Medios de cultivo y Esterilizacin

Prctico 2

Curso de Microbiologa 2010 Facultad de Agronoma

Cultivo de los microorganismos

Medios de cultivo

Solucin acuosa con las sustancias necesarias para que las clulas generen energa y realicen biosntesis

Requerimientos nutricionales componentes del medio de cultivo: Fuente de energa Fuente de C, N, H, O Fuente de P, S, Ca, K Micronutrientes Factores de crecimiento

Clasificacin de los medios de cultivo:

Segn su naturaleza: Lquido Slido Semislido

Segn su composicin: Medio definido-sinttico Medio indefinido-complejo

Segn su uso: Medio mnimo Medio enriquecido Medio selectivo Medio diferencial

Medio PCA

Extracto de levadura 2.5 g Glucosa 1 g Triptona 5 g

Agua 1 litro Agar 15 g pH 7

Extracto de levadura 2 g Glucosa 20 g Fosfato insoluble 2 g Agar 18 g Agua destilada 1 litro

Extracto de papa 4 g Glucosa 20 g Agar 15 g Agua destilada 1 litropH 5.6

Solubilizadoresde fosfato

PDA

TY

Triptona 5 g Extracto de levadura 3 g CaCl2 2H2O 0.6 g Agua destilada 1 litro Agar 18 g pH 6.8

CALDO TY: igual al anterior pero sin el agar

Medio EMA

Manitol 10 g K2HPO4 0.5 g MgSO4.7H2O 0.2 g NaCl 0.1 g Extracto de levadura 1 g Rojo congo 10 ml Agua destilada 1 litro Agar 18 g

Esterilizacin

Mtodos de esterilizacin:a) Calor:

calor seco calor hmedo

b) Agentes qumicos: gases (xido de etileno), glutaraldehdo, formaldehdo

c) Filtracin:Filtros de membranaCmara de flujo laminar

d) Radiacin: radiacin ionizante y no ionizante

Es la completa destruccin o eliminacin de toda forma de vida

a) Calor seco

Mecanismo de accin Procesos de oxidacin y desnaturalizacin de protenas

Control del proceso Indicador biolgico esporas de Bacillus subtilis

Aire caliente Se consigue esterilizacin a 170C, 60 minutos o 160C a120 minutos

Usos: Esterilizacin de materiales resistentes al

calor, sustancias no miscibles en agua (inyectables oleosos, siliconas, vaselina lquida), polvos

Incineracin: Flameado (>500 C) Incineracin

Esterilizacin por calor

Horno elctrico

a) Calor hmedo

Procesos: Vapor saturado a presin mayor que la atmosfrica

(Autoclave) Tindalizacin

Mecanismos de accin: Desnaturalizacin de protenas Destruccin de cidos nucleicos

Esterilizacin por calor

Autoclave

Vapor saturado a temperaturas mayores de 100C (precaucin: eliminacin total del aire)

Esterilizacin de materiales termoestables (salvo productos oleosos y polvos)

Descontaminacin de desechos biolgicos

Condiciones: 121C durante15 min., con cargas iniciales bajas 121C durante 30 min., con cargas iniciales altas

Indicadores: Fsicos: temperatura y/o presin Qumicos Biolgicos: Geobacillus stearothermophilus

Vlvula de escape

Manmetro

Caja de controles

Termmetro

Entrada devapor

Desage

Esterilizacin por calor

Ciclo tpico de un autoclave

Esterilizacin por calor

Tindalizacin

100C 30 minutos, 3 das sucesivos Proceso discontinuo con perodos de incubacin

intercalados Usos: esterilizacin de productos de baja resistencia

trmica, cuando no existe otra opcin

Esterilizacin por calor

Otros procesos de control por calor hmedo

Pasteurizacin LHT (low temperature holding) 30 minutos a 62.8C HTST (high temperature short time) 15 segundos a

71.6C Solo destruye patgenos (Coxiella burnetti,

Mycobacterium tuberculosis, etc.) y reduce flora de deterioro

Usos: leche, lcteos, jugos de fruta UHT (Ultra high temperature)

140-150C durante pocos segundos Proceso continuo Necesita envasado asptico

NO ESTERILIZANTESb) Filtros de membrana

Se emplea para materiales sensibles al calor: medios de cultivo, azcares, soluciones de antibiticos, etc.

Esterilizacin por Filtracin

b) Cmara de flujo laminar

Protege la muestra, el operador y el medio ambiente Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) Remocin de hasta el 99.97% de partculas mayores a

0.3 micrones de dimetro

Esterilizacin por Filtracin

d) Radiacin

Esterilizacin por radiacin

Alta energa, baja longitud de onda Gran poder de penetracin Produce e-, radicales hidroxilo (OH) e hdrido (H) que

degradan cidos nucleicos y protenas No requieren altas temperaturas 2 tipos Rayos gamma (160Co 137Cs)

Rayos betaUsos: esterilizacin de suministros mdicos, industria alimentaria, turba para inoculantes

Radiacin ionizanteEsterilizacin por radiacin

Radiacin no ionizante

Baja energa, sin poder ionizante Sin poder penetrante Mxima eficiencia biocida a 260 nm Mecanismos de accin:

Sitio blanco ADN Formacin de dmeros de timina

Usos: Desinfeccin de superficies Desinfeccin de aire y agua

Esterilizacin por radiacin