7/23/2019 MANUAL de PRACTICAS CBTIS-practica4-Aislamiento de Bacterias

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Manual de Practicas Aislamiento de bacterias aerobias

Práctica # 4Práctica # 4 AISLAMIENTO DE BACTERIAS AEROBIASAISLAMIENTO DE BACTERIAS AEROBIAS

INTRODUCCION

La población microbiana existente en nuestro entorno es grande ycompleja. Cientos de especies microbianas habitan normalmente endistintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto intestinal yla piel. Al nacer, los microbios inmediatamente empiezan a colonizarnuestros cuerpos, así como a casi todos los objetos del mundo. Ellosfotan alrededor hasta ue entran en contacto con una super!cie ueo"rezca comida y resguardo. #e encuentran m$s "recuentemente en laoscuridad, en objetos h%medos ue a menudo entran en contacto con lacomida, la suciedad o la &egetación. Las super!cies del ba'o, los cepillospara el cabello, los re"rigeradores, los la&aplatos y las tablas de cocinatienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las paredes tienenmenos porue son pobres en nutrientes y secos.

Los microorganismos se culti&an en el laboratorio sobre materialesnutriti&os denominados medios. #e dispone de una gran cantidad demedios y la clase ue se debe de utilizar depende de muchos "actores,uno de los cuales es la clase de microorganismos ue se &a a culti&ar. Elmaterial ue se inocula sobre el medio se denomina inóculo mediantealguna t(cnica )siembra por estría en placa o siembra en masa en placa*.+urante la incubación a -C , las c(lulas microbianas indi&iduales sereproducen tan r$pidamente ue en un lapso de /0 a 12 horas producen

masas &isibles de c(lulas denominadas colonias. 3na colonia es &isible asimple &ista. Cada colonia di"erente es presumiblemente un culti&o purode una sola clase de microorganismo. #i dos c(lulas microbianasprocedentes del inóculo original uedan muy cerca una de otra sobre elmedio de Agar, la masa de c(lulas obser&ables no ser$ un culti&o puro.

+espu(s de la incubación en un medio sólido, se desarrollancolonias macroscópicas de bacterias ue proceden de una sola bacteria ode una agrupación de bacterias, estas %ltimas tambi(n llamadasunidades "ormadoras de colonias. Cuando se tienen coloniasper"ectamente separadas, cada una de (stas pueden aislarse o

resembrarse para obtener un culti&o con un solo tipo de colonias uetendr$ bacterias de la misma especie, al ue se llama culti&o puro oax(nico. 4ara &eri!car ue se trata de un culti&o puro es necesario ueen las resiembras subsecuentes de la colonias tengan la mismamor"ología colonial y microscópica.

Existen m(todos para el aislamiento de bacterias en medios deculti&o sólidos. 3n m(todo cualitati&o es la t(cnica de estría cruzada(Fig. 1* y un m(todo cuantitati&o es la t(cnica de las diluciones (Fig. 2).

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Fig. 1.! T"cica $% %&tr'a cra$a.

Fig.2 T"cica $% *a& $i*ci+%&

Fig. T"cica c+rr%cta $% %&t%ri*iar %* a&a Fig. 4T"cica $% %,ria-i%t+ $% a&a

Las principales indicaciones para un correcto aislamiento son

5 Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y en"riarse sobre el

agar o el material de &idrio )en zonas est(riles* antes de tomar lamuestra de microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor.

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+iluyen+iluyentete

67L38E9 +E67L38E9 +E :;A9#<E;E9C=A :;A9#<E;E9C=A

A*'cA*'c+ta+ta

8edio de culti&o8edio de culti&osolidosolido

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5 +espu(s de utilizarlas, las asas se &ule&en a esterilizar.5 Las bocas de los tubos y matraces de &idrio se famean ligeramente una&ez destapadas, y despu(s de la inoculación.5 +urante la inoculación, los tapones se mantienen en la manosujet$ndolos por la parte ue no entra en contacto con tubos y matraces.

5 Los tubos abiertos deben mantenerse en posición inclinada para ue elriesgo de contaminación sea mínimo.5 Las tapas de las placas 4etri no deben colocarse nunca sobre la mesade trabajo.

OBETI/O0

5 Aprender y practicar la t(cnica de aislamiento de la estría cruzaday el m(todo de las diluciones.

5 7bser&ar la gran &ariedad de microorganismos presentes en elmedio ambiente, determinando las di"erentes mor"ologías decolonias ue se obtienen.

MATERIAL0

 :ubos de ensaye /> x /?@

4ipetas de / y /@ ml

8atraz Erlenmeyer

8uestras de suelo

8echero de <isher

Agua destilada est(ril

Cajas petri

Etanol

Agar cuenta est$ndar

METODO0

I.! Ai&*a-i%t+ $% act%ria& +r %* -"t+$+ $% $i*ci+%&.

/.5 8arcar /@ tubos de /> /?@ est(riles.1.5 Adicionar 2.? ml de agua destilada est(ril en condiciones deesterilidad..5 4esar @.? g de la muestra de suelo y adicionar al tubo /. Bomogenizary dejar sedimentar la muestra.2.5 ;ealizar una serie de diluciones decimales hasta la dilución /@ 5/@ )tubo/@* usando @.? ml como &olumen de trans"erencia. Lo ideal es utilizaruna pipeta est(ril para cada trans"erencia y agitar con un &ortex en cadapaso. Con muestras ue contienen microorganismos patógenos osustancias tóxicas nos es recomendable usar las pipetas con la boca, encambio debe usarse una propipeta o bulbo.

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?.5 Colocar @./ ml de las diluciones /@5/@, /@5,/@50,/@5-  y /@5>  en lasuper!cie de una placa de gelosa simple o agar cuenta est$ndar.

 :ambi(n colocar @./ ml de las mismas diluciones en agar cuentaest$ndar, extender las muestras en la super!cie con una &arilla de &idrioacodada est(ril. La &arilla se esteriliza moj$ndola en alcohol, escurriendo

el exceso y pas$ndola por la fama del mechero. Al extinguirse el "uego la&arilla estar$ est(ril.>.5 En&ol&er las cajas con la tapa hacia abajo, marcar el pauete eincubar a 10DC durante 12520 hrs.

II.! Ai&*a-i%t+ $% act%ria& +r *a t"cica $% *a %&tr'a cra$a

/.5 Esterilizar el asa (g.), y en"riar en un extremo del agar. (Fig. 4)1.5 A partir del tubo con la dilución /@ 5/, tomar una asada y sembrarla enel medio de Cuenta est$ndar por estría cruzada. (Fig. 1)..5 8arcar las cajas e incubarlas a 10DC durante 205-1 hrs.

¡ ¡ NOTA0 EL REPORTE E INFORME DE ESTA PR5CTICA 6 LASI7UIENTE SE ENTRE7ARAN UNTAS 8 8

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