Métodos de esterilización

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MICROBIOLOGÍA GENERAL CARRERA DE QUÍMICA FARMACEÚTICA Sergio Rodrigo Quisberth Barrera M.Sc. [email protected] La Paz – Bolivia 27 de abril del 2015

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Presentación acerca de métodos físicos y químicos empleados para la desinfección y esterilización

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MICROBIOLOGÍA GENERAL

CARRERA DE QUÍMICA FARMACEÚTICA

Sergio Rodrigo Quisberth Barrera M.Sc.

[email protected]

La Paz – Bolivia

27 de abril del 2015

El objetivo de controlar el crecimiento microbiano es reducir la carga microbiana o el número de microorganismos viables presentes en un material, alimento o en una solución.

Introducción

Esterilización: Eliminación o muerte de todos los microorganismos. Sanitizante: Agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para la salud de la población. Desinfectante: Agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitaciones. Antiséptico: Agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas.

Introducción

Criterio de muerte de un microorganismo: Pérdida irreversible de la capacidad de reproducción en un medio adecuado. También implica destrucción de la célula

Proliferación: Desarrollo y crecimiento con incremento del tamaño poblacional del microorganismo

Supervivencia: No hay muerte ni proliferación, permaneciendo los microorganismos inactivos o inhibidos.

Introducción

Introducción

Cuando una población microbiana se expone a un agente letal, la cinética de la muerte es casi siempre exponencial.

So

bre

viv

ien

tes

po

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un

idad

de

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lum

en

100%

Lo

gari

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men

Tiempo (horas)

Factores que afectan el control de los microorganismos

El número de microorganismos

El tiempo de exposición.

La concentración del agente de control

Condiciones ambientales locales

El tipo de microorganismos

La temperatura

El estado físico de el microorganismo

Introducción

El número de microorganismos

A mayor número de microorganismos o resistencia de la población se necesitará mayor tiempo de esterilización.

Para determinar el número de sobrevivientes es necesario conocer el tamaño inicial de la población.

Para establecer los procedimientos de control hay que considerar dos factores: la tasa de mortalidad y el tamaño de la población inicial

Introducción

Tiempo de reducción decimal (D)

Es el tiempo necesario para reducir la densidad de una población al 10% del original a una T° determinada

Introducción

Introducción

Tiempo Supervivientes Muertes por unidad de tiempo

Total muertes

Porcentaje total de muertes

1. 1.000.000 0 0 0

2. 100.000 900.000 900.000 90,0000%

3. 10.000 90.000 990.000 99,0000%

4. 1000 9.000 999.000 99,9000%

5. 100 900 999.900 99,9900%

6. 10 90 999.990 99,9990%

7. 1 9 999.999 99,9999%

Caso teórico de desinfección

valor-Z (Z)

El valor-Z es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.

Introducción

Introducción

Efecto de la concentración del agente de control

Efecto de diferentes concentraciones de fenol sobre una población de E. coli

Introducción

Tiempo (minutos)

Condiciones Ambientales

El calor es más eficaz en un medio ácido que en uno alcalino.

La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye marcadamente en la penetración del agente.

Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan, por lo general, la resistencia térmica de los organismos.

Introducción

Condiciones Ambientales

La presencia de materia orgánica extraña reduce la eficacia de los agentes antimicrobianos :

No permite que el agente llegue al microorganismos

Se combina con el desinfectante y lo precipita

Se combina con el desinfectante y lo inactiva dejando libres concentraciones tan bajas que no logran el efecto deseado sobre la población microbiana

Introducción

La naturaleza del microorganismo Desinfección por UV

Introducción

La temperatura

La muerte de microorganismos como consecuencia de un tratamiento a altas temperaturas sigue una cinética exponencial.

Introducción

dN

dt = - K´N

Nº ufc

tiempo

La temperatura

Introducción

𝑿𝒇 = 𝑿𝒐𝒆−𝑲𝒕𝒇

𝑳𝒏𝑿𝒇

𝑿𝒐= −𝑲𝒕𝒇

𝑲 =𝑳𝒏 𝟏𝟎

𝑫

D =K𝒕𝒇

𝑫 =𝒕𝒇

𝑳𝒐𝒈(𝑿𝒐𝑿𝒇

)

𝒁 =Δ(𝒕𝟐 − 𝒕𝟏)

𝑳𝒐𝒈(𝑫𝒕𝟏𝑫𝒕𝟐

)

La temperatura

Problema

Determinar el valor del tiempo de reducción decimal a 116 ºC (D116) de un microorganismo a partir de los siguientes datos de supervivencia al tratamiento

Introducción

Duración del tratamiento (min)

Número de viables (UFC/ml)

5 340.0

10 65.0

15 19.0

20 4.5

25 1.3

min27,8116 D

La temperatura

Problema

Se ha determinado que para esporas de Clostridium botulinum suspendidas en buffer fosfato el D121 = 0.204 min, ¿Cuánto tiempo llevaría reducir una población de 1012 esporas de C. botulinum en buffer fosfato a 1 espora a 121°C?

Introducción

min448,2ft

La temperatura

Problema

Para un microorganismo determinado el valor D104.4 es 113.0 min. y D121.1 es 2.3 min. Calcular el valor z.

Introducción

CZ o9,9

Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes

Provocan pérdida de la viabilidad en los microorganismos Físicos (calor, radiaciones) Químicos (óxido de etileno, formaldehído, agentes oxidantes,

soluciones antisépticas.)

Provocan una separación de los microorganismos de la

sustancia líquida Filtración (se eliminan los microorganismos presentes en un

fluido).

Introducción

Los agentes físicos más empleados para destruir o eliminar microorganismos no deseables son el calor y la radiación.

Esterilización por calor

Esterilización mediante radiaciones

Agentes físicos

Calor:

Los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor.

Provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de membranas y procesos oxidativos.

La efectividad del calor como método de esterilización depende de: Temperatura

Tiempo de exposición

Agentes físicos

Calor Húmedo

El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se debe principalmente a dos razones:

El efecto del agua a altas temperaturas, ya que produce reacciones de hidrólisis y desestabilización de puentes de hidrógeno.

El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.

Agentes físicos

El autoclave es el equipo más utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100°C.

Agentes físicos

Los autoclaves de laboratorio :

El tiempo de exposición depende del volumen del líquido, de tal manera que para volúmenes pequeños (hasta unos 3 litros) se utilizan 20 minutos a 120° C; si los volúmenes son mayores debe alargarse el tiempo de tratamiento.

Usualmente 15 minutos a 121°C

Agentes físicos

Los autoclaves de laboratorio :

Agentes físicos

Condiciones :

121ºC durante 15 minutos, con cargas iniciales bajas

121ºC durante 30 minutos, con cargas iniciales altas

Indicadores:

Físicos: Temperatura y/o presión

Químicos: Tira reactiva.

Indicador biológico: Geobacillus stearotermophilus o Bacillus stearotermophilus

(D 121ºC=1.5 minutos) Tamaño del inóculo: 104 esporas

Pasteurización

LHT (low temperature holding)

30 minutos a 62.8ºC

HTST (high temperature short time)

15 segundos a 71.6ºC

UHT (ultra high temperature)

2 a 4 segundos a una temperatura que oscila entre 130 y 150ºC, seguido de un rápido enfriamiento, no superior a 32 °C

Agentes físicos

Pasteurización

Solo destruye patógenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium tuberculosis, etc.) y reduce flora de deterioro.

NO ES UN PROCESO DE ESTERILIZACIÓN

Usos: leche, lácteos, jugos de fruta.

Agentes físicos

Tindalización

100 ºC 30 min, 3 días sucesivos

Proceso discontinuo con períodos de incubación intercalados

Usos: Esterilización de productos de baja resistencia térmica, cuando no existe otra opción.

Agentes físicos

Ventajas Rápido calentamiento y penetración. Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo. No deja residuos tóxicos. Hay un bajo deterioro del material expuesto. Económico.

Desventajas No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones

con el agua. Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.

Agentes físicos

Calor Seco

El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de membranas.

La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.

Agentes físicos

Calor Seco

Agentes físicos

Indicadores:

Indicadores físicos y químicos

Indicador biológico esporas de Bacillus subtilis var. niger

(D 160ºC = 0.3 a 1.8 min, Z=20ºC, tamaño del inóculo: =105

esporas)

Existen otras formas de calor seco.

La incineración se utiliza para destruir material descartable contaminado.

La acción directa de la llama cuando se lleva al rojo el material de metal.

Agentes físicos

Agentes físicos

Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas

Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.

Agentes físicos

Radiaciones

Agentes físicos

Actividad antimicrobiana

Alta energía

Baja energía

Dos tipos: Radiaciones ionizantes Radiaciones no ionizantes

Radiaciones LUV

La radiación ultravioleta ha sido utilizada por su actividad germicida esterilizante por más de 30 años.

La acción de los rayos ultravioleta se debe a la producción de ozono que logra la asepsia, ya que este gas conserva su acción inhibidora hasta una dilución de 1 x 40.000.

Agentes físicos

Radiaciones LUV

Los aminoácidos aromáticos de las proteínas y las bases puricas y primidinicas, en particular la timina del DNA, son los principales compuesto blancos afectados por la acción bactericida de la acción ultravioleta.

Agentes físicos

Agentes físicos

Radiaciones Ionizantes

Características: Alta energía, baja longitud de onda

Gran poder de penetración

Ionizan átomos y moléculas

No requieren altas temperaturas

Tipos: Rayos gamma (60Co o 137Cs)

Rayos catódicos (electrones acelerados)

Agentes físicos

Radiaciones Ionizantes Desventajas: Equipo especial, personal entrenado No todos los materiales resisten el tratamiento Reacciones no deseadas en alimentos

Agentes físicos

Antisépticos Alcoholes

Iodo

Peroxido de hidrogeno

Órgano-Mercuriales

Colorantes

Bifenoles

Diamidinas

Anilinas

Compuestos de Aminas Cuaternaria

Halofenoles

Agentes químicos

Alcoholes

Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan proteínas. Desorganizan la estructura fosfolipídica de la membrana.

No destruyen esporas y tienen una acción germicida lenta.

Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%.

Los más utilizados son el etanol e isopropílico.

Agentes químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Iodo Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de

proteínas y ácidos nucleicos. Inactiva proteínas y enzimas por oxidación de los grupos -

SH a S-S. Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo:

yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), es irritante.

Es efectivo contra esporas en una concentración de 1600 ppm de iodo libre.

A 0,25% presenta un valor D = 6,7 min para Bacillus subtilis y D = 4,0 min para Staphylococcus aureus.

Agentes químicos

Amer, Mady, Yusef y Sabry. (2013) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospitals for killing airborne isolated bacteria. Afr. J. Microbiol. Res. 7(26):3321.

Peróxido de Hidrógeno

Es un antiséptico débil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.

El peróxido de hidrógeno gaseoso se utiliza como desinfectante de superficies o decontaminante de gabinetes biológicos debido a que no posee las propiedades tóxicas y cancerigenas del óxido de etileno y formaldehído.

A 1,5% y pH=3,3 presenta un valor D = 55,2 min para Bacillus subtilis y D = 3,4 min para Staphylococcus aureus.

Agentes químicos

Mazzola, Vessoni y S. Martins. (2003) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospitals for disinfection purposes. BMC Infectious Diseases. 3(24):10.

Órgano-Mercuriales

Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las proteínas, inactivando enzimas.

Dentro de los mercuriales orgánicos se encuentran el metafen y el mertiolate.

Agentes químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Colorantes

Los derivados del trifenilmetano bloquean la conversión del ácido UDP-acetilmurámico en UDP-acetilmuramil-péptido.

Agentes químicos

R = HSO4- Verde Brillante

R = Cl- Verde de Malaquita Violeta de Genciana

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Bifenoles

Los derivados de compuestos derivados de dos fenoles unidos por diferentes puentes.

Aparentemente actuan a nivel de la membrana celular, se vio que el triclosan desestabiliza la membrana celular y el hexaclorofeno inhibe la cadena de transporte de electrones

Agentes químicos

Triclosan

Hexaclorofeno McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Diamidinas

Son compuestos que vienen en forma de Isetionato, su mecanismo de acción esta relacionado con el ingreso de oxigeno en la bacteria pero no esta descrito del todo.

Clínicamente son empleados en el tratamiento tópico de heridas superficiales.

Agentes químicos

Dibromo propamidina

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Anilidas

Son compuestos que destruyen el carácter semipermeable de las membranas, generalmente se usan en Javoncillos y desodorantes.

El compuesto mas empleado es el Triclocarban (3, 4, 4’ – Triclorocarbanilida) o TCC

Agentes químicos

Triclocarban

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Compuestos de Aminas Cuaternaria

Son detergentes que producen daño a nivel de la membrana celular de las bacterias.

Entre los más empleados se encuentra el CTAB, cetrimida y sales de Benzalkonium.

Agentes químicos

Cetrimida CTAB Cloruro de Benzalkonium

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Cloro y Compuestos clorados

Aldehídos

Oxido de Etileno

Compuestos Fenólicos

Biguanidinas

Agentes químicos

Cloro y sus derivados

El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actúan sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos.

Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.

El producto clorado más utilizado es el hipoclorito de sodio (lavandina), su actividad bactericida se debe al ácido hipocloroso (HClO) y el Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua.

Agentes químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Cloro y sus derivados El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones

concentradas (50-100 g/l de Cloro activo) y Generalmente, se utilizan soluciones con una concentración del 0.1-0.5% de Cloro activo.

Su actividad está influida por la presencia de materia orgánica.

A 0,025% presenta un valor D = 20,6 min para Bacillus subtilis y D = 4,7 min para Staphylococcus aureus

Agentes químicos

Mazzola, Vessoni y S. Martins. (2003) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospitals for disinfection purposes. BMC Infectious Diseases. 3(24):10.

Aldehídos

Agentes alquilantes que actúan sobre proteínas, produce modificación irreversible de enzimas e inhibición de la actividad enzimática.

Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas.

Agentes químicos

Glutaraldehido Paraformaldehido Formaldehido

Aldehídos

El glutaraldehído es el único esterilizante efectivo en frío.

El formaldehído como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes, etc.

El formaldehído gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehído, tiene la desventaja de ser muy irritante, ser cancerigeno y perder actividad en ambientes refrigerados.

Agentes químicos

Oxido de Etileno

Agente alquilante se une a compuestos con hidrógenos lábiles como grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.

Utilizado en la esterilización gaseosa, generalmente en industria farmacéutica. Sirve para esterilizar material termosensibles. Es muy peligroso

Agentes químicos

Compuestos Fenólicos

Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmática porque desordenan la disposición de las proteínas y fosfolípidos.

El fenol no es usado a menudo como desinfectante por ser muy irritante, por ser cancerígeno y por el resido que queda luego de tratar las superficies.

Agentes químicos

Compuestos Fenólicos

Los derivados del fenol más utilizados son el hexaclorofeno y los cresoles.

Son efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias.

No son efectivos contra esporas.

Agentes químicos

Biguanidinas Son compuestos que a bajas concentraciones afectan

la integridad de la membrana, y que a altas concentraciones producen congelamiento del citoplasma.

Entre los mas usados están: Clorhexidina, Alexidina.

Agentes químicos

Clorhexidina

Agentes químicos

Compuesto Químico

Espectro de Actividad

Bacteria Hongos y Levaduras Virus Gram + Gram - Esporas

Amonio cuaternario +++ +/- +/- +/- -

Aldehídos +/- ++ ++ ++ ++

Cloro +++ +++ + ++ +

Iodo +++ +++ ++ ++ +

Tenso activos + + - + -

Alcoholes + + - + -

Mercuriales + +/- - + -

Fenoles +++ +/- +/- ++ +/-

Resistencia Agentes Químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Resistencia Agentes Químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Resistencia Agentes Químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

Resistencia Agentes Químicos

McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

Existen varios métodos para determinar la actividad antimicrobiana de los compuestos.

Técnica de dilución en tubo.

Técnica de la placa de agar.

Agentes químicos

Técnica de dilución en tubo

Primero se realizan diferentes diluciones del agente químico.

El mismo volumen de cada dilución se dispensa en tubos estériles.

A cada tubo se le añade la misma cantidad de una suspensión del microorganismo utilizado como prueba (0.5 de la escala de Mac Farland).

Estos tubos inoculados se incuban a la temperatura óptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante 24 a 48 horas.

Agentes químicos

Técnica de dilución en tubo

Al cabo del tiempo se examina el crecimiento por presencia o ausencia de turbidez en el tubo

Crecimiento (+) turbidez

No crecimiento (-) ausencia de turbidez.

Existen diferente metodologías estandarizadas para determinar la eficiencia de un desinfectante en tubo.

Concentración inhibitoria mínima CIM.

Medición de la turbidez a 580 o 530nm de λ.

Agentes químicos

Técnica de la placa de agar

Se inocula una placa que contenga medio de cultivo sólido con el microorganismo utilizado como prueba.

El agente químico se coloca en el centro de la placa, en un cilindro o impregnado en un disco de papel.

Estas cajas se incuban a la temperatura óptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante 24 a 48 horas.

Agentes químicos

Técnica de la placa de agar

Al cabo del tiempo se examina el crecimiento y se mide el halo de inhibición del crecimiento.

Sensible con halo de inhibición alto.

Resistente con halo de inhibición pequeño.

Existen diferente metodologías estandarizadas para determinar la eficiencia de un desinfectante en tubo.

Concentración inhibitoria mínima CBM.

Bauer-Kirby.

Agentes químicos

Técnica de la placa de agar

Agentes químicos

Cepas control

Los controles biológicos mas empleados son cepas de la colección americana (ATCC)

Staphylococcus aureus ATCC 6538

Bacillus subtilis ATCC 6633

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

Agentes químicos

Filtración

La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a través de una membrana capaz de retener los microorganismos presentes.

Se emplea para materiales sensibles al calor, como ciertos medios de cultivo, azúcares, soluciones de antibióticos y otros medicamentos.

Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeño tamaño de los poros y en parte por adsorción a las paredes del poro durante su paso a través del filtro debido a la carga eléctrica.

Esterilización por Filtración

Filtración

Debido al pequeño tamaño de los virus, nunca es posible tener certeza de que por métodos de filtración que dejan libre de bacterias, eliminan también los virus.

Según el tamaño del poro se puede lograr esterilidad o reducción de los microorganismos.

En las plantas de tratamiento de agua se logra remover hasta el 90-99% de los microorganismos filtrando el agua previamente floculada y sedimentada.

Esterilización por Filtración

Filtración

Esterilización por Filtración

La filtración se utiliza para

Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos de pomadas.

Soluciones termolábiles: líquidos biológicos (suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y antibióticos).

Esterilizar soluciones oftálmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibióticos y vitaminas.

Esterilización por Filtración

La filtración se puede ser a través de:

Filtros profundos o Filtros de profundidad.

Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air).

Membranas filtrantes.

Esterilización por Filtración

Filtros profundos o Filtros de profundidad

Están elaborados de un material fibroso (papel, asbesto o fibra de vidrio) dispuesto al azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean vías tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayoría de los contaminantes presentes.

En este tipo de filtros la retención de las partículas se produce por una combinación de absorción y de retención mecánica en la matriz.

Esterilización por Filtración

Filtros profundos o Filtros de profundidad

Esterilización por Filtración

Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) Compuesto por pliegues de acetato de celulosa que

retienen las partículas (incluídos los microorganismos) del aire que sale de una campana de flujo laminar o ambiente.

Remoción hasta el 99.97% de partículas mayores de 0.3 micrones de diámetro.

Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar (Industria de Alimentos o Farmaceutica).

Esterilización por Filtración

Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)

Esterilización por Filtración

Entrada de aire

Salida de aire

Protege la muestra, el

operador y el medio ambiente

Filtración de ambientes (Salas Blancas)

Esterilización por Filtración

Las salas blancas, llamadas también salas limpias o de ambiente controlado son un instrumento imprescindible en determinados procesos de producción e investigación.

En la industria alimentaria la contención de partículas y la contención bacteriológica son requisitos imprescindibles para la garantía de calidad del producto.

En el ámbito de la industria farmacéutica, su función es garantizar la calidad en operaciones de fabricación y control.

Filtración de ambientes (Salas Blancas)

Esterilización por Filtración

Numero máximo de partículas permitidas x m³ “iguales a” o “sobre”

Grado En descanso En operación >=0.5µm >=5.0µm >=0.5µm >=5.0µm

A 350 0 3500 0 B 3500 0 350000 2000 C 350000 2000 3500000 20000 D 3500000 20000 No definido No definido

OMS. (2002) Clasificación del Aire en la Unión Europea, guía para Buenas Prácticas de Fabricación.

Grado A y B corresponde a clase 100, M 3.5, ISO 5 Grado C corresponde a clase 10000, M 5.5, ISO 7 Grado D corresponde a clase 100000, M 6.5, ISO 8

Filtración de ambientes (Salas Blancas)

Esterilización por Filtración

OMS. (2002) Clasificación del Aire en la Unión Europea, guía para Buenas Prácticas de Fabricación.

Grado Tipos de Operaciones para preparaciones asépticas.

A Preparación aséptica y relleno

B Condiciones ambientales para actividades requeridas en el Grado A

C Preparación de Soluciones para ser filtradas

D Manipulación de componentes después del lavado

Filtración de ambientes (Salas Blancas)

Esterilización por Filtración

OMS. (2002) Clasificación del Aire en la Unión Europea, guía para Buenas Prácticas de Fabricación.

ISO Clase

Controles Velocidad del Aire a nivel

mesa en FPM Cambios de Aire

por Hora

1 Riguroso 70 - 130 >750

2 Riguroso 70 - 130 >750

3 Riguroso 70 - 130 >750

4 Riguroso 70 - 110 500 - 600

5 Riguroso 70 - 90 150 - 400

6 Intermedio 25 - 40 60 - 100

7 Intermedio 10 - 15 25 - 40

8 Menos riguroso 3 - 5 10 - 15

Membranas filtrantes

Filtros elaborados generalmente de acetato o nitrato de celulosa con poros de tamaño uniforme.

Tiene como ventaja que, al conocer exactamente el tamaño de poro que presentan, se pueden seleccionar filtros capaces de retener la totalidad de los microorganismos presentes en una solución.

Sin embargo, se saturan rápidamente y la velocidad de filtración a través de ellos es lenta.

Esterilización por Filtración

Membranas filtrantes

La mayor parte de los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y manipular asépticamente al ensamblar el equipo

Los filtros de membrana se utilizan en:

La esterilización de líquidos.

En el análisis microbiológico de aguas.

Esterilización por Filtración

Membranas filtrantes

Esterilización por Filtración

Preguntas??