microorganismos del aire interno del mercado modelo
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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES DEPARATAMENTO ACEDEMICO DE CIENCIAS AMBIENTALES INFORME DE PRÁCTICA PRE PROFESIONAL Microorganismos del aire interno de seis sectores del mercado Modelo de Tingo María EJECUTOR :TORRES CÁRDENAS, Diana Carolina. ASESOR :Mcblgo. Btcnlgo. Dr. Sc. LÓPEZ LÓPEZ, César Samuel. ÁREA :Laboratorio de microbiología de la Universidad Nacional Agraria de la Selva. LUGAR : Tingo María - Huánuco. SUPERVISOR : Ing. Richar Sias Rodríguez. INICIO :17 de Enero del 2011 CULMINACION :17 de Abril del 2011 TINGO MARIA, PERÚ 2011
Transcript of microorganismos del aire interno del mercado modelo
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
DEPARATAMENTO ACEDEMICO DE CIENCIAS AMBIENTALES
INFORME DE PRÁCTICA PRE PROFESIONAL
Microorganismos del aire interno de seis sectores del mercado
Modelo de Tingo María
EJECUTOR :TORRES CÁRDENAS, Diana Carolina.
ASESOR :Mcblgo. Btcnlgo. Dr. Sc. LÓPEZ LÓPEZ, César Samuel.
ÁREA :Laboratorio de microbiología de la Universidad Nacional
Agraria de la Selva.
LUGAR : Tingo María - Huánuco.
SUPERVISOR : Ing. Richar Sias Rodríguez.
INICIO :17 de Enero del 2011
CULMINACION :17 de Abril del 2011
TINGO MARIA, PERÚ
2011
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CONTENIDO
Página
I. INTRODUCCIÓN…………………..………………………………...................... 6
1.1 Objetivos…………………….……………………………………................... 7
1.1.1. Objetivo general…………………................................................... 7
1.1.2. Objetivos específicos.................................................................... 7
II. REVISIÓN DE LITERATURA…………………………………....….....……...... 8
2.1 Mercado Modelo de la ciudad de Tingo María…………………............... 8
2.2 Residuos sólidos en el mercado Modelo de Tingo María……….....…..... 8
2.3 Medidas de higiene en el mercado Modelo de Tingo María…................ 9
2.4 Microorganismos del aire…………………............................................... 9
2.5 Tipos de microorganismos……………………......................…................ 10
2.5.1. Bacterias…………………………................................................... 10
2.5.1.1. Género Enterobacter……………………....……...….......... 11
2.5.1.2. Género Serratia…………………………......……...……...... 11
2.5.1.3. Género Escherichia…………………………..…….............. 12
2.5.2. Hongos…………………………………………………………........... 13
2.5.2.1. Género Aspergillus……………………………......….......... 13
2.5.2.2. Género Penicillium………………………...….…................ 14
2.5.2.3. Género Fusarium…………………………………............... 14
2.5.2.4. Género Geotrychum……………………………….............. 15
2.5.2.5. GéneroSaccharomyces…………………………............... 15
2.5.2.6. Género Trichophyton……………………………................ 15
2.5.2.7. Género Muccor………….……………………..…............... 16
2.5.2.8. Género Botrytis……….…………………………................. 16
2.6. Requerimientos Nutricionales………........................................................ 16
2.6.1. Fuentes de Energía…………..…………….......…………................. 16
2.6.2. Fuentes de carbono…………………..…………....……………........ 17
3
2.7.Factores ambientales que intervienen en el desarrollo de los
microorganismos................................................................................................... 18
2.7.1. Humedad relativa……………………………………..…………...... 19
2.7.2. Temperatura…………….............................................................. 19
2.7.3. Oxígeno……………..................................................................... 20
2.7.4. Materia Orgánica………............................................................... 20
2.8. Enfermedades transmitidas por el........................................................ 20
III. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………............. 23
3.1. Descripción de la zona de trabajo…….................................................. 23
3.1.1. Lugar de ejecución……………………………….……….……...... 23
3.1.2. Condiciones climáticas..…………………………………..……..... 23
3.2. Materiales………................................................................................... 24
3.2.1. Medios de cultivo…..................................................................... 24
3.2.2. Medios de cultivo para pruebas bioquímicas................................ 24
3.2.3. Reactivos…….............................................................................. 24
3.2.4. Materiales de laboratorio……….................................................... 24
3.2.5. Equipos………………………...…………………………………....... 24
3.3. Metodología…….................................................................................... 25
3.3.1. Reconocimiento del área de estudio........................................... 25
3.3.2. Preparación de BHI para muestreo……...................................... 25
3.3.3. Muestreos………………………….……………………………........ 25
3.3.4. Incubación de BHI………………………………………………....... 26
3.3.5. Recuento de microorganismos…………...……………………...... 26
3.3.6. Preparación de medios de cultivo………………………….......... 27
3.3.7. Siembra en las placas Petri con medios enriquecedores…....... 28
3.3.8. Batería de pruebas bioquímicas………………….....………......... 29
3.3.9. Microcultivos……………………………..………………………...... 30
IV. RESULTADOS…………………………………………….........……....………... 32
4.1. Conteo de microorganismos…................................................................ 33
4.2. Reconocimiento de bacterias………………………………........………..... 35
4
4.2.1. Selección de placas para la realización de pruebas
bioquímicas............................................................................................................ 37
4.3. Reconocimiento de hongos……………………………………………......... 43
V. DISCUSIÓN………………………………………………………………..……... 45
VI. CONCLUSIONES…………….…………………………………………..……..... 49
VII. RECOMENDACIONES...........…………………………………………..……..... 50
VIII. BIBLIOGRAFIA.......……………………………………………………..……...... 51
IX. ANEXOS...…………………………………………….…………………..……..... 55
5
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro Página
Enfermedades bacterianas transmitidas por el aire…………………..…...... 21
Enfermedades fúngicas transmitidas por el aire…………………………….. 22
Humedad relativa de las zonas de muestreo en el interior del mercado
Modelo......................................................................................................... 32
Temperaturas de las zonas de muestreo en el interior del mercado
Modelo........................................................................................................ 33
Número de microorganismos por sector…………………………......……… 33
Reconocimiento de la presencia o ausencia de bacterias en cinco
diferentes medios de cultivos en el primer muestreo.................................. 35
Reconocimiento de la presencia o ausencia de bacterias en cinco
diferentes medios de cultivos en el segundo muestreo……........................ 36
Selección de las placas conforme al mayor crecimiento presentado para
cada sector................................................................................................. 37
Resultados de pruebas bioquímicas del sector de verduras del mercado
Modelo........................................................................................................ 38
Resultados de pruebas bioquímicas del sector de carnes y pescados del
mercado Modelo………….……………………….......................................... 39
Resultados de pruebas bioquímicas del sector de comidas del mercado
Modelo…………………………………………............................................... 39
Resultados de pruebas bioquímicas del sector de comidas, segundo piso
del mercado Modelo………………………………………….......................... 40
Resultados de pruebas bioquímicas del sector carnes - mercado viejo..... 40
Resultados de pruebas bioquímicas del sector comidas, mercado viejo…. 41
Especies de bacterias encontradas en el mercado Modelo……............... 41
Especies de hongos encontradas en el mercado Modelo………………. 43
Número de establecimientos del mercado Modelo de Tingo María 61
6
I. INTRODUCCION
La ciudad de Tingo María cuenta con una superficie de 428.58 km2
abarca auna población urbana de 50,414 habitantes, con una tasa de crecimiento
poblacional de 1.3 %, INEI (2007);elincremento poblacional podría seruno de los
factores que hace que Tingo María se vea afectada por una mayor concentración
de microorganismos en el airesobre todo por la apropiadatemperatura de la
ciudad, ocasionando efectos sobre el perfil epidemiológico de la población.
La ciudad de Tingo María tiene como centro principal de
abastecimiento de alimentos y productos de primera necesidad al mercado
Modelo, que según la Municipalidad Provincial de Leoncio Prado (MPLP),
actualmente existen mil ciento ochenta comerciantes (1,180) y mil sesentaicinco
puestos (1,065), que conjuntamente con el gran número de consumidores, están
propensos a adquirir diversas enfermedades con el simple hecho de respirar.
Es por ello que este informe tiene como objetivo dar a conocer el
estado actual de la atmósfera interior del mercado Modelo con la finalidad de
identificar los diversos microorganismos posiblemente patógenos y dar así un
alcance del su estado actualpara que instituciones como la Municipalidad
Provincial de Leoncio Prado o la Red de Salud,otorguen la importancia que
merece y elcontrol necesario para que la población de Tingo María pueda contar
con la seguridad de un ambiente limpio y accesible ambientalmente.
7
1.1 Objetivos
1.1.1 Objetivo general
‾ Identificar los diferentes microorganismos presentes en el aire
interno del mercado modelo de la ciudad de Tingo María.
1.1.2 Objetivos específicos.
‾ Aislar las bacterias y fungi (hongos)en medios de cultivos
presentes en el aire interno del mercado Modelo de Tingo
María.
‾ Realizar pruebas bioquímicas para la identificación de
bacterias.
‾ Realizar microcultivos para la identificación de fungi (hongos).
8
II. REVISIÓN DE LITERATURA
2.1. Mercado Modelo de la ciudad de Tingo María
El principal centro de abastos de la ciudad de Tingo María cuenta
actualmente con mil 180 comerciantes (1,180) y mil 65 puestos formales
(1,065), y según consta en la inspección realizada por la Municipalidad
provincial de Leoncio Prado el mes de marzo del presente año, las condiciones
de salubridad e higiene ambiental se encuentran en situación alarmante debido
a la existencia de problemas como es el sistema de desagüe que
prácticamente ha colapsado por la propia basura y desperdicios que arrojan los
comerciantes de las distintas zonas del mercado, de igual forma el sistema de
drenaje pluvial, que ha generado constantemente inundaciones en varios
lugares. El aumento de establecimientos no planificados es otro de los
problemas ya que el principal centro de abastos de la ciudad ha sufrido en la
última década elhacinamiento de los comerciantes, generando todo esto una
atmósfera cada vez más apropiada para el desarrollo de microorganismos
ambientales (MPLP, 2011).
2.2. Residuos sólidos en el mercado Modelo de Tingo María
Según el estudio de caracterización de residuos sólidos realizado
en la ciudad de Tingo María el año 2009 por la MPLP(CONSORCIO BELLA
DURMIENTE, 2009), se tiene que en el mercado Modelo el promedio de
residuos por establecimiento es el siguiente:
9
Verdulerías 17.31 Kg/día
Fruteros 10 Kg/día
Tienda de abarrotes 1.65 Kg/día
Venta de carnes 11.15 Kg/día
Restaurant 12.5 Kg./día
2.3. Medidas de higiene en el mercado Modelo de Tingo María
Desde inicios del presente año, la Gerencia de Servicios Públicos y
comunales a través de la administración del centro de abastos de Tingo María
se viene realizando la limpieza general y baldeo del mercado modelo con el
objetivo de preservar la higiene y contribuir con la salud de los consumidores.
(MPLP, 2011).
2.4. Microorganismos del aire
Los microorganismos son y siempre han sido un factor importante
para la salud humana. Estos microorganismos han desarrollado una
extraordinaria capacidad de supervivencia que les ha permitido colonizar
prácticamente cualquier espacio natural de la tierra.La atmósfera no tiene una
microbiota autóctona pero es un medio para la dispersión de muchos tipos de
microorganismos (esporas, bacterias, virus y fungi), procedentes de otros
ambientes. Algunos han creado adaptaciones especializadas que favorecen su
supervivencia y permanencia. Los microorganismos dispersados por el aire
tienen una gran importancia biológica y económica porque producen
enfermedades en plantas, animales y humanos, causan alteraciones en los
alimentos y materiales orgánicos y contribuyen al deterioro y corrosión de
monumentos y metales. El transporte se realiza sobre partículas de polvo,
fragmentos de hojas secas, piel, fibras de la ropa, en gotas de agua o en gotas
de saliva eliminadas al toser, estornudar o hablar.El número de
microorganismos del aire en laszonas pobladas depende de la actividad enesa
10
zona (tanto industrial o agrícola), la presencia de seres vivos y la cantidad de
polvo (PASTOR,2010).
2.5. Tipos de microorganismos
El aire contiene en suspensión diferentes tipos de
microorganismos, especialmente bacterias y fungi. Algunos microorganismos
se encuentran en forma de células vegetativas, pero lo más frecuente son las
formas esporuladas, ya que las esporas son metabólicamente menos activas y
sobreviven mejor en la atmósfera porque soportan la desecación. Las producen
fungi, algas, líquenes, algunos protozoos y algunas bacterias. En el aire se
aíslan frecuentemente bacterias esporuladas de los géneros Bacillus,
Clostridiumy Actinomicetos (UNDERWOOD, 1992).
Entre las bacterias también son muy frecuentes los bacilos
pleomórficos Gram positivos (Corynebacterium) y los cocos Gram positivos
(Micrococcus y Staphylococcus). Los bacilos Gram negativos (Flavobacterium,
Alcaligenes) se encuentran en menor proporción y disminuyen con la altura
(GREGORY, 1973).
Cladosporium es el fungi que predomina en el aire, tanto sobre la
tierra como sobre el mar, aunque también es frecuente encontrar otros mohos,
como Aspergillus,Penicillium, Alternaria y Mucor (TAKAHASHI, 1997) y la
levadura Rhodotorula (UNDERWOOD, 1992).
2.5.1. Bacterias
Las bacterias son organismos complejos, capaces de vivir, en un
medio adecuado, sin la necesidad de un huésped para completar su
desarrollo.Es de destacar la capacidad de elaborar esporas quepresentan
algunas bacterias. Las esporas no son más que formas de vida resistentes
acondiciones adversas. Pueden resistir, durante años incluso,altas
11
temperaturas, sequedad, falta de nutrientes, etc., recuperando su estado
normal y capacidad infectiva al entrar en contacto con un medio adecuado para
su desarrollo (PASTOR,2010).
Las principales fuentes de bacterias en el aire son originadas por el
hombre, siendo las más importantes las aguas negras y los desechos de origen
animal. La degradación y digestión de los desechos produce aerosoles que
contienen bacterias, algunas de las cuales pueden ser patógenas como es el
caso de los estreptococos y las coliformes fecales. Un estudio realizado en la
ciudad de Marsella, mostró que el número de bacterias se incrementa con la
temperatura y la velocidad del viento (INE,2004).
2.5.1.1. Género Enterobacter
Los microorganismos que pertenecen a este género raras veces
causan infecciones en huéspedes sanos, pero son aislados nosocomiales
frecuentes.Tres especies de Enterobacter, E. cloacae, E. aerogenes y E.
sakazakii, son responsables de la amplia mayoría de infecciones por
Enterobacter. Pantoea agglomerans, hasta hace poco conocida como
Enterobacter agglomerans, es también un aislado frecuente que puede causar
una una amplia variedad de infecciones, entre ellas neumonía. Estas
baceterias fermentan la lactosa, son móviles y forman colonias mucoides
(MANDELL, 2006).
2.5.1.2. Género Serratia
De las múltiples especies del género Serratia, S. marcescens es la
especia que se aísla con más frecuencia de infecciones humanas y S.
liquefaciens crece de forma ocasional. Este microorganismo está diseminado
en el medio ambiente, pero no es un componente común de la flora fecal
humana. Por tanto la mayoría de las infecciones se adquiere de manera
12
exógena.Este microorganismo puede sobrevivir en condiciones hostiles, incluso
en una variedad de desinfectantes, entre ellos las fuentes de brote, y se aísla a
menudo en las vías respiratorias y de las heridas. La diseminación hematógena
puede producir casos de osteomielitis, artritis infecciosa, entre otras; mientras
que la meningitis puede tener lugar tras procedimientos neurológicos
(MANDELL, 2006).
2.5.1.3. Género Escherichia
La Escherichia colies huésped constante del intestino del hombre y
de los animales de sangre caliente. Por su especificidad está considerado
como un buen índice de contaminación fecal. Tiene el inconveniente de vivir
poco tiempo en el ambiente extraentérico, por lo que su presencia en los
alimentos indica contaminación reciente.Para deducir la presencia de E. coli se
realizan pruebas de confrimación, como por ejemple, las IMVC:
I = indol
M = rojo de metilo
V = Voges Proskauer
C = citrato
Para la prueba de indol, la reacción positiva se manifiesta por la
formación de un anillo rojo bermellón en la superficie del medio; la reacción
negativa muestra un anillo amarillento. Escherichia coli al desaminar e
hodrolizar el triptófano del medio, produce indol que se pone de manifiesto al
añadir el reactivo de Kovacs.Para la reacción del rojo de metilo, en caso
positivo, se produce una coloración roja; en la reacción negativa, el color es
amarillo. E. coli es un organismo rojo de metilo (RM) positivo.Para la prueba de
Voges Proskauer (acetil-metil-carbinol), la reacción positiva se manifiesta por
un fuerte color rojo. E. coli es un germen Voges Proskauer negativo.En la
prueba de Citrato de Simmons la reacción es positiva cuando se produce
crecimiento en el medio. E.coli es una bacteria ceitrato-negativa (PASCUAL y
CALDERON, 2000).
13
2.5.2. Fungi (Hongos)
Los fungi son formas complejas de vida que presentan una
estructura vegetativa denominada micelio que está formada por hifas
(estructuras filiformes por las que circulael citoplasma plurinucleado). Esta
estructura vegetativa surge de la germinación de suscélulas reproductoras o
esporas. Su hábitat natural es el suelo, pero algunos componentes de este
grupo son parásitos tanto de hombres y animales como de vegetales
(PASTOR,2010).
Los fungi son típicamente más abundantes en verano que en el
resto del año, mientras que las bacterias son más abundantes en primavera y
otoño debido a factores como la temperatura, humedad relativa del aire,
exposición a la luz solar, etc. (BOVALLIUS et al., 1978).
En cuanto a su significado para la salud, la acción de los fungi
unicelulares (levaduras) es muchas veces infectiva (Cándida albicans,
Ceyptococcus neoformas, Blastomyces dermatiditis, etc.), mientras que el
mayor problema originado por los mohos se refiere a su gran capacidad de
elaboración de micotoxinas (Aspergillus spp, Penicillum spp, Fusarium spp,
etc.). No obstante, ciertos mohos pueden ser tanto agentes de micosis como
responsables de intoxicaciones (p. ej., Aspergillus fumigatus) (PASCUAL y
CALDERON, 2000).
2.5.2.1 Género Aspergillus
Las especies del género Aspergillus son mayoritariamente ubicuas,
aislándose de diferentes sustratos, aunque con mayor frecuencia de climas
cálidos. Las colonias de este género se desarrollan en general de forma rápida
y presentan diversas tonalidades: blanquecinas, amarillentas, marrón-
amarillentas, negruzcas, marrón-negruzcas o verdosas. Están formadas por
densas agrupaciones de conidióforos sobre los que se encuentran las células
14
conidiógenas que son las que originarán las esporas asexuales o conidios
(SORIANO, 2007).
Se sabe que Aspergillus fumigatus produce dos elastasas que
incluyen una proteasa sérica y una metaloproteasa que pueden actuar sobre la
elastina que constituye cerca del 30% del tejido pulmonar.Aspergillus flavus
produce aflatoxina que es una hepatotoxina cancerígena conocida (FORBES,
2009).
2.5.2.2 Género Penicillium
Los penicilios son mohos comunes que desarrollan sobre los más
diversos substratos: granos, paja, cueros, frutas, etc.crecen sobre los alimentos
preparados o sus materias primas, ya sean de origen vegetal o animal, si hallan
la actividad del agua y los nutrientes necesarios. Este género se caracteriza por
formar conidios en una estructura ramificada semejante a un pincel que
termina en células conidiógenas llamadas fiálides (CARRILLO, s.d.).
2.5.2.3 Género Fusarium
La identificación de las especies de Fusarium no es fácil, dado que
las diferencias entre ellas son poco evidentes. El medio de cultivo PDA se
utiliza con buenos resultados en el aislamiento de estos hongos. Cuando el
patógeno ataca las espigas, éstas muestran diferentes coloraciones que van
desde el blanco-rosado hasta el naranja (GILCHRIST, 1995).
Se ha relacionado el cáncer de esófago en regiones de China
(Henan) y Sudáfrica (Transkei) con el consumo de maíz contaminado por
Fusarium (SORIANO, 2007).
15
2.5.2.4 Género Geotrichum
Fungi de distribución cosmopolita, produce Geotricosis, que es una
micosis oportunista producida por este fungi que está presente en el medio
ambiente, la piel y mucosas del huésped humano. La infección puede ser de
fuente endógena o exógena, las formas clínicas son varias y la más frecuente
es la pulmonar, con manifestaciones muy similares a la tuberculosis. A nivel
cutáneo produce lesiones nodulares y su tratamiento es a base de yoduro de
potasio y violeta de genciana (ROMERO, 2007).
2.5.2.5 Género Saccharomyces
Es una levadura comúnmente llamada de ―cerveza‖ o de
―panadería‖, suele colonizar las mucosas de los seres humanos, pero por lo
general no se la considera patógena. Presenta células alargadas, globosas a
elipsoidales. Las colonias en agar glucosado de Sabouraud son cremosas,
blandas y glabras como las formadas por Candida. Saccharomyces es un
hongo ambiental común y es un componente transitorio de las microbiotas
digestiva y cutánea humanas. Se utiliza ampliamente en la elaboración de vino,
cerveza, pan y otros alimentos(KONEMAN, 2008).
2.5.2.6 Género Trichophyton
El género Trichophyton es uno de los agentes etiológicos
principales de las dermatomicosis, capaces de invadir el pelo, la piel y las uñas.
Los dermatrofitos degradan y utilizan la queratina como una fuente de
nitrógeno pero suelen ser incapaces de penetrar en el tejido subcutáneo, salvo
que el huésped esté inmunodeprimido. Los miembros de este género están
ampliamente distribuidos y son las causas más importantes y comunes de
infecciones de los pies y las uñas; son los causantes de la tiña del cuerpo,
cuero cabelludo, uñas, entre otros(FORBES, 2009).
16
2.5.2.7 Género Mucor
Es un fungi del suelo que sobrevive principalmente como
esporangiospora. Se aísla fácilmente en agar papa dextrosa acidificado. En
este medio, los esporangióforos son altos, erguidos y de color blanco con
esporangios terminales de forma globosa (CARRILLO, s.d.).
2.5.2.8 Género Botrytis
Es un fungi ampliamente distribuido con una extensa gama de
huéspedes. En cítricos causa enfermedades en brotes, hojas, madera y frutos.
Vive sapróficamente en la materia orgánica en descomposición y también ha
sido aislado del suelo. Las conidias pueden ser transportadas hasta el huésped
por el viento, agua, insectos u otros medios. Si el inóculo potencial es
suficientemente grande, el hongo puede penetrar directamente, pero
comúnmente lo hace a través de heridas (TIMMER, 2002).
2.6. Requerimientos nutricionales de los microorganismos
Según HERNÁNDEZ(2003), los microorganismos, como cualquier
ser vivo, requieren una serie de sustancias que les permitan realizar sus
actividades metabólicas; básicamente, necesitan fuentes de agua, energía,
carbono, nitrógeno, minerales, vitaminas y oxígeno (para el caso de los
aerobios).
2.6.1 Fuentes de energía
Los microorganismos tienen diferentes formas de obtener energía
y, con base en esa característica, se clasifican en fotótrofos y quimiótrofos. Los
fotótrofos obtienen la energía de la luz o radiación solar. Los quimiótrofos
obtienen energía de un compuesto químico y se dividen en litótrofos (si el
compuesto químico es inorgánico) y organótrofos (si el compuesto es orgánico)
(HERNÁNDEZ, 2003).
17
Figura 1. Clasificación de los microorganismos con base a lafuente de
energía que utilizan (Modificado de HERNÁNDEZ, 2003).
2.6.2 Fuentes de carbono
Es el constituyente principal de los microorganismos, la fuente más
empleada la constituyen los carbohidratos que además son fuentes de oxígeno,
hidrógeno y energía metabólica. Los carbohidratos participan en la biosíntesis
del material celular, así como en la formación de los productos o metabolitos.
Según HERNÁNDEZ(2003), los microorganismos se pueden clasificar, con
base en su capacidad de asimilación de la fuente de carbono, en:
Autótrofos El CO2 es su única fuente de carbono.
Heterótrofos Los compuestos orgánicos constituyen su fuente de
carbono.
2.7. Factores ambientalesque intervienen en el desarrollo de los
microorganismos
Fotótrofos
Litótrofos
Quimiótrofos
Organótrofo
s
Los microorganismos de acuerdo a su capacidad
de obtener energía se clasifican en:
18
Las condiciones físico-químicas de la atmósfera no favorecen el
crecimiento nila supervivencia de los microorganismos por lo que la mayoría
solopueden sobrevivir en ella durante un breve período de tiempo.Las esporas
son las formas de vida con mayor supervivencia y tienen varias propiedades
que contribuyen a su capacidad para sobrevivir en la atmósfera, principalmente
su metabolismo bajo, por lo que no requieren nutrientesexternos ni agua para
mantenerse durante largos períodos de tiempo. Ademásposeen otras
adaptaciones que aumentan su capacidad de sobrevivir en esteambiente.
Algunas esporas tienen paredes gruesas que las protegen de la desecación y
otras son pigmentadas, lo que las ayuda contra las radiaciones ultravioleta. Su
escasa densidad les permite permanecer suspendidas en el aire sinsedimentar.
Algunas son muy ligeras e incluso contienen vacuolas de gas yotras tienen
formas aerodinámicas que les permite viajar por la atmósfera(GREGORY,
1973).
El tiempo de permanencia de losmicroorganismos en el aire
depende de laforma, tamaño, peso del microorganismo yla existencia de la
potencia de las corrientesaéreas que lo sostenga y lo eleve. Son factores
adversos los obstáculos, que al oponersea los vientos, disminuyen su velocidad
y supotencia de arrastre, y las precipitaciones,que arrastran al suelo las
partículas suspendidas (DE LA ROSA et al., 1987).
Además, las esporas se producen en número muy elevado
yaunque muchas mueran en la atmósfera, el éxito de unas pocas asegura la
supervivencia y dispersión de los microorganismos.La supervivencia de las
bacterias es variable, debido a su diversidad estructural y metabólica. En
general, las bacterias Gram positivas son más resistentes que las Gram
negativas ya que su pared celular es más gruesa. Porejemplo, en aire seco
algunas especies de Bacillus y Clostridium son capacesde sobrevivir más de
200 años, Mycobacterium un mes y Salmonella sólodiez minutos. Según
19
POTTS(1994), los principales factores que intervienen, son: Humedad relativa,
temperatura, oxígeno y materia orgánica.
2.7.1 Humedad relativa
Es el factor más importante. Cuando la humedad relativa del aire
decrece,disminuye el agua disponible para los microorganismos, lo que causa
deshidratación y por tanto la inactivación de muchos de ellos. La desecación
puedecausar una pérdida de viabilidad en las capas más bajas de la atmósfera,
especialmente durante el día. A mayores altitudes, las condiciones son más
favorables por la evaporación y algunas esporas pueden germinar en las
nubes. Lahumedad relativa de la atmósfera varía de un 10-20 % en las
regiones desérticas. El límite menor para el crecimiento de fungi es del 65 %.
Las bacteriasrequieren una mayor humedad. Las Gram negativas resisten peor
la desecación que las positivas; esto se refleja en que existe poca evidencia de
transmisión por el aire de bacterias Gram negativas, con la excepción de
Legionella(LIDWELL, 1990).
2.7.2 Temperatura
Está muy relacionada con la humedad relativa, por lo que es difícil
separarlos efectos que producen ambas. La temperatura en la troposfera varía
de 40°C cerca de la superficie, a –80° C en las capas altas, alcanzándose
temperaturas de congelación entre 3-5 Km. La congelación no destruye los
microorganismos pero no pueden multiplicarse. Diversos estudios muestran
que el incremento de la temperatura disminuye la viabilidad de los
microorganismos(MOHR, 1997).
2.7.3 Oxígeno
20
Se da una correlación negativa entre la concentración de oxígeno y
la viabilidad, que aumenta con la deshidratación y el tiempo de exposición. La
causa de la inactivación podría ser los radicales libres de oxígeno (MOHR,
1997).
2.7.4 Materia orgánica
La atmósfera contiene muy poca concentración de materia
orgánica, y enla mayoría de los casos, es insuficiente para permitir el
crecimiento heterotrófico. El agua disponible es escasa por lo que, incluso el
crecimiento de microorganismos autótrofos está limitado(MOHR, 1997).
2.8. Enfermedades transmitidas por el aire
Gran número de infecciones humanas y animales se trasmiten por
el aire y causan enfermedad, principalmente, en el aparato respiratorio. Las
enfermedades respiratorias tienen una gran importancia socio económica ya
que se trasmiten fácilmente a través de las actividades normales del hombre,
son las más frecuentes en la comunidad y el motivo más importante de
absentismo laboral y escolar.
Los microorganismos causales se trasmiten porlas secreciones de
la nariz y la garganta y son diseminados por la tos, los estornudos y la
conversación pudiendo alcanzar una velocidad de 300 km/h.
Una persona puede expulsar una media de 500 partículas en la tos
y de 1.800 a20.000 en un estornudo, de los cuales la mitad son menores de 10
µm. El tamaño de las partículas tiene una gran importancia, las más pequeñas
penetranmejor y las más grandes tienen mayor supervivencia.
Algunos casos especiales son: Legionella que se encuentra en el
agua y setrasmite por los aerosoles que se forman en los distintos sistemas y
aparatos oCoccidioidesimmitis y Aspergillus fumigatus cuyas esporas,
21
procedentes delsuelo y estiércol, son diseminadas sobre el polvo y
trasportadas por el viento(BENENSON, 1997).
Cuadro 1. Enfermedades bacterianas transmitidas por el aire.
Enfermedades Géneros y especies
Amigdalitis, faringitis, bronquitis,
escarlatina
- Streptococcuspyogenes
Difteria - Corynebacteriumdiphtheriae
Neumonía clásica - Streptococcuspneumoniae
- Staphylococcusaureus
- Klebsiellapneumoniae
Neumonía atípica, bronquitis - Mycoplasmapneumoniae
- Chlamydophilapneumoniae
- Chlamydophilapsittaci
Meningitis - Neisseriameningitidis
Meningitis, epiglotitis, neumonía - Haemophilusinfluenzae
Tosferina - Bordetellapertussis
Tuberculosis - Mycobacterium tuberculosis
Legionelosis - Legionellapneumophila
Actinomicosis - Actinomycesisraelii
Nocardiosis - Nocardia asteroides
Fiebre Q - Coxiellaburnetii
Carbunco pulmonar - Bacillusanthracis
Peste - Yersiniapestis
Fuente: BENENSON (1997).
Cuadro 2. Enfermedades fúngicas transmitidas por el aire.
Enfermedades Hongos
Neumonías - Pneumocystiscarinii
Micosis sistémicas - Cryptococcusneoformans
22
- Blastomycesdermatitidis
- Histoplasmacapsulatum
- Coccidioidesimmitis
- Aspergillus fumigatus
Hipersensibilidad - Alternaria - Botrytis
- Aspergillus - Puccinia
- Penicillium - Serpula
- Cladosporium - Mucor
Micotoxicosis - Aspergillus
- Fusarium
- Stachybotrys
Fuente: BENENSON (1997).
23
III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Descripción de la zona de trabajo
3.1.1. Lugar de ejecución
La presente práctica se realizó en seis sectoresdel interior del
mercado Modelo de la ciudad de Tingo María: Sector de verduras, sector de
carnes y pescados, sector de comidas, sector de comidas del segundo piso,
sector carnes del ―mercado viejo‖, sector comidas del―mercado viejo‖. El
mercado Modelo se encuentra ubicado en la ciudad de Tingo María capital de
la provincia de Leoncio Prado y del distrito de RupaRupa, entre la unión de los
ríos Monzón y Huallaga,
3.1.2. Condiciones climáticas
La ciudad de Tingo María es una zona eminentemente tropical, su
clima constituye uno de sus principales atractivos con una temperatura que
oscila entre 18.7°C y 30.5°C (IGP, 2009), siendo los meses más calurosos Abril
a Setiembre y los meses de diciembre a marzo se considera como meses de
lluvia donde la Humedad Relativa alcanza un 83% en el interior del mercado
Modelo. La precipitación anual se considera 3472.8 mm (IGP, 2009).
24
3.2. Materiales
3.2.1 Medios de cultivo
Brainheartbroth (BHI), agar eosina azul de metileno (EMB), agar
cistina-lactosa deficiente en electrolitos (CLED),agar MacConkey, agar
cetrimide, agar Staphylococcus, agar glucosa 4% según Sabouraud, caldo
peptona, agar platecount, agar Ogy.
3.2.2 Medios de cultivopara pruebas bioquímicas
Caldo peptona 0.1%, caldorojo de metilo y Voges-Proskauer
(RMVP), agarhierro-triple azúcar (TSI), agar lisina hierro (LIA), agar citrato de
Simmons, caldo malonato, agar urea.
3.2.3 Reactivos
Reactivo del Indol según Kovacs, rojo de metilo, hidróxido de
sodio al 4% (NaOH), alfa naftol, azul lacto glicerol.
3.2.4 Materiales de laboratorio
Matraces Erlenmeyer, placas Petri, tubos de ensayo, termómetro,
jeringas de 20 mL, algodón, pipetas, pinzas, varillas de vidrio, porta objetos,
cubre objetos, gradillas para tubos de ensayo, mechero de Bunsen, asa de
siembra, anza micológica, agitadores, espátulas, papel mantequilla.
3.2.5 Equipos
Baño maría, autoclave, estufas, balanza, microscopio, contador
de colonias, cabina de bioseguridad.
25
3.3. Metodología
3.3.1. Reconocimiento del área de estudio
Se realizo una primera visita para reconocer la zona y entre las
distintas áreas, escoger los seis puntos de muestreo; reconocer también las
condiciones de temperatura en el lugar. Se elaboró un croquis del mercado
modelo (Anexo, lamina 2) para visualizar las áreas de muestreos, además se
dialogó con algunos de los comerciantes y consumidores sobre sus opiniones
sobre el estado ambiental actual del mercado modelo.
3.3.2. Preparación de BHI para muestreo
Para los seis puntos de muestreo se prepararon doce matraces
con BHI de la siguiente manera, en 90 mL de agua destilada se adicionaron
3.3g de BHI granulado; se repartieron seis matraces para muestreo de
bacterias y seis para muestreo de hongos, para lo cual se tuvo que agregar
antibiótico a cada matraz del último grupo para restringir el crecimiento de
bacterias.
3.3.3. Muestreos
Se realizaron dos muestreos, el primero tuvo lugar el 24 de enero
y el segundo muestreo se realizó el 25 de febrero, ambos al medio día con una
temperatura promedio de 25.7ºC, teniendo como puntos de muestreos las
siguientes áreas:
- Sector de verduras.
- Sector de carnes y pescados.
- Sector de comidas.
- Sector de comidas, segundo piso.
- Sector carnes, mercado viejo.
26
- Sector comidas, mercado viejo.
Para cada muestreo se realizaron aspiraciones del aire de cada
punto de muestreo recorriendo toda el área del sector. Las aspiraciones se
realizaron con una jeringa de 20 mL aplicando 50 repeticiones. Después de
cada aspiración se descargó el contenido de la jeringa dentro de un matraz con
medio BHI y en un matraz con BHI más antibiótico.
3.3.4. Incubación de BHI
Los matraces con medio BHI para crecimiento de bacterias se
incubaron a 37 ºC por un lapso de 48 horas; mientras que los matraces con
medio BHI más antibióticos usados para el crecimiento de hongos se llevaron a
incubar a temperatura ambiente por un tiempo de 5 días.
3.3.5. Recuento de microorganismos
Para el recuento de microorganismos se realizó el método de
Recuento en placa(Figura 11), para ello se prepararon seis matraces
conteniendo cada uno 90 mL de caldo peptona, de cada frasco con BHI
después de haber sido incubado por 48 horas se retira con una pipeta 10 mL,
los cuales obedeciendo al método de diluciones seriadas (Figura 2), se
adicionan a su respectivo matraz con caldo peptona (10-1); se homogeniza el
resultado para luego realizar dos diluciones más, sacando 1 mL de la muestra y
adicionándolo a un tubo de ensayo con 9 mL de caldo peptona (10-2), se
homogeniza y se repite el procedimiento (10-3), de ésta última dilución, se
realiza el método de placa vertida, para el cual se retira 1 mL de la última
dilución y se vierte en una placa petri vacía y esterilizada para luego agregar 10
mL de agar PlateCount, se deja solidificar por unos 10 minutos para
posteriormente llevar las placas a la estufa a 37 ºC por 48 horas. Después de
este tiempo se puede realizar el conteo de microorganismos utilizando el
27
contador de colonias manual. La fórmula para el conteo de microorganismos
(m.o.) es la siguiente:
―m.o. = Nº colonias × Inóculo × Factor de dilución‖
Figura 2. Cálculo del número de microorganismos por el método de diluciones
seriadas (Modificado de TÓRTORA, 2007).
3.3.6. Preparación de medios de cultivo
Los agares necesarios para el crecimiento de bacterias son los
siguientes y se prepararon de esta manera:
- Agar EMB: 500 mL de agua destilada con 18 g del agar.
- Agar CLED: 500 mL de agua destilada con 18 g del agar.
- Agar MacConkey: 500 mL de agua destilada con 25.8 g del
agar.
- Agar Cetrimide: 500 mL de agua destilada con 23.35 del agar,
y 2 mL de glicerina por cada 100 mL.
28
- Agar Staphylococcus: 500 mL de agua destilada con 74.5 g del
agar.
Para el crecimiento de hongos se utilizaron:
- Agar glucosa 4% según Sabouraud para el primer muestreo:
500 mLde agua destilada con 32.5 g del agar.
Para el recuento de microorganismos se utilizaron los siguientes medios:
- Caldo peptona: 100 mL de agua destilada con 0.1 g de
peptona.
- Agar platecount: 300 mL de agua destilada con 7.05 g del agar.
Todos los matraces se mezclan bien y se llevan a baño maría
para que hiervan hasta la disolucióntotal, luego se llevan a esterilizar al
autoclave a 15 lb de presión por 15 minutos, se deja enfriar hasta 45 ºC para
plaquear.
3.3.7. Siembra en las placas Petri con medios enriquecedores
De los matraces con BHI y muestras de aire incubados a 37 ºC
por 48 horas se retiró mediante un asa de siembra, un inóculo para luego
sembrar en las placas Petri. El método de siembra se realizó por estrías.
Seguidamente las placas Petri ya sembradas se llevaron a incubación por 48
horas a una temperatura de 37 ºC.
Para la siembra de hongos, se retiró un inóculo de cada caldo BHI
más antibiótico y se sembró por el método de puntura en agar sabouraud para
el primer muestreo y en agar OGY para el segundo muestreo. Las placas se
incubaron a temperatura ambiente por un tiempo de 5 días.
29
3.3.8. Batería de pruebas bioquímicas
La batería de pruebas bioquímicas que se utilizaron para la
identificación de bacterias está constituida por las siguientes pruebas: Indol,
rojo de metilo,Voges-Proskauer, TSI, LIA, citrato de Simmons, caldo malonato,
urea. La metodología es de la siguiente manera:
Después de haber incubado las placas petri para el crecimiento de
bacterias, se realizaron las pruebas bioquímicas:
Indol: Se vierte aproximadamente 9 mL de caldo peptona al 0.1% a
un tubo de ensayo, se realiza la siembra de bacterias con el anza de siembra
por el método de enjuague. Se incuba por 48 horas, para la determinación se
usa el reactivo de Kovacs, de 2 – 3 gotas.
Rojo de metilo: Se utiliza el caldo rojo de metilo y voges-proskauer
(RMVP), aproximadamente 9 mL en cada tubo de ensayo, se siembra mediante
el método de enjuague; se incuba por 48 horas y como reactivo se adiciona el
rojo de metilo de 2 -3 gotas.
Voges-Proskauer: Se vierte en el tubo de ensayo el caldo RMVP,
se siembra mediante el método de enjuague y se incuba por 48 horas; como
reactivo se utiliza hidróxido de sodio (NaOH) al 4% de 2 - 3 gotas y se adiciona
el reactivo de alfa naftol de 2 – 3 gotas.
TSI: Se vierte el agar a 45 ºC hasta la tercera parte de los tubos de
ensayo, se deja enfriar en pico de flauta, luego se siembra con puntura y
estrías, se incuba a 37 ºC por 48 horas; el tipo de reacción positivo o negativo
se conoce por el cambio de color.
LIA: Se vierte el agar a los tubos de ensayo a una temperatura de
45 º C y se deja enfriar en pico de flauta, para proceder a sembrar la colonia de
30
bacteria seleccionada mediante el método de puntura y estrías; la reacción se
muestra mediante el cambio de color.
Citrato de Simmons: Se vierte el agar en los tubos de ensayo y se
deja enfriar en modo inclinado para luego sembrar por el método de estrías.
Pasada las 48 horas de incubación, el cambio a color azul indica reacción
positiva.
Caldo Malonato: Se vierte el caldo en los tubos de ensayo y se
realiza la siembra por el método de enjuague, después de incubar por 48 horas
se observa si hubo o no reacción, es positivo si cambia a color azul.
Úrea: Se distribuye el agar en tubos de ensayo, se siembra la
colonia de bacterias por el método de puntura, al cabo de las 48 horas el
cambio de color nos dirá si hubo reacción positiva.
3.3.9. Microcultivos
Se esterilizaron las placas Petri conteniendo: un soporte de vidrio
en forma de herradura, un porta y un cubre objeto.
Se preparó una placa Petri con medio agar de Sabouraud glucosa
4%, dividido en cubitos de aproximadamente 20 × 20 × 10 mm. Cada cubito se
coloca sobre el porta objeto dentro de la placa de microcultivo y sobre la varilla
de vidrio.
De los cultivos aislados de fungi se eligió diferentes tipos de
colonias por cada placa de microcultivo. Elegida la colonia de fungi, con la
ayuda de un anza micológica, se toma un inoculo de la misma y se traslada
sobre el cubito de medio de sabouraud que se ha colocado sobre el porta
objeto dentro de la placa de microcultivo. Se coloca el cubre sobre el cubito de
agar, luego se pone dentro de la placa un algodón húmedo para asegurar la
31
humedad y el crecimiento del hongo. La placa de microcultivo se lleva a
incubación a temperatura ambiente por un tiempo de 5 – 7 días.
Al término de la incubación, se retira suavemente con ayuda de
una pinza el cubre objeto de la placa de microcultivo y se coloca sobre un porta
objeto limpio y desengrasado al que ha colocado previamente 1 – 2 gotas de
azul de lacto glicerol. Con la ayuda de papel secante, se absorbe el exceso de
colorante. Se sellan los lados laterales con esmalte de uñas transparente.
Luego se elimina el cubito de medio sabouraud llevándolo a un
recipiente conteniendo lejía diluida al 10 %, retirar el porta de la placa de
microcultivo y agregarle de 1 – 2 gotas de azul lacto glicerol, añadir un cubre
limpio y desengrasado. Con papel secante, absorber el exceso de colorante.
Sellar los lados laterales con esmalte de uñas transparente.
Las muestras obtenidas, se observan al microscopio utilizando un
lente ocular de 10x y un lente objetivo de 40x, así el aumento total será de
10x40 = 400 aumentos.
32
IV. RESULTADOS
- Cuadro 3.Humedad relativa de las zonas de muestreo en el interior del
mercado Modelo.
Zona de muestreo
1º muestreo (24 de enero) Temperatura (ºC)
2º muestreo (25 de febrero) Temperatura (ºC)
Sector de verduras. 83.4 80.05
Sector de carnes y pescado.
84.7 81.25
Sector de comidas. 83.0 79.33
Sector de comidas, segundo piso
84.9 81.13
Sector carnes, mercado viejo.
83.7 80.24
Sector comidas, mercado viejo.
83.0 79.25
Promedios 83.8 80.2
Promedio total 82.0
- El primer muestreo se realizó el 24 de enero, al medio día con una
temperatura promedio de 25.9ºC.
- El segundo muestreo tuvo lugar el 25 de febrero, al medio día con una
temperatura promedio de 25.6ºC.
33
Cuadro4.Temperaturas de las zonas de muestreo en el interior del mercado
Modelo.
Zona de muestreo 1º muestreo (24 de enero)
Temperatura (ºC) 2º muestreo(25 de febrero)
Temperatura (ºC)
Sector de verduras. 25.5 25.1
Sector de carnes y pescado. 25.8 25.4
Sector de comidas. 27.1 26.8
Sector de comidas, segundo piso
24.9 24.6
Sector carnes, mercado viejo.
25.2 25.7
Sector comidas, mercado viejo.
26.6 26.1
Promedios 25.9 25.6
Promedio total 25.7
4.1. Conteo de microorganismos
Cuadro 5.Número de microorganismos por sector.
Zona de
muestreo
Nº de microorganismos
Promedio del número de m.o.
1º muestreo 2º muestreo
Sector de verduras, mercado nuevo
12x105mo/mL 55 x 10
4mo/mL 875 x 10
3mo/mL
Sector de carnes y pescado, mercado nuevo.
1544x103mo/mL 1080 x 10
3mo/mL 1312 x 10
3mo/mL
Sector de comidas, mercado nuevo.
1693x103mo/mL 194 x 10
4mo/mL 18165 x 10
3mo/mL
34
Sector de comidas, segundo piso.
1707 x103mo/mL 79 x 10
3mo/mL 893 x 10
3mo/mL
Sector carnes, mercado viejo.
115 x104mo/mL 215 x 10
3mo/mL 6825 x 10
2mo/mL
Sector comidas, mercado viejo.
1098 x103mo/mL 66 x 10
4mo/mL 879 x 10
3mo/mL
Figura 3. Porcentaje de la cantidad de microorganismos para cada sector.
4% 6%
79%
4% 3%
4% 1
2
3
4
5
6
- Sector Verduras. - Sector carnes y pescado. - Sector comidas. - Sector comidas 2ºpiso. - Carnes, mercado viejo. - Comidas, mercado viejo.
35
Figura 4. Relación entre el número de microorganismos y la temperatura en el
interior del mercado Modelo.
4.2. Reconocimiento de bacterias
Cuadro 6.Reconocimiento de la presencia o ausencia de bacterias en cinco
diferentes medios de cultivos en el primer muestreo.
Zona de muestreo EMB CLED McConkey Staphylococcus
Cetrimide
Sector de verduras, mercado nuevo + + + + -
Sector de carnes y pescado, mercado nuevo
+ + + + -
Sector de comidas, mercado nuevo. + + + + -
Sector de comidas, segundo piso - + + - -
Sector carnes, mercado viejo + + - + -
Sector comidas, mercado viejo. - + - + -
Verduras
Carnes y pescado
Comidas
Comidas 2do piso
Carnes mercado viejo
Comidas mercado viejo
23.5
24
24.5
25
25.5
26
26.5
27
27.5
875000 1312000 18165000 893000 682500 879000
Va
ria
ció
n d
e l
a t
em
pe
ratu
ra e
n e
l m
erc
ad
o M
od
elo
Número de microorganismos para cada temperatura
36
Cuadro 7.Reconocimiento de la presencia o ausencia de bacterias en cinco
diferentes medios de cultivos en el segundo muestreo.
Zona de muestreo EMB CLED McConkey Staphylococ
cus Cetrimide
Sector de verduras,
mercado nuevo - + - + -
Sector de carnes y
pescado, mercado
nuevo
+ - + + -
Sector de comidas,
mercado nuevo. + + + + -
Sector de comidas,
segundo piso - + - - -
Sector carnes, mercado
viejo + + + + -
Sector comidas,
mercado viejo. + + + + -
37
Figura 5. Comparación de la efectividad de los diferentes medios de cultivos
utilizados para el crecimiento de los microorganismos.
4.2.1 Selección de placas para la realización de pruebas
bioquímicas
De acuerdoal crecimiento de colonias bacterianas desarrollado en
las placas Petri, se seleccionaron aquellas donde se presentó un mayor
crecimiento:
Cuadro 8. Selección de las placas conforme al mayor crecimiento presentado
para cada sector.
0
2
4
6
8
10
12
-
CLED
EMB
MacConkey
Staphylococos
Cetrimide
Zona de muestreo Placa seleccionada Muestreo 1
Placa seleccionada Muestreo 2
Sector de verduras, mercado nuevo
EMB
CLED
McConkey
Sector de carnes y pescado, mercado nuevo EMB
MacConkey; se eligió 2tipos diferentes de colinas (pequeñas y medianas)
38
Cuadro 9.Resultados de pruebas bioquímicas del sector de verduras del
mercado Modelo.
Primer muestreo
Segundo muestreo (Cled)
(EMB) (McConkey)
INDOL — — — RM — — + VP — — — TSI (lactosa) — — — TSI (sacarosa) + + + TSI (glucosa) + + + TIS (H2S) — — — TSI (gas) — — — LIA (lisina descarboxilasa) + + +
CS + + + CM + + + UREA — — —
Especie encontrada Enterobacterhafniae Enterobacterhafniae Enterobacterhafnia
e
Sector de comidas, mercado nuevo.
EMB EMB
Sector de comidas, segundo piso
CLED
CLED
McConkey
Sector carnes, mercado viejo EMB
EMB
Cled
Sector comidas, mercado viejo.
CLED
EMB; se seleccionaron 3 muestras distintas de colonias, una de pigmentación morado, otra de naranjado y la última de blanco.
39
Cuadro 10. Resultados de pruebas bioquímicas del sector de carnes y
pescados del mercado Modelo.
Primer muestreo (EMB)
Segundo muestreo (MacConkey)
Colonias pequeñas Colonias medianas
INDOL — + + RM — — — VP — — — TSI (lactosa) — — — TSI (sacarosa) + + — TSI (glucosa) + — — TIS (H2S) — — — TSI (gas) — — — LIA(lisina descarboxilasa) — — —
CS + + + CM + — — UREA — — —
Especie encontrada Enterobacteragglo
merans Enterobacteragglomera
ns Enterobacteragglo
merans
Cuadro 11. Resultados de pruebas bioquímicas del sector de comidas del
mercado Modelo.
Primer muestreo (EMB) Segundo muestreo (EMB)
INDOL + + RM + + VP — — TSI (lactosa) — — TSI (sacarosa) — — TSI (glucosa) — — TIS (H2S) — — TSI (gas) — + LIA (lisina descarboxilasa) + +
CS — —
40
CM — — UREA — —
Especie encontrada Escherichiacoli Escherichiacoli
Cuadro 12. Resultados de pruebas bioquímicas del sector de comidas,
segundo piso del mercado Modelo.
Primer muestreo
Segundo muestreo (Cled) (Cled) (McConkey)
INDOL — — —
RM + — — VP — — — TSI (lactosa) + — + TSI (sacarosa) + + + TSI (glucosa) + + — TIS (H2S) — — — TSI (gas) + — — LIA (lisina descarboxilasa)
— + —
CS — — — CM — — — UREA — — —
Especie encontrada Enterobacteragglome
rans Enterobacterhafniae
Enterobacteragglomerans
Cuadro 13. Resultados de pruebas bioquímicas del sector carnes- mercado
viejo.
Primer muestreo (EMB)
Segundo muestreo
Colonias pequeñas (EMB)
Colonias medianas (Cled)
INDOL — — — RM — — — VP — — — TSI (lactosa) — + + TSI (sacarosa) + + — TSI (glucosa) + — — TIS (H2S) — — — TSI (gas) — — —
41
LIA(lisina descarboxilasa)
+ + +
CS + + — CM — + — UREA — + —
Especie encontrada Serratiamarcescen
s Serratiarubidaea
Enterobacteragglomerans
Cuadro 14. Resultados de pruebas bioquímicas del sector comidas, mercado
viejo.
Primer muestreo (Cled)
Segundo muestreo (EMB)
Colonia morada Colonia naranja
Colonia blanca
INDOL — — — — RM + + + + VP — — — — TSI (lactosa) — — — — TSI (sacarosa) + — — — TSI (glucosa) + — — — TIS (H2S) — — — — TSI (gas) — — — — LIA (lisina descarboxilasa)
+ — — —
CS + — + + CM — — — — UREA — — — —
Especie encontrada Serratiamarcesce
ns Enterobacteragg
lomerans Enterobacter
hafniae Enterobacter
hafniae
Cuadro 15.Especies de bacterias encontradas en el mercado Modelo.
Lugar de muestreo : Bacteria encontrada
Sector verduras Enterobacterhafniae
Sector carnes y pescado Enterobacteragglomerans
Sector comidas Escherichiacoli
42
Sector comidas 2do piso
Enterobacteragglomerans
Enterobacterhafniae
Sector carnes mercado viejo
Serratiamarcescens
Serratiarubidaea
Enterobacteragglomerans
Sector comidas mercado viejo
Enterobacteragglomerans
Enterobacterhafniae
Serratiamarcescens
Figura 6. Abundancia de especies de bacterias en los puntos de muestreo
según la diferenciación bioquímica.
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
Escherichia coli Serratia rubidaea Serratiamarcescens
Enterobacterhafniae
Enterobacteragglomerans
pre
se
ncia
en
pu
nto
s d
e m
ue
str
eo
43
Figura 7. Diversidad de especies bacterianas en los puntos de muestreo
determinadas por diferenciación bioquímica.
4.3. Reconocimiento de Fungi
Mediante la realización de microcultivos se determinaron las
siguientes especies de hongos.
Cuadro 16.Especies de fungi encontradas en el mercado Modelo.
Lugar de muestreo : Fungi encontrados
Sector verduras
Geotrichumsp.
Aspergillus sp.
Sector carnes y pescado
Fusarium sp.
Saccharomyces cerevisiae
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
Sectorverduras
Sectorcarnes ypescado
Sectorcomidas
Sectorcomidas 2do
piso
Sectorcarnes
mercadoviejo
Sectorcomidasmercado
viejo
Nú
me
ro d
e e
sp
ecie
s
44
Sector comidas
Trichophytonsp.
Geotrichum sp.
Sector comidas 2do piso
Mucorsp.
Saccharomyces cerevisiae
Sector carnes mercado viejo
Botrytis sp.
Penicillum sp.
Sector comidas mercado viejo
Aspergillusterreus, Aspergillus sp.
Geotrichumcandidum
Penicillium sp.
45
V. DISCUSIÓN
En el mercado Modelo de Tingo María se determinó que hubo un
incrementosignificativo de los microorganismos en función a la temperatura, de
modo que se encontró 893 x 103m.o. a 24.6ºC (temperatura más baja) y 18165
x 103m.o. a 27.1ºC (temperatura más alta), como se muestra en la Figura 4, de
los cuales se encontró tres géneros de bacterias y ocho géneros de fungi
(Cuadro 14 y 15), confirmando lo sostenido por el INE (2004), donde menciona
que el número de microorganismos se incrementa con la temperatura y la
velocidad del viento. Además, las temperaturas más elevadas corresponden al
sector de comidas del mercado Modelo, donde se cocinan alimentos
constantemente ocasionando un clima desfavorable para el crecimiento de
microorganismos, puesto que las temperaturas por encima del nicho de los
microorganismos favorecen solo a determinadas especies como es el caso de
la E. coli, puesto que independiente a la diversidad de microorganismos
encontrados en el mercado se reportó una mayor abundancia para esta
especie, conforme con lo sostenido por MOHR (1997),que menciona que al
incrementarse la temperatura disminuye la viabilidad y diversidad de los
microorganismos.
En el interior del mercado Modelo se logró aislar del aire a tres
géneros de bacterias, pero el género que predominó en los resultados
corresponde al género Enterobacter, quese caracterizó en los análisis de agar
Mc Conkey por fermentar la lactosa y dar positivo como resultado, obteniendo
como la principal bacteria a Enterobacter agglomerans, seguida por
Enterobacter hafniae;según MANDELL (2006), esto se debe a que este tipo de
bacterias son móviles, además las especies de Enterobacter son responsables
de la amplia mayoría de infecciones, entre ellas neumonía.
46
Otro género que se encontró corresponde al género Serratialos
cuales son microorganismos que pueden sobrevivir en condiciones hostiles,
incluso en una variedad de desinfectantes, y se aísla a menudo en las vías
respiratorias y de las heridasesto según MANDELL (2006). Como las
condiciones ambientales del Mercado Modelo son favorables para la
proliferación de casi todas las bacterias y Serratia puede sobrevivir sobre los
desinfectantes es que se le ha encontrado a pesar de que la Gerencia de
Servicios Públicos y comunales de la MPLP, a través de la administración del
centro de abastos de Tingo María, viene realizando la limpieza general y
baldeo del mercado modelo una vez por mes desde enero del presente año.
Según MANDELL (2006), de las múltiples especies del
géneroSerratia, S. marcescens es la especie que se aísla con más frecuencia
de infecciones humanas; casualmente Serratia marcescens es la especie de
bacteria que se encontró en los sectores de carne y comidas del mercado viejo
correspondiente al mercado Modelo de la ciudad.También se encontró la
presencia de Escherichia coli para los dos muestreos realizados en el sector de
comidas del mercado Modelo y según citaPASCUAL y CALDERON (2000), la
E. coli es una bacteria citrato-negativa; esto se demostró en el laboratorio
durante las pruebas bioquímicas, pues la E. coli no se desarrolló sobre el agar
Citrato de Simmons al no ser capaz de utilizar el citrato como única fuente de
carbono.
Por otro lado se aislaron distintas especies de fungi encontrados
durante los muestreos realizados en enero y febrero, que corresponden a
verano en la costa y lluvias en la selva, al respecto BOVALLIUS(1978)
argumenta que los fungi son típicamente más abundantes en verano que en el
resto del año, mientras que las bacterias son más abundantes en primavera y
otoño debido a factores como la temperatura, humedad relativa del aire,
exposición a la luz solar, etc. En este sentido, en la ciudad de Tingo María, los
47
fungipodrían no verse favorecidos en los meses considerados de verano (de
junio a setiembre) debido a que las temperaturas pueden llegar a más de 30ºC,
prefieriendo proliferar en épocas de lluvia por la alta concentración de humedad
en la zona (82% según lo medido en el mercado),dando origen a una amplia
variedad de fungi.
Las bacterias se aislaron en cinco diferentes medios de cultivo,
siendo el medio CLED el más adecuado para el crecimiento de los
microorganismos, ya que de las doce placas empleadas para el análisis, once
dieron resultados positivos, a diferencia del medio Cetrimide donde no se
presentó crecimiento alguno, puesto RIVERO(2005), menciona que el medio
CLED usado fundamentalmente para el análisis de microorganismos del tracto
urinario posee las sales necesarias para el crecimiento de una amplia gama de
microorganismos;lo que no sucede con el agar Cetrimide, que es específico
para Pseudomonas, como lo sostiene la UCV(2009).
Para el crecimiento de hongos se emplearon dos diferentes medios
de cultivo, para el primer muestreo se utilizó agar Sabouraud y para el segundo
muestreo, agar OGY, siendo indiferente el crecimiento de los fungi en dichos
medios, por lo que se difiere con lo sostenido porDIGESA(s.d.), que indica que
el medio OGY es preferente para mohos y levaduras.
Según las pruebas bioquímicas se determinó la presencia de cinco especies
bacterianas como se detalla en el Cuadro 14, de las cuales Enterobacter
agglomerans tuvo una mayor presencia al estar en cuatro de los seis lugares
que se eligieron como puntos de muestreo. A diferencia de Escherichia coli y
Serratia rubidaea que se presentaron sólo en un punto de muestreo (Figura
6).Por consiguiente la diferenciación bioquímica efectuada a las bacterias en el
mercado determina que el sector de carnes y comidas del mercado viejo
presentan una mayor diversidad de bacterias pues presentan tres especies
cada uno, mientras que en el sector de verduras, carnes y pescados y sector
comidas, presentan sólo una especie (Figura 7).
48
En los microcultivos se determinaron ocho géneros de hongos, de
los cuales el predominante esAspergillus, seguido por el género Geotrichum
(Cuadro 15). Siendo causantes de múltiples enfermedades al sistema
respiratorio, la piel e incluso el hígado, concordando con lo mencionado por
FORBES (2009) y ROMERO (2007).
49
VI. CONCLUSIONES
1. En el sector de comidas se presento la mayor cantidad de
microorganismos desarrollados en agar Plate Count, con un promedio
de 18165 x 103mo/mL entre los dos muestreos realizados;
correspondiendo a un 79% entre todos los sectores.
2. El medio de cultivo que presento mayor efectividad para el crecimiento
de bacterias corresponde al agar CLED con un total de once placas
positivas, seguido por el agar Staphylococcus con diez placas positivas,
posteriormente con ocho placas positivas cada uno se presento el agar
EMB y agar McConkey, finalmente el agar Cetrimide que verifica la
presencia de Pseudomonas se vio negativo para todas las placas.
3. Las bacterias encontradas en el ambiente del aire interior del mercado
modelo corresponden a tres géneros: Enterobacter, Serratia y
Escherichia, siendo el género Enterobacter el predominante en un
70.6%.
4. En cuanto a la presencia de fungi, se identificaron los géneros de
Aspergillus, Saccharomyces, Geotrichum, Penicillum, Fusarium,
Trichophyton, Mucor, y Botrytis. El género predominante es
Aspergillus,seguido por el género Geotrichum.
50
VII. RECOMENDACIONES
- Se recomienda que la red de salud de Leoncio Prado realice
inspecciones periódicas necesarias al Mercado Modelo para que se
tenga conocimiento del grado de peligrosidad al que está expuesta la
población y de esta manera se tomen las respectivas medidas de
mitigación.
- Al momento de realizar los muestreos mediante aspiraciones se deben
realizar como mínimo 50 aspiraciones para una jeringa de 20 mL, que
fue la que se utilizó en la práctica, esto para que existan suficientes
microorganismos en el caldo de cultivo BHI, y puedan proliferar
exitosamente.
- Para la manipulación de los microorganismos en el laboratorio, se debe
tener estricta higiene, en cuanto a la esterilización de los materiales y del
ambiente a utilizar.
- A los comerciantes que manejan puestos de comida se les recomienda
estricta higiene en su local y en sus alimentos, ya que es en estos
lugares se encontró E. coli.
- En el caso que se vea necesario almacenar productos como carnes y
pescados, se recomienda un estricto cuidado en el almacenamiento de
éstos productos frescos, porque podrían ser importantes fuentes de
generación de microorganismos.
51
VIII. REVISIÓN BIBLIGRÁFICA
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55
ANEXOS
Cuadro 15. Número de establecimientos del mercado Modelo de Tingo María.
56
Figura 8. Preparación de medios de cultivo.
Figura 9. Realización del muestreo en el sector de carnes del mercado
viejo.
57
Figura 10. Resultados de pruebas bioquímicas para el primer muestreo.
Figura 11. Agar Plate Count a las 48 horas de sembrío en el cuenta-colonias.
58
Figura12. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector de verduras.
Figura 13. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector de carnes y pescados, colonias pequeñas.
59
Figura 14. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector de carnes y pescados, colonias medianas.
Figura 15. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector comidas.
60
Figura 16. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector comidas-segundo piso.
Figura 17. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector carnes – mercado viejo, colonias sacadas de EMB.
61
Figura 18. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector carnes – mercado viejo, colonias sacadas de medio CLED.
Figura 19. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector comidas – mercado viejo, colonias moradas.
62
Figura 20. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector comidas – mercado viejo, colonias naranjas.
Figura21. Resultados de pruebas bioquímicas para el segundo muestreo,
sector comidas – mercado viejo, colonias blancas.
63
Figura21. Resultado positivo de E. coli, con brillo metálico característico en
agar EMB para el sector de comidas del mercado Modelo.
Figura 22. Bacteria desarrollada en agar CLED para el sector de comidas del
mercado Modelo.
64
Figura 23. Colonias de Geotrichum sp. del sector de verduras del mercado
Modelo.
Figura 23. Geotrichum sp. del sector de verduras del mercado Modelo visto a
400 aumentos.
65
Figura 24. Colonias de Aspergillus sp. del sector de verduras del mercado
Modelo.
Figura 25. Aspergillus sp del sector de verduras del mercado Modelo visto a
400 aumentos.
66
Figura 26. Colonias de Fusarium sp. del sector de carnes y pescado del
mercado Modelo.
Figura 27. Fusarium sp. del sector de carnes y pescado del mercado Modelo
visto a 400 aumentos.
67
Figura 28. Colonias de Saccharomyces cerevisiae del sector de carnes y
pescado del mercado Modelo.
Figura 29. Saccharomyces cerevisiae del sector de carnes y pescado del
mercado Modelo visto a 400 aumentos.
68
Figura 30. Colonias de Trichophyton sp. del sector de comidas del mercado
Modelo.
Figura 31. Trichophyton sp. del sector de comidas del mercado Modelo visto
a 400 aumentos.
69
Figura 32. Colonias de Geotrichum sp. del sector de comidas del mercado
Modelo.
Figura 33. Geotrichum sp. del sector de comidas del mercado Modelo visto a
400 aumentos.
70
Figura 34. Colonias de Mucor sp. del sector de comidas del segundo piso del
mercado Modelo.
Figura 35. Mucorsp. del sector de comidas del segundo piso del mercado
Modelo visto a 400 aumentos.
71
Figura 36. Colonias de Saccharomyces cerevisiae del sector de comidas del
segundo piso del mercado Modelo.
Figura 37. Saccharomyces cerevisiae del sector de comidas del segundo
piso del mercado Modelo visto a 400 aumentos.
72
Figura 38. Colonias de Botrytis sp. del sector carnes del mercado viejo.
Figura 39. Botrytis sp. del sector de carnes del mercado viejo visto a 400
aumentos.
73
Figura 40. Colonias de Penicillum sp. del sector carnes del mercado viejo.
Figura 41. Penicillum sp. del sector de carnes del mercado viejo visto a 400
aumentos.
74
Figura 42. Colonias de Aspergillus sp. y Geotrichum candidum del sector de
comidas mercado viejo.
Figura 43. Aspergillus sp. del sector de comidas mercado viejo visto a 400
aumentos.
75
Figura 44. Colonias de Penicillium sp. del sector de comidas mercado viejo.
Figura 45. Penicillium sp. del sector de comidas mercado viejovisto a 400
aumentos.
