedimientos de limpieza, aunque similares, difieren en cuanto al cuidado y precauciones que deben preverse. Los elementos ópticos externos de los oculares, los objetivos, el

condensador y el iluminador se limpian frotando suavemente la superficie de los mismos, con el pincel de pelo de camello. Esto remueve las partículas de polvo que hayan podido encontrarse depositadas sobre la superficie de los mismos. A continuación, se utiliza la pera para soplar chorros de aire sobre la superficie de los lentes y asegurar que los mismos quedan libres de polvo. Si el polvo se encuentra adherido a la superficie óptica, se utiliza la pieza de tela limpia y de forma muy suave se efectúa un pequeño movimiento circular, sin ejercer mayor presión sobre la superficie del lente. Con la pera se sopla nuevamente la superficie del lente. Esto retira las partículas adheridas. Podría también utilizarse una pieza de gamuza fina. En este caso se instala la pieza de gamuza en la punta de un pequeño cilindro de diámetro ligeramente inferior al del lente y, sin ejercer mayor presión, se efectúa una rotación de la misma sobre la superficie del lente. Finalmente, con la pera, se sopla aire sobre la superficie del lente. Esto basta para limpiar las superficies externas. La pieza de gamuza puede humedecerse con agua destilada.

En condiciones adecuadas de instalación, las superficies interiores de los elementos ópticos no deben resultar afectadas por la presencia de polvo o partículas. Si por alguna circunstancia aparecen partículas sobre la superficie interior de los lentes, se necesita abrirlos para efectuar la limpieza. Nunca debe abrirse un ocular u objetivo, si no se cuenta con un ambiente limpio en el

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cual realizar el procedimiento de limpieza. Las superficies ópticas interiores se limpian con el pincel de pelo de camello y con la pera para soplar aire, siguiendo un procedimiento análogo al anteriormente explicado; se recomienda no desmontar por ningún motivo los elementos ópticos para no alterar las tolerancias de ensamble del fabricante. Si se desmontan, sería necesario alinear nuevamente los elementos y estosolo es factible siguiendo instrucciones precisas del fabricante. La limpieza de los objetivos se limitará a conservar limpios los lentes frontal y posterior.

Si se detectan residuos de aceite de inmersión en la superficie de los lentes, este debe removerse utilizando papel especial para limpieza de lentes o algodón tipo medicinal. A continuación, la superficie del lente debe limpiarse con una solución compuesta de 80 % éter petroleum y 20 % 2-Propanol.

4. Limpieza del cuerpo del microscopio: El cuerpo del microscopio puede ser limpiado con una solución

jabonosa que resulta útil para remover la suciedad externa. La solución jabonosa corta la grasa y el aceite. La misma puede aplicarse con un cepillo pequeño. Después de que la grasa y la suciedad hayan sido removidas, debe limpiarse el cuerpo del microscopio con una solución 50/50 de agua destilada y etanol al 95 %.Nota: Esta solución no es adecuada para limpiar las superficies ópticas.

Las partes mecánicas, integradas por los mecanismos de ajuste macro/micrométrico –ajuste grueso y fino–, el mecanismo de ajuste del condensador y los mecanismos del carro portamuestras o plataforma, deben ser lubricados de forma periódica con aceite fino de máquina, para permitir su desplazamiento suave.

5. Mantenimiento del microscopio: Entre las rutinas más importantes para mantener un microscopio en condiciones adecuadas de operación, se encuentran las siguientes: Verificar el ajuste de la plataforma mecánica. La misma debe

desplazarse suavemente, en todas las direcciones (X-Y) y debe mantener la posición que selecciona o define el microscopista.

Comprobar el ajuste del mecanismo de enfoque. El enfoque que selecciona el microscopista debe mantenerse. No debe variar la altura asignada por el microscopista.

Verificar el funcionamiento del diafragma. Limpiar todos los componentes mecánicos. Lubricar el microscopio de acuerdo con las recomendaciones del

fabricante.

Confirmar el ajuste de la uña fijaláminas. Verificar el alineamiento óptico.

6. Precauciones: Evitar limpiar los componentes ópticos con etanol, debido a que

estos líquidos afectan los elementos ópticos. Tampoco limpiar la base o la plataforma con xileno o acetona.

No utilizar papel ordinario para limpiar los lentes, dado que en sus componentes constitutivos podría haber elementos de alta dureza que podrían rayar la superficie de los lentes.

No tocar los lentes con los dedos, para evitar las huellas digitales. No limpiar el interior de los lentes de oculares u objetivos con

telas o papel, ya que los barnices de recubrimiento de los elementos ópticos podrían deteriorarse. Limpiar estas superficies con un pincel de pelo de camello o una pera para soplar aire.

Evitar dejar el microscopio sin los oculares. Colocar los tapones si requiere retirar los oculares para evitar el ingreso de polvo o partículas a la cabeza binocular.

No dejar el microscopio guardado en una caja, en ambientes húmedos.

Evitar presionar los objetivos contra las "Placas", puesto que se podrían producir daños en la laminilla o el lente frontal del objetivo. Enfocar el microscopio de forma lenta y cuidadosa.

Mantener limpia la plataforma o carro portamuestras. No desensamblar los componentes ópticos, pues se pueden

producir desalineamientos. Las superficies ópticas deben limpiarse en primera instancia con un pincel de pelo de camello; a continuación, con gamuza o papel especial para lentes.

Utilizar las dos manos para levantar el microscopio. Con una mano sostenerlo por el brazo, y con la otra sostener su base.

Evitar tocar con los dedos la superficie de la bombilla cuando se la cambia. Las huellas digitales disminuyen la intensidad lumínica.

Verificar que el voltaje de alimentación es el correcto para prolongar la vida útil de la bombilla; siempre que sea posible, utilizar la menor intensidad luminosa que resulte útil para realizar las observaciones.

Conectar el microscopio a través de un estabilizador de voltaje, si el voltaje de alimentación no es estable.

7. Cuidados especiales en climas cálidos: Tanto en climas cálidos como en secos el principal problema que afecta al microscopio es el polvo, ya que afecta las partes mecánicas y a los sistemas ópticos. Dicho problema se puede controlar mediante los siguientes procesos:

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Proteger siempre el microscopio con una cubierta plástica, cuando no esté en uso.

Limpiar el microscopio con aire, utilizando una pera de caucho, al finalizar el turno laboral.

Limpiar los lentes con un pincel de pelo de camello o con un cepillo de aire. Si el polvo permanece unido a la superficie óptica, intentar removerlo con papel especial para lentes, pero frotando la superficie de forma muy suave, para evitar rayones.

8. Cuidados especiales para climas húmedos: En climas húmedos, por lo general calurosos, los microscopios suelen ser afectados por hongos, que se forman principalmente sobre la superficie de los lentes, en las ranuras de los tornillos y bajo la pintura protectora. En caso de no protegerse el equipo de forma adecuada, podría quedar inservible en muy corto plazo. Los cuidados que se detallan a continuación ayudan a prevenir la formación de hongos: Almacenar el microscopio durante la noche en una caja dotada de

un bombillo eléctrico que no exceda los 40 W de potencia. El bombillo debe estar instalado en la parte superior de la caja, cerca de la cabeza binocular y debe estar encendido durante toda la noche. La caja debe disponer de orificios para permitir la circulación del aire. Se debe evitar que la temperatura del interior de la caja no exceda los 50 °C, para que no se afecten las propiedades de los lubricantes del microscopio.

Si no es posible utilizar la caja con el bombillo eléctrico, como alternativa se puede utilizar un material desecante como silica gel o arroz. Cuando use el agente desecante, verificar que el microscopio esté guardado en una caja o protegido con una cubierta protectora que puede ser fabricada en tela de características similares a la de los pañuelos. Verificar que el agente desecante esté en buenas condiciones; caso contrario, sustituirlo o regenerarlo.

Limpiar el microscopio de forma periódica. Usar guantes de látex si tiene que tocar los lentes. Esto evita que las huellas digitales de adhieran a la superficie y disminuye los riesgos o probabilidad de crecimiento de hongos donde quedaron impresas las huellas digitales.

Si ninguna de las alternativas mencionadas es factible, ubicar el microscopio en un lugar que tenga buena circulación de aire. Cuando el microscopio no esté en uso, podría colocarse bajo la luz solar de forma directa, por períodos cortos de tiempo. Esto reduce la humedad y el riesgo de que crezcan hongos en las superficies del equipo.

El aire acondicionado –control de temperatura y humedad– evita significativamente el crecimiento de los hongos en los microscopios. Sin embargo, esta no es una opción que disponga una gran cantidad de laboratorios. Si el servicio de aire acondicionado no es continuo en el área donde se encuentra instalado el microscopio, se deben tomar precauciones para controlar la humedad.

9. Remoción de la película de hongos: Revisar y limpiar con frecuencia el microscopio, utilizando los

procedimientos mencionados en el presente capítulo. Controlar las condiciones de humedad donde se usa y almacena el microscopio. Si se mantiene una ventilación adecuada, disminuye la posibilidad de que se inicie la formación de hongos en el microscopio.

Si se detecta un crecimiento de hongos, utilizar una mota de algodón humedecida en una solución limpiadora de hongos que normalmente es éter o xilol. Frotar suavemente siguiendo un movimiento circular, a lo largo de toda la superficie del lente. También puede realizar un movimiento oscilatorio, hacia adelante y hacia atrás o izquierda- derecha-izquierda, ejerciendo sobre la superficie del lente una presión muy moderada. Si es necesario, repetir el procedimiento con una nueva mota de algodón.

Cuando se termine la remoción de la película de hongos, limpiar con una mota de algodón limpio.Los hongos solo pueden ser removidos cuando su crecimiento se limita a la superficie de los lentes. Si dicho crecimiento no se atiende a tiempo, el hongo puede penetrar el cuerpo del lente. Si este es el caso, el lente se pierde, allí ya es imposible removerlo.Si el microscopio se utiliza con elementos potencialmente contaminados, debe ser limpiado con mayor frecuencia.

10. Cuidado del microscopio: Diaria (después del uso):

- Limpiar el aceite de inmersión del objetivo 100X. Usar papel para limpieza de lentes o en su defecto algodón tipo medicinal.

- Limpiar el carro portamuestras.- Limpiar el condensador.- Colocar el reóstato de control de intensidad luminosa en la

posición mínima y luego apagar completamente el sistema de iluminación.

- Cubrir el microscopio con una funda protectora –plástica o de tela–. Asegurar que queda ubicado en un lugar bien ventilado, en el cual estén controlados la humedad y la temperatura. Si se dispone de caja de almacenamiento ventilada dotada con

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bombillo para control de humedad, colocar allí el microscopio, encender la lámpara y cerrar la puerta de la misma.

Cada mes:- Remover las partículas de polvo que pueda tener el cuerpo del

microscopio. Usar una pieza de tela humedecida con agua destilada.

- Retirar las partículas de polvo de los oculares, objetivos y del condensador. Utilizar la pera para soplar aire. A continuación, limpiar la superficie de los lentes con solución limpiadora de lentes. No aplicar directamente esta solución a los lentes, sino en papel para limpiar lentes y luego frotar suavemente la superficie de los mismos con el papel mencionado.

- Retirar el mecanismo de sujeción de las placas portamuestras; limpiar cuidadosamente y reinstalar.

Cada seis meses: Como complemento a las rutinas mensuales de mantenimiento se recomienda lo siguiente:- 1. Efectuar una inspección visual general del microscopio.

Verificar que cada componente se encuentre en buen estado, esté limpio y esté bien ajustado mecánicamente.

- Verificar que en el lugar de instalación se conserven las condiciones de buena ventilación, control de humedad y temperatura.

- Comprobar la calidad del sistema eléctrico que alimenta el microscopio. Verificar la integridad de los conectores, los fusibles y la lámpara incandescente.

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