TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS

UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO”

DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL

SECCION DE MICROBIOLOGÍA

Microbiología Médica I

Yudy Aranguren, 2014

PASOS PARA EL DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO:

1.- MUESTRA:

2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram

3.- CULTIVO

4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO

MICROBIOLÓGICO DE

COCOS GRAM POSITIVO

PRUEBA DE LA CATALASA

La determinación de la presencia de la enzima catalasa

• Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de

24-48 horas de incubación, con en peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%.

• La liberación de O2 indica la presencia de la enzima catalasa.

H2O2 + catalasa = H2O + ½ O2

Son catalasa positivo:

Son catalasa negativo:

PRUEBA PRIMARIA: Para cocos Gram positivos

PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS

• Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos

por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa

- +

• Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de:

- Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0,6%.

- Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0,8%.

• Se observa un cambio de color:

• Positivo: Rojo ladrillo

• Negativo: Sin cambio de color

PRUEBA PRIMARIA: Para cocos Gram positivos

AGAR SALADO MANITOL

• La fermentación de un carbohidrato (azucares) por

un microorganismo en particular ayuda a su

identificación.

- +

FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS

• La acidez que se produce en el medio se

pone en evidencia a través del cambio de

color de un indicador de pH

• Se puede evidenciar la producción de gas

Presencia de la enzima COAGULASA

PRUEBA PRIMARIA: Para diferenciar especies del género Sthaphylococcus

SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA (antibiótico)

PRUEBA SECUNDARIA: Para diferenciar especies del grupo Sthaphylococcus Coagulasa negativa

PRUEBA DE LA COAGULASA

COAGULASA

POSITIVA NEGATIVA

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus saprophyticus

+ -

+

-La determinación de la presencia de la enzima

coagulasa:

• Se pone en contacto una pequeña cantidad de

cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e

incubar 4 horas a 37ºC.

PRUEBA DE SENSIBILIDAD

SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

SENSIBLE-SIN CRECIMIENTO

RESISTENTE-CON CRECIMIENTO

Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus

SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

NOVOBIOCINANOVOBIOCINA

Con crecimiento alrededor del disco de Novobiocina

Sin crecimiento alrededor del disco de Novobiocina

-+

CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL

COCOS GRAM POSITIVOS

• Género Staphylococcus crece a altas

concentraciones de sal (7% NaCl)

• Género Streptococcus NO crece a

altas concentraciones de sal (7% NaCl)

• Género Enterococcus crece a altas

concentraciones de sal de 6,5% pero NO a 7%

NaCl

Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentación de manitol

1.- Género Streptococcus no crece a 7% de NaCl

3.- Staphylococcus aureus

crece y fermenta el manitol

(color amarillo del medio)

2.- Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus

Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio)

CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL

PATRONES DE HEMÓLISIS

PATRONES DE HEMÓLISIS

ALFA

BETA

GAMMA

AGAR SANGRE

BETA: Lisis total de los glóbulos rojos

GAMMA: Sin lisis

ALFA: Lisis parcial de los glóbulos rojos

PRUEBA PRIMARIA: Para diferenciar especies del género Streptococcus

Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA

HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemólisis de una cepa

indicadora de Staphylococcus aureus.

Streptococcus pyogenes

Staphylococcus aureus

Streptococcus agalactiae

PRUEBA DE CAMP

TIPO DE HEMÓLISIS

AUTOEVALUACIÓN

NO HEMOLITICO

http://www.youtube.com/watch?v=Zks-2AZuZ1Y&feature=related

CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS

BETA HEMOLITICOS

Extracto soluble de la pared celular por acción enzimática + Partículas de látex cubiertos

de anticuerpos específicos

CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS

Hardy Diagnostics StrepPro-1.mp4

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina

Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina

PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Beta hemolíticos

DISCO DE OPTOQUINADISCO DE

OPTOQUINA

Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina

Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

Streptococcus pneumoniae

StreptococcusGrupo Viridans

PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Alfa hemolíticos

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS

Streptococcus pneumoniae lisado en presencia de Bilis

Streptococcus mitis NO lisado en

presencia de Bilis

PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Alfa hemolíticos

PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO

MICROBIOLÓGICO DE

BACILOS GRAM NEGATIVOS

4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

PASOS PARA EL DIAGNOSTICO:

1.- MUESTRA:

2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram

3.- CULTIVO

FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN

MEDIO MAC CONKEY

• Permite conocer la presencia o ausencia del

“citocromo C” en bacterias y es una característica

fisiológica muy utilizada en taxonomía

PRUEBA DE LA OXIDASA

• Este reactivo es rápidamente transformado a

un producto oxidado de color púrpura dentro

de 30 segundos en presencia de citocromo

oxidasa.

• Se toma una pequeña cantidad de cultivo

bacteriano de 24-48 horas de edad y se

transfiere a un trozo de papel filtro

previamente embebido en n,n-dimetil p-

fenilendiamina

Prueba de oxidasa

PRUEBA DE MOVILIDAD• Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no, eso ayuda

en el proceso de clasificación

• Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica, y tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

• Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol

• Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack (P-dimetil-aminobenzaldehido )

• Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un anillo rojo en la superficie del caldo

PRUEBA DEL INDOL

+ -

Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono.

PRUEBA DEL CITRATO

+ -Medio citrato de Simmons

KLIGLER: Agar triple azucar hierro

En el bisel: LACTOSA

En el Taco: GLUCOSA

+

+-

-

KLIGLER: Agar triple azucar hierro