cocos gram positivos aerobios

Septiembre 2014 - Febrero 2015[cocos gram positivos aerobios]

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA MEDICINACATEDRA DE MICROBIOLOGIA IIPERIODO ACADMICO: SEPTIEMBRE 2014-FEBRERO 2015

DATOS GENERALESSEMESTRE: CUARTO PARALELO: BAPELLIDOS Y NOMBRES PANCHANO LARA JULIO CESAR

DOCENTE: DRA. SONIA MEZA. INFORME No. 1

FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA: 24-10-2014FECHA DE PRESENTACIN DEL INFORME DE LA PRCTICA: Viernes 29 de Noviembre del 2014

TITULO DE LA UNIDAD:COCOS GRAM POSITIVOS AEROBIOS

TEMA DE LA PRCTICA: MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVO GENERAL PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO GENERALIDADES CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS ESPECFICOS Definir los criterios para estandarizar la preparacin de medios de cultivo La preparacin adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos y exhibir una morfologa colonial y microscpica tpica en el medio Los medios de cultivo son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos Rango de pruebas y tcnicas de laboratorio a elegir

FUNDAMENTO TERICO O CONTENIDO CIENTFICOLos medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas permiten el crecimiento de los microorganismosLa aplicacin de los medios de cultivo deshidratados ha sido tan aceptado universalmente como standar en los laboratorios de microbiologa que son utilizados con resultados de prueba como el mtodo clsico. En el mercado existen medios de cultivo deshidratados en forma de polvo o bien en forma de granulado; este es un procedimiento que con cuya ayuda se consigue una deshidratacin extrema. Se utiliza sobre todo en aquellos medios de cultivo que contienen sustancias higroscpicas y que necesitan una desecacin muy intensa que ofrece algunas ventajas como: Mejor conservalidad, particularmente en ambientes hmedos (clima tropical) Distribucin ms homognea de sustancias particularmente de aquellas substancias activas que se hallen en pequea cantidad Nmero de grmenes disminuido Mejor es polvo reabilidad, como consecuencia, menor dificultad de pesada Ausencia muy notable de polvo durante la manipulacin, evitndose con ello ampliamente las manifestaciones alrgicas o la inhalacin de sustancias txicas.Los medios de cultivo deben conservarse en ambiente fresco y seco protegidos contra la luz, despus de cada empleo deben quedar hermticamente cerrados. La conservacin de los medios de cultivo deshidratados es limitada, es segura la conservacin por 2 aos por lo menos en forma de polvo y 4 aos para los medios de cultivo desecados en forma granuladaLos medio de cultivo deshidratados son ms o menos higroscpicos. Por este motivo, los frascos que lo contienen deben tener tapn hermtico, solo debe abrirse en ambiente seco. El ingreso de agua desde el exterior, o la liberacin de agua en el interior, motivada por la temperatura dan lugar al desarrollo de grmenes en el material, lo que puede ocasionar consumo de sustancias nutritivas, variaciones de pH y alteraciones del color. La accin intensa de luz puede alterar tambin las sustancias.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVOLos medios de cultivo pueden ser naturales y artificiales o sintticos. Los medios de cultivo naturales son la leche, orina, sangre, son lquidos que contienen sustancias nutritivas.Los medios de cultivo artificiales o sintticos son aquellos que tienen una frmula precisa o composicin o por lo tanto se pueden preparar en cualquier momento en el laboratorio.Estos medios artificiales se clasifican a su vez en medios simples o complejosLos medios complejos son medios que tienen una composicin compleja y son especiales para el aislamiento de micro organismos muy exigentes (enriquecimiento, diferenciales y selectivoSlidos Agar-Agar tienen la capacidad de fundir al medio a 100C y solidificar a 40CGelatina se utiliza en pocos medios es lquida a T ambiente y es atacada por los micro organismos que producen gelatinaza Lquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o erlenmeyers. Por su COMPOSICIN: Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto. Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems. Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee.Algunos medios suelen ser selectivos y diferenciales al mismo tiempo para distintos grupos bacterianos Ej: EMV- LEVINE es selectivo para Gram (-) porque la bacteria Gram (+) por la presencia del colorante azul de metileno es diferencial porque es Fermentadora de lactosa de las no fermentadoras entre siEl Agar Sangre es diferencial y enriquecido al mismo tiempo para las bacterias ya que un nutriente extra, la sangre y diferencial ejemplo: las bacterias del gnero estreptococcus puede diferenciar a la bacteria de ste gnero por el halo de hemlisis que se producen alrededor de las colonias, hemlisis halo transparente, hemlisis halo verdoso, hemlisis sin halo.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOSMateriales: Elermeyers graduados o probeta, algodn hidrfilo, gasa, tubos vacutainer, aguja vacutainer, Agua destilada, cajas Petri, pipetas de vidrio. Reactivos: Agar Sangre, Agar Chocolate, Agar Mac- Conkey, Agar MullerHintonEquipos: Balanza Analtica, Estufas, Refrigeradora, Autoclave, Computadora, esptula

PROCEDIMIENTO:

PROCEDIMIENTO:TCNICA:

1.- Elaborar una lista donde se registre la cantidad del medio de cultivo existente y el medio de cultivo que se va a prepararPesar

2.- Antes de preparar cualquier medio se debe leer cuidadosamente el rtulo del envase, instrucciones del fabricante y fijarse la fecha de vencimientoDisolver Agua destilada

3.- Debe prepararse empleando material de vidrio limpio y seco Calentar

4.- Se calcula la cantidad de polvo, de acuerdo a las instrucciones del envase y el volumen total que se desee prepararAuto clavar

5.- Se pesa sobre el papel y se vuelca sobre el recipiente en el que ser preparado, (debe ser un recipiente graduado, caso contrario se medir el volumen de lquido en otro recipiente auxiliar limpio y graduado)Enfriar

6.- Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivoPoner la sangre

7.- Se le va agregando el agua destilada de acuerdo a las indicaciones del fabricante y se agita vigorosamente hasta obtener una suspensin o solucin homognea (si es caldo)Dispensar en las cajas Petri

8.- Los caldos suelen dar soluciones transparentes que no necesitan calentamiento ni ninguna otra manipulacin antes de ser llevados al autoclave Enfriar

9.- En caso de los agares luego de diluidos y colocados en elermeyer se tapan con algodn y con papel empaque y se autoclavan inmediatamente (registro de esterilizacin) Guardar

10.- Las soluciones lquidas, requieren calentamiento hasta ebullicin con agitacin constante y a fuego suave para lograr su solubilizacin completa. Se debe observar con cuidado la solucin durante el calentamiento ya que una vez que aparecieron las primeras burbujas tiende a desbordar por ebullicin.

11.- Luego los medios se dispensan con pipeta de vidrio volumtrica teniendo en cuenta el uso que se les dar

12.- Esterilizar en autoclave 8 minutos a 120C 21 libras presin utilizando adems cintas de control de esterilizacin.

13.- Los agares se dejan enfriar a temperatura de 40-50C

14.- Se dispensan en cajas Petri de 90mm x 15mm. En caso del agar sangre previo a su dispensacin se aade de un 5% - 10% de sangre humana en base al volumen preparado, se mezcla y se dispensa

15.- Los medios deben dejarse enfriar y guardarse en estufa una del lote a 35C hasta el siguiente da con el fin de controlar que no haya exitido contaminacin

16.- Los medios son conservados en refrigeracin hasta el momento de su uso.

GRFICOS Y RESULTADOS:

RESULTADOS

Realizamos el agar de sangre de acuerdo a los procedimientos establecidos. Con la muestra farngea se realizo cultivo, y se pudo observar una Hemolisis alfa

GRAFICOS

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

CONCLUSIONESSe prepar el medio en un matraz de acuerdo a las instrucciones.En la presente prctica se prepararon exitosamente los medios de cultivo tanto de agar sangre.Presento una Hemlisis alfa que es una hemlisis parcialy la zona de crecimiento aparece rodeada de un halo de color verdoso.

RECOMENDACIONES Los agares se preparan en cajas especiales de polipropileno, de alta transparencia, permitiendo una visin clara de los crecimientos bacterianos y sus caractersticas. Se utilizan dos tipos de caja segn el tiempo de incubacin requerido y tipo de agar. Cajas de Petri con ventilacin: tienen unas pestaas en la tapa con tres aperturas equidistantes, lo que permite la entrada de aire a la cmara superior de la caja, favoreciendo el crecimiento rpido de los grmenes en el agarBIBLIOGRAFA:MURRAY, P. MICROBIOLOGIA MEDICA. ESPAA: ELSERVIER.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA MEDICINACATEDRA DE MICROBIOLOGIA IIPERIODO ACADMICO: SEPTIEMBRE 2014-FEBRERO 2015

DATOS GENERALESSEMESTRE: CUARTO PARALELO: BAPELLIDOS Y NOMBRES PANCHANO LARA JULIO CESAR

DOCENTE: DRA. SONIA MEZA. INFORME No. 2

FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA: 27-10-2014FECHA DE PRESENTACIN DEL INFORME DE LA PRCTICA: Viernes 29 de Noviembre del 2014

TITULO DE LA UNIDAD:COCOS GRAM POSITIVOS AEROBIOS

TEMA DE LA PRCTICA: INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

OBJETIVO GENERAL CULTIVO DE MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

OBJETIVOS ESPECFICOS AISLAMIENTO DE BACTERIAS CULTIVADAS IDENTIFICACION DE BACTERIAS CULTIVADAS PRUEBAS DE IDENTIFICACION DIFERENCIAR BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVASFUNDAMENTO TERICO O CONTENIDO CIENTFICOLos microorganismos que causan enfermedad en el tracto respiratorio superior, la nasofaringe y faringe deben entrar en contacto con el epitelio de la mucosa, adherirse y multiplicarse. N. meningitidis, Bordetellapertussis, C. diphtheriae y muchos virus son transportados por aerosoles formados por las secreciones y llegan al nuevo husped mediante contacto ntimo, condiciones de hacinamiento o de falta de higiene. Los Mycoplasma y S. pyogenes con frecuencia se adquieren de esta manera. Aunque se puede aislar gran nmero de especies de bacterias y hongos a partir de muestras tomadas del tracto respiratorio superior, son muy pocos los microorganismos que provocan una verdadera patologa de esta reaEl S. pyogenes o streptococo betahemoltico del grupo A es la bacteria ms comnmente aislada.La flora de la nariz consta principalmente de corinebacterias, estafilococos (S. epidermidis, S.aureus) y estreptocos.Frecuentemente las mucosas de la boca y faringe son estriles al nacimiento, pero se contaminan al atravesar el canal del parto. En las primeras 4 a 12 horas despus del nacimiento, el estreptococo viridans se establece como el miembro principal de la flora normal y lo sigue siendo por toda la vida.Muy pronto se agregan estafilococos aerobios y anaerobios, diplococos Gram negativos difteroides y algunos lactobacilos. Normalmente existen especies de Actinomyces en el tejido amigdalino y las encas de los adultos, que algunas veces se acompaan de diversos protozoarios. En la boca existen levaduras (especies de Candida).MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MUESTRA: Secrecin Farngea

MATERIALES

Agar Sangre, baja lenguas, isopo, cajas Petri, portaobjetos, palillos

EQUIPOS

Microscopio

Mechero

REACTIVOS

Cristal Violeta, Lugol, alcohol cetona y fucshina

Aceite de Inmersin

Disco comercial de DIFCO

Perxido de hidrogeno al 3%

Tubo de tapa Lila

PROCEDIMEINTO

PROCEDIMIENTO:TCNICA:

1. Fije el frotis con calor COLORACIN GRAM

2. Cubrir el frots con cristal violeta por un minutoCOLORANTE PRIMARIO (1 min)

CRISTAL VIOLETAVIOLETA DE GENCIANA

3. Lave con guaMORDIENTE(1 min)

SOLUCIN DE LUGOL

4. Cubrir el frotis con el lugol por un minutoDECOLORANTE(30 segundos)ALCOHOL - ACETONA

5. Lave con agua COLORANTE DE CONTRASTE(1 min)SAFRANINAFUCSHINA BSICA

6. Decolorar con el alcohol cetona hasta que arrastre todo el colorante por 15 segundosPRUEBA DE OXIDASAPositivo color morado o prpuraNegativo no produce ningn cambio de color

7. Lave con aguaPRUEBA DE LA CATALASALa Aparicin rpida y sostenida de burbujas constituye una reaccin positiva.La observacin de unas pocas burbujas diminutas de los 20 a 30 segundos no se considera prueba positiva.

8. Cubra con fucshina por 1 minuto PRUEBA DE LA COAGULASA

9. Lave con aguaObservar formacin de coagulo

10. Dejar secarSi no se forma el coagulo re incubar el tubo a temperatura ambiente y leer despus de 18 horas

PRUEBA DE LA OXIDASA

Positivo formacin de coagulo

1. Aadir unas del reactivo a una tira de papel filtro o utilizar discos comerciales impregnados con el reactivo de secado

2. Frotar sobre este una colonia aislada de un cultivo

3. la reaccin de color positivo se produce a los 10 segundos

PRUEBA DE LA CATALASA

1. transferir parte de una colonia, con un palillo de madera a la superficie de un porta objetos.

2. Agregar una o dos gotas de reactivo Perxido de Hidrogeno

3. Observar la formacin de burbujas

PRUEBA DE COAGULASA

Prueba en tubo

1. Emulsionar una pequea cantidad de colonias puras de una placa de agar en un tubo que contenga 0.5 ml de plasma.

2. Incubar el tubo a 35 C durante 4 horas.

GRAFICOS Y RESULTADOS

RESULTADOS

TINCION DE GRAM: GRAM POSITIVOPRUEBA DE CATALASA: POSITIVAPRUEBA DE COAGULASA: NEGATIVOBACTERIA: ESTAFILOCOCO

GRAFICOS

TINCION DE GRAM

PRUEBA DE CATALASA

PRUEBA DE COAGULASA

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

En la tincin obtuvimos como resultado COCO GRAM (+) que presento un color azul oscuro. En la prueba de catalasa obtuvimos como resultado POSITIVA, esta solo presentan las bacterias del grupo estafilococo En cambio de en la prueba de coagulosa sali NEGATIVO lo que indica que la bacteria no es un estafilococo aureus.

BIBLIOGRAFA: MURRAY, P. MICROBIOLOGIA MEDICA. ESPAA: ELSERVIER.

ANEXOS:

STREPTOCOCOSCOCOS GRAM NEGATIVOS

STREPTOCOCOS Y DIPLOCOCOS

MICROBIOLOGIA PRACTICA II Dra. Sonia Meza