Métodos rápidos en bacteriología y control por ilse garcía negrete

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Soluciones Integrales en el Monitoreo Microbiológico

CONSEJO MEXICANO DE LA CARNE

Y USAPEEC

29 de Noviembre de 2007


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MISIÓN

• Brindar a nuestros clientes soluciones innovadoras y confiables dentro del campo de la microbiología en alimentos proporcionándoles herramientas para alcanzar y superar sus objetivos de calidad, productividad y desempeño con productos de calidad y bajo una cultura de ética laboral.


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VISIÓN

“Ser el Proveedor Líder en Calidad e Inocuidad Alimenticia contribuyendo con la Industria de Alimentos en la entrega de Productos Sanos y Seguros para el Mercado Mexicano.”


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Placas 3MMR PetrifilmMR para la


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El método de conveniencia para

análisis de microorganismos en

Placas PetrifilmMR


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Nuestras Fortalezas

•Alta calidad 3M,•Confiabilidad,•Conveniencia,•Incremento en productividad•Aprobaciones Internacionales •Avanzado servicio técnico


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• Placas para m.o. indicadores y algunos patógenos

• No requieren de equipo especializado.

• Las placas vienen en un sobre descontaminado y listas para usarse.

• No es necesario preparar medios de cultivo, ya que vienen deshidratados en las placas.

VENTAJASPlacas PetrifilmTM


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Brindan un ahorro de 5 horas

comparándolas en con el método tradicional en caja petri.

MÉTODOLOGÍA…

sólo tres sencillos pasos!!!

Placas PetrifilmTM

1. Inocular. (vaciar muestra en la placa)

2. Incubar.

3. Interpretar. (contar colonias)


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Placas PetrifilmTM

• Aprobaciones Internacionales– AOAC -OMA– ISO - AFNOR – INTERNATIONAL DAIRY FEDERATION (FIL/IDF)

Bulletins 285/1993 and 350/2000• Por País:

– Australia, Canadá, Chile , Francia, Alemania, Japón , Korea, Nueva Zelanda, Países Nórdicos, Polonia , Sudafrica, Reino Unido, Estados

AprobacionesPetrifilm


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Placas PetrifilmTM

• Publicaciones Internacionales

– FDA-BAM– SMEDP– APHA Compendium– INTERNATIONAL DAIRY FEDERATION

(FIL/IDF) Bulletins 285/1993 and 350/2000


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USDA

• La Placa Petrifilm para recuento de E.coli/Coliform cumple con los requerimientos definidos por USDA en pruebas para la reducción de patógenos (HACCP).

USDA documents: • www.usda.govhttp://www.fsis.usda.gov/PDF/

Guideline_for_Ecoli_Testing_Cattle_Swine_Estab.pdfhttp://www.fsis.usda.gov/PDF/

Guideline_for_Ecoli_Testing_Slaughter_Estab.pdfhttp://www.fsis.usda.gov/ophs/Microlab/Mlgchp3.pdf

http://www.fsis.usda.gov/PDF/Guideline_for_Ecoli_Testing_Cattle_Swine_Estab.pdf




http://www.fsis.usda.gov/PDF/Guideline_for_Ecoli_Testing_Slaughter_Estab.pdf




http://www.fsis.usda.gov/ophs/Microlab/Mlgchp3.pdf

http://www.fsis.usda.gov/ophs/Microlab/Mlgchp3.pdf


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Aspectos Generales

Placas PetrifilmMR


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Placa Petrifilm para Recuento de Aerobios (AC)


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Cuenta Aerobia

• Se usa para estimar la población total de bacterias en la mayoría de los alimentos.

• Organismos Gram + y Gram -

• Crecen en medio general (no selectivo)

• Recomendado para la detección de fuentes de contaminación en muestras de proceso y producto terminado.


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• Incubar 48 + 3hr 35 + 1°C• Cuantificar todas las

colonias rojas

• Area = 20 cm2

• Rango ideal de recuento: 30 a 300

Placa Petrifilm para Recuento de Aerobios (AC)


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Método de Aprobación AOAC

• Método # 989.10 para productos Lacteos – rango contable de 25- 250 colonias– Incube a 32 + 1°C durante 48 + 3h

• Método # 990.12 para alimentos – rango contable 30- 300 colonias– Incube a 35 + 1°C, 48 + 3 hrs

• Método # 986.33 para leche – rango contable 30 - 300 colonias– Incube a 32 + 1°C durante 48 + 3h


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¿Qué es un COLIFORME?

• Es un bacilo gram negativo aerobio que fermenta la lactosa produciendo ácido y gas.

• Es un grupo heterogéneo de bacterias que consta de 4-10 subgrupos. Incluye especies de Escherichia, Enterobacter, Citrobacter y Klebsiella entre otras


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• Medio Bilis Rojo Violeta modificado

• Se identifican como coliformes las colonias rojas asociadas a gas

Placa Petrifilm para Recuento de Coliformes ( CC)


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• Incube 24 + 2 hrs a 35+1 °C

• Cuente todas las colonias rojas asociadas a una o mas burbujas de gas.

• El rango de recuento es de 15 a 150 colonias.

Incubación e Interpretación


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Comidas asociadas a enfermedades por E.Coli

• Carne cruda• Productos del mar• Lacteos – Leche y

quesos no pausterizados

• Vegetales crudos y congelados

• Comida preparada y de conveniencia


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Sintomas causados por E.Coli

• Aparentes después de 6 a 36 hrs de ingestion

• Diarrea, nauseas, fiebre, calambres abdominales


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E. coli Enterohemorragica: O157:H7

• Usualmente O157:H7• Produce Verotoxina que

daña las paredes del intestino

• Sindrome Uremico hemólitico – daño riñón

• Diarrea abundante con sangre


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Placa Petrifilm para Recuento de E.Coli /Coliformes ( EC)

• Nutrientes Bilis rojo violeta, gel soluble en frío, indicador tetrazoilo, indicador para enzima b-glucuronidasa

• El rango de conteo óptimo es entre 15 y 150 colonias


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Incubación e Interpretación

• Incube 24 hr a 35°C• Cuente las colonias

rojas con gas y azules con gas como coliformes totales

• Vuelva a incubar 24 hr a 35°C

• Cuente las colonias azul con gas como E.coli


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Interpretación PetrifilmTM EC• Siempre que aparezcan

colonias azules con burbu ja de gas se considera confirmativo para E. coli.

• E. coli O157:H7 es glucuronidasa negativa, aparece como coliforme (roja con burbuja de gas)


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Petrifilm Staph Express (STX)

• Medio Baird-Parker Modificado

• Indicador cromógenico Selectivo y diferencial para S.aureus


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• Incubar por 24±2 horas a 35°C ó 37 + 1°C

• Colonias Rojo- Violeta son S. aureus confirmadas


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Incubación

• Incube las placas cara arriba apilando 10 placas máximo.

• 28 hrs ±2 hrs a 35 °C ±1 °C ó a 37 °C ±1°C.

• El área inoculada es aprox. 42 cm2.


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VENTAJAS

• Segura = No requere paso de enriquecimiento, sólo de reparación

• Rápida = Resultados en tan sólo 30 hrs!!!

• Confiable = Aprobada por la AOAC

Fácil de usar !!!!


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PATÓGENOS : TECRA

• INMUNUENSAYO VISUAL (ELISA)

Salmonella

Listeria

E. coli O157:H7


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3M™ TECRA™ VIA


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1. PRE ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO

2. CHOQUE TÉRMICO

3. CAPTURA

4. UNIÓN DEL CONJUGADO

5. DESARROLLO DE COLOR

3M™ TECRA™ VIA


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3M TECRA Listeria VIA• Test rápido para la detección de Listeria spp. en:

– Alimentos

– Muestras ambientales


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3M TECRA Listeria VIA

RAPIDO– Resultados negativos en 48 horas.

PRÁCTICO– Cliente elige el protocolo de enriquecimiento que

le resulte más conveniente.

CONFIABLE– Alta sensibilidad: 1-5 cfu/25 gram muestra– Aprobaciones AOAC


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3M TECRA Listeria VIAELISA

1.5hrs


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Salmonella VIA3M™ TECRA™ VIA


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Salmonella VIARAPIDO y CONFIABLE

• Detecta Salmonella mótil y no mótil

• Resultado negativo en 42 horas!

• Protocolo equivalente al método tradicional.

• Sensibilidad: 1cfu/25 g muestra

• Especificidad: 95% – 100%

3M™ TECRA™ VIA


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Salmonella VIAELISA

Agregar la muestraIncubar 30 min/ 35-37°C

Lavar 3 veces

Agregar Substrato10 min/ 20-25 °C

Lectura de resultados

Agregar ConjugadoIncubar 30 min/ 35-37°C

Lavar 4 veces

3M TECRA SALVIA

1.1 hrs


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MONITOREO MICROBIOLÓGICO

• OBJETIVOS DE LA INDUSTRIA:– Evaluación del diseño y fabricación higiénica de

equipos e instalaciones

– Verificación de limpieza y sanitización

– Determinación de tiempos de limpieza y frecuencias de sanitización

– Fuentes de microorganismos en el ambiente

– Inicidencia de patógenos invasivos en el


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• Verificación del Sistema HACCP

• Evaluación precisa de los riesgos biológicos en el ambiente de la fábrica.

MONITOREO AMBIENTES Y SUPERFICIES


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MONITOREO

• Pruebas a Incluir:– Bioluminiscencia ATP*– Indicadores Microbiológicos– Patógenos


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BIOLUMINISCENCIA

1. Toma de muestra

2. Activar Hisopo

3. Agitar suavemente (5- 7 s)

4. Lectura en equipo (10 – 15 s)

5. Resultados en URL


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INDICADORES BIOLÓGICOS


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PATÓGENOS


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COLECTA DE DATOS

1. Toma de Muestra2. Retención de Muestra 3. Preparación de Muestra


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1. TOMA DE MUESTRA

Muestra Representativa– Distribución de microorganismos– Mezclado adecuado– Cantidad suficiente – Características físicas – Tomadas al azar

• La confiabilidad de los resultados dependerá en gran parte del numero y tamaño de muestras que se analicen.


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ACCESORIOS DE MUESTREO

• Esponja• Hisopo• Placas • Bolsas estériles


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• ESPONJA

– Esponja 5x5cm – Uso de buffer o medio

aceptable (inactivación de sanitizantes)

– Técnica Aséptica– Monitoreo Patógenos– 3 direcciones

TIPOS DE MUESTREO


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TIPOS DE MUESTREO

• Enjuague

– Solución Bufferada – Microorganismos

Indicadores• Cuenta total• Coliformes

– Patógenos• Salmonella


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TIPOS DE MUESTREO

• Pesado– Diluyente

• Peso o volumen


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QUICK SWAB: Toma de muestra para superficies vivas e inertes

• Toma de muestra en superficies con hisopo Quick Swab


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1. Exprima el bulbo para

Quick Swab

4. Vierta 1 ml en el centro de la placa 3M Petrifilm

3. Devuelva el hisopo al tubo y agite vigorosamente durante 10

segundos

2. Muestree la superficie


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Sistemas de Monitoreo de Temperatura

MonitorMark®Indicadores Tiempo/Temperatura

Freeze Watch®Indicadores Temperatura


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LECTURA

El Color azul señala que la temperatura de activación se ha excedido.

La extensión del color proporciona una medida del tiempo acumulado por arriba de la temperatura de activación.

MonitorMark™TimeTemperatureIndicator 10I

INDEX/INDICE

1 2 3 4 50

3


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CATÁLOGO…


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57

GRACIAS

Ilse García NegreteAsesor en Ventas Microbiología

3M Microbiologí[email protected]

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