Micro Biolog i A

Elaboró: Dra. Luz Marina Carvajal

Revisó: Dra. Yanith Piragauta Gutierrez

Validó: Dr. Fernando Anibal Peña Diaz

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APOYO DIAGNOSTICO MANUAL DE MICROBIOLOGIA LABORATORIO CLINICO CODIGO: ADx-LC-M005

A VERSION: 02-2011

Manual de microbiología

Laboratorio clínico




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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BACTERIOLOGIA

1. COCOS GRAM POSITIVOS En el grupo de los cocos Gram positivos considerados básicamente dos géneros: Staphylococcus y Streptococcus. La apariencia de las colonias sobre el medio de cultivo primario como el agar sangre, es regla general suficiente para la clasificación inicial del género. Si existe alguna duda, una preparación de la colonia cultivada en el medio de cultivo caldo nutritivo, coloreada con Gram, mostrara la clásica formación de cadenas o de racimos y una prueba de CATALASA separar definitivamente estos dos géneros. STAPHYLOCOCCUS Las infecciones de la piel son las mas frecuentes producidas en el hombre por este genero de microorganismos. Entre estas podemos citar furunculosis, la pioderma, los abscesos, el impétigo y las infecciones de heridas post-operatorias en diferentes regiones del cuerpo. Los procesos infecciosos severos como las bacteremias, meningitis neumonía y osteomielitis son generalmente producidas en pacientes inmunosuprimidos o con alguna condición base. Examen directo de la muestra: Un examen directo coloreado con Gram, puede ser de algún valor para evaluar la presencia se Staphylococcus cuando se trata de una muestra de orina, líquidos articulares, aspiraciones traqueales y abscesos pulmonares. Si se trata de una muestra que puede presentar contaminación con la flora microbiana normal, debe ponerse especial atención en la presencia y el número de células inflamatorias (PMN) y células epiteliales. La mayor incidencia de las primeras es mas significativa, pero es necesario advertir que la presencia de cocos Gram-positivos en el frotis directo no es diagnostico suficiente para establecer que el Staphylococcus es el agente etiológico de una infección porque puede confundirse con algunos con algunos Streptococcus o cocos anaerobios. Es necesario realizar el cultivo y las pruebas de identificación complementarias para confirmar genero y especie. La inoculación de medios primarios de aislamiento como agar sangre y caldo de enriquecimiento (tripticasa soya o infusión cerebro corazón) son suficientes para obtener un buen crecimiento de estos microorganismos, después de una incubación de 18 a 24 horas en atmósfera de aerobiosis. PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACION DE LA ESPECIE a) Actividad hemolítica de los glóbulos rojos: Esta característica puede variar muchísimo entre las diferentes especies de Staphylococcus.

La hemólisis no debe considerarse como una prueba de virulencia, sino como una actividad metabólica del microorganismo aislado, por lo general, hay mejor producción de hemolisinas sobre glóbulos rojos humanos que sobre los de cordero o bovinos.

b) Producción de coagulasa:




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Esta prueba es quizás, utilizada universalmente desde hace muchísimos años y es aceptada como el mejor criterio para la identificaron de los Staphylococcus patógenos más comunes: el aureus en humanos y animales, el intermedius y el hyiucus en animales. Esta prueba puede realizarse en un tubo o en lámina, utilizando plasma humano o plasma de conejo estéril. Si se realiza en lámina, debe interpretarse como prueba presuntiva y deberá confirmarse con el tubo. I a) prueba de coagulasa en lámina:

Hacer suspensión abundante de la colonia en 0.1 ml de agua destilada estéril sobre una lamina de vidrio, agregar una gota de plasma, mezclar perfectamente. Observar si hay formación de coágulos en 10 segundos. La prueba debe leerse inmediatamente pues pueden obtenerse resultados positivos en un tiempo mayor. Aproximadamente un 10-15% de S. aureus pueden dar resultados falsos negativos, por esta causa en necesario realizar la prueba en tubo. II 2) prueba de coagulasa en tubo: Hacer una suspensión de varias colonias de un cultivo que tanga 18-24 horas de incubación, en 0.5 ml de plasma fresco e incubar a 37 ºC. Observar a partir de las 4 horas siguientes para ver la formación de coagulo. Generalmente el S. aureus puede coagular el plasma en un tiempo de cuatro horas; en ocasiones puede demorar de 8-16 horas. Si el tiempo de incubación se prolonga de un día para el otro, debe tenerse en cuenta que la producción de estafiloquinasa por unas cepas de S. aureus puede lisar el coagulo formado, dando resultados falsos negativos. Si el cultivo utilizado no es puro o el plasma que se utiliza no es estéril pueden ocurrir falsos negativos. c) Resistencia a la novobiocina: Dentro de las especies clínicamente importantes de los Staphylococcus: aureus, epidermidis y saprophyticus; la prueba de resistencia a la novobiocina a una concentración mayor de 1.6 mgr/ml., Para identificar el Staphylococcus saprophyticus, pues es el único que presenta resistencia. Pueden utilizarse discos de sensibilidad antibiótica de 5 mgr/ml. Se prepara una suspensión de la colonia que tenga turbidez de 0.5 de la escala de Mac Farland, esta suspensión se siembra masivamente con un hisopo de algodón sobre una caja de agar Muller Hinton y se coloca un disco de novobiocina sobre la superficie de la caja ya sembrada. Se incuba por 18-24 horas a 37 ºC y se lee la zona de inhibición. Si esta es menor o igual a 16 mm se considera resistencia positiva para la novobiocina.




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STREPTOCOCCUS La familia Streptococaceae esta dividida en 4 géneros: Aerococcus, Leuconostoc, Gemella y Streptococcus. El genero Gamella no esta aun bien definido; aunque las diferentes especies del grupo Viridans podrían considerarse dentro de este genero. El genero Leuconostoc no a sido aislado en humanos. Los géneros Aerococcus y Streptococcus son los que verdaderamente están bien definidos y aislados en procesos infecciosos del organismo humano. El genero Streptococcus puede crecer en condiciones aeróbicas, anaeróbica o en presencia de CO2, son Oxidasa y Catalasa negativos. Con un tiempo de incubación de 18-24horas forma colonias características en agar sangre que son pequeñas, puntiformes y de variada actividad

MUESTRA CLINICA

Agar sangre o caldo de

enriquecimiento

Colonias aisladas observar

hemolisis

Incubación: 36-37 ºC/ 18-

24 horas

Frotis directo de lesión

Gram: cocos Gram

positivos

Es significativo si hay

presencia de abundantes PMN

Abscesos, heridas,

secreciones, otros

Gram: cocos Gram

positivos en racimo

Prueba d susceptibilidad a la

novobiocina

Negativa Positiva

Prueba de Catalasa positiva

(+)

Prueba de coagulasa

S. aureus

(Patógeno)

Resistente Sensible

S. epidermidis

(Patógeno oportunista)

S. saprophyticus

(Patógeno urinario)




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hemolítica. La presencia o ausencia de hemólisis es una de las características que se utilizan para clasificar inicialmente este género.

La hemólisis producida en los glóbulos rojos de cordero pueden ser: alfa, beta, alfa prima y gamma.

ALFA HEMÓLISIS: Cuando se presenta una destrucción parcial de eritrocitos alrededor de la colonia, produciendo coloración verde-marrón. BETA HEMÓLISIS: Una zona clara decolorada alrededor de la colonia, por destrucción total de los eritrocitos, pueden observarse perfectamente.

ALFA PRIMA HEMÓLISIS: Se observa un doble alo de hemólisis alfa y beta consecutivos alrededor de la colonia. Este tipo de hemólisis puede confundirse con una falsa hemólisis beta si se observa a las 48-72 horas de incubación al igual que la hemólisis alfa; de hay que cualquier hemólisis debe ser observada alas 18-24 horas de incubación. GAMMA HEMÓLISIS: No hay actividad hemolítica aparente. Los Streptococcus Beta. Alfa o No hemolíticos pueden ser agrupados de acuerdo a un polisacárido especifica de la pared celular, llamado grupo antigeno streptoccico, que puede ponerse de manifiesto por diferentes procedimientos; precipitación, aglutinación serológica y anticuerpos fluorescentes con antisueros específicos. De acuerdo a lo anterior podemos agrupar los Streptococcus según su antigeno específico y según su hemólisis así: AGRUPAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL GÉNERO STREPTOCOCCUS:

BETA HEMOLÍTICOS A (PYOGENES)

B (AGALACTIAE)

GRUPOS C

D (ENTEROCOCCUS Y NO ENTEROCOCCUS)

F

G

ALFA HEMOLÍTICOS D (ENTEROCOCCUS Y NO ENTEROCOCCUS)

GRUPOS VIRIDANS

S. PNEUMONIAE

AEROCOCCUS

GAMMA HEMOLÍTICOS D (ENTEROCOCCUS Y NO ENTEROCOCCUS)

GRUPOS VIRIDANS

AEROCOCCUS

PRUEBAS BIOQUIMICAS DE IDENTIFICACION




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PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD A BACITRACINA Y OPTOQUINA 1- la inoculación sobre agar sangre cordero debe ser en forma de rejilla donde se ubicaran

posteriormente los sensidiscos.

PRUEBA DE CAMP Es una prueba específica para la identificación presuntiva de Streptococcus beta hemolíticos

del grupo b. cuando el Streptococcus desconocido que debe sea identificado., produce una sustancia conocida como factor CAMP, este se disemina en el medio de agar sangre y al ponerse en contacto con una B-lisina producida por una cepa conocida de S. aureus sembrada perpendicularmente al Streptococcus, la zona de hemólisis entre los dos microorganismos se aumenta, formando una cabeza de flecha moldeada claramente en el punto de la unión beta lisina y factor CAMP. Existen dos maneras de realizar esta prueba, ya sea haciendo la siembra de Staphylococcus sobre la placa de agar sangre para inocular perpendicularmente la cepa de Streptococcus Beta-hemolítico que debe ser identificado. La prueba de CAMP es positiva para Streptococcus Beta-

hemolíticos del grupo B (agalactiae). Algunos Streptococcus del grupo A pueden ser CAMP positivos en atmósfera de CO2 (jarra con vela) PRUEBA DE HIPURATO DE SODIO UNA PRUEBA MAS PARA IDENTIFICAR LOS Streptococcus del grupo B es la hidrólisis del hipurato de sodio. Un tubo de caldo con hipurato de sodio es inoculado con varias colonias de un cultivo puro de Streptococcus desconocido. El caldo se incuba a 35-37 ºC por 18-24 horas, luego se centrifuga y se toma 0.8 ml de sobrenadante en un tubo de ensayo estéril, se le agrega 0.2 ml de reactivo cloruro ferrico y se mezcla perfectamente. La formación de un precipitado denso que permanece por más de 10 minutos indica que la prueba es positiva y el Streptococcus puede ser identificado como presuntivamente del grupo B. Si la prueba es negativa o débilmente positiva, el caldo de hipurato inoculado con las colonias, debe ser incubado por 48 horas seguidas para repetir la prueba. Otro Streptococcus Beta-




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hemolíticos pertenecientes a los grupos S, C, F y G hidrolizan el hipurato. Algunos Streptococcus del grupo D pueden hidrolizarlo pero se diferencian del grupo B por que los D son bilis esculina positivos. PRUEBA DE RESISTENCIA AL TRIMETROPIN-SULFA (SXT) Utilizando discos de sensibilidad que contengan 1.25mgr de trimetropin y 23.75 mgr de sulfametoxasole, obtenidos comercialmente pueden ser separados los Streptococcus B-hemolíticos grupo A y B de otros grupos, por la resistencia presentada por estos dos grupos al trimetropin-sulfa. Los mismos criterios utilizados para la prueba de bacitracina deben ser tenidos igualmente para esta prueba. Los discos SXT son obtenidos comercialmente y son los mismos que se utilizan para las pruebas de sensibilidad antibiótica. Prueba de CAMP STREPTOCOCCUS AGALTIAE Los estreptococos del grupo B (S. agalactiae) producen una proteína difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la beta-hemólisis de Staphylococcus aureus. S. aureus (sembrado desde la parte superior hasta la parte inferior de la placa) produce esfingomielinasa C que se puede unir a las membranas de los eritrocitos. Cuando son expuestas al factor CAMP del grupo B, las células sufren hemólisis. PRUEBA DE TOLERANCIA AL NaCL Los streptococcus del grupo D deben ser diferenciados de los grupos: Grupo D ENTEROCOCO y grupo D NO- ENTEROCOCO. La prueba de tolerancia a la sal (NaCL 6.5%) puede diferenciar fácilmente estos dos grupos. El grupo D ENTEROCOCO (S. faecalis, S. Durans, S. Faecium). Resisten una concentración de

STREPTOCOCCUS

EN ESTUDIO

S. AUREUS B-

LISINA




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6.5% de NaCL adicionando a un caldo de infusión de cerebro corazón desarrollándose allí, enturbiando el caldo de cultivo y algunas veces cambiando el color del indicador de púrpura de bromocresol presente en el medio de cultivo. Si la prueba se realiza sobre placas de agar que contengan la misma concentración de sal y con el mismo indicador, se deben inocular varias colonias de streptococcus problema sobre la superficie del medio, se incuba en una atmósfera aeróbica o en 3-6% de CO2 (jarra con vela) por 24 – 48 horas. La prueba es positiva cuando el crecimiento es visible sobre la superficie del agar. Si no hay crecimiento después de 48 – 72 horas, la prueba es NEGATIVA. IDENTIFICACIÓN DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Dos pruebas fáciles de realizar son suficientes para diferenciar un Streptococcus pneumoniae de otros streptococcus alfa-hemolíticos del grupo viridans. PRUEBA DE OPTOQUINA La prueba de sensibilidad a la optoquina, es utilizada para la identificación presuntiva de streptococcus Pneumoniae. Observar el esquema inicial. Debe utilizarse los mismos criterios para la prueba de bacitracina:

Utilizar discos diferenciales de optoquina obtenidos comercialmente.

El microorganismo problema debe estar en cultivo puro.

Debe utilizarse un inóculo abundante del microorganismo, que se siembra sobre una caja

de agar sangre, repartiendo uniformemente el inóculo sobre la superficie del medio y

colocando encima el disco de optoquina.

Incubar por 18-24 horas a 35 °C en una atmósfera de CO2 (jarra de vela).

Cuando se utilizan discos de optoquina de 6mm, un halo de inhibición de 14 mm es considerado POSITIVO. Si el disco es de 10 mm, un halo de inhibición de 16 mm mínimo debe ser considerado POSITIVO. Halos de inhibiciones menores, deben ser cuestionables y por tanto deberá realizarse una prueba de solubilidad en bilis para confirmar S. Pneumoniae. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDA A LA BACITRACINA Esta prueba puede ser utilizada para la identificación presuntiva de streptococcus beta-hemolíticos del grupo A. (pyogenes) Debe seguirse algunas normas para realizar correctamente esta prueba;

a) Debe realizarse discos diferenciales de Bacitracina con concentraciones de 0.04U.

b) Debe realizarse sobre un cultivo pura de microorganismos, no sobre muestras directas

sembradas en faringe.

c) Debe utilizarse un inóculo concentrado en microorganismos a partir de un cultivo de 18-24

horas en caldo o en agar de sangre. Una asada del cultivo es sembrada uniformemente

Sensible (halo de inhibición) Resistente NO




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sobre una caja de agar de sangre, luego se coloca encima un disco de BACITRACINA. La

placa se incuba de 18-24 horas a 37°C en aerobiósis; cualquier halo de inhibición que se

observe debe ser considerado POSITIVO. Con esta prueba pueden ser identificados

presuntivamente como grupo A, hasta el 95% de streptococcus de éste grupo. Solo debe

hacerse para streptococcus B-hemolíticos, pues algunos streptococcus alfa-

hemolíticos como S. Pneumoniae pueden ser sensibles a la bacitracina, causando

confusión en la identificación de uno u otro.

Si se hace sobre un inóculo que no sea abundante pueden interpretarse resultados falsos negativos por el poco crecimiento obtenido.

Si se inoculan pruebas de bacitracina sobre placas de agar sangre de cordero que han sido sembradas directamente son el hisopado faríngeo, solamente podrán identificarse un 50% de streptococcus grupo A, cuando ellos están presentes en la muestra procesada.

Si por el contrario un cultivo puro de streptococcus es utilizado para realizar la prueba, podrán identificarse presuntivamente un 95% de streptococcus grupo A, cuando el

faríngo-cultivo está positivo para ellos.

AGRUPAMIENTOS DE MICROORGANISMOS DEL GÉNERO

STREPTOCOCCUS

(Reacciones diferenciales)




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CARACTERISTICAS DIFERNCIALES DE LISTERIA SSP.




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ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN Microorganismo del genero listeria

MUESTRA CLINICA




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Pruebas bioquímicas Para diferenciar especies

L.C.R.- hemocultivo- Secreciones genitales- Biopsias endometrio.

Cocos Gram. negativos de crecimiento exigente: NEISSERIAS: Dentro de este género es necesario considerar 2 especies patógenas de la mayor relevancia clínica. Estas dos especies son: N. gonorrhoeae y N. meningitidis, que pueden ser identificadas por procedimientos bacteriológicos y bioquímicos aunque, de acuerdo a la naturaleza de la muestra procesada, puede establecerse presuntivamente la especie. Un esquema de identificación puede observarse a continuación: ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN Microorganismos del genero Neisseria

Coloración gram

Bacilos y cocobacilos Gram-positivos

Agar triprioasa soya Agar infusión corazón + 5% sangre cordero

35-37 grados °C, 24-8h En atmosfera CO2

Aislamiento de colonias Pequeñas, húmedas con beta-hemolosis difusa

Prueba catalasa positiva Prueba motilidad a

20-25 grados C Formación de sombrilla

Por debajo de la superficie del medio de

motilidad

Listeria spp

Coloración de Gram: bacilo corto

Delgado Gram positivo

Presuntivamente




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ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN MICROORGANISMOS DEL GENERO STREPTOCOCCUS

MUESTRA CLINICA

L.C.R-Secreciones-liquido articular

AGAR CHOCOLATE THAYER-MARTIN MODIFICADO

MEDIO NEW YORK CITY

35-37 grados C, 24-48 h. atmosfera

de CO2

Aislamiento colonias Grises húmedas

y brillantes

Prueba oxidasa Positiva

Glucosa (+) Maltosa (+) Sacarosa (-) Lactosa (-)

Otro patrón fermentación

Neisseria spp

Glucosa (+) maltosa (-) Sacarosa (-) Lactosa (-)

Coloración de gram Diplococos gram-

Negativos

Fermentación azucares En medio CTA

N. gonorrhoeae

Neisserias no patogenas

N. meningitidis

Coloración de gram

Diplococos gram- Negativos

Intra y extracelulares

MUESTRA CLINICA

Agar sangre cordero 35-37°C de 18-24 h

Frotis directo Coloreado




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STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Y STREPTOCOCCUS VIRIDANS Tiene en común el tipo de hemólisis que producen: alfa hemólisis. El streptococcus Pneumoniae posee una cápsula fácilmente demostrable con tinta china y en el Gram. se observan como diplococos ligeramente lanceolados. Streptococcus viridans es habitable normal de la faringe de personas sanas. Al Gram. Se observa como un coco Gram. positivo en cadenas.

Hemocultivos LCR

Otros




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En el laboratorio la diferenciación se hace mediante un disco de optoquina que es positivo (inhibición del crecimiento alrededor del sensidisco). Para streptococcus Pneumoniae y negativo para streptococcus viridans. Antibiograma Solo está recomendado hacer sensibilidad a la penicilina porque se han detectado algunas cepas resistentes aun en Colombia. Como drogas para el tratamiento de infecciones por streptococcus Pneumoniae, están:

Penicilina V o G.

Eritromicina.

Cefalosporina IG.

Vancomicina.

Trimetropin sulfa.

Aztronan.

Cinclamicina.

Cloranfenicol.

Para streptococcus viridans cuando produce Endocarditis tampoco se solicita antibiograma pero si existen esquemas de tratamiento. STREPTOCOCCUS BOVIS Crecimiento en NaCL al 6.5% Negativo Bilis Esculina Positiva ANTIBIOGRAMA DE PRIMERA LINEA RECOMENDADO:

Eritromicina.

Cefalosporina IG.

Vancomicina.

Penicilina.

Ampicilina.

ENTEROCOCO FAECALIS Crecimiento en NaCL al 6.5% positivo Bilis Esculina Positiva




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ANTIBIOGRAMA DE PRIMERA LINEA RECOMENDADO EN ENDOCARDITIS Y OTRAS INFECCIONES GRAVES. Penicilina G a Ampicilina + Gentamicina o Estreptomicina Alternativas: Vancomicina + Gentamicina Ampicilina sulbactan + Gentamicina. STREPTOCOCCUS GRUPO B O AGALACTIAE TIPO DE HEMOLISIS

variable (usualmente beta)

PRUEBA PARA SU CLASIFICACIÓN Test de CAMP que utiliza una cepa de streptococcus y se producirá una hemólisis en flecha si el streptococcus es agalactiae

HABITAT NORMAL EN EL HUMANO la vagina de algunas mujeres Enfermedades que producen en el recién nacido meningitis y septicemia. Antibiograma

PenicilinaG.

Ampicilina.

Cefalosporina IG.

Vancomicina.

Eritromicina.

STREPTOCOCCUS BETA HEMOLITICO DEL GRUPO A O PYOGENES PRUEBA PARA SU CLASIFICACIÓN: Sensibilidad a la Bacitracina usando un sensidisco de 0.04 unidades. Otras alternativas para su diagnóstico en el laboratorio son las pruebas rápidas para la detección de antígenos tanto en cultivo como directamente de la muestra del paciente. No está indicado realizar antibiograma ya que no ha demostrado resistencia pero algunos antibióticos recomendados para pacientes alérgicos a la penicilina son:

Eritromicina.

Cefalosporina.

Vancomicina.




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Azitromicina.

Clindamicina.

LISTERIA. El género listeria fue ubicado inicialmente dentro del género corynebacterium pero más tarde fue considerado un género de clasificación indefinida que comprende también los géneros Erysipelotrix y caryophanon. La listeria monocitógenes ha sido especialmente asociada con un amplio rango de infecciones en humanos; la sepsis y la meningitis en pacientes inmunocomprometidos o en recién nacidos. La sepsis y los abortos repetitivos de etiología desconocida en mujeres, durante un embarazo aparente normal, contaminando el feto pueden presentarse con alguna frecuencia. Pueden ser aislado en sangre, LCR, líquido amniótico, secreciones del tracto genital biopsias del endometrio. Se define como bacilo Gram. (+), corto un esporulado. Es anaeróbico facultativo, productor de catalasa y crece en agar infusión corazón o agar triptacasa soya con 5% de sangre descordero a las 24-48 horas de incubación en atmósfera de 3-6% de CO2 (jarra de vela), en aislamiento primario. En agar sangre produce una pequeña sangre de hemólisis alrededor o debajo de la colonia. Una forma sencilla de identificarla presuntivamente es observando su crecimiento característico en forma de sombrilla abierta, en un medio semisólido de motilidad, incubando entre 20-25 °C; por 48-72 horas. Le frotis directo coloreado con Gram. de un sedimento de líquidos orgánicos normalmente estériles como LCR o líquido amniótico puede ser útil para establecer un diagnostico tentativo. En preparaciones de LCR puede localizarse intra y extracelular; pero puede confundirse con corynebacterium, S. Pneumoniae. Streptococcus ssp. O h. influenzae, si la preparación es excesivamente decolorada. La presencia abundante de bacilos cortos, Gram. positivos sugestivos de listeria spp en frotis directos de muestras provenientes de procesos infecciosos mencionados anteriormente pueden ser de alguna ayuda. Algunas pruebas bioquímicas como la fermentación de hidratos de carbono y la prueba de CAMP son necesarias para la identificación de las diferentes especies. La prueba de tolerancia al NaCL puede ser positiva. Una coloración de Gram. de un cultivo puro para observar morfología, la prueba de motilidad a 20-25°C y 37°C y la prueba de catalasa son las más prácticas para la diferenciación entre Listeria spp, streptococcus grupo B, enterococcus y corynebacterium. Los esquemas de identificación están resumidos en los cuadros siguientes:

ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN Microorganismos del género Haemophilus

MUESTRA CLINICA

L.C.R HEMOCULTIVO LÍQUIDO ARTICULAR

Fortis directo colores con Gram

Tracto Respiratorio

Cocobacilos Gram-negativos




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Presuntivamente

AGAR CHOCOLATE

24-48 HORAS

ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN Microorganismos del género Garnerella

ULCERA GENITAL CONJUNTIVITIS

AGAR CHOCOLATE (isovilatex-vancomicina)

(2-4dias) (9dias)

35-37°C En atmosfera de CO2

X solamente no hemolítico H. ducreyi

Agar chocolate mas Bacitracina 24-48 horas

X-V, no hemolítico X-V, hemolítico H influenzae H. hemolyticus V solamente no V solamente Hemolítico hemolítico H. parainfluenzae H. parahemolyticu

Haemophlus spp

Aislamiento de colonias pequeñas, grises, brillantes

Hemolisis en A.S. y factor de crecimiento

Coloración de Gram: cocobacilo. Gram : negativos

Oxidasa (+)

SECRECIÓN VAGINAL

AGAR SNGRE CORDERO AGAR CHOCOLATE

MEDIO G.V

pH2 ml de solución salinaly prueba de amina

Células clave

FROTIS DIRECTO

35-37 °C. 48 horas Atmosfera CO2

Coloración de Gram: células Clave cocobacilos

Gram variables

A, SI Colonias puntiformes, no hemolíticas. A, CHIColonias puntiformes, translucidas.




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A.G.V I agar diferencial para aislamiento de Gardnerella Vaginalis

CLASIFICACIÓN GENERAL FAMILIA: ENTEROBACTERIACEAE




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MICROORGANISMOS ANAEROBICOS




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CLASIFICACIÓN GENERAL

GRAM POSITIVOS GRAM NEGATIVOS

1) BACILOS ESPORULADOS Clostridia

1) BACILOS NO ESPORULADOS Bacteroides Butirivibrio Fusubarcterium Moviluncus Selenomona Succinivibrio

2) BACILOS NO ESPORULADOS Actynomices Arachnia. Eubacterium. Bifidobacterium Lachnospira Lactobacillus

3) FORMAS ESPIRALES Treponema Campylobacter

3.) COCOS Coprococcus Peptococcus Peptostreptococcus Ruminococcus Sarnica Streptococcus.

3.) COCOS Acidaminococcus Veillonella.

SERIES DE ANTIMICROBIANOS




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MICROORGANISMOS GRAM POSITIVOS

Penicilina G Clindamicina. Una cefalosporina de 1a. Generación. Meticlina u Oxacilina de 5 Micgs. Eritromicina. Tetramicina. Vancomicina. Un Aminoglucósido: Amikasina ó Gentamicina ó Netilmicina ó Tobramicina ó Kanamicina.

Cloranfenicol Trimetropim-sulfa Nitrofurantoina* Norfloxaina* Sulfisoxazole* *= solo para infecciones urinarias

STREPTOCOCCUS FAECALIS (Enterococo)

STREPTOCOCCUS GRUPOS VIRIDANS Y NO ENTEROCOCCUS

Ampicilina ó Penicilina G Vancomicina Tetraciclina Eritromicina Nitrofurantoina* Cefalosporina de 1ª. G *= solo para infecciones urinarias

Una cefalosporina de 1a. Generación. Cloranfenicol Norfloxaina* Clindamicina. Eritromicina Penicilina G Tetraciclina Vancomicina. Nitrofurantoina* *= solo para infecciones urinarias




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ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN

Microorganismos no fermentadores

HEMOCULTIVO, SECRECIONES L.C.R. OTROS

AGAR SANGRE y/o FROTIS DIRECTO




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IDENTIFICACIÓN ENTEROBACTERIAS POR CRYSTAL

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO.

Los paneles del sistema de identificación BBL CRYSTAL contienen 30 substratos bioquímicos y enzimáticos deshidratados. Para rehidratar los substratos se utiliza una suspensión de bacterias en el fluido de inoculo del sistema de identificación BBL CRYSTAL E/NF se basan en la utilización y degradación microbiana de substratos específicos detectados por varios sistemas indicadores las reacciones de fermentación detectan la capacidad de un aislado de metabolizar carbohidratos en ausencia de oxígeno atmosférico, y las reacciones de oxidación se basa en la capacidad de un microorganismo de metabolizar el sustrato utilizando el oxigeno como aceptor final de electrones. Ambas reacciones se detectan en general con un indicador de pH en el sustrato de la prueba. Los substratos cromógenos producen, como resultado de la hidrólisis, cambios de color que pueden observarse a simple vista. Además, hay otras pruebas que detectan la capacidad de un microorganismo de hidrolizar, degradar, reducir o de alguna manera utilizar el substrato. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA. El sistema BBL CRYSTAL N/H ID requiere resultados de las pruebas de la oxidasa y del índol. Antes de prepararse los paneles BBL/NF, deben hacerse las pruebas de indol y de la oxidasa a partir del medio no selectivo de menos de 24 horas. Estas pruebas deben hacerse de acuerdo con las instrucciones suministradas en el prospecto incluido con los reactivos. 1. Saque las tapas de la envoltura. Deseche el desecante. Una vez sacadas de la envoltura las

tapas cubiertas deben usarse dentro de 1 hora.

2. Tome un tubo del sistema de identificación BBL CRYSTAL de fluido de inoculo y marque el

número del paciente en la etiqueta. Usando una técnica aséptica, levante una colonia grande y

bien aislada (2 a 3 mm de diámetro o mayor), o 4 ó 5 colonias más pequeñas de la misma

morfología, con la punta de la torunda de algodón estéril (no use torunda de poliéster) o con

un palillo de madera de una placa de sangre como las placas de agar de soja tritipcasa con

5% de sangre de oveja. También se pueden usar placas de agar Mac Conkey.

3. Ponga las colonias en suspensión en un tubo BBL CRYSTAL de fluido de inoculo para la

identificación de patógenos fecales/ enterobacterias.

4. Vuelva ata par el tubo y agite fuertemente por 10 a 15 seg.

5. Tome una base y anote el número del paciente en el costado.

6. Vierta todo el contenido del inoculo en el área demarcada de la base BBL CRYTAL.

7. Tome la base con ambas manos, balanceándola suavemente hasta que los pocillos se llenen

en el inoculo, balancee la base nuevamente para escurrir el exceso de liquido de vuelta al

área demarcada y ponga la base sobre la mesa.

8. Alinee la tapa de modo que el extremo donde se encuentra la inscripción este sobre el área

demarcada de la base.

9. Presione hacia abajo hasta sentir una leve resistencia. Ponga los pulgares a cada lado del

borde de la tapa en el medio del panel y presione hacia abajo simultáneamente hasta que la

tapa se asiente en su lugar (se escucharan dos golpecitos)

PRUEBA DE CULTIVO PURO: Para determinar la pureza del cultivo, levante una pequeña gota del tubo de inoculó con un alambre estéril, antes y después de inocular




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la base, e inocule un tubo de agar inclinado o una placa (cualquier medio de cultivo no selectivo).Deseche el tubo del fluido de inoculo con su tapón en el recipiente para desechos biológicos peligrosos. Incube el tubo 18- 24 horas a una temperatura de 35- 37 °C en una incubadora sin CO2. Este cultivo también puede utilizarse para cualquier prueba suplementaria o en serología si fuese necesario.

INCUBACIÓN: Ponga los paneles inoculados en bandejas de incubación. Se puede poner 10 paneles en una bandeja (5 filas de 2 paneles). Todos los paneles deben incubarse boca abajo (ventana grande hacia arriba-etiqueta hacia abajo) en una incubadora sin CO2 con 40-60% de humedad relativa. No deben apilarse más de 2 bandejas durante la incubación. El tiempo de incubación para los paneles E/NF es de 18 a 20 horas a una temperatura de 35-37°C.

LECTRURA: Después del periodo de incubación recomendado, saque los paneles de la incubadora. Todos los paneles deben leerse boca abajo (ventana grande hacia arriba-etiqueta hacia abajo) usando el visor para paneles BBL CRYSTAL. Consulte la plantilla de reacciones de color y/o la tabla 3 para la interpretación de las reacciones. Use el bloc de resultados para anotar las reacciones.

CALCULO DEL NÚMERO DE PERFIL BBL CRYSTAL: Cada reacción positiva recibe un valor de 4, 0 1, correspondiente al renglón donde se encuentra la reacción. Cada resultado negativo recibe un valor de cero. Los números resultantes de cada reacción positiva en cada columna se suman. Se obtiene de esta manera un número de 10 digito, éste es el número de perfil BBL CRYSTAL

IDENTIFICACIÓN GRAN POSITIVO POR CRYSTAL

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO Los paneles del sistema de identificación BBL CRYSTAL contienen 29 substratos bioquímicos y enzimáticos deshidratados. Para hidratar los substratos se utiliza una suspensión de bacterias en el fluido de inoculo. Las pruebas usadas en el sistema se basan en la utilización y degradación microbiana de substratos específicos detectados por varios sistemas indicadores. La hidrólisis enzimática de los substratos fluorogénicos que contienen derivados cumarinicos del 4- Metil-Umbeliferona-(4MU) o el 7-amino-4-metilcumarin (7-AMC) resulta en un aumento de la florescencia que se detecta fácilmente a simple vista con una lámpara de luz ultravioleta. Los substratos cromogénicos, después de sufrir hidrólisis, producen cambios de color que pueden detectarse visualmente. Además hay pruebas que detectan la capacidad de un organismo de hidrolizar. Degradar o reducir o de alguna forma utilizar en substrato en los sistemas BBL CRYSTAL ID. RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS Los sistemas BBL CRYSTAL ID no deben utilizarse directamente con muestras clínicas. Utilice aislados de un método como agar Columbia con 5% de sangre de cordero (Columbia). También es aceptable el uso de los medios selectivos como agar alcohol feniletilico con 5% de sangre de cordero (PEA) o agar Columbia CNA con 5% de sangre de cordero. No se deben utilizar los medios que contienen esculina. El aislado para la pruebe debe ser un cultivo puro de no más de 18-24 horas para la mayoría de los géneros, cultivos hasta de 48 horas pueden ser aceptables para algunos organismos de crecimiento lento. Solamente debe usarse torundas con puntas de algodón para preparar la suspensión del inoculo. Las tapas deben utilizarse dentro de una hora una vez retiradas de los envoltorios sellados con el fin de asegurar un rendimiento apropiado. La cubierta de plástico debe permanecer en la tapa hasta que se vaya a utilizar.




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PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA:

1. Saque las tapas de la envoltura. Deseche el desecante. Una vez sacadas de la envoltura

las tapas cubiertas deben usarse dentro de 1 hora.

2. Tome un tubo de fluido de inoculo y anote el numero de la muestra del paciente en la

etiqueta, usando una técnica aséptica, levante con la torunda de algodón estéril o con un

palillo de madera o una asa plástica desechable varias colonias de la misma morfología de

uno de los medios recomendados.

3. Ponga las colonias en suspensión en un tubo BBL CRYSTAL de fluido de inoculo.

4. Vuelva ata par el tubo y agite fuertemente por 10 a 15 seg. La turbidez deberá ser

equivalente a un patrón Mc Farland NI 0,5.


6. Vierta todo el contenido del tubo del fluido de inoculo en área demarcada de la base.

7. Tome la base con ambas manos, balanceándola suavemente hasta que los pocillos se llenen en el inoculo, balancee la base nuevamente para escurrir el exceso de liquido de vuelta al área demarcada y ponga la base sobre la mesa.

8. Alinee la tapa de modo que el extremo donde se encuentra la inscripción este sobre el

área demarcada de la base.

9. Presione hacia abajo hasta sentir una leve resistencia. Ponga los pulgares a cada lado del

borde de la tapa en el medio del panel y presione hacia abajo simultáneamente hasta que

la tapa se asiente en su lugar (se escucharan dos golpecitos)

PRUEBA DE CULTIVO PURO: Para determinar la pureza del cultivo, extraiga una pequeña gota del tubo de fluido de inoculo con un alambre estéril, antes y después de inocular la base, e inocule un tubo de agar inclinado o una placa (cualquier medio apropiado) Deseche el tubo del fluido de inoculo con su tapón en el recipiente para desechos biológicos peligrosos. Incube el tubo de agar inclinado o placa durante 24-48 horas a la temperatura de 35-




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A VERSION: 02-2011

37 °C bajo condiciones adecuadas. Este cultivo también puede utilizarse para cualquier prueba suplementaria o en serología si fuese necesario. INCUBACIÓN Ponga los paneles inoculados en bandejas de incubación. Se puede poner 10 paneles en una bandeja (5 filas de 2 paneles). Todos los paneles deben incubarse boca abajo (ventana grande hacia arriba-etiqueta hacia abajo) en una incubadora sin CO2 con 40-60% de humedad relativa. No deben apilarse más de 2 bandejas durante la incubación. El tiempo de incubación para los paneles es de 18-24 h. A 35-37°C. si los paneles se incuban durante 24 horas, estos deben leerse dentro de 30 minutos después de sacarlo de la incubadora. LECTRURA Después del periodo de incubación recomendado, saque los paneles de la incubadora. Todos los paneles deben leerse boca abajo (ventana grande hacia arriba-etiqueta hacia abajo) usando el visor para paneles BBL CRYSTAL. Consulte la plantilla de reacciones de color y/o la tabla 3 para la interpretación de las reacciones. Use el bloc de resultados para anotar las reacciones. CALCULO DEL NÚMERO DE PERFIL BBL CRYSTAL: Cada reacción positiva (excepto 4.A que se utiliza como control negativo de fluorescencia) recibe un valor de 4 o 1, correspondiente al renglón donde se Encuentra la reacción. Cada resultado negativo recibe un valor de cero. Los números resultantes de cada reacción positiva en cada columna se suman. Se obtiene de esta manera un número de 10 digito, éste es el número de perfil BBL CRYSTAL

IDENTIFICACIÓN NEISSERIA/HAEMOPHILUS POR CRYSTAL

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO: Los paneles del sistema de identificación BBL CRYSTAL contienen 29 substratos bioquímicos y enzimáticos deshidratados. Para hidratar los substratos se utiliza una suspensión de bacterias en el fluido de inoculo. Las pruebas usadas en el sistema se basan en la utilización y degradación microbiana de substratos específicos detectados por varios sistemas indicadores. La hidrólisis enzimática de los substratos fluorogénicos que contienen derivados cumarinicos del 4- Metil-Umbeliferona-(4MU) o el 7-amino-4-metilcumarin (7-AMC) resulta en un aumento de la florescencia que se detecta fácilmente a simple vista con una lámpara de luz ultravioleta. Los substratos cromogénicos, después de sufrir hidrólisis, producen cambios de color que pueden detectarse visualmente. Además, hay pruebas que detectan la capacidad de un organismo de hidrolizar RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS Los sistemas BBL CRYSTAL ID no deben utilizarse directamente con muestras clínicas. Utilice aislados de un medio como Agar chocolate, agar soja trypticase con 5% de sangre de cordero (TSA), agar Columbia con 5% de sangre de cordero (Columbia) y agar nutritivo. También es aceptable el uso de los medios selectivos como agar Martín- Lewis. Agar Thayer- Martín modificado (MTM), medio New York City modificado (NYC), agar V (para G. vaginalis) y agar GC-LECT. No se deben utilizar los medios que contengan esculina. El aislado para la prueba debe ser un cultivo puro de no más de 8 a 24 horas para la mayoría de los géneros. Cultivos hasta 48 horas pueden ser aceptables para algunos organismos de crecimiento lento, solamente deben usarse torundas con punta de algodón para preparar la suspensión del inoculo. Las tapas deban utilizarse dentro de una hora una vez retiradas de los envoltorios sellados con el fin de asegurar un rendimiento apropiado, la cobertura de plástico debe permanecer en la tapa hasta que se vaya a utilizar. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA.




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A VERSION: 02-2011

El sistema BBL CRYSTAL N/H ID requiere una tinción de Gram.:

1. Saque las tapas de la envoltura. Deseche el desecante. Una vez sacadas de la

envoltura las tapas cubiertas deben usarse dentro de 1 hora.

2. Tome un tubo de fluido de inoculo y anote el numero de la muestra del paciente en la

etiqueta, usando una técnica aséptica, levante con la torunda de algodón estéril o con

un palillo de madera o una asa plástica desechable varias colonias de la misma

morfología de uno de los medios recomendados.

3. Ponga las colonias en suspensión en un tubo BBL CRYSTAL de fluido de inoculo.

4. Vuelva ata par el tubo y agite fuertemente por 10 a 15 seg. La turbidez deberá ser

equivalente a un patrón Mc Farland Nº 3.


6. Vierta todo el contenido del tubo del fluido de inoculo en área demarcada de la base.

7. Tome la base con ambas manos, balanceándola suavemente hasta que los pocillos se llenen en el inoculo, balancee la base nuevamente para escurrir el exceso de liquido de vuelta al área demarcada y ponga la base sobre la mesa. Antes de colocar la tapa asegúrese de que no haya exceso de líquido entre los pocillos no líquido proveniente del área demarcada en dirección a los pocillos.

8. Alinee la tapa de modo que el extremo donde se encuentra la inscripción este sobre el

área demarcada de la base.

9. Presione hacia abajo hasta sentir una leve resistencia. Ponga los pulgares a cada lado

del borde de la tapa en el medio del panel y presione hacia abajo simultáneamente

hasta que la tapa se asiente en su lugar (se escucharan dos golpecitos).

PRUEBA DE CULTIVO PURO: Para determinar la pureza del cultivo, extraiga una pequeña gota del tubo de fluido de inoculo con un alambre estéril, antes y después de inocular la base, e inocule un tubo de agar inclinado o una placa (cualquier medio apropiado)

Deseche el tubo del fluido de inoculo con su tapón en el recipiente para desechos biológicos peligrosos. Incube el tubo de agar inclinado o placa durante 24-48 horas a la temperatura de 35- 37 °C bajo condiciones adecuadas. Este cultivo también puede utilizarse para cualquier prueba suplementaria o en serología si fuese necesario.




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A VERSION: 02-2011

INCUBACIÓN

Ponga los paneles inoculados en bandejas de incubación. Se puede poner 10 paneles en una bandeja (5 filas de 2 paneles). Todos los paneles deben incubarse boca abajo (ventana grande hacia arriba-etiqueta hacia abajo) en una incubadora sin CXO2 con 40-60% de humedad relativa. No deben apilarse más de 2 bandejas durante la incubación.

El tiempo de incubación para los paneles es de 4 horas a 35-37°C.

LECTRURA

Después del periodo de incubación recomendado, saque los paneles de la incubadora. Todos los paneles deben leerse boca abajo (ventana grande hacia arriba-etiqueta hacia abajo) usando el visor para paneles BBL CRYSTAL. Consulte la plantilla de reacciones de color y/o la tabla 3 para la interpretación de las reacciones. Use el bloc de resultados para anotar las reacciones.

CALCULO DEL NÚMERO DE PERFIL BBL CRYSTAL:

Cada reacción positiva recibe un valor de 4, 0 1, correspondiente al renglón donde se encuentra la reacción. Cada resultado negativo recibe un valor de cero. Los números resultantes de cada reacción positiva en cada columna se suman. Se obtiene de esta manera un número de 10 digito, éste es el número de perfil BBL CRYSTAL

ENFERMEDADES INFECCIOSAS DE LA NASOFARINGE

CULTIVO FARINGE DE RUTINA

TOMA DE LA MUESTRA:




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A VERSION: 02-2011

Bajar la lengua

Frotar ambas amígdalas con un aplicador estéril.

Anotar las características de las lesiones si las hay.

Anotar si el paciente presenta fiebre o si está tomando antibióticos y cuáles.

SIEMBRA:

Agar sangre de cordero o caballo.

Agar chocolate suplementado para niños de menos de 5 años.

No está indicado sembrar caldo.

En los cultivos de rutina para el aislamiento de germen causal de la faringo-

amigdalitis no está indicado el Gram.

INCUBACIÓN

Observar la posible presencia de colonias Beta hemolíticas y cuantificar el crecimiento

anotando como:

Escaso (1 a 10 colonias)

Moderado (10 a 20 colonias)

Abundante (más de 20 colonias)

Sembrar las colonias Beta hemolíticas en un Agar sangre y colocar un disco de

bacitracina de 0.04 unidades.

A las 24 horas de incubación observar la presencia de un halo de inhibición alrededor

del disco de bacitracina y reportar.




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A VERSION: 02-2011

Los Streptococcus beta hemolíticos no grupo a, es recomendable clasificarlos ya que

varios de ellos son agentes causales de faringitis especialmente los grupos B,C,G,F.

Los Streptococcus beta hemolíticos, bacitracina positivos pueden ser recomendados por

otros métodos

OTRAS INVESTIGACIONES EN LA NASOFARINGE

Estudio de portadores sanos de bacterias como Staphylococcus, Enterobacteriaceas,

Streptococcus con fines epidemiológicos o en pacientes inmunosuprimidos.

Estudio de portadores nasofaríngeos de Neisseria Maningitidis en estudio de brotes y/o

relacionados con casos de meningitis meningoccocida

Estudio de Haemophilus influenza en niños menores de 5 años o en otros grupos

susceptibles. También puede estar indicado este estudio en relación con casos de

meningitis por este germen.

Estudio de Corynebacterium diptheriae y otros Corynebacterium (C. Ulcerans, C.

hemolyticum y C pyogenes) en pacientes con sospecha clínica de difteria y estudios

de contactos para encontrar los portadores sanos en caso de brotes de esta

enfermedad.

Búsqueda de Neisseria Gonorrhoeae según solicitud médica expresa por sospecha de

faringitis causada por este germen.

Búsqueda de levaduras tipo cándida en recién nacidos o pacientes inmunosuprimidos.

Evaluación de flora causante de infección nosocomial en pacientes con cirugías de vías

respiratorias o pacientes que presentan faringo- amigdalitis después de incubación u

otros procesos iatrogénicos.

Estudio para gérmenes aerobios y anaerobios de material drenado de abscesos

periamigdalinios

Bordetella pertusis como investigación especial en los medios recomendados para

transporte y aislamiento de este germen. (en INS tiene interés en el reporte de casos)




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A VERSION: 02-2011

Investigaciones de Mycoplasma pneumoniae y Chlamidia tricomatis (RN).

Herpes virus simple y otros virus pueden causar lesiones dolorosas pero usualmente no

pueden ser identificados en los laboratorios de rutina

Investigación de Mycobacterium tuberculosis (35% de los pacientes con TBC sistémica)

Treponema pallidum en lesiones de pacientes con sífilis primaria o congénita.

Secreción que proviene de drenaje de abscesos cervicofaciales para investigar

Actynomices bovis. Blastomycosis suramericana producida por paracoccidioides

brazilensis en la mucosa nasofaríngea y la cavidad oral.

FROTIS Y CULTIVO DE GARGANTA PARA MANIPULADORES DE ALIMENTOS

(REGLAMENTO DEL MINISTERIO DE SALUD PÚBLICA)

toma la muestra de secreción faríngea.

Procesar Gram. e informar en forma descriptiva los gérmenes observados y la presencia

de leucocitos.




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A VERSION: 02-2011

Realizar cultivo en agar sangre.

Informar los gérmenes patógenos cultivados especialmente la presencia de

staphylococcus aureus.

En caso contrario informar “flora normal en orofaringe”

CULTIVO DE ESPUTO Y SECRECIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO

GRAM DIRECTO: Evaluar la flora bacteria, número de leucocitos y números de células epiteliales.

En aumento de 100% evaluar e informar los gérmenes descriptivamente y enviar el resultado

al médico como examen urgente si lo solicita.

Realizar otras coloraciones para hongos o mycobacterias si están indicadas.

SIEMBRA DE RUTINA

Agar sangre.

Agar chocolate suplementado.

EMB o Mac conkey.

Trogliocato.

INCUBACUÓN: En atmósfera de CO2 el agar sangre y el agar chocolate. LECTURA:

A las 24 horas observar en los medios la posible presencia de patógenos, identificar y realizar

los antibiogramas correspondientes.

En caso de no aislar un patógeno reconocido o un germen potencialmente patógeno único o

abundante informar “Flora normal de vías respiratorias altas”.

MICROORGANISMOS DE OJOS, OIDOS, SENOS PARANASALES

OJOS:

Por la constante actividad de limpieza que ejercen las lagrimas y sus componentes antibacterianos.

Flora no patógena oportunista; corynebacterium, staphylococcus epidermis, propionibacterium.

FLORA PATOGENA:




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A VERSION: 02-2011

Staphylococcus aureus, haemophylus, streptococcus pneumoniae, Neisseria gonohorrea, streptococcus B hemolítico y streptococcus hemolítico, moraxella lacunata, acinetobacter calcoal, bacilos coliformes, y otro bacilos entéricos, pseudomona aeroginosa, corynebacterium diphteriae, virus y chlamydias, hongos, anaerobios,mycobacterium y toxoplasma.

TOMA DE MUESTRA:

Se recoge el material purulento en un escobillón estéril de superficie de saco conjuntival inferior i el borde interno del ojo. Este material purulento se inoculará inmediatamente en A-sangre, agar chocolate que se incubará en 10% de CO2 y en un tubo de caldo enriquecido.

Se mantendrán todos los medios durante 48 horas y el crecimiento se identificará por los métodos apropiados.

La conjuntivitis bacteriana aguda es causada por streptococcus Pneumoniae, streptococcus B hemolítico del grupo A, Haemophilus influenzae y streptococcus aureus.

La moraxella lucana es un diplobacilo g (-), corto u grueso, que provoca una conjuntivitis catar al sub aguda o crónica, especialmente grave en el ángulo externo del ojo.

El haemophilus aegyptius agente causal de una conjuntivitis epidémica aguada que recibe el nombre camón de ojo rojo.

El tipo más de infección ocular es la endoftalmitis bacteriana, a menudo esta infección aparece después de una intervención de cataratas y el germen patógeno más común es el stasphylococcus aureus.

Cada vez es mayor el número de stasphylococcus epidermis aislados no se sabe con seguridad si esto presenta el verdadero papel de este microorganismo en la infección o si ello significa que no se han identificado otro microorganismos rebelde.

OIDO:

Los siguientes microorganismos se encuentran en mayor frecuencia en los cultivos de oído:

NO PATOGENOS U OPORTUNISTAS:

Staphylocuccus epidermis, difteroides, bacillus spp, hongo sapropi.

PATOGENOS O PATOGENOS POTENCIALES:




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A VERSION: 02-2011

Pseudomona aeruginosa, staphylococcus aureus, Proteus, Streptococcus hemolítico, Streptococcus B hemolítico, Streptococcus pneumoniae, haemophylus influenza, bacilos entericos, Aspergillus fumigates, Candida albicans, Bacteroides, Fososbacterium y cocos anaerobios.

La supuración del oído en la otitis media crónica revela por lo general la presencia de pseudomonas y proteus. En otitis aguda presenta Streptococcus Pneumoniae, Streptococcus pyogenes y haemophilus influenzae.

TOMA DE LA MUESTRA:

Realizar estricta asepsia, tomar la secreción con escotillón, se hace coloración con Gram. y cultivo en agar sangre, chocolate, mackonkey y tioglicolato, se siembra por agotamiento

SECRECIONES NASALES:

Los cultivos nasofaríngeos tienen importancia para demostrar la presencia de Neisseria menigitidis en caso de sospecha de meningococcemia y meningococcida, se puede recoger el espécimen por la boca, pasando un hisopo de alambre por debajo y por detrás de la úvula hasta la pared posterior de la nasofaringe.

Se debe recordar que la N. meningitidis puede ser recuperada en personas sanas, las cifras de portadores entre los grupos de población que presentan brotes de meningitis pueden llegar al 80 %.

Una sinusitis supurativa aguda puede suceder en un resfrió común o presentarse cuando sea introducido agua infectada en la nariz durante la natación. Los microorganismos aislados con mayor frecuencia son: Streptococcus, Estaphylococcus y neumococcus.

TOMA DE LA MUESTRA:

Se realiza con escobillones flexibles se hace Gram. y se siembra en agar sangre y chocolate, y tioglicolato por agotamiento. Incubar a 37 °C en 10% de CO2 durante 24-48 horas.

FARINGE:

ETIOLOGIA: viral en el 70% y por Estrptococcus del grupo A en 20-30% sobre todos los niños.




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VIRUS: adenositos 25%- rinovirus y coxsaque.

SINTOMAS:

Dolor de garganta

Fiebre

Malestar general

Anorexia

Nauseas

Vomito

SIGNOS:

Enrojecimiento de la pared de la faringe

Secreciones

Inflamación de las amígdalas

Exudado de las membranas

Petequias en el paladar

PATOGENESIS: Infectocontagioso, los astos se elevan 2 aproximadamente 3 semanas después de haber iniciado la infección. TOMA DE MUESTRA: Mientras se mantiene baja la lengua del paciente y la garganta tiene expuesta e iluminada se frota enérgicamente con el escobillón la parte posterior de la misma. Ambas amígdalas y la fosa tonsilar, así como las partes donde hay inflamación, exudados o ulceraciones. Se cultivan en agar sangre y se efectúan picaduras en el medio, utilizando el asa para observar la hemólisis de tipo beta, contención de oxigeno reducida. Se incuban a 35 °C en 10% de co2 durante 24-48 horas. FORMA NORMAL: Estreptococcus hemolíticos, Neisseria, Staphylococcus epydermidis, Staphylococcus aureus, haemoliticus, H. influenza, neumococo, Estreptococcus no hemolíticos, Bacilos difteroides, Coliformes, Levaduras, Anaerobios.




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FLORA PATOGENA: Estreptococcus beta hemolítico del grupo A y a veces los subgrupos B, C y G, corynebacterium diphteriae, meningococo y en niños Haemophilus influenzae. TRATAMIENTO: Estreptococcus grupo A: penicilina benzatinica, si es alérgico Entromicina. Como los anaerobios son productores de B-lactamasa esto puede hacer fallar un poco el tratamiento con penicilina. Haemophilus influenzae el tratamiento con Ampicilina. ESPUTO: La neumonía bacteriana, la tuberculosis pulmonar y la bronquitis crónica constituyen uno de los grupos más importantes de la patología humana. La recuperación del agente etiológico del esputo u otro espécimen apropiado depende no solo de los método s de laboratorio empleados, sino también del cuidado de la obtención de la muestra. A menudo el cultivo del material inadecuado hace que el clínico reciba informes equivocados al no hallar el verdadero microorganismo infectante o por identificación de un patógeno circunstancial. El microbiólogo está autorizado a rechazar una muestra que solo contenga saliva, por considerarla inadecuada para el examen bacteriológico. NEUMONIAS BACTERIANAS:

Mecanismo de defensa pulmonar:

AERODINAMICOS: filtración, impactación y sedimentación.

FISICOS: calefacción, humidificación, tos.

MUCOCILIARES: manto de moco (cubre la vía aérea y se mueve por las cilias) movimiento ciliar.

CELULAS: PMN, linfocitos, macrófagos.

INMUNOLOGICOS: IgA, IgG, IgM, complemento.

BACTERIOLOGICOS: flora normal orofaríngea.

HUMORALES: lisosimas, surfactante. PUERTA DE ENTRADA:

A) vía aérea: nebulizadores mal lavados (causa mas frecuente de incidencia de neumonía por pseudomona)

B) vía hemática C) continuidad

FACTORES QUE PREDISPONEN A BRONCOASPIRACION:

Crisis convulsiva

Depresión neurológica por drogas

Trauma cráneo encefálico

Accidente cerebro vascular




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A VERSION: 02-2011

Parálisis de cuerdas vocales

Trastornos de los mecanismos de deglución PRESENTACION DE LAS NEUMONIAS:

Típica

Atípica

Por brocoaspiración

Por diseminación hemática NEUMONIA TÍPICA:

Es el 80 % de los casos

Historia clínica reciente de infección viral o alcoholismo

Comienzo súbito con escalofríos, fiebre y tos

Dolor pleurítico

Expectoración purulente o berrumbrosa

Taquicardia, poliprea, disnea y cianosis Gérmenes mas frecuentes: Streptococcus pneumoniae, Haemophylus influenzae, Staphylococcus aureus, klebsiella pneumoniae y Streptococcus pyogenes. NEUMONIA ATIPICA:

es el 20 % de los casos

comienzo gradual con malestar, cefalea, tos seca, esputo escaso, disnea y fiebre muy alta.

Gérmenes mas frecuentes: mycoplasma pneumoniae, viral, legionella pneumophila. NEUMINIA POR BRONCOASPIRACION:

comienzo gradual con tos leve y febrícula.

Evolución a tos severa con abundante esputo fétido.

En ocasiones es de evolución rápida y culminante con bacteremia y shock séptico (ancianos)

Gérmenes mas comunes: depende de la flora orofaríngea predominante (anaerobios en asociación con Gram negativos) NEUMONIA POR DISEMINACION HEMATOGENA: Lesiones satélite- heridas- raspaduras, barros que se molestan hasta que se infectan. Gérmenes mas frecuentes: Staphylococcus aureus y E. coolí DIAGNOSTICO: GRAM: El primer paso para el examen del esputo es determinar si la muestra es o no conveniente. Se elige una porción purulenta del esputo y se prepara un extendido coloreado con Gram, y se observa en 10 X el número de células epiteliales planas y de leucocitos polimorfos nucleares. Se cultiva en agar sangre, chocolate y Mckonkey, a 37 °C durante 24 a 48 horas.

INFECCION OCULAR




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CULTIVO DE RUTINA CONJUNTIVA TOMA DE MUETRA:

Idealmente antes de la aplicación de cualquier medicamento local o sistémico. GRAM:

Hacer un frotis para colorear con Gram si la muestra obtenida lo permite. SIEMBRA:

Agar sangre

Agar chocolate suplementado

Caldo INCUBACION:

Atmósfera de CO2 al 4 % durante 24 a 48 horas. LECTURA:

Identificar los gérmenes y practicar antibiogramas con los antibióticos apropiados. OTREO ESTUDIOS RELACIONADOS CON:

Mycobacterium

Treponema pallidum

Hongos y levaduras

Chlamydia

Nocardia

ULCERA DE CORNEA- CULTIVO DE RUTINA TOMA DE MUESTRA:

Debe ser realizada por el oftalmólogo practicando un raspado de la ulcera a la cual se le practicara una coloración de GRAM y un estudio en fresco para buscar hongos.

Estos estudios deben ser informados en forma muy urgente. SIEMBRA:

Agar sangre

Chocolate suplementado INCUBACION:

Atmósfera de 4% de CO2 por 24 a 48 horas se aísla, identifica y se le practica antibiograma correspondiente.

OTROS ESTUDIOS RELACIONADOS CON:

Mycobacterium

Chlamidias

Nocardia




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A VERSION: 02-2011

ENFERMEDADES INFECCIOSAS DEL OIDO

PABELLON AURICULAR:

En las infecciones secundarias a traumas el germen mas frecuente es pseudomona aeruginosa.

Se presentan además lesiones sifilíticas, lepra, tuberculosis y leishmaniasis.

Son frecuentes las dermatitis de contacto sobreinfectadas que ameritan una consulta al dermatólogo.

OTITIS DEL OIDO EXTERNO:

Los gérmenes mas frecuentes son Pseudomona aeruginosa, E. coli y Proteus spp

La forunculosis del conducto auditivo externo suele ser por Staphylococcus aureus.

La otitis externa maligna es una entidad patológica de lata mortalidad en diabéticos y ancianos. El agente causal es la Pseudomona aeruginosa.

Las perforaciones de la membrana timpánica pueden infectarse y aparte de las traumáticas hay de origen sin compromiso del oído medio.

Se presenta también secreción purulenta que sale a través del conducto auditivo cuando hay procesos supurativos del oído medio que rompen la membrana timpánica y drena al exterior. ENFERMEDADES INFECCIOSAS DE LA TROMPA DE EUSTAQUIO:

Están ligadas a las infecciones de la nasofaringe y se producen por las mismas causas. ENFERMEDADES INFECCIOSAS DEL OIDO MEDIO:

La mayoría ocurren por diseminación de patologías nasofaríngeas y d los senos paranasales a través de la trompa de Eustaquio.




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A VERSION: 02-2011

La otitis media es una inflamación aguda de la mucosa generalmente de origen bacteriano o viral, pero se puede producir también por causas físicas, alérgicas, inmunológicas o mecánicas.

Su evolución varía desde la curación espontánea hasta las que dejan secuelas severas y hasta la muerte debido a una meningitis o absceso cerebral.

Si la inflamación de la mucosa se extiende puede llegar a la osteítis, mastoiditis o desencadenar en una otitis crónica supurativa.

La muestra debe ser tomada por el medico mediante paracentesis a menos que el tímpano se rompa y la secreción fluya a través del oído externo. Agentes causales mas frecuentes:

Streptococcus pneumoniae 40%

Haemophilus influenzae 20 %

Virus 20%

Otros 10% como: o Moraxella catarrhalis o Staphylococcus aureus o Mycoplasma sp

OTITIS MEDIA CRONICA:

Cundo ocurren cambios irreversibles en la mucosa del oído medio el proceso se denomina otitis media crónica.

Se forma una colesteatoma compuesto de queratina que se sobre infecta y progresivamente invade el oído medio destruyendo la cadena de huesecillos, provocando fisura y complicaciones endocraneanas algunas veces de evolución lenta y otras pueden llegar a producir la muerte por complicaciones endocraneanas.

Los gérmenes más comunes son:

Pseudomona aeruginosa

Proteus sp

Staphylococcus aureus

Varias especies de Streptococcus

Haemophilus influenzae

Algunos gérmenes anaerobios




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CAVIDAD NASAL Y SENOS PARANASALES CULTIVO NASAL DE RUTINA

Esta indicado en casos de:

Infecciones nasales

Previo a cirugías nasales

Con fines epidemiológicos

Complicaciones con rinitis que evolucionan a infecciones bacterianas. GRAM:

No esta indicado SIEMBRA:

Agra sangre de cordero o caballo

Agar chocolate

Se dividen por mitad y se marcan fosa derecha e izquierda

No esta indicado sembrarlo en caldo INCUBACION:

24-48 HORAS EN ATMOSFERA DE 4% DE CO2 LECTURA:

Identificar e informar los gérmenes encontrados y realizar antibiogramas. INVESTIGACIONES ESPECIALES:

Por solicitud expresa del medico y de acuerdo a la sintomatología del paciente

RINOSCLEROMA: enfermedad granulomatosa destructiva de la cavidad nasal y el tracto respiratorio superior. El agente etiológico es klebsiella rhinoscleromatis. Esta enfermedad




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es endémica en algunos países de Europa central, centro y Suramérica. En Colombia se encuentra en Boyacá, Cundinamarca, Santander, Tolima y Valle.

La klebsiella azanae es el agente causal de la rinitis crónica atrófica caracterizada por un olor fétido

La lepra y la tuberculosis son entidades que pueden tener localización nasofaríngea y por ello es posible que sean solicitados estudios para investigar la presencia de los agentes etiológicos de estas enfermedades.

El treponema pallidum pude producir lesiones en la mucosa nasal en algunos casos de sífilis congénita.

Entre los parásitos que se pueden encontrar en la mucosa nasal están la leishmaniasis muco cutánea.

Numerosas micosis pueden tener esta localización especialmente las producidas por hongos oportunistas y algunos productores de micosis sistémicas mucor, Rhizopus, Rhinosporidium seeberi, Paracoccidiodes brazilences, Histoplasma capsulatum, actinomices israelii y aspergillus.

SINUSITIS:

Es la inflamación de la mucosa de los senos paranasales: frontales, maxilares, esfenoides y etmoides.

Clases:

Infecciosas (virus, bacterias, hongos o parasitos

Alérgicas

Vasomotoras

La muestra debe ser tomada por el medico en el momento en que se haga el drenaje del material purulento acumulado en el seno.

La presencia de un germen en la nariz no tiene ningún significado clínico en términos de la etiología de la sinusitis y por lo tanto no se deben tomar muestras nasales para su diagnostico.

Las muestras enviadas para estudio de la etiología de una sinusitis deben ser estudiadas de acuerdo a la orientación que el medico nos de, de acuerdo a la sintomatología del paciente hay que practicar cultivos aerobios o anaerobios o pruebas especiales de acuerdo a los gérmenes.

Hongos filamentosos:




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Klebsiella ozonae

Eikenella corrodens

Bacteroides sp

Peptococcus sp

Actinomices sp

Ciertos microorganismos se consideran agentes etiológicos de enfermedad si se encuentran en el tracto respiratorio ya que poseen factores de virulencia que se expresan en cualquier huésped.

Entre los mecanismos patógenos que emplean los agentes causales de infecciones del tracto respiratorio podemos mencionar:

o Factores específicos de adherencia

o Producción de toxinas

o Producción de enzimas

o Productos extracelulares que participan en la necrosis tisular y facilitan la formación de abscesos.

o Capacidad para evadir las defensas del huésped mediante capsulas formadas por

polisacáridos que sirven para evadir fagocitosis

o Algunos patógenos respiratorios avaden el sistema inmune del huésped multiplicándose dentro de las células como las Chlamydias.

o Microrganismos que son englobados por las células fagocíticas del huésped dentro de las cuales se multiplican como el Mycobacterium tuberculosis.

Patógenos definidos del tracto respiratorio:

Corynebacterium diphitheriae (productor de toxina)

Neisseria gonorrhoeae

Mycoplasma pneumoniae

Chlamidia tracomatis

Bordetella pertusis




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A VERSION: 02-2011

Legionella sp

Histoplasma capsulatum

Coccidioides immitis

Cryptococcus neoformasn

Blastomyces dermatitidis

Francisella tularensis

MICROORGANISMOS QUE CAUSAN INFECCION EN LAS VIAS RESPIRATORIAS INFERIORES

El tracto respiratorio empieza en el pasaje nasal u oral y se extiende a través de la nasofaringe y la orofaringe hasta la traquea y luego hacia los pulmones. Diversos mecanismos protegen el tracto respiratorio de las infecciones entre ellos los pelos, pasajes contorneados y mucus que tapizan los cornetes nasales. La flora normal de la nasofaringe y orofaringe previene la colonización del tracto respiratorio por microorganismos patógenos. En determinadas circunstancias como un daño previo causado por una infección viral, daño físico del epitelio por el cigarrillo o perdida de las defensas inmunitarias del huésped estos microorganismos pueden causar enfermedad. Microrganismos que ocasionalamnete pueden ser patógenos:

Estreptococcus no beta hemolítico

Stapylococcus coagulasa negativa

Micrococcus

Corynebacterium sp

Neisseria sp (excluyendo meningitidis y gonorrhoeae)

Lactobacillus sp

Veillonella sp

Espiroquetas

Microrganismos posibles patógenos:


Revisó: Dra. Yanith Piragauta

Gutierrez

Validó: Dr. Fernando Anibal

Peña Diaz

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A VERSION: 02-2011

Acinetobacter

Streptococcus viridans

Streptococcus pnuemoniae

Staphylococcus aureus

Mycoplasma sp

Haemophimus influenzae

Haemophilus parainfuenzae

Moraxella catarrhalis

Candida albicans

Virus herpes simple

Enterobacteriaceae

Mycobacterium sp

Pseudomonas sp

Bacillus anthrax

Yersinia pestis

Pseudomona pseudomallei

Coxiella burnetti

Chlamidia psittaci

Brucella sp

Salmonella sp

Pasteurellamultocida

Klebsiella rhinoscleromatis

MICOLOGIA Cantidades de material recomendadas para un estudio micológico TIPO DE MUESTRA Sangre (serología) Médula ósea Esputo Lavado bronquial LCR Pelos Piel Tejidos Orina Pus-Exudados Exudado otico

CANTIDAD MINIMA 10 ml adultos, 5 ml niños 0,2 ml frotis, 1 ml cultivo 5 ml 10ml 5ml 15 fragmentos Raspados y fragmentos cortados El mayor fragmento posible 10 ml 3ml 2 escobillas o raspado

Envió de muestras Pelo, escamas y uñas. El transporte inmediato es preferible pero no indispensable. Los hongos pueden ser aislados después de varias semanas, si se tienen recipientes estériles. Suero. En un tubo tapa rosca o con tapón de caucho. LCR. Debe enviarse en un tubo estéril, perfectamente tapado con tapa de rosca o caucho y refrigerado. Las otras muestras en las cuales se investiga micosis; esputo, orina, sangre, pus, etc., deben ser procesadas inmediatamente y en casos especiales iniciar el cultivo.




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A VERSION: 02-2011

TABLA No. 1 CARACTERISTICAS DE LAS ESTRUCTURAS MICOTICAS OBSERVADAS AL EXAMEN DIRECTO

MORFOLOGIA ORGANISMOS TAMÑO (diámetro en micras)

CARACTERISTICAS

LEVADURAS Histoplasma capsulatum

2-5 Ovales a redondeadas; frecuentemente intracelulares: la retracción de la membrana celular al ser teñida simula una capsula; hay gemación de una o varias blastoconidias.

Cryptococcus neoformans

2-15 Tamaño variable; gemación generalmente única; capsulas de diferentes tamaños.

Paracoccidioides brasiliensis

5-60 Blastoconidias multigemantes de tamaño variable; pared gruesa, refringente; inclusiones intracitoplasmaticas.

LEVADURAS Y SEUDOHIFAS O HIFAS VERDADERAS

Candida sp 3-4 5-10

Numero de gemas variables; ovaladas a redondas. En las seudo hifas las blastoconidias permanecen unidas formando una depresión (como cintura) en el sitio de unión.

TABLA No. 1 CONTINUACION




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A VERSION: 02-2011


CARACTERISTICAS

LEVADURAS E HIFAS

Malassezia furfur 3-8 2.5-4

Blastoconidias unigemantes, de pared gruesa, permanecen en acumulos. Las hifas son cortas, gruesas y poco ramificadas

HIFAS SEPTADAS Zigomicetos 10-30 Hifas anchas con ramificaciones

HIFAS SEPTADAS HIALINAS

Dermatofitos en piel En cabello (endo-ectotrix) Endotrix

3-5 Diámetro y espesor de la pared variables. Pueden presentar cadenas de artroconidias. En la periferia del cabello predominan las artroconidias formando una vaina; en el interior hifas. Hifas y artroconidias en el interior del pelo.



CARACTERISTICAS

HIFAS SEPTADAS HIALINAS (HIALOHIFOMICOSIS)

Aspergillus sp. Pseudallescheria boydii Fusarius sp

3-12 3-12

Las hifas se ramifican en ángulo de 45, pueden observarse clamidioconidias. Imposible diferenciar de aspergillus y otros mohos monillaceos. Las hifas semejantes a las de aspergillus, pseudallescheria y otros mohos hialinos.

HIFAS SEPTADAS DEMATIACEAS (FEOHIFOMICOSIS) TIÑA NIGRA

Bipolaris sp. Curcularia sp. Exserohilus sp. Exhopiala sp. Wangiella dermatitidis Xilophypha bantiana Phaeoannellomyces werneckii

2-5 1.5-5

Hifas dematicas polimorfas; en algunos casos asociadas con artroconidias clamidioconidias y en hongos dimorficos a blastoconidias.





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A VERSION: 02-2011


CARACTERISTICAS

ESFERULAS Coccidioides inmitis 10-200 Varían en tamaño algunas contienen endosporas otras se encuentran vacías.

ESPORANGIO Rhinosporidius seeberi

6-300 Esporangios grandes, de paredes gruesas, conteniendo esporangiosporas.



CARACTERISTICAS

GRANULO Eumicetoma 65-100 Hifas septadas entrelazadas formando una masa o granulo. Las hifas pueden ser hialinas o dematiaceas, asociadas o no por medio de una matriz como cemento.

ASCOCARPO U ASCOSTROMA

Piedra negra variable Ascocarpo dematiaceo conteniendo ascos con ascosporas bitunocadas en forma de hoz

NODULO DE HIFAS, ARTROCONIDIAS Y BLASTOCONIDIAS

Piedra blanca Variable Las hifas hialinas se fragmentan en artroconidias rectangulares a veces con extremos redondeados. las blastoconidias son difíciles de ver.

ADAPTADO DE: Merz WG, Roberto GD. Detection and recovery of fungi from clinical specimens. Chapeter 58. MANUAL OF MICROBIOLOGY. FIFTH ED. Balows a, hausier WJ, Hermann KL, Isenberg HD, Shadomy HJ (Eds). American society for microbiology. Washington D.C. 1991. TABLA No. 2 INFORME EXAMENES DIRECTOS

MICOSIS INFORME:




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A VERSION: 02-2011

SUPERFICIALES Al examen directo se observa

Pitiriasis Blastoconidias y restos de micelio de MALASSEZIA FURFUR

Tinea nigra Hifas septadas, pigmentadas (blastoconidias) compatibles con : PHAEOANNELLOMSYCES WERNECKII

Piedra blanca Nódulo de piedra blanca

Piedra negra Nódulo de piedra negra

MICOSIS INFORME:

Dermatofitosis Restos de micélio o pseudomicelios; Pelo: invasión tipo endotrix, invasión tipo ectotrix Cantidad: escasa, moderada, abundante.

Dermatomicosis Restos de micelio y pseudomicelio

Candidiasis 1. Blastoconidias, pseudomicelios. Tipo candida.

2. Blastoconidias:

Cantidad Uñas Flujo

Escasa 1-5 1-10

Moderada 5-10 10-20

Abundante Mas 10 Mas 20

Cm x 40





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MICOSIS SUBCUTANEAS

INFORME: Al examen directo se observa

Esporotricosis Cuerpos asteroides (biopsia)

Cromoblastomicosis Células escleróticas de Mediar

Micetomas Actinomicoticos: gránulos de azufre compatibles con actinomicetos Euicoticos: gránulos compatibles con mohos dematiaceos o hialinos.

Lobomicosis Blastoconidias compatibles con loboa loboi

Feohifomicosis Hifas septadas, pigmetadas, compatibles con feohifomicosis.

MICOSIS


Coccidioidomicosis Esferulas compatibles con coccidioides immitis

Blastomicosis Levaduras unigemantes compatibles con Blastomyces sp.

Rinosporidiosis Esporangios compatibles con Rhinosporidium seeberi

Rinosentom oftoromicosis Hifas septadas hialinas


MICOSIS SISTEMICAS


Criptococosis Blastoconidias encapsuladas compatibles con cryptococcus sp.

Paracoccidioidomicosis Blastoconidias multigemantes compatibles con paracoccidioidomicosis brasilensis

Histoplasmosis Blastoconidias intracelulares compatibles con Histoplasma capsulatum

Aspergillosis Hifas hialinas, dicótomas, septadas, compatibles con aspergillus.

Zigomicosis Hifas hialinas, septadas, compatigles con zigomiceto.

Hialohifomicosis Hifas septadas hialinas, blastoconidias compatibles con Hialofeohifomicosis.

PROTOCOLO PARA PROCESAR UROCULTIVOS OBJETIVO: aislar e identificar microorganismo enteropatógenos (salmonella, Shigella, Yersinia, Vibrio cholerae.




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A VERSION: 02-2011

TPO DE MUESTRA: Materia fecal recogida en un escobillón carbonatado, esto por la labilidad de bacterias enteropatógenos en especial para la búsqueda de Vibrio cholerae, se debe recogen en las primeras 24 horas después de iniciados los síntomas y antes de empezar el tratamiento, en este se debe impregnar el escobillón carbonatado con materia fecal o tomar la muestra directamente del recto; se introduce el escobillón en el tercio superior del medio CARY-BLAIR, cortar el sobrante del escobillón, ajustar la tapa y enviar al laboratorio a 25° C. PROCEDIMIENTO: Con el escobillón frotar sobre los medios de MACConkey, XLD y TCBS, además en agua peptonada y caldo selenito, si la muestra proviene de un niño o paciente inmunosuprimido sembrar en agar sangre, sembrar por agotamiento, reincubar de 35-378 °C de 18-24 horas, a las 4 horas de la primera siembra se hacen repiques a partir de selenito en XLD y MACConkey, también de agua peptonada en TCBS en caso de sospechar un Vibrio. Cholerae, se deja reincubar de 18-24 horas. Se hace lectura según crecimiento en MACConkey, observar crecimiento de colonias lactosa positiva y negativa, en XLD crecimiento de colonias H2S positivas y no fermentadoras, a las no fermentadoras realizar la prueba de oxidasa. En TCBS observar crecimiento de colonias amarillas fermentadoras de sacarosa; se subcultiva en un medio no diferencial para realizar la prueba de la cuerda y oxidasa. Realizar pruebas según criterio de bacteriólogo (tener vigilancia en caso de enterocolitis necrotizante en servicio de RN klebsiella pneumoniae) En caso de ser negativos se informa como negativo para crecimiento de enteropatógenos salmonella, Shigella, Yersinia y Vibrio. EXAMEN MICROBIOLOGICO DE SECRECIONES PURULENTAS DE HERIDAS QUIRURGICAS

O TRAUMATICAS

EXAMEN MICROBIOLOGICO DE LIQUIDOS EXTRAIDOS DE CAVIDADES: TOMA DE LA MUESTRA: Idealmente el material purulento aspirado con una jeringa, enviado al laboratorio es el mismo. Si se toma la muestra con aplicadores, existen pocas probabilidades de recuperar gérmenes anaerobios u otros de difícil crecimiento, en este caso se puede entregar un medio de transporte, EL cual mejoraría un poco la recuperación de gérmenes. El material puede ser tomado durante un procedimiento quirúrgico. GRAM Es indispensable no solo como ayuda oportuna al médico para orientar le tratamiento si no también como guía del microbiólogo para tomar determinaciones a cerca de medios a emplear y atmósferas de incubación. SIEMBRA: Una retina puede incluir:

- Agar sangre

- Tioglicolato

- Macconkey o EMB

INCUBACION:

- Agar sangre en C02 al 5% por 24 a 48 horas

- MACConkey o EB o caldo en aerobiosis por 24 horas

LECTURA DE CULTIVOS

- Leer los medios sólidos a las 24 horas e iniciar la identificación de los microorganismos.




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A VERSION: 02-2011

- Reincubar si es necesario el agar sangre y el agar chocolate y CO2 por 24 horas mas

- Mirar el caldo y si sui turbidez, su olor y los resultados del Gram si lo justifican montar

los medios para anaerobiosis.

MATERIAL PYURULENTO O LIQUIDO DE CAVIDADES ENTEROBACTERIAS

- Gentamicina

- Amikacina

- Aztreonan

- Cefalosporina

- Cloranfenicol

- Ceftriazona

- Ciprofloxacina

Opcionales

- Ceftaxidime

- Imipimem

- pefloxacina

- Cefixima

STREPTOCOCCUS

- Vancomicina

- Penicilina

- Ampicilina

ENTEROCOCOCS:

- Vancomicina

- Ampicilina

- Ciprofloxacina

- Gentamicina

- Amikacina

LOS INFORMES DEBEN INCLUIR: Los resultados de los cultivos aerobios y anaerobios y el resultado del Gram inicial. Los antibiogramas se realizan para cada germen aislado de acuerdo a las características y localización. ANTIBIOGRAMA Un esquema para este propósito en primera fila. HERIDAS Y ABSCESOS (para abscesos no incluir aminoglucidos) Enterobacterias

- Gentamicina

- Amikacina

- Perfloxacina

- Cefalosporina

- Trimetropin sulfa

- Cefuroxime

- Ciprofloxacina

- Ampicilina sulbactan




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A VERSION: 02-2011

PSEUDOMONAS:

- Gentamicina

- Amikacina

Aztreonan

- Ceftaxidime

- Imipimem

- Ciprofloxacina

STAPHYLOCOCCUS

- Ampicilina sulbactan

- Eritromicina

- Prostaficlina

- Vancomicina

- Cefalosporina

- Clindamicina

- Ciprofloxacina

- Teicoplanina

ANTIBIOGRAMAS DE PRIMERA LINEA PARA MUESTRAS DIFERENTES DE ORIAN EN LAS QUE AISLEN STAPHYLOCOCCUS

NIÑOS ADULTOS

PENICILINA 10 U IMIPEMEN

CEFTAXIDIME 30 MCG FLUOROQUINOLONA

UNASYN 20 MCG UNASYN 20 MCG

PROSTAXIFILINA 1 MCG ERITROMICINA 15 MCG

OXACILINA 1 MCG PROSTAFILINA – OXACILINA 1 MCG

VANCOMICINA 30 MCG VANCOMICINA 30 MCG

CLINDAMICINA 2 MCG CEFALOSPORINA IG 30 MCG

CLINDAMICINA 2 MCG

PENICILINA 10 U

TEICOPLANINA 15 MCG

Si es productor de betalactamasa no incluir penicilina.

TOMA Y PROCESAMIENTO DE HEMOCULTIVO

TOMA Y PROCESAMIENTO D ELA MUESTRA Elementos:

- Guantes

- Gasa o algodón estéril

- Alcohol al 70%

- Solución de yodo acuoso al 2% (isodine)

- Jeringa estéril desechable

- Medios de cultivo: se utilizan viales de cultivo Bactec pediátrico o adulto, caldo enriquecido

de digerido de soya, caseína y CO2.

Preparación del paciente:

- Inserte la aguja dentro de la vena y proceda a la extracción de la sangre (vial pediátrico

de 3 ml o para adulto de 5-7 ml).




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A VERSION: 02-2011

- Realice la inoculación en el medio, a través del tapón de caucho de la botella, sin cambiar

la aguja.

- Desinfecte previamente el tapón con la solución de yodo.

- Inocule suavemente la sangre y mezcle por inversión unas 6 veces.

o Limpie nuevamente el tapón

o Marque las botellas en el rotulo – no escribir sobre el código de barras-

o Remitir la botella inmediatamente al laboratorio

- Incube a 37°C hasta por 5 días en el Bactec9050

- Descarte la aguja y la jeringa en un recipiente de seguridad

BACTEC 9050 Incubador utilizado para una rápida detección de bacterias y hongos en los cultivos de sangre. Cuenta con una capacidad para 50 viales y maneja una temperatura de 35 °C +/- 1.5°C. Cada botella dura en incubación 5 días, tiempo suficiente para detectar los hemocultivos negativos. FUNDAMENTO: Cada frasco o vial contiene un sensor fluorescente que puede detectar aumentos de dióxido de carbono producido por el crecimiento de microorganismos. Cada 10 minutos el instrumento verifica el aumento de la fluorescencia del sensor, la que se relaciona con la cantidad de dióxido de carbono presente. Se han descrito resinas para tratar las muestras de sangre viables dentro del frasco. Se deben usar antes y después de su inoculación en los medios de cultivo. A los medios de cultivo Bactec se han incorporado resinas para mejorar la capacidad de recuperación de microorganismos sin necesidad de ningún tratamiento especial. Un resultado positivo indica la presencia de microorganismos, se deben efectuar entonces 3 subcultivos: agar sangre, A. chocolate y A. MACConkey. PRECAUCIONES: Se debe examinar cada frasco antes de usarse para ver si se presentan daños (contaminación o deterioro) por ejemplo: turbidez, decoloración, tapón hinchado y rupturas.

PROTOCOLO PARA TOMA DE MUESTRAS EN CASO DE BROTES OBJETIVO: identificar durante la aparición de un brote en ambiente hospitalario, la fuente del microorganismo causante del mismo, para tal caso se debe tomar muestras de superficies tales como: lavamanos, cunas, lámparas, succionadores, equipo de uso común (pesa bebe, brazaletes de tensiómetros), elementos para toma de signos vitales; así mismo identificar posibles portadores por medio de cultivo faríngeo.

1. Identificar las áreas específicas donde se han presentado los casos de brotes.

2. La técnica utilizada es el hisopado cualitativo en el que se pasa el escobillón sobre las

superficies en estudio, este se deposita en caldo tioglicolato y se deja incubar por 72

horas a 37°C, se revisa cada 24 horas, cualquier tipo de crecimiento evidenciado por

turbidez, amerita repique en agar sangre y A. MACConkey para hacer su correspondiente

identificación. También se toma muestras del medio ambiente dejando la caja de agar

sangre destapada por un lapso de 5 minutos.

3. Para estudio de faringes de personas que se encuentre en contacto con los pacientes y/o

áreas implicadas se cultiva a partir de hisopado faríngeo sobre agar sangre para su

correspondiente identificación.

COLORACION DE GRAM

IMPORTANCIA




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A VERSION: 02-2011

La coloración de Gram es la más importante en bacteriología, permite en la mayoría de los casos establecer un diagnostico presuntivo, teniendo en cuenta los siguientes aspectos:

- Morfología celular

- Características tintoriales

- Agrupación celular

FUNDAMENTO La pared celular como elemento obligado de la estructura bacteriana representa aproximadamente el 20% del peso en seco de un microorganismo. La pared puede ponerse de manifiesto mediante la tinción por el método de Gram, que permite de acuerdo con su afinidad tintorial dividir las bacterias en dos grandes grupos: GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS: ambos tipos de bacterias poseen un componente común que es el PEPTIDOGLICANO. Este es muy abundante en las bacterias Gram positivas (50-90%) y escasos en las Gram negativas (aprox. 10%). Además las bacterias Gram positivas poseen en su pared ácidos teicoicos que intervienen en el mantenimiento de la integridad de la pared. Las bacterias Gram positivas resisten la decoloración con el alcohol cetona y retienen el colorante primario (cristal violeta), mientras que las Gram negativas se decoloran y toman la coloración de contraste (fucsina). MUESTRA: El material de estudio puede proceder de un producto cualquiera: pus, exudado, liquido cefalorraquídeo, liquido pleural, secreciones o de un cultivo microbiano puro. PROCEDIMIENTO Una vez seco y fijado al calor, tratar el frotis de la siguiente manera:

- Teñir el frotis durante 10 segundos con el cristal violeta (ref. 12214)

- Lavar con agua corriente y escurrir

- Cubrir con la solución de lugol (ref.12213) y dejar 10 segundos


- Decolorar con el alcohol cetona (ref.12211) por 30 segundos


- Cubrir con la coloración de contraste: fuscina (ref. 12212) o safranina (ref.12215) por 10

segundo.

- Lavar con agua corriente y limpiar el exceso de colorante.

- Secar y examinar al microscopio.

-

NOTA: cuando utilice como coloración de contraste safranina, decolore con alcohol etílico al 95%. CONTROL DE CALIDAD Hacer frotis de sepas conocidas de bacterias Gram positivas y Gram negativas. Se recomienda filtrar semanalmente los colorantes. Cada laboratorio puede estandarizar sus tiempos de coloración OBSERVACION ESPERADA: Recorrer la preparación cuidadosamente observando la morfología predominante bacilar, cocobacilar o esférica tipo coco, agrupación: ninguna, en cadena, pares o en racimo. Al microscopio las bacterias Gram positivas se ven de color Violeta- Azulado y las Gram negativas Rojas. ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO: Todos los reactivos empleados deben conservase a temperatura ambiente. Estables hasta la fecha de expiración indicada en la etiqueta. UNA REACCION NEGATIVA FALSA:

- No se dejó actuar suficientemente el lugol




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A VERSION: 02-2011

- Se sobre decoloro

- Cultivos viejos o en medios pobres en nutrientes, toma irregularmente la coloración.

- Algunos géneros bacterianos toman irregularmente el colorante.

RECOMENDACIONES:

- Usar portaobjetos nuevo.

- Lavarlos con jabón de manos

- Sumergirlos en alcohol y secarlos

- Usar colorantes y decolorantes de buena calidad

- Realizar personalmente la coloración o entrenar muy bien a quien lo realiza

CONTROL DE CALIDAD DE LOS COLORANTES DE GRAM Realizar control de calidad con sepas ATCC Streptococcus 19615, E. Coli 25922 periódicamente. Cada vez que se preparen colorantes o cuando se note irregularidad en la coloración. RECOMENDACIONES SI SE PREPARAN COLORANTES:

- Usar colorantes con sello de aprobación de la “biological stain commission” o sus

equivalentes.

- Pesar exactamente la balanza analítica.

- Moler el colorante en mortero y añadir el colorante lentamente.

- Dejar los colorante es reposo mínimo 24 horas después de preparados.

- Filtrar siempre antes de usarlos.

- Preparar soluciones diluidas en pequeñas cantidades a partir de soluciones madres.

- Rotular con nombre del colorante, concentración y fecha de preparación.

- Conservar las soluciones fuera de la luz solar directa y en frascos adecuados en cuanto a

color, material y sello de la tapa.

- Usar diluyentes y decolorantes (alcohol etílico, acetona) puros y con la certificación

adecuada.




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A VERSION: 02-2011

REPORTES

INFORME DEL EXAMEN DIRECTO DE ORINA COLOREADA CON GRAM

FECHA :________________________________

HORA DE TOMA :________________________

NOMBRE DEL PACIENTE ___________________

HISTORIA CLINICA: _______________________

RESULTADO PMN x cm 1000x Objetivo 100x BACTERIAS x cm 1000x

Objetivo 100x CELULAS EPITELIALES (Contaminación con flujo vaginal) Nota: es un examen de urgencias que requiere un informe inmediato

0____ 1-5_____ 6-10______ >10_________

0____ 1-5_____ >5______

Cocos:______ Bacilos ______ Cocobacilos _____ Agrupación ______________________________________ Coloración Gram Positivos_____ Negativos _______

Escasas____ Moderadas _____ Abundantes ____




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A VERSION: 02-2011

INFORME DEL EXAMEN DIRECTO DE LCR U OTRO LÍQUIDO CORPORAL COLOREADO CON GRAM

NOTA: este examen debe hacerse del sedimento, después de centrifugar a 1000 gravedades por 15 minutos. FECHA :________________________________

HORA DE TOMA :________________________



RESULTADO PMN x cm 1000x Objetivo 100x BACTERIAS x cm 1000x Objetivo 100x

NOTA: es un examen de urgencias que requiere un informe inmediato

0____ 1-5_____ 6-10______ >10_________

0____

1-5_____ >5______

Cocos:______

Bacilos ______ Cocobacilos _____

Agrupación ______________________________________ Coloración Gram Positivos_____ Negativos _______





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A VERSION: 02-2011

INFORME DEL EXAMEN DIRECTO DE ABSCESO – MATERIAL PURULENTO COLOREADO CON GRAM

FECHA :________________________________

HORA DE TOMA :________________________



RESULTADO PMN x cm 1000x Objetivo 100x BACTERIAS MORFOLOGIA GRAM + GRAM - Coco _______________ _________________ __________________ Bacilos _______________ _________________ __________________ Cocobacilos _______________ _________________ __________________

CANTIDAD: NOTA: es un examen de urgencias que requiere un informe inmediato

0____ 1-5_____ 6-10______ >10_________

Flora mixta sugestiva de infección por anaerobios

_______________________________________


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