Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales

Lic. PEDRO ELÍAS PATIÑO MARTÍNEZ Lic. EDGAR ENRIQUE RAMÍREZ PARRA

Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales Universidad de Santander

Teléfono (57) 6516500 Ext 253 • Fax (57) 6516492

BUCARAMANGA 2006

Justificación

Durante el proceso de formación del estudiante de la UDES, los conceptos teóricos requieren ser corroborados mediante la experimentación los cuales muchos de ellos se privilegian al interior de las prácticas de laboratorio. Para dichas prácticas el alumno debe utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos químicos los cuales son preparados por laboratoristas o docentes. La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos químicos requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parámetros para cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de prepararlos y cuidados básicos. El presente manual permitirá a los laboratoristas o docentes tener una guía para la preparación de las diferentes soluciones utilizadas en las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales

Pedro Patiño

CUIDADOS BASICOS Y NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL

La preparación de las soluciones es un Proceso que requiere todos los cuidados básicos posibles y el cumplimiento de normas de Bioseguridad personal, ya que en dicha preparación se esta expuesto a químicos que son altamente tóxicos y nocivos para la salud humana

CUIDADOS BASICOS • Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente

nivelada y calibrada. • Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar

completamente limpia. • La vidriería donde se preparan los soluciones debe estar

completamente limpia y en algunos casos estéril. • Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos

oscuros para evitar procesos de oxidación por acción de la luz. • Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre,

concentración, fecha de preparación, fecha de vencimiento y código de riesgos.

• Siempre se deben mezclar lentamente los ácidos fuertes sobre el agua.

• La preparaciones de ácidos fuertes o reactivos volátiles debe hacerse en las campanas extractoras de gases.

NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL • Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la

preparación que se realice • Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que

se prepare una solución. • No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud

como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.

• En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de la zona de preparación de reactivos o fuera de esta y consultar un médico.

SOLUCIONES

AGUA DE BROMO

Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de bromo en tetracloruro de carbono.

Cuidados: solución altamente tóxica para el organismo Uso: Para determinación de compuestos orgánicos

ACETO-ORCEINA Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de Ácido Acético Glacial y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullición por 2 minutos, dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses

Cuidados: Tóxicos y corrosivos Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas)

ACETO –CARMIN

Pesar 0,5 gr de carmín, adicionarle 45 ml de ácido acético glacial y completar con 55 ml de agua destilada Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas)

Cuidados: Tóxicos y corrosivos

ACIDO CLORHIDRICO 2.5 N

Medir 20.75 ml de HCl 37%, aforar a 100 ml con H2O destilada

Cuidados: Tóxicos y corrosivo Uso: En pruebas de división celular (mitosis)

ALCOHOL- CETONA Medir 70 ml de Alcohol Etílico absoluto y completar a 100 ml de solución con Acetona pura Cuidados: Comburente Uso: Decolorante para la coloración de Gram

ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N

Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y

completar a 100 ml con agua destilada

Cuidados: Tóxicos corrosivos

Uso: Para titulación ácido–base y pruebas cualitativas de pH.

ACIDO SULFURICO 1 M Medir 49 ml de Ácido Sulfúrico y aforar a 1000 ml con agua destilada

Cuidados: Tóxicos corrosivos

Uso: Para titulación ácido–base

ACIDO ACETICO 1 N

Medir 60.05 ml de ácido acético 100% y aforar a 1000 ml con agua destilada.

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Pruebas cualitativas de pH.

AZUL DE METILENO 1% Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada hasta obtener una solución uniforme

Cuidados: Tóxicos Uso : Para tinción de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos vegetales, pruebas de difusión celular

ALCOHOL ACIDO 3% Medir 97 ml de alcohol etílico absoluto, adicionarle con mucho cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de Ácido Clorhídrico al 37% Cuidados: Comburente y corrosivos Uso: Para coloración de Microbiológica

ACIDO OXALICO 1 N Pesar 6,3 gr de ácido oxálico y aforar a 100 ml con H2O destilada Uso: Para titulación de ácido-base

ACIDO NITRICO 3M Medir 50 ml de Agua Destilada, adicionarle 29.1 ml de ácido nítrico al 65% luego completar a 100 ml con H2O destilada Cuidados: Tóxicos y corrosivos

AZUL DE BROMOTIMOL Pesar 0.1 gr. de azul de bromotimol y diluirlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador para titulación ácido-base

BARFOED

Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H2O, luego adicionarle 1.8 ml de ácido acético glacial Cuidados: Tóxicos y corrosivos

Uso: Diferenciación los Monosacáridos reductores de los Disacáridos reductores

BIAL

Pesar 1.5 gr. de orcinol y disolverlo en 500 ml de HCl concentrado y añadir 20 gotas de Fe Cl3 1%

Cuidados: Tóxico y corrosivo

Uso: Para identificar pentosas

BIURET Pesar 3 gr. de CuSO4 .5H2O, adicionarle 9 gr. de tartrato de sodio y potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Añadir 5 gr. de KI y completar a 1000 ml con NaOH . (NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua) Uso: Para determinación de proteínas(Enlace peptídico) Cuidados: Tóxico y corrosivo

BENEDICT Solución A: Pesar 173 gr. de Citrato de sodio, adicionarle 100 gr. de Na2CO3 completar a 800 ml de H2O destilada. Filtrar y completar hasta 850 ml de H2O. Solución B: Pesar 17.3 gr de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua destilada Disolver suavemente la solución B en la A agitando continuamente. Uso: Para determinación de carbohidratos reductores Cuidados: Tóxico y corrosivo

BUFFER DE FOSFATOS

Solución I: Pesar 13.8 gr. De NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de H2O destilada Solución II: Pesar 35.85 gr. De Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de H2O destilada Mezclar 212.5 ml de solución I + 37.5 de solución II y aforar a 500 ml con H2O destilada

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

BUFFER LISIS II Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M pH 8.0 y adicionarle 0.438 gr NaCl y aforar a 1000 ml con agua destilada

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

BUFFER LISIS I Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100, adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. pH 7.5 y 5 ml de MgCl2 1M aforar a 1000ml con H2O destilada destilada. (Tris-HCl 10mM. PH 7.5)=0.15756 gr 100 ml s/n Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x 100+ 5 ml tris + 2.5 ml Mgcl2 1M).

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

BÚFER DE EXTRACCIÓN Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 100 mM, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mM, B-Mercaptoetanol 10 mM y SDS 1.3%. Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

BÚFFER DE DILUCIÓN (TE)

Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 50 mM, EDTA 10 Mm Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

BÚFFER TBE 5X Mezclar las siguientes sustancias: Pesar 54 gr. de Tris Base, adicionarle 20 ml de EDTA 0.5 M y 27,5 gr de Ácido Bórico Completar con agua destilada en balón aforado a la cantidad necesaria, posteriormente autoclavar

Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

BUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA Solución A : Fosfato ácido de disodio (Na2HPO4 ) 0.2 M Solución B : Ácido cítrico (C6H8O7. H2O) 0.1 M BUFFER pH 5.0 (515 ml S/N A + 485 ml S/N B). BUFFER pH 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B) BUFFER pH 8.0 (972,5 ml S/N A + 27.5 ml S/N B).

CLORURO DE SODIO 0.1 M Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membranas

DAMASHECK

Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15 gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H2O destilada. Adicionarle 3 gotas de formol 37 % Uso: Para recuento de reticulocitos

| DRABKIN

Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de bicarbonato de sodio (NaHCO3) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio (K3Fe(CN)6) Completar a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Para Recuento en Hematológico

Cuidados: Tóxicos corrosivos

2,4 DINITROFENILHIDRIZINA Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H2SO4 concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol absoluto, decantar y utilizar el filtrado. Uso: Indicador

Cuidados: Tóxicos

DISOLUCION DE FERROCIANURO Pesar 1.65 gr. de K3(Fe(CN)6) recristalizado, adicionarle 10.6 gr. carbonato de sodio anhídrido y aforar a 1000 ml de H2O destilada. Guardar en frasco oscuro (duración 2 meses) . Uso: Indicador

Cuidados: Tóxicos

ETANOL 0.6 M Medir 34.9 ml de alcohol etílico absoluto y completar a un 1 litro de solución con H2O destilada

Uso: Para Fenómenos de membrana.

ERLICH (PRUEBA) Ácido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solución de NaNO3 0.5% y Na2CO3

FOUCHER 25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H2O y 10 ml de cloruro férrico al 10 %

FEHLING A

Pesar 34.6 gr. de CuSO4 .5 H2O (vitriolo azul) y disolverlo en 500 ml de H2O destilada

Cuidados: Tóxicos Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para determinación de azucares reductores

FEHLING B Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le añaden 62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H2O

Cuidados: Tóxicos y corrosivo Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinación de azucares reductores

FENOLFTALEINA

Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 % Uso: Indicador Ácido-Básico

Cuidados: Tóxicos

GLUCOSA 0.1 M

Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana.

GLICEROL 0.6 M

Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana.

HAYEN 2.5 gr. de sulfato de sodio 0.5 gr. de cloruro de sodio 0.25 gr. cloruro de mercurio completar a 1000 ml de H2O

HIDROXIDO DE SODIO 1M Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Nota: La disolución del NaOH en el agua se debe realizar en la cámara extractora de gases Uso: Diferentes usos, principalmente Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo

JUGO GASTRICO ARTIFICIAL

Medir 40 ml de Ácido Acético 0.1 N, adicionarle 15 ml de Ácido Clorhídrico 0.1 N y aforar a 100 ml con agua destilada Uso: Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo

LUCAS Pesar 17 gr. de ZnCl2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en baño frío, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen y guardar en nevera. Uso: Diferenciación de alcoholes primarios, secundarios y terciarios

Cuidados: Tóxico y corrosivo

LUGOL Tejidos vegetales Parásitos 0.5 gr. de yodo 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 1 gr. de yoduro de potasio 100 ml de agua destilada 300 ml de agua destilada Uso: Colorante Cuidados: Corrosivo

LIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H2O destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37%

MILLON Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO3 concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja sedimentar y se decanta (preparación en cámara extractora ). Cuidados: Corrosivo

MOLISCH Pesar 50 gr. de α naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95% (estable 1 semana) Uso: Para determinación general de Azucares

Cuidados: Tóxico y corrosivo

MEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA) Medir 500 ml de H2O destilada y adicionar lentamente 250 ml de H2SO4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le mezcla dicromato de potasio y finalmente sé afora a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Limpieza de material con restos carbónicos Cuidados: Corrosivo

METIL NARANJA

Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % o en 100 ml de H2O destilada Uso: Indicador Ácido Básico

Cuidados: Tóxico

NESSLER Pesar 15 gr. de HgI2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H2O. Esta disolución se vierte en el vaso con HgI2 , disolver muy bien con agitación. En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H2O Luego se le adiciona la otra solución y se agita, al final decantar y separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo)

Cuidados: Tóxico

NITRATO DE PLATA 0.1 N Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua destilada. Uso: Determinación de cloruros (formación de un precipitado blanco)

Cuidados: Tóxico y corrosivo

NYLANDER

Pesar 2 gr. de nitrato dibásico de bismuto y adicionarle 4 gr. de tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve para disolución completa de la sal , se enfría y se separa por filtración.

NINHIDRINA 0.2%

Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona Uso: Determinación del grupo amino de aminoácidos y proteínas

Cuidados: Tóxico y corrosivo

NEGRO DE ERICROMO Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 % (o triturarlo con solución al 1 % de cloruro de sodio) Uso: Indicador

Cuidados: Tóxico

O-TOLUIDINA

Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego disolverlos hasta completar a 1000 ml con ácido acético al 95 %

Cuidados: Tóxico

ROJO CONGO 5%

Pesar 5 gr. de rojo congo y disolverlo en 100 ml de H2O destilada Uso: Para reconocimiento de lípidos

Cuidados: Tóxicos

ROJO DE METILO

Pesar 0.1 gr. de rojo de metilo y completar a 100 ml de alcohol etílico al 96 %

Uso: Indicador Ácido Básico

Cuidados: Tóxico

REACTIVO DE SCHIFF Pesar 2 gr. de fucsina básica y disolverlo en 400 ml de H2O hirviendo, enfriar a 50 °C luego añadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de metasulfito de potasio, 1 gr. de carbón activado filtrar y adicionarle 10 ml de HCl 2N Almacenar en frasco oscuro y en nevera

SELIVANOFF

Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de Ácido Clorhídrico al 20% Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa)

Cuidados: Tóxicos corrosivos

SOLUCION DE RINGER(Holfretter) ( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H2O destilada Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H2O destilada (1:9)

SOLUCION PATRON DE LIPIDOS

Pesar 1 gr. de ácido esteárico y disolver en 100 ml de cloroformo Uso: Determinación de lípidos

Cuidados: Tóxico corrosivos

SOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l )

Pesar 3.6 gr. de KIO3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H2O destilada, añadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de solución. Conservar a 4 °C. Uso: Determinación de lípidos Cuidados: Tóxicos

SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS MICROSCOPICAS

Proporción 1: 3 1 ml de ácido acético en 3 ml de alcohol etílico

SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO4

Pesar 0.05745 gr. de KmnO4 y disolverlo en 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría y calibración del espectrofotómetro Cuidados: Tóxicos

SOLUCION 30 ppm DE K2Cr2O7 EN KOH 0.05 N Pesar 2.8 gr. de KOH y 0.030 gr de dicromato de potasio (K2Cr2O7) y llevarlo a 500 ml de solución con agua destilada. Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría

Cuidados: Tóxico corrosivos

SOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO4

Pesar 71.8 mg de KMnO4 y llevar a 500 ml de solución con H2O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría

Cuidados: Tóxico

SACAROSA 0.1 M 3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solución con H2O destilada Conservar en Nevera a 8 grados

SUDAN III 0.2%

Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etílico al 70%, se mezclan(calentando en baño de María a 90 grados centígrados) y se dejan en reposo durante 24 horas. Uso: Para coloración de cutícula y gotas de grasa en células vegetales

Cuidados: Tóxico

SUDAN III

1 gr. de sudan en polvo +30 ml de ácido acético y completar con 70 ml de H2O. (calentar para lograr una mejor disolución) Uso: Para determinación de lípidos por solubilidad en muestras biológicas

Cuidados: Tóxico

SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER pH 7

Pesar 13.3 gr. de Na2HPO4 y 4.3 gr. de ácido benzoito, llevar a 250 ml de H2O destilada, calentar y añadir 0.2 gr. de almidón y 5 ml de H2O destilada y completar a 500 ml con H2O destilada y conservar a 4 °C.

SULFATO DE COBRE (CuSO4) 2000ppm

Pesar 2 gr. de CuSO4 y llevar 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría

Cuidados: Tóxico

SULFATO 100 ppm Pesar 0.1825 gr. de K2SO4 en un litro de H2O destilada

TIONINA Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y completar a 100 ml con H2O destilada. Uso: Para coloración de tejidos vegetales

Cuidados: Tóxico

TOLLENS Solución A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada Solución B: Preparar 20 ml de NaOH al 10% Mezclar Solución A y Solución B, luego adicionarle amoniaco concentrado hasta disolver el precipitado. Guardar preferiblemente en frasco oscuro Uso: Para formación del espejo de plata

Cuidados: Tóxico corrosivos

TURK 100 ml de Ácido acético al 3% + 3 gotas de azul de metileno

TIMOL AL 1 % Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico absoluto Uso: Indicador de pH

Cuidados: Tóxico

TIMOLFTALEINA

Pesar 0.1 gr. de tiomolftaleina en 100 ml de alcohol etílico al 50

%

TANRED Solución A: 18 gr. KI + 200 ml de H2O destilada. Solución B: 6.75 gr. de HgCl2 +200 ml de H2O destilada La solución B se disuelve sobre la A, agitar hasta que desaparezca el naranja , completar con ácido acético glacial hasta 500 ml.

Cuidados: Tóxico

VIOLETA DE METILO Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador de pH

WRIGHT Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a poco 60 ml de Metanol Analítico y homogenizarlo, dejarlo en maduración por lo menos ocho (8) días. Filtrarlo cada dos meses Uso: Colorante para identificación de Células Sanguíneas

Cuidados: Tóxico

Bibliografía

Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos químicos 2005-2007. Frankfurter Strabe 250 64293 Darmstadt.GERMANY. J.T.Baker.Catalog 2004-2005.Tyco Specialty Products.2003 Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA. Promega, Life Science Catalog-2004 Merck, Productos de Laboratorio para la práctica-Indicadores- Sustancias patrón primario. Patiño, Pedro; Edgar Ramírez, Manuel de Preparación de Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002 Plumer, David; Introducción a la Bioquímica Práctica. McGraw Hill