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Molecular Probes® 流式细胞分析产品和资源指南

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Molecular Probes® | 流式细胞分析产品

参考指南

在线工具了解最新资讯

可随时用于研究的手机应用程序

学习并沟通

《Molecular Probes®手册》 (第11版)本手册提供了最全面的荧光标记和检测参考，包括大量的参考资料和技术说明，介绍了超过3,000项技术解决方案，涉及各种生物分子标记和检

测试剂。请登录lifetechnologies.com/handbook查看《Molecular Probes®手册》在线版。购Molecualr Probes®任意产品满3000RMB即可获赠

一本。

抗体在线选择工具

采用易于使用的选择工具，了解我们各种高质量的一抗和二

抗结合物。

lifetechnologies.com/antibodies

《BioProbes®期刊》和

Molecular Probes®时事通讯

我们的获奖杂志《BioProbes®期刊》提供印刷版和电

子版，重点介绍科学家们的最新突破成果，以及新技

术和产品。

Molecular Probes®时事通讯可为您提供最新发布的产品。

请登录lifetechnologies.com/bioprobes，浏览《BioProbes®期刊》近期和往

期刊物

请登录lifetechnologies.com/subscribeprobes，订阅《BioProbes®期刊》和

Molecular Probes®时事通讯

荧光光谱查看器(在线)在一张图上绘制至多14种荧光基团，可以打印或保存。

lifetechnologies.com/spectraviewer

如需了解更多信息，请登录 lifetechnologies.com/probes

资源

流式细胞术资源中心

一站式搜索实验方案、教程、应用说明、荧光基团和产品选

择指南、文献及其他技术资源。

lifetechnologies.com/flowresources

Molecular Probes®网上研讨会系列

我们的科学家分享了各种技术和使用

技巧。

请登录lifetechnologies.com/

probeswebinars，观看已录制的网上

研讨会或注册以便观看以后的在线网上研讨会

流式细胞仪及相关配件

它代表了逐一细胞分析的发展趋势。您可以利用Attune®

NxT声波聚焦流式细胞仪优化性能和通量，且不影响灵敏度

或准确度。

lifetechnologies.com/attune

流式细胞分析指南和实验方案

您可随时访问我们的试剂选择指南，了解部分应用和实验方

案以及疑难解析，此外还有针对计时步骤的内置实验方案计

时器和闹钟伴您实验每一步。

荧光光谱查看器

可绘制和比较光谱，查看多种荧光染料的光谱兼容性及详细

信息，并以清晰的打印格式将信息通过email发送给您。

DailyCalcs科学计算器

帮助您轻松计算摩尔浓度、稀释度和分子量等。

所有移动应用程序均免费提供，可登录 lifetechnologies.com/apps 下载

Molecular Probes® | 流式细胞分析产品

Molecular Probes® 流式细胞分析产品和资源指南

Molecular Probes®流式细胞分析产品和资源指南主要概括介

绍了一抗结合物、细胞功能分析及经过我们的科学家优化的用

于流式细胞分析的相关工具。近40年来，Molecular Probes®

团队一直走在荧光探针发明及开发的最前沿，本指南汇总了一

些最有用的流式细胞分析研究工具。我们的探针和分析产品有

各种荧光颜色可供选择，您可以查看Molecular Probes®流式

细胞分析产品，选择符合您需要的产品。

请登录lifetechnologies.com/flow-cytometry，进一步了解

Molecular Probes®流式细胞分析产品和资源。

流式细胞分析工作流程

样本制备

细胞保护 _________________ 2红细胞裂解 _______________ 2固定和透化 _______________ 2Dynabeads® 细胞分离 _______ 3

细胞分析

样本制备

抗原检测

仪器设置和校准


仪器校正 _________________ 6 大小校准 _________________ 6 细胞分选设置 _____________ 7 补偿调节 ________________ 7 绝对细胞计数 _____________ 9

细胞分析

细胞活性 ________________ 20 细胞增殖 ________________ 22 细胞周期 ________________ 24 细胞凋亡 ________________ 25 其他细胞功能分析 ________ 28

抗原检测

一抗 ___________________ 12 荧光染料概述 ___________ 12 抗体标记 ________________ 15 二级检测 ________________ 18定制服务 ________________ 19

2 Molecular Probes® | 流式细胞分析产品

γ-IFN–PE-Cy®7 �uorescence

106105104103-103TNF-α

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γ-IFN–PE-Cy®7 �uorescence

CD4–Fluorescein �uorescence CD4–Fluorescein �uorescence

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106105104103-103

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-103103

TNF-α

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A

B

样本制备

样本制备高质量的数据需要高质量的原始材料。Molecular Probes®样

本制备试剂包括血细胞保护试剂、红细胞裂解液及样本固定

和透化试剂，旨在帮助您获得最佳结果。如需了解上述产品

的更多信息并获取实验方案，请登录lifetechnologies.com/

flow-sample

细胞保护TransFix®试剂

TransFix®试剂(货号：FIX2、FIX20、FIX100)是一种全血保

护剂，它可以稳定白细胞并保护抗原位点，以供进一步细

胞分析。该试剂可实现对多个样本的简单批量处理，从而

优化实验工作流程。此外，采用TransFix®试剂稳定处理的

血液可方便地移至其他分析地点。

细胞裂解Cal-Lyse™全细胞裂解液

Cal-Lyse™预混合裂解液(货号：GAS010、GAS010S100)

适用于经单克隆抗体染色的全血或骨髓样品，用于裂解红

细胞，采用该试剂处理可同时实现红细胞裂解和白细胞固

定，且处理不会对与白细胞结合的荧光染料标记的抗体产

生影响，可使白细胞保持完整的形态学光散射特性。Cal-

Lyse™试剂可用于“No Wash”和“Wash”的染色步骤。

不含固定剂的High-Yield LyseHigh-Yield Lyse (货号：HYL250)是一种预混合且不含固定

剂的红细胞裂解液，适用于从全血中去除红细胞，供流式

细胞仪分析使用，在红细胞裂解过程中稀有血细胞群损失

极少。用单克隆抗体对血样本进行染色后，可使用该试剂

立刻裂解红细胞；无需进行清洗步骤。

固定和透化FIX & PERM®试剂和试剂盒

• 可与大多数细胞抗原分析相兼容

• 不影响细胞形态学散射特性

• 减少背景染色

• 经过验证的实验方案

FIX & PERM®细胞透化试剂盒(货号：GAS003、GAS004)

可提供匹配好的固定试剂(Medium A)和化透试剂(Medium

B)，能够在同一细胞群中同时实现细胞内和细胞表面抗

原分析(图1)。该处理便于抗体进入细胞内结构，且可使

细胞保持完整的形态学光散射特性，优化的配方能降低

背景染色，使用时可以同时加入透化试剂和荧光染料标

记的抗体。固定试剂(货号：GAS001S100)和透化试剂(货

号：GAS002S100)均可单独购买。

图1. 使用FIX & PERM®细胞透化试剂盒，同时进行细胞表面抗原和细胞内抗

原染色。采用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)和离子霉素，在brefeldin A存在的条

件下刺激C57BL/6脾细胞5小时，对照组细胞未进行刺激。然后采用FITC偶联的抗小鼠CD4抗体(货号：MCD0401)对细胞进行表面染色，然后采用FIX & PERM®细胞透化试剂盒(货号：GAS003、GAS004)对样本进行固定和透化；

在透化过程中，采用PE-Cy®7 tandem偶联的抗小鼠γ-干扰素(γ-IFN)抗体(货号：A18713)和Pacific Blue™染料偶联的抗小鼠肿瘤坏死因子α (TNF-α)抗体

进行细胞内染色(货号：RM90128)。在Attune®声波聚焦流式细胞仪(蓝光/紫光)上分析采集数据，细胞仪配备的488 nm激发光和530/30 nm带通发射滤光

片用于检测FITC荧光，640 nm长通滤光片用于检测PE-Cy®7 tandem荧光；

采用405 nm激发光和450/40 nm带通发射滤光片检测Pacific Blue™结合物

荧光。(A)全部小鼠脾细胞(在brefeldin A存在的条件下，未经刺激(左)或采用

PMA和离子霉素刺激(右)的小鼠脾细胞)的γ-IFN和TNF-α抗体共染色，对淋巴

细胞设门；(B)按上述方法刺激后，CD4+ T细胞中TNF-α (左)和γ-IFN (右)的表

达。

3Molecular Probes® | 流式细胞分析产品

Remove beads

1

2

3

Incubate yourstarting samplewith Dynabeads®

Separatebead-capturedcells with aDynal MPC™magnet

Transfersupernatant withuntouched cellsto a new tube

Positivelyisolated cells(bead-captured)

Negativelyisolated cells

(untouched)

Molecular applicationse.g., mRNA and DNA analysis

Cell-based assays, flowcytometry, cell expansion

Cou

nt0

1,00

050

02,

000

1,50

0CD4 FITC

102 103 104 105

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750

500

1,25

01,

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CD4 FITC

102 103 104 105

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CD4 FITC

102 103 104 105

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250

750

500

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000

CD4 FITC

102 103 104 105

Dynabeads®细胞分离• 高活性-具有阳性分离、阴性分离、细胞活化和细胞去除产品

• 温和-无需分离柱，表面带有惰性图层可以更温和地处理细胞，分离后无其

他污染残留

• 高产量-管式分离可实现极好的细胞回收

当细胞离开其原环境时，实验操作可能会对细胞表型和功能产生不良影响。因

此，选择适当的细胞分离方法是下游实验的关键。Dynabeads®磁珠是具有超顺

磁性、单一大小的合聚物磁珠，其外部包被了一层薄的惰性多聚物外壳，用以

包覆磁性材料(图2)，该设计可防止细胞分离后有不必要成分(如铁)残留于样本

中。此外，由于细胞不与磁珠结合(阴性分离和细胞去除磁珠)或者在经过温和的

磁性分离后从磁珠上解离下来(阳性分离磁珠)，因此最终的细胞样本具有高纯度

及高活性，且不会带有影响下游实验的残留物(图3)。

人细胞分离

采用Dynabeads®磁珠可直接从全血、单核细胞、血沉棕黄层、骨髓或组织样

品中进行温和的管式人细胞分离，用于任何下游分析，包括流式细胞分析(图

4)。Dynabeads®产品可用于人T细胞、B细胞、干细胞、NK细胞、单核细胞、

树突状细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、白细胞和粒细胞的分离。

分离方案包括：

• 阳性分离和细胞释放

• 不结合细胞的阴性分离

• 去除不想要的细胞类型或适于分子应用领域的阳性细胞分离

• 使用自备抗体分离细胞

如果您无法找到一款即用型人细胞分离产品，我们可提供多种Dynabeads®产品

可与您选择的抗体结合，构建定制的细胞分离工具，包括：链霉亲和素Dyna-

beads®、二抗包被的Dynabeads®和表面活化的Dynabeads®。更多信息，请登

录lifetechnologies.com/humancellisolation

图2. Dynabeads®磁珠是均匀一致的球形磁珠，具有高度确定且一致的产品特性，有助于确保您获得

真实可靠且可重复的结果。

图3. 利用Dynabeads®磁珠进行阳性或阴性管式细

胞分离的工作流程图。

图4. 人CD4+ T细胞的纯度。采用Dynabeads® Un-touched™人CD4 T细胞试剂盒对外周血单核细胞进

行阴性分离之前(上)和之后(下)的纯度。

样本制备


样本制备

CD4+

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200

150

300

250

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400 Purity:78.5%

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CD4+

Pro

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Viability:63%

102 103 104 105

Column-based isolation

CD4+

Cou

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0

100

200

400

300

500

600 Purity:97.2%

CD4+

Pro

pid

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iod

ide

102

103

104

105

Viability:86%

102 103 104 105

Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD4 Kit

小鼠细胞分离

直接从全血、脾脏、淋巴结或胸腺中进行温和的管式小鼠细胞分离，可用于任何下游分析，包括流式细胞分析(图5)。

Dynabeads®产品可用于分离小鼠T细胞、B细胞、NK细胞和树突状细胞。

分离方案包括：

• 阳性分离和细胞释放

• 不结合细胞的阴性分离

• 去除不想要的细胞类型或适于分子应用领域的阳性细胞分离

如果您无法找到一款即用型小鼠细胞分离产品，我们可提供多种Dynabeads®产品，可与您选择的抗体结合，构建定制的细

胞分离工具：链霉亲和素Dynabeads®、二抗包被的Dynabeads®和表面活化的Dynabeads®。

更多信息，请登录lifetechnologies.com/mousecellisolation

在线查找更多信息

登录lifetechnologies.com/cellisolation，您可以查找有关我们全部细胞分离产品的信息，还可以浏览：

• 细胞分离产品选择指南

• 样本制备实验方案和细胞分离策略

• 有关我们的细胞分离产品与其他商品化产品的性能对比数据

• 帮助您选择适用于试管或微孔板的相应磁力架

• 视频、资料手册、应用说明及引用Dynabeads®产品的参考文献的链接

图5. 从小鼠脾细胞中分离CD4+ T细胞。采用Dynabeads® FlowComp™小鼠CD4试剂盒(上)进行细胞分离获得的纯度(97%)和活性(86%)明显高于柱式(下)阳性细

胞分离(纯度和活性分别为78%和63%)。


样本制备

样本制备相关产品列表

步骤产品名称种属靶细胞类型

适用* 规格货号

细胞保护

TransFix® 试剂 NA NA RUO

2 mL FIX2

20 mL FIX20

100 mL FIX100

红细胞裂解Cal-Lyse™ 全细胞裂解液 NA NA IVD

25 mL GAS010

100 mL GAS010S100

High-Yield Lyse NA NA IVD 500 mL HYL250

固定和透化 FIX & PERM® 细胞透化试剂盒 NA NA GPR 50 assays GAS003

200 assays GAS004

固定试剂 (Medium A) NA NA GPR 100 mL GAS001S100

渗透试剂 (Medium B) NA NA GPR 100 mL GAS002S100

Dynabeads® 细胞分离

Dynabeads® FlowComp™ 人CD4试剂盒人 T 细胞 RUO 3 mL 11361D

Dynabeads® CD4阳性分离试剂盒人 T 细胞 RUO 5 mL 11331D

Dynabeads® Untouched™ 人CD4 T细胞试剂盒人 T 细胞 RUO 1 kit 11352D

Dynabeads® FlowComp™ 人CD8试剂盒人 T 细胞 RUO 3 mL 11362D

Dynabeads® CD8阳性分离试剂盒人 T 细胞 RUO 5 mL 11333D

Dynabeads® Untouched™ 人CD8 T细胞试剂盒人 T 细胞 RUO 1 kit 11348D

Dynabeads® FlowComp™ 小鼠CD4试剂盒小鼠 T 细胞 RUO 3 mL 11461D

DETACHaBEAD® 小鼠CD4试剂盒小鼠 T 细胞 RUO 5 mL 12406D

Dynabeads® Untouched™ 小鼠CD4细胞试剂盒小鼠 T 细胞 RUO 2 x 10 mL 11415D

Dynabeads® FlowComp™ 小鼠CD8试剂盒小鼠 T 细胞 RUO 1 kit 11462D

Dynabeads® Untouched™ 小鼠CD8细胞试剂盒小鼠 T 细胞 RUO 2 x 10 mL 11417D

N/A，不适用。* GPR，通用型试剂；IVD，体外诊断用；RUO。仅供研究使用。不得用于诊断。


图6. AlignFlow™微球可用488 nm离子激光激发，并可在三种发射通道进行

检测。宽范围的荧光发射光谱可使其在所有三个通道均可进行检测，且微球

之间的荧光强度差异极小。该数据由Rosewell Park癌症研究所的Carleton Stewart提供。

图7. 流式细胞仪大小校准试剂盒。如图所示，采用前向散射光强度(FSC)的对数值表示流式细胞仪大小校准试剂盒(货号：F13838)中提供的六种聚苯乙

烯微球样本的大小，进行直方图分析，通过Becton Dickinson FACScan®流

式细胞仪采用488 nm的激发光测定FSC。

仪器设置和校准 • 帮助确保获得可靠的最佳日常仪器性能

• 稳定的数据采集，使差异降至最低

• 与所有流式细胞仪兼容

流式细胞仪可对单个细胞及其他颗粒进行定量检测，实现较

高的精度、速度和准确性。与所有高性能仪器一样，流式

细胞仪必须经常校准，以确保准确性和可靠性。Molecular

Probes®校准微球产品具有非常好的稳定性、均一性和重复

性，是极佳的流式细胞仪设置和校准工具，如需了解全部

Molecular Probes®产品的更多信息，请登录lifetechnologies.

com/flow-standards

校正AlignFlow™流式细胞仪校正微球

AlignFlow™流式细胞仪校正微球是流式细胞仪校正、聚

焦和校准的可靠参考。这些带荧光的聚苯乙烯微球的大小

和荧光强度高度均一(图6)，微球的大小、发射波长和强度

与许多生物学样本相近。由于染料位于微球基质的内部，

而非表面，因此AlignFlow™微球具有极佳的光化学和物

理稳定性，可提供可靠的仪器设置参照信号。荧光染料经

过了精心挑选，采用流式细胞仪常用的激光光源即可达到

最佳激发效果。AlignFlow™微球有三种类型：350–370

nm紫外激光激发(货号：A16502、A16505)，488 nm蓝色

激光激发(货号：A16500、A16503)，633 nm红色激光激

发(货号：A16501、A16504)。每种类型都有两种微球大

小可供选择：2.5 μm直径和6.0 μm直径。

大小校准流式细胞仪大小校准试剂盒

Molecular Probes®流式细胞仪大小校准试剂盒(货号：F13838)

提供了一套无荧光的微球悬液，可供流式细胞仪用户作为可

靠的大小参考标准使用。该试剂盒包含六种已知直径的、未

染色的聚苯乙烯微球悬液，每种微球的直径通过透射电子显

微镜测定。通过比较实验样本中细胞的前向散射(FSC)信号和

参照微球的FSC信号，评估细胞的大小。微球可用作可重复

的分子量标准(图7)，并可与实验样本混合或用于平行实验。

流式细胞仪亚微米颗粒大小参考试剂盒

流式细胞仪亚微米颗粒大小参考试剂盒(货号：F13839)提

供了一套绿色荧光的微球悬液，可供流式细胞仪用户作

为可靠的大小参考标准使用。该试剂盒包含六种已知直径

的聚苯乙烯微球悬液，每种微球的直径通过透射电子显微

镜测定。所有微球的激发和发射谱与Alexa Fluor® 488或

FITC染色的细胞类似(最大激发和发射波长分别为505 nm

和515 nm)。



通过比较实验样本中生物颗粒的FSC信号和参照微球的FSC

信号，评估生物颗粒的大小(或大小范围)。各组分微球可用

作可重复的分子量标准，并可单独使用(一种大小)，亦可与

实验样本预先混合(二至六种大小)，或用于平行实验。

该试剂盒还可用于确认仪器性能并建立适合亚微米颗粒大

小分析的参数。例如，该试剂盒还可用于检测：

• 颗粒大小检测的分辨率限度和动态范围

• 前向散射和侧向散射光电倍增管的灵敏度

• 仪器基线噪声水平

• 激光和光学系统的校准和稳定性

• 液流系统的稳定性

细胞分选设置细胞分选设置微球

Molecular Probes®细胞分选设置微球(货号：C16506、

C16507、C16508、C16509)是适用于流式细胞分选仪器的

设置和校准的可靠标准品。微球直径为6 μm (±10%)，其大

小、发射波长和强度与许多生物学样本相近。因此，微球

可用于检测细胞分选仪的设置，如液滴延迟和效率(分选过

程中的细胞损失)。微球还可用流式细胞仪激光源、光学和

液流的校准，同时避免浪费宝贵且稀有的实验样本。

补偿在理想状态下，各荧光基团的荧光发射谱应为极强的窄

峰，各个发射峰之间完全分离。实际上，有机染料和荧光

蛋白的发射峰较宽。图9显示了两种常用的荧光基团的光谱

重叠示例，它们分别是Alexa Fluor® 488染料和R-藻红蛋白

(R-PE)的发射谱。为准确阐释采集的数据，必须清楚Alexa

Fluor® 488染料的记录荧光信号确实是来自Alexa Fluor® 488

染料而非R-PE，R-PE有时能发射出同样波长范围的荧光。

为准确记录特定荧光基团的荧光信号，必须对所有染料的

发射信号进行校正，这称为补偿。

我们可提供两种类型的补偿试剂盒(表1)。一种是AbC™微

球试剂盒，适用于采用荧光标记抗体的免疫分型实验中的

染料补偿。另一种是ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒，可

与采用氨基反应性染料的细胞活性分析结合使用，如LIVE/

DEAD®可固定死细胞染料试剂盒(参见第20页的“细胞活

性”，了解这些分析产品的更多详情)。

AbC™补偿微球试剂盒

• 无需使用珍贵的样本进行流式细胞仪补偿设置

• 对小鼠、大鼠和仓鼠免疫球蛋白的不同亚类具有最高的反

应性

• 快速简便的基于微球的流式细胞仪补偿

• 消除因抗原表达差异造成的不一致性

AbC™微球试剂盒提供了一种稳定、准确且使用方便的技

术，可在使用1)荧光基团偶联的仓鼠、小鼠、兔或大鼠抗体

(AbC™总抗体补偿微球试剂盒；货号：A10497；图10) 2)使

用荧光基团偶联的小鼠抗体(AbC™抗小鼠微球试剂盒，货

号：A10344，图11)；或者3)使用荧光基团偶联的大鼠或

仓鼠抗体(AbC™抗大鼠/仓鼠微球试剂盒，货号：A10389)

时用于流式细胞仪补偿的设置。

图8. 流式细胞仪亚微米颗粒大小参考试剂盒。通过Attune®声波聚焦流式细

胞仪进行分析，仪器使用488 nm激发滤光片和530/30带通(BP)发射滤光片，

采集流式细胞仪亚微米颗粒大小参考试剂盒(货号：F13839)中五种不同大小

的颗粒的信号(试剂盒提供六种不同大小的颗粒；这里只使用其中的五种)。在颗粒荧光与侧向散射散点图中鉴别出五种不同的绿色荧光微球的直径。

图9. Alexa Fluor® 488染料(绿色曲线)和R-PE (橙色曲线)的发射谱。

Rel

ativ

e in

tens

ity (%

)

Wavelength (nm)

0

25

50

75

100

300 400 500 600 700 800 900




图10. AbC™总抗体补偿微球试剂盒染色的直方图。小鼠(A)、大鼠(B)和仓鼠(C)单克隆抗体和兔(D)单克隆及多克隆抗体的阳性捕获微球的信号分离。采用各种

PE抗体结合物(经过优化的用量)标记微球，通过Attune®声波聚焦流式细胞仪进行分析，仪器使用488 nm激发滤光片和574/26 nm带通滤光片。

联的小鼠抗体(AbC™抗小鼠微球试剂盒，货号：A10344，图

11)；或者3)使用荧光基团偶联的大鼠或仓鼠抗体(AbC™抗大

鼠/仓鼠微球试剂盒，货号：A10389)时用于流式细胞仪补偿

的设置。上述三种试剂盒均含有两种经过特殊修饰的聚苯乙

烯微球：1) AbC™捕获微球(又称为阳性补偿微球)，可与特

定免疫球蛋白的各种同型抗体结合，以及2)无抗体结合能力

的阴性微球。使用荧光基团偶联的一抗(仓鼠、小鼠、大鼠

或兔，取决于使用的试剂盒)孵育后，这两种组分可提供不

同的阳性和阴性微球群，用于设置补偿(图11)。

您可以使用与细胞染色相同的荧光基团标记抗体进行补

偿。微球散射的一致性和高表面抗体结合能力提高了设置

补偿的稳定性和准确性，可与任何一种荧光基团标记的一

抗结合使用。两种类型的微球(AbC™捕获微球和阴性微球)

直径均为6 μm左右(管上列出了各批次的实际大小)。微球悬

液采用滴瓶包装，方便了实验应用。

ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒

• 省去了需热处理细胞的麻烦

• 适用于所有LIVE/DEAD®可固定死细胞染料试剂盒

• 快速简便的基于微球的流式细胞仪补偿

• 无需使用珍贵的样本进行补偿设置

准确且一致的结果

ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒(货号：A10346)提供了一

种稳定、准确且使用方便的技术，可在使用任意一款LIVE/

DEAD®可固定死细胞染料试剂盒或氨基反应性染料时用于

流式细胞仪补偿的设置。LIVE/DEAD®可固定死细胞染料试

剂盒(和氨基反应性染料)通过染料与细胞氨基基团的反应，

评估哺乳动物细胞的活性。反应性染料可以进入细胞膜受

损的坏死细胞中，与细胞内部和细胞表面的游离氨基反

应，产生强烈的荧光。而活细胞仅有细胞表面的氨基可与

染料反应，产生的荧光强度相对较弱。活细胞和死细胞群

之间的荧光强度差异通常高于50倍。

产品名称分析类型阳性微珠阴性微珠货号

AbC™ 总抗体补偿微球试剂盒免疫分型仓鼠、小鼠、兔和大鼠抗体* 无结合能力 A10497

AbC™ 抗小鼠微球试剂盒免疫分型小鼠单克隆抗体* 无结合能力 A10344

AbC™ 抗大鼠/仓鼠微球试剂盒免疫分型大鼠和仓鼠单克隆抗体无结合能力 A10389

ArC™ 氨基反应性补偿微球试剂盒细胞活性分析氨基反应性染料和LIVE/DEAD® 可固定死细胞染料无氨基反应性 A10346

*AbC™捕获微珠可与各种同型抗体结合。本表格中的所有产品均为RUO，仅供研究使用。不得用于诊断。

表1. 补偿试剂盒选择指南。

Rat IgG1

Rat IgG2a

Rat IgG2b

Rat IgG2c

Rat IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

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s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500

800

700

900

1,000

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500

700Armenian hamster IgG

Syrian hamster IgG

PE �uorescence

Num

ber

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vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500

800

700

900 Mouse IgG1

Mouse IgG2a

Mouse IgG2b

Mouse IgG3

Mouse IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

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100

400

300

600

500

800

700Rabbit monoclonal IgG

Rabbit polyclonal IgG

Rat IgG1

Rat IgG2a

Rat IgG2b

Rat IgG2c

Rat IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

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100

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300

600

500

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700

900

1,000

PE �uorescence

Num

ber

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s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500


Syrian hamster IgG

PE �uorescence

Num

ber

of e

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101 102 103 104 105 1060

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100

400

300

600

500

800

700

900 Mouse IgG1

Mouse IgG2a

Mouse IgG2b

Mouse IgG3

Mouse IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

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s

101 102 103 104 105 1060

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100

400

300

600

500

800



Rat IgG1

Rat IgG2a

Rat IgG2b

Rat IgG2c

Rat IgGM

PE �uorescence

Num

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vent

s

101 102 103 104 105 1060

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100

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300

600

500

800

700

900

1,000

PE �uorescence

Num

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of e

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s

101 102 103 104 105 1060

200

100

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300

600

500


Syrian hamster IgG

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

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100

400

300

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500

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700

900 Mouse IgG1

Mouse IgG2a

Mouse IgG2b

Mouse IgG3

Mouse IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500

800



Rat IgG1

Rat IgG2a

Rat IgG2b

Rat IgG2c

Rat IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

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700

900

1,000

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

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500


Syrian hamster IgG

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500

800

700

900 Mouse IgG1

Mouse IgG2a

Mouse IgG2b

Mouse IgG3

Mouse IgGM

PE �uorescence

Num

ber

of e

vent

s

101 102 103 104 105 1060

200

100

400

300

600

500

800





ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒含有两种经过特殊修饰的聚苯乙烯微球，可方便地补偿LIVE/DEAD®可固定死细胞染

料：ArC™反应性微球(组分A)-结合氨基反应性染料，ArC™阴性微球(组分B)-无反应活性。使用氨基反应性染料进行

孵育后，这两种试剂盒组分可提供不同的阳性和阴性微球群，用于设置补偿(图12)。ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒可与

AbC™抗小鼠微球试剂盒相结合，用于荧光基团偶联的小鼠抗体，在多色免疫分型实验中(同时使用LIVE/DEAD®可固定死细

胞染料)提供更稳定、更准确的补偿。

绝对细胞计数流式细胞术提供了一种快速的细胞定量方法。但大多数流式细胞仪无法直接检测样本的细胞浓度或绝对细胞数量。绝对细

胞计数广泛应用于细胞群体和疾病进程定量，包括干细胞研究。将血液分析仪的测定独立细胞浓度的功能与流式细胞术细

胞群数据(多平台检测)相结合，或者在流式细胞术样本(单平台检测)中添加内部微球计数标准，可获得绝对细胞计数值。由

于单平台法较多平台检测更简单、准确(无实验室间差异和低估现象)，因此单平台检测是首选检测方法。

我们可提供两种细胞计数产品-CountBright™绝对计数微球和AccuCheck计数微球。参见下一页中的表2，确定哪种试剂

盒适合您的实验。

图11. 使用AbC™抗小鼠微球试剂盒进行补偿。(A)使用藻红蛋白(PE)偶联的小鼠抗人CD56抗体(货号：MHCD5604)标记AbC™捕获微球，用作阳性信号，阴性

微球提供阴性信号。(B)使用FITC偶联的小鼠抗人CD3抗体(货号：MHCD03014)标记AbC™捕获微球，用作阳性信号，阴性微球提供阴性信号。(C)双参数散点

图显示了使用AbC™抗小鼠微球试剂盒(货号：A10344)进行补偿后的门控人淋巴细胞，这些淋巴细胞采用PE偶联的小鼠抗人CD56抗体和FITC偶联的小鼠抗人

CD3抗体标记。

图12. ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒组分及3种LIVE/DEAD®可固定死细胞染料试剂盒的染色图谱。(A)采用405 nm激发滤光片和450/50 nm带通发射滤光片

分析LIVE/DEAD® Fixable Violet染料染色的微球(货号：L34955)。(B)采用488 nm激发滤光片和525/50 nm带通发射滤光片分析LIVE/DEAD® Fixable Green染料

染色的微球(货号：L23101)。(C)采用633 nm激发滤光片和660/20 nm带通发射滤光片分析LIVE/DEAD® Fixable Far Red染料染色的微球(货号：L10120)。

PE �uorescence

50

100

150

200

250

102-102 0 103 104 105

Eve

nts

coun

ted

FITC �uorescence

50

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150

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102-102-350 0 103 104 105

Eve

nts

coun

ted

CD56-PE �uorescence

CD

3-FI

TC �

uore

scen

ce

102-102 0 103 104 105

105

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102

0-102

A B C

LIVE/DEAD® Fixable Green stain �uorescence

0

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300

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102-102-288 0 103 104 105

Eve

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ted

LIVE/DEAD® Fixable Red stain �uorescence

0

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100

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300

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102-102-715 0 103 104 105

Eve

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ted

LIVE/DEAD® Fixable Violet stain �uorescence

0

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100

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200

350

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300

250

102-102 0 103 104 105

Eve

nts

coun

ted

A B C



图13. CountBright™绝对计数微球。采用LIVE/DEAD®存活/细胞毒性试剂盒

(货号：L3224)中的试剂对活的和热灭活的Jurkat细胞混合物进行处理。将

CountBright™ 绝对计数微球(货号：C36950)加入样本中，然后利用流式细胞

仪在488nm激发光下进行分析。采用530/30 nm带通滤光片采集钙黄绿素荧

光值，采用610 nm长通滤光片采集乙啶同型二聚体-1 (EthD-1)荧光值。数据

显示可以清楚地分辩出活细胞和死细胞以及计数微球。

CountBright™绝对计数微球

• 由于微球上带有各种荧光染料，因此它可与所有商品化的

仪器兼容

• 易于使用的实验方案，可用于多种细胞类型，包括裂解/

无需清洗的全血

• 更多平台检测更可靠

CountBright™绝对计数微球(货号：C36950)含有已知浓度

的微球，是经校准的微球悬液，能够在各种激发和发射波

长下(紫外光至635 nm激发光和385至800 nm发射光)发出亮

的荧光。进行绝对计数时，将特定体积的微球悬液加入到

特定体积的样本中，这样样本体积与微球体积之比就是已

知的。分析样本的体积可以通过微球数量计算得出，且可

与细胞事件结合用于测定细胞浓度(图13)。一般而言，应至

少采集1,000次微球信号方可确保样本体积的测定具有统计

学意义。

CountBright™绝对计数微球适用于任意样本类型，包括裂

解/无需清洗的全血。试剂中的微球直径约为7 μm，沉降特

性与淋巴细胞类似。样本制备步骤(如清洗)可导致细胞或微

球损失，应尽量避免。CountBright™微球可与散射或荧光

阈值结合使用。使用散射阈值时，微球信号应高于阈值。

通过单一参数可对微球设门，但利用参数组合则可从细胞

和其他信号中分辨出微球。

AccuCheck计数微球

• 利用两种不同颜色的微球的比值表示移液准确度的内部

质控

• 首选单一平台，而非多平台检测，实现结果的稳定性

• 轻松实现大多数免疫分型实验验证

AccuCheck计数微球(货号：PCB100)提供了一种高效的单

平台绝对细胞计数方法，它结合了直接流式细胞术免疫分

型的优点，并使用两种不同的荧光微球(A微球和B微球)。这

两种荧光微球可作为双重内部质控，用于血液体积计算。

将已知体积的AccuCheck计数微球加至同样已知体积的采用

裂解/无需清洗技术染色的血液中。与细胞一起计数微球。

由于微球的浓度已知，因此可以通过细胞数量与荧光微球

总数的比值获得每微升中的细胞数(绝对计数)。然后用细胞

数乘以每单位体积的总荧光微球数。由于AccuCheck计数微

球系统包含两种不同的已知比例的荧光微球，可通过两种

微球的比值确认分析过程中移液的准确性。

产品名称样本类型微球大小激发波长 (nm) 最大发射波长 (nm)

检测参数适用* 货号

CountBright™ 绝对计数微球任意类型 7 μm UV to 635 385 to 800 细胞数 RUO C36950AccuCheck计数微球全血 Bead A: 6.40 μm

Bead B: 6.36 μmBead A: 488Bead B: 635

Bead A: 575–585Bead B: 660–680

细胞数和移液准确性

RUO PCB100

*RUO，仅供研究使用。不得用于诊断。

表2. 绝对计数微球选择指南。



步骤产品名称激光类型 Ex/Em* 适用* 规格货号

校正 AlignFlow™ 流式细胞仪校正微球 (适用于紫外光)，2.5 μmUV 350–370/

400–470 RUO 3 mLA16502

AlignFlow™ 流式细胞仪校正微球 (适用于紫外光)，6.0 μm A16505

AlignFlow™ 流式细胞仪校正微球 (适用于蓝色激光)，2.5 μm蓝色 488/515–660 RUO 3 mL

A16500

AlignFlow™ 流式细胞仪校正微球 (适用于蓝色激光)，6.0 μm A16503

AlignFlow™ 流式细胞仪校正微球 (适用于红色激光)，2.5 μm红色 633/645–680 RUO 3 mL

A16501

AlignFlow™ 流式细胞仪校正微球 (适用于红色激光)，6.0 μm A16504

大小校准流式细胞仪大小校准试剂盒 (非荧光微球) NA NA RUO 1 kit F13838

流式细胞仪亚微米颗粒参考试剂盒蓝色 505/515 RUO 1 kit F13839

细胞分选设置细胞分选设置微球 (适用于紫外光) UV 350–375/460 RUO 3 mL C16506

细胞分选设置微球 (适用于蓝色激光) 蓝色 488/515 RUO 3 mL C16508

细胞分选设置微球 (适用于绿-黄色激光) 绿-黄色 532, 561/575 RUO 3 mL C16509

细胞分选设置微球 (适用于红色激光) Red 633/680 RUO 3 mL C16507

补偿 AbC™ 总抗体补偿微球试剂盒 NA NA RUO 1 kit A10497

AbC™ 抗小鼠微球试剂盒 NA NA RUO 1 kit A10344

AbC™ 抗大鼠/仓鼠微球试剂盒 NA NA RUO 1 kit A10389

ArC™ 氨基反应性补偿微球试剂盒 NA NA RUO 1 kit A10346

绝对细胞计数 AccuCheck计数微球蓝色/红色 488/575-585 (Bead A)

RUO 10 mL PCB100

CountBright™ 绝对计数微球紫外光至红色 UV to 635/385 to 800 RUO 5 mL C36950

N/A，不适用。

* 最大激发和发射波长 (nm)。� RUO，仅供研究使用。不得用于诊断。

表2. 绝对计数微球选择指南。


抗原检测

图14. 采用Attune® NxT声波聚焦流式细胞仪对小鼠调节性T细胞和树突状细胞

进行多参数(10色)分析。使用表4列出的针对表面抗原的一抗对C57BL/6脾细胞

进行染色，然后使用FIX & PERM®细胞透化试剂盒(货号：GAS003、GAS004)进行固定和透化。在透化过程中，使用PE偶联的大鼠抗小鼠Foxp3抗体进行细

胞内染色。采用FSC/SSC参数(A，左)对淋巴细胞设门，在后续分析中除去表

达B220的B细胞(A，右)。在B220–、CD45.2+设门范围内，根据CD3表达水平分

析T细胞(A，右下)。根据辅助受体CD4或CD8 (B，左) 的表达将CD3+ T细胞分成

两个群体。在CD4+ T细胞中，有一种抑制性调节性T细胞亚群可以表达转录因

子Foxp3和细胞表面标记物CD25 (IL-2Rα) (B，右)。CD3–细胞中有少量CD11c+ MHCII+群体，它们是专业的抗原提呈树突状细胞(C，左)。脾脏树突状细胞可

以进一步分为CD11b+和CD8+树突状细胞亚群(C，右)，分别具有不同的抗原提

呈特性。

抗原检测一抗• 种类最多的染料、蛋白及Qdot®抗体结合物

• 抗体种类繁多，可满足各类应用需求

• 适用于临床和研究应用的优质产品；有RUO、ASR和IVD试

剂可供选择

• 被超过20,000篇学术期刊引证过

我们可提供适用于基础和临床研究设置靶点的多种高度特异

性的RUO、ASR和IVD一抗。这些抗体已经过验证，可用于

流式细胞分析，包括CD标记物、细胞因子、趋化因子和生

长因子特异性的抗体以及针对肿瘤、免疫学、细胞信号、凋

亡、增殖以及干细胞研究的抗体。从异源细胞群的亚群鉴定

到稀有事件检测，采用多色流式细胞仪及Molecular Probes®

荧光偶联一抗有助于解决众多复杂的细胞生物学问题-较

其他方法操作时间更短，需要的样本量更少。如需搜索一抗

结合物，请登录lifetechnologies.com/flow-searchantibodies

荧光基团概述自1975年以来，Molecular Probes®科研团队一直是荧光技术

和细胞分析能力领域的引领者，从Alexa Fluor®染料和Qdot®

标记物到Zenon®标记技术，不断推出新产品。我们能够提

供涵盖近紫外光、可见光和近红外光谱的一整套Molecular

Probes®荧光标记物。这些专业技术增强了我们的一抗和二

抗结合能力，可产生更亮、更稳定的荧光结合物。不论您使

用哪种仪器，我们都可提供各种标记物，帮助您每次均可获

得最佳的样本结果和流式细胞分析结果。参见表3，了解我

们提供的荧光基团及其特性列表。

经典荧光染料和串联染料

我们可提供各种荧光染料偶联的一抗，包括Alexa Fluor®、

Pacific Blue™、Pacific Green™和Pacific Orange™染料、荧光

素、荧光蛋白(PE、PerCP和APC)及11种不同的串联染料偶联

的抗体(表3)。随着仪器技术的进步，有越来越多的荧光颜色

可以使用，染料品种齐全变得越来越重要(图14和表4)。

Rapid, accurate detection of rare events

Figure 1. Multiparameter (10-color) analysis of murine regulatory T cells and dendritic cells with the Attune® NxT Acoustic Focusing Cytometer. Lymphocytes were gated using FSC/SSC parameters (A, left) and B220-expressing B cells were omitted from subsequent analysis (A, middle). Within the B220–, CD45.2+ gate, T cells were analyzed based on their expression of CD3 (A, right). CD3+ T cells were separated into two populations based on expression of the co-receptors CD4 or CD8 (B, left). Within the CD4+ T cells there is a subpopulation of suppressive regulatory T cells that express the transcription factor Foxp3 and the cell surface marker CD25 (IL-2Rα) (B, right). CD3– cells were separated to show a rare population of CD11c+ MHCII+, professional antigen-presenting dendritic cells (C, left). Splenic dendritic cells can be subdivided further into CD11b+ and CD8+ dendritic cell subsets (C, right), each possessing unique antigen presentation properties.

B C

CD4 Pacific GreenTM CD11c PE-Cy®7 CD11b FITCFoxp3 PE

CD8

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700

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Forward scatter CD45.2 APC-Cy®7 CD3 PerCP-Cy®5.5

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0 P

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B

C

The Attune® NxT Acoustic Focusing Cytometer is a benchtop analyzer that uses a revolutionary technology, acoustic focusing, to align cells prior to interrogation with a laser for your multicolor flow cytometry analysis. The system offers: • Unique modular design—one-day field upgradable

system with configurations from 1–4 lasers, with the ability to detect up to 14 colors

• Fast detection speed—short acquisition time without loss of data quality enables unique applications such as rare event detection and use of no-wash/no-lyse techniques

• Distinctive acquisition and analysis software—intuitive and powerful for users of all experience levels

• Convenient size—complete setup fits on even small benchtop space

Now with the flexibility to create a customized 4-laser, 14-color system, the Attune® NxT cytometer is designed to accommodate existing experimental protocols and lab budgets.

Multicolor analysis in a modular designWith the option to be configured with up to 4 lasers and 14 colors for multiparameter analysis (Figure 1), the Attune® NxT Acoustic Focusing Cytometer was designed as a modular system to fit most experimental design needs and lab budgets. The Attune® NxT cytometer can be designed to accommodate the most common fluorophores and fluorescent proteins used in flow cytometry to match the panels you are currently running (Table 1). Multiple fluorescent proteins can be detected with an optional 561 nm laser (Figure 2).



B C


CD8

Alex

a Fl

uor®

700

MH

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CD8

Alex

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700

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A


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B C


CD8

Alex

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700

MH

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CD8

Alex

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700

CD25

AP

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A

Forward scatter CD45.2 APC-Cy®7 CD3 PerCP-Cy®5.5Si

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B

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B C

CD4 Pacific GreenTM CD11c PE-Cy®7 CD11b FITCFoxp3 PECD

8 Al

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B C


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B C


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B C


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B

C









抗原检测

表3. 用于流式细胞仪的荧光基团。

荧光基团激光发射波长 (nm)

UV 紫色405 nm

蓝色488 nm

绿色532 nm

黄色561 nm

红色633/635 nm

抗体标记物

Alexa Fluor® 350 442


Pacific Blue™ 455

Pacific Green™ 500

Pacific Orange™ 551


Fluorescein (FITC) 525

Qdot® 605 605

Qdot® 655 655

Qdot® 705 705

Qdot® 800 800

Peridinin chlorophyll (PerCP) 678

PerCP-Cy®5.5 695

R-phycoerythrin (R-PE, PE) 575

PE-Texas Red® 615

PE-Alexa Fluor® 610 628

TRI-COLOR® (TC, PE-Cy®5) 670

PE-Cy®5.5 694

PE-Alexa Fluor® 700 723

PE-Cy®7 767

Allophycocyanin (APC) 660

APC-Cy®5.5 694

APC-Cy®7 767

APC-Alexa Fluor® 750 775



APC-Alexa Fluor® 750 775

表4. T细胞和树突状细胞的多参数分析中使用的产品 (图14)。

靶点宿主荧光基团激光最大发射波长 (nm) 货号

MHCII 大鼠 Pacific Blue™ dye 紫色 455 A14901

CD4 大鼠 Pacific Green™ dye 紫色 500 C11207

B220 大鼠 Pacific Orange™ dye 紫色 551 RM2630

CD11b 大鼠 FITC 蓝色 525 RM2801

Foxp3 大鼠 R-PE 蓝色 575 N/A

CD3 仓鼠 PerCP-Cy®5.5 蓝色 695 A14784

CD11c 仓鼠 PE-Cy®7 蓝色 767 A15849

CD25 (IL-2Rα) 大鼠 APC 红色 660 N/A

CD45.2 小鼠 APC-Cy®7 红色 767 A18642

CD8 大鼠 Alexa Fluor® 700 红色 719 MCD0829

* 所有产品仅供研究使用。除特别说明外，不得用于诊断。N/A-不适用


抗原检测

图15. Qdot®标记物的吸收和发射谱。(A) 采用摩尔消光系数绘制Qdot®标记物

的吸收光谱。(B) Qdot®标记物的标准化发射光谱，数量与图A相同。

Qdot®抗体结合物

• 405 nm或488 nm激发，使紫色激光的使用最大化

• 与现有的有机染料相结合，提高了可检测的参数数量

• 不会像串联结合物那样随着时间的推移而降解，重复性

更好

• 使用单一激发光源时可产生更窄的发射光谱，补偿极低

Qdot®抗体结合物具有明亮的发射荧光，极其适用于低丰度

细胞外蛋白检测。Qdot®抗体结合物的大小与R-PE相当，可

与现有的有机荧光基团结合物相兼容。Qdot®抗体结合物采

用低于最大发射光波长的任意值均可激发，最佳激发光源为

紫外光或紫色光线。采用单一激发光源时，Qdot®抗体结合

物可产生较窄的均衡发射谱，补偿极低，采用405 nm紫色激

光时具有极长的Stokes频移，可实现更好、更高效的多色分

析。用于流式细胞分析的Qdot®抗体结合物有多种颜色可供

选择(图15和表5)，这些优势使其成为功能强大的抗体标记和

染色工具。

如需进一步了解Qdot®纳米晶体及其在流式细胞分析中的应

用，请登录lifetechnologies.com/flow-qdot

靶点* 克隆结合物‡

Qdot® 655 Qdot® 705 Qdot® 800

CD2 S5.5 Q10172 Q22140§ Q22141§ Q22142§

CD3 S4.1 (AKA 7D6) Q10054 Q10012 Q22149§

CD4 S3.5 Q10008 Q10007 Q10060

CD4† RM4-5 Q10092 Q22163§ Q22164§ Q22165§

CD8 3B5 Q10009 Q10055 Q10059 Q22157§

CD10 MEM-78 Q10153 Q22135§ Q22136§

CD14 TüK4 Q10013 Q10056 Q22137§ Q10064

CD19 SJ25-C1 Q10306 Q10179 Q22138§ Q22139§

CD19† 6D5 Q22160§ Q10379 Q22161§ Q22162§

CD27 CLB-27/1 Q10065 Q10066

CD38 HIT2 Q10053 Q22150§ Q22151§ Q22152§

CD45 H130 Q10051 Q22154§ Q10062 Q10156

CD45R (B220) RA3-6B2 Q22166§ Q10176 Q22167§ Q22168§

CD45RA MEM-56 Q10047 Q10069 Q22155§ Q22156§

HLADR (class II) Tü36 Q10052 Q22158§ Q22159§ Q10063

同型对照小鼠IgG2a Q10014 Q10015 Q10076

* 除特别说明外，所有抗体的宿主均为小鼠。所有产品仅供研究使用。除特别说明外，不得用于诊断。† 宿主为大鼠。‡ 除特别说明外，所有产品的规格均为100次检测。§ 产品规格为25次检测。

A

B

表5. Qdot® 一抗结合物选择指南。


图16. 采用Pacific Blue™染料偶联的大鼠抗mCher-ry抗体(货号：M11238)标记的表达mCherry蛋白的

U2-OS细胞的直方图。通过Attune®声波聚焦流式

细胞仪，使用405 nm激发滤光片和522/31 nm带通

滤光片采集并分析样本。

抗原检测

mCherry大鼠单克隆抗体结合物

我们的亲和纯化的mCherry荧光蛋白大鼠单克隆抗体荧光结合物(表6)可在流式

细胞应用中用于检测天然和变性形式的mCherry或mCherry融合蛋白(图16)。全

长mCherry用作免疫原，形成的IgG2a-同型单克隆抗体可检测变性和天然形式的

蛋白质。mCherry单体红色荧光蛋白具有更高的亮度、出众的光稳定性和极快的

成熟速度，适用于生理学过程监测和转基因表达检测。

染料结合物激发光颜色激发/发射波长 (nm) 货号

Pacific Blue™ dye 紫色 405/455 M11238

Alexa Fluor® 488 蓝色 488/519 M11239

Alexa Fluor 594 红色 590/617 M11240

Alexa Fluor® 647 红色 650/668 M11241

表6. mCherry大鼠单克隆抗体 (克隆16D7) 结合物。

N3

N3

N3

N3

Azide-activated antibody

Antibody • Polyclonal • Monoclonal • Recombinant

Site-selectively labeled antibody

β-GalactosidaseGalT(Y289L)UDP-GalNAz

DIBO alkyne label

抗体标记我们可提供多种Molecular Probes®标记试剂盒，可将Alexa Fluor®高强度荧

光染料、Qdot®纳米晶体、R-藻红蛋白(R-PE)甚至生物素直接连接到不到10

µg乃至1 mg的IgG抗体上。采用直接标记抗体时，在一次染色实验中可以使用

多种相同种属的抗体。您可以使用适用于您的应用领域的传统标记试剂或者

采用click化学技术进行位点特异性标记。我们下面介绍两种简单的流式细胞

分析一抗标记方案。如需了解更多信息及产品，请登录lifetechnologies.com/

flow-antibodylabeling

SiteClick™ 抗体标记系统

• 包含可标记100 μg IgG抗体的试剂

• 简单的分步实验方案

• 高效的位点特异性且可重复的标记试剂

• 适用于流式细胞分析的R-PE和Qdot®标记物

SiteClick™系统是通用位点选择性抗体标记的新范例。这种click化学试剂介

导的模块化方法使您可以通过酶促反应标记在任意抗体的重链N-连接聚糖

上。传统的抗体标记技术繁琐且不稳定，而SiteClick™位点选择性方法则可以

高度稳定且可重复地在抗体上标记检测分子。

SiteClick™系统(图17)提供的位点选择性标记可以防止传统氨基或巯基反应

性标记试剂常见的抗原结合域破坏，在修饰前无需对标记位点进行遗传学改

造。在对抗原结合域内或其周围含有赖氨酸残基的单克隆抗体进行标记时，

这种位点选择性策略就显得尤其重要，因为这些位点的标记会破坏抗原的结

合。

单克隆抗体还对还原性半胱氨酸标记中使用的二硫键还原剂具有不同的敏感

性，会形成部分解离的抗体片段，从而导致抗体结合和产量下降。

图17. SiteClick™抗体标记系统。SiteClick™抗体标

记过程的第一步是使用ß-半乳糖苷酶去除重链N-连接聚糖上的末端半乳糖残基，暴露几乎所有可修

饰的GlcNAc残基。第二步，使用GalT (Y289L)酶通

过酶促反应将GalNAz连接至末端GlcNAc残基上，

利用叠氮标签活化游离的末端GlcNAc残基。第三

步，使叠氮残基与您选择的二苯环辛炔(DIBO)-功能化的探针(如Alexa Fluor® 488 DIBO炔烃)反应。

平均标记率为每个抗体3–3.5个标记。


抗原检测

我们可提供带有R-PE和各种Qdot®标记物的抗体标记试剂盒(表7)，尤其适用于

流式细胞分析应用。该试剂盒提供了简单的工作流程，无论是初学者还是经验

丰富的研究人员，每次均可实现高效的抗体标记(图18)。抗体聚糖高度保守，

即便是在不同的种属之间亦是如此，因此SiteClick™标记用于不同抗体的可重

复性极高，无需对各种新获得的抗体的标记进行优化。如需了解更多信息，请

登录lifetechnologies.com/flow-siteclick

Zenon®标记技术

Zenon®标记技术提供了一种使用简便的通用系统，可为小鼠IgG1、IgG2a和

IgG2b同型以及兔、山羊和人IgG抗体标记上优秀的Molecular Probes®染料以及

其他荧光基团、生物素、光蛋白和酶标记物。与直接化学标记相比，该技术具

很多优势，包括：

• 快速-整个标记过程只需不到10分钟

• 高效-一抗的标记率接近100%

• 经济-可标记亚微克量的抗体

• 简单-无需对抗体进行标记前或标记后纯化

• 灵活-可以方便地在一次实验中使用多种一抗

Zenon®标记技术采用针对完整IgG抗体Fc片段的荧光基团、生物素或酶标记Fab

片段，构成非共价标记复合物。为了确保Zenon®标记试剂对目标抗体Fc片段的

高亲和力和高选择性，这些标记试剂制备过程中已经过亲和纯化。由于Zenon®

标记方法的核心是免疫选择性，因此形成复合物前无需去除抗体样品中的外源

性蛋白或含氨基缓冲液。利用Zenon®技术标记的抗体，其荧光强度或酶活性与

直接标记的抗体结合物相近。

我们提供的各种Zenon®标记试剂(表8)可以组合搭配，因此在流式细胞分析应用

中可自由选择多种染料–抗体组合。如需进一步了解Zenon®抗体标记技术及其

他抗体标记产品，请登录lifetechnologies.com/flow-antibodylabeling

图18. 无论是初学者还是经验丰富的研究人员均可

实现高效的抗体标记。初学者和专业用户分别使用

SiteClick™ Qdot® 605抗体标记试剂盒和SiteClick™ R-PE抗体标记试剂盒标记抗CD4单克隆抗体，重复

三次。使用标记抗体对分离自人供体血液的CD4阳性细胞进行标记，然后利用流式细胞仪进行分析；

对照样本为商品化的R-PE抗CD4抗体结合物。数据

显示了CD4阳性细胞在总细胞中的百分比，误差线

表示各用户进行三次标记的差异。新用户从未进行

过蛋白质生物偶联，亦可达到与专业用户相当的标

记效率。

产品激发光颜色发射波长 (nm) 货号

SiteClick™ R-PE抗体标记试剂盒蓝色 578 S10467

SiteClick™ Qdot® 525抗体标记试剂盒紫外光、紫色、蓝色 525 S10449

SiteClick™ Qdot® 565抗体标记试剂盒紫外光、紫色、蓝色、绿色 565 S10450

SiteClick™ Qdot® 585抗体标记试剂盒紫外光、紫色、蓝色、绿色、黄色 585 S10451




SiteClick™ Qdot® 705抗体标记试剂盒紫外光、紫色、蓝色、绿色、黄色、红色 705 S10454

SiteClick™ Qdot® 800抗体标记试剂盒紫外光、紫色、蓝色、绿色、黄色、红色 800 S10455

表7. SiteClick™ 抗体标记试剂盒。


抗原检测

表7. SiteClick™ 抗体标记试剂盒。

染料 Ex/Em* 小鼠IgG1 小鼠IgG2a 小鼠IgG2b 兔IgG 山羊IgG 人IgG

Alexa Fluor® 染料†�

Alexa Fluor® 350 346/442 Z25000 Z25100 Z25200 Z25300 Z25400

Alexa Fluor® 405 402/421 Z25013 Z25113 Z25213 Z25313

Alexa Fluor® 488 495/519 Z25002 Z25102 Z25202 Z25302 Z25602 Z25402

Alexa Fluor® 546 556/573 Z25004 Z25104 Z25304

Alexa Fluor® 555 555/565 Z25005 Z25105 Z25205 Z25305 Z25605

Alexa Fluor® 568 578/603 Z25006 Z25106 Z25306



Alexa Fluor® 680 679/702 Z25010 Z25110 Z25210

Alexa Fluor® 700 696/719 Z25011

传统染料†

Pacific Blue™ 410/455 Z25041 Z25156

Pacific Green™ Z11203

Pacific Orange™ 400/551 Z25256 Z25257

Fluorescein 494/518 Z25042 Z25342

Biotin†

Biotin-XX NA Z25052 Z25152 Z25252 Z25352 Z25452

藻胆蛋白和串联染料‡

R-PE 496§/578 Z25055 Z25155 Z25255 Z25355 Z25455

R-PE-Alexa Fluor® 610 496§/630 Z25020

R-PE-Alexa Fluor® 647 496§/668 Z25021

Allophycocyanin (APC) 650/660 Z25051 Z25151 Z25251 Z25351 Z25451

APC-Alexa Fluor® 750 650/775 Z25031

酶‡ 辣根过氧化物酶 NA Z25054 Z25154 Z25254 Z25354

* 最大荧光激发和发射波长近似值 (nm)。† 每个配有Alexa Fluor®染料、经典染料或生物素的Zenon®标记试剂盒所含材料可供50次标记反应使用；一次标记反应定义为标记1 μg抗体所需的 Zenon®试剂。‡ 每个配有藻胆蛋白或酶的Zenon®标记试剂盒所含材料可供25次标记反应使用；配有串联染料的Zenon®标记试剂盒所含材料可供10次标记反应使用。§ 546和565 nm处存在额外激发峰。NA，不适用。请登录lifetechnologies.com/flow-zenon，了解更多信息。

表8. Zenon®标记试剂盒选择指南。


抗原检测

图19. 使用Alexa Fluor® 610–R-藻红蛋白串联链霉亲和素结合物、Alexa Fluor® 488染料和R-藻红蛋白标记物同时检测三种细胞表面标记物。使用生物素化

的小鼠抗人CD3抗体标记氯化铵红细胞裂解的全血中的淋巴细胞，用含1%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)清洗，然后用Alexa Fluor® 610–R-藻红

蛋白串联染料标记的链霉亲和素(货号：S20982)孵育。再次清洗细胞，然后用Alexa Fluor® 488染料偶联的抗人CD8抗体和PE偶联的抗人CD4抗体标记。使用

1% BSA/PBS进一步清洗，通过Becton Dickinson FACScan®流式细胞仪，采用488 nm激发光分析标记。在绿色通道(525 + 10 nm)中检测CD8，橙色通道 (575 + 10 nm)中检测CD4，红色通道(>650 nm)中检测CD3。双变量散射图显示了预期的相互排斥的(A) CD4和CD8阳性细胞以及(B)双阳性CD3/CD4和(C) CD3/CD8细胞群体。

表9. 二级检测试剂选择指南。

反应性及类型

染料或标记

Alexa Fluor®

405

Pacific Blue™

Pacific Green™

Pacific Orange™

Alexa Fluor®

488

PE Alexa Fluor® 610–R-PE

Alexa Fluor® 647–R-PE

APC Alexa Fluor® 750–APC

抗小鼠IgG A31553 P10993 P11204 A11001 P852 A20980 A20990 A865 A21006

抗兔IgG A31556 P10994 P31584 A11008 P2771MP A20981 A20991 A10931

抗大鼠IgG A11006 A10545 A10540

链霉亲和素 S32351 S11222 S11200 S32365 S11223 S866 S20982 S20992 S868S32362*

S21008

* 优质级。

二级检测我们可提供种类繁多的二抗检测试剂，包括我们优质的Alexa Fluor®染料、藻胆蛋白、Alexa Fluor®染料–藻胆蛋白串联

荧光染料(图19)、Qdot®标记物、生物素和酶标记物(辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)标记的抗体和链霉亲和素。我们还可

提供不同免疫活性的抗体，当同时进行两个或多个靶点的二抗免疫检测时，可避免混杂的交叉反应。

表9列出了一小部分结合物。使用我们的在线二抗选择工具查找合适的二级检测试剂。利用该工具，您可以指定目标IgG

的种类(和形态)、宿主、种属反应性及结合物类型，优化搜索结果。如需立即查找二抗，请登录lifetechnologies.com/

flow-secondarydetection


抗原检测

表9. 二级检测试剂选择指南。

流式细胞分析抗体定制服务我们的定制抗体服务高效、保密，且可确保质量。专属项目经理将指导完成项目的每个步骤，并及时将我们的进展告知

您。让我们为您提供定制解决方案，解除您的烦恼。

我们提供的定制抗体服务包括：

• 标记-使用您的抗体或从我们的抗体中选择一种，标记物的品种齐全

• 配制-不含叠氮化物，不同的缓冲液或不同浓度

• 包装-各种特殊规格包装

• 预混-(RUO)抗体混合物

如需了解更多信息，请发送电子邮件至客户服务部[email protected]


细胞分析

图20. 细胞固定后，LIVE/DEAD®可固定死细胞染

料的保留。使用LIVE/DEAD® Fixable Aqua死细胞

染料试剂盒(货号：L34957)分别对活Jurkat细胞

(左侧峰)和经过热处理的Jurkat细胞(右侧峰)进行

染色。(A)图中的细胞未经固定；(B)图中的细胞染

色后采用3.7%甲醛固定。利用流式细胞仪采用405 nm激发光和~525 nm发射光分析样本。

细胞分析我们开发出了各种Molecular Probes®染料和试剂盒，用于评估细胞功能、健康

和活性。细胞健康不论是您面临的首要问题，还是仅仅是您解决其他问题的一

个关键因素，我们都可以为您提供解决方案。如需了解更多信息及产品，请登

录lifetechnologies.com/flow-cellhealth

细胞活性采用细胞活性分析，可以轻松鉴别活细胞群和死细胞群，将其与其他功能或治

疗相关联，或者将死细胞群排除在分析之外。下面我们介绍了两种不同的细胞

活性分析类型，它们仅使用流式细胞仪的一个检测通道，因此尤其适用于多色

流式细胞分析(表10)。如需了解更多信息及产品，请登录lifetechnologies.com/

flow-cellviability

LIVE/DEAD®可固定死细胞染料试剂盒

• 固定后染色形态仍可保留，利用细胞内表型分析轻松完成活细胞/死细胞分析

• 适用于几乎任何染色和表型分析实验方案

• 有七种颜色可供选择，适合紫外光、405 nm、488 nm或633 nm激光

LIVE/DEAD®可固定死细胞染料试剂盒(参见第30页的产品列表)可与氨基酸共价

结合，但无法进入健康的活细胞胞浆内。染料可与活细胞和死细胞的表面蛋白

反应，但只能标记细胞膜受损的细胞胞浆蛋白，因此死细胞的荧光强度比活细

胞亮至少50倍。由于采用共价标记，可以在不影响活性鉴别信号的情况下对染

色细胞进行固定和透化(图20)，如果您想要固定并透化样本，同时在后续分析

过程中进行死细胞鉴别，则这些试剂是您的理想选择。LIVE/DEAD®可固定死

细胞染料可与各种激发光源和检测通道匹配。对于补偿质控，可以使用LIVE/

DEAD®可固定死细胞染料和ArC™氨基反应性补偿微球试剂盒(A10346；参见第

8页) 获得最佳结果。

在实验中意外将病变细胞或死细胞计入在内会对结果产生极大的影响。例

如，在免疫分型分析中将死细胞计入会影响结果，尤其对于稀有表型更是如

此。Perfetto et al. (2006)显示在白细胞免疫分型实验中，采用流式细胞术散射参

数设门无法将所有死细胞排除在分析之外(参见第21页的引文)。使用Molecular

Probes® LIVE/DEAD®可固定死细胞染料，能够高效地将死细胞排除在分析之外，

从而大大提高了分析的准确性。

产品靶点是否可固定?* 无需清洗？活细胞荧光

死细胞荧光

应用

LIVE/DEAD® 可固定死细胞染料表面和细胞内蛋白是否十分微弱十分明亮免疫分型

SYTOX® 死细胞染料 Nucleic acids 否是十分微弱十分明亮活细胞分析，死细胞排斥

* 仅采用甲醛固定。

LIVE/DEAD®

sllec fo r eb

muN

102 103 104 105

LIVE/DEAD®

sllec fo r eb

muN

102 103 104 105

25

0

50

75

100

125

0

50

100

150

Live

Live

Dead

Dead

A

B

表10. 细胞活性分析选择指南。


细胞分析

图21. 死细胞排除避免了分析中的染色伪影。对淋巴细胞设门后(A)，使用

LIVE/DEAD® Fixable Violet死细胞染料试剂盒(货号：L34955)鉴别活细胞和死

细胞(B)。请注意，尽管对散射参数设门，但死细胞的数量仍较多。对死细

胞(C)和活细胞(D)的后续分析显示，两种细胞群体的表型存在明显差异。经

Elsevier许可来自Perfetto SP, Chattopadhyay PK, Lamoreaux L, et al.(2006) J Immunol Methods 313:199–208。图22. 使用SYTOX®死细胞染料对活细胞设门。使用Alexa Fluor® 488染料

偶联的抗人CD3抗体、R-PE偶联的抗人CD8抗体和5 nM SYTOX® Red死细

胞染料(货号：S34859)对经热处理和未经处理的人外周血白细胞混合物进

行染色，然后利用流式细胞仪采用488 nm和635 nm激发光进行分析。(A)直方图显示了两个细胞群体的分布，死细胞可发出明显的SYTOX®红色荧

光信号，活细胞则没有。(B)对活细胞设门后的CD8和CD3染色双参数曲

线。

SYTOX®死细胞染料

• 高亲和核酸染料，可轻松鉴定死细胞

• 多种颜色，光谱重叠极少，具有更佳的多色性能

• 无需清洗步骤；只需加入、孵育并分析即可，采用简化的实验方案

SYTOX®死细胞染料(参见第30页的产品列表)无法进入细胞膜完整的细胞，但可以快速扩散进入质膜受损的细胞内。染料进

入细胞后，可与DNA结合，其荧光信号明显增强；活细胞无荧光，死细胞则可发出明亮的荧光。SYTOX®染料可与各种激发

光源匹配，这些染料通常用于“缓存通道”，并对活细胞设门供进一步分析(图22)，无需清洗步骤；事实上，SYTOX®死细

胞染料无法与DNA共价结合，因此在分析过程中染料必须维持一定的浓度。

表10. 细胞活性分析选择指南。

CD

3–A

lexa

Flu

or® 4

88 fl

uore

scen

ce

CD8–R-PE fluorescence

Num

ber

of c

ells

Dead

Live

SYTOX® Red fluorescence

50

100

150

200

0

1020 103 104 105

0

103

104

105

0 103 104 105

A

B

A

B

SSC

Lymphocyte gate Viability gate

Live cells Dead cells

CD

4–C

y®5.

5-P

E �

uore

scen

ce

CD

4–C

y®5.

5-P

E �

uore

scen

ce

FSC

-A

FSC

-A

CD8–Q705 �uorescenceCD8–Q705 �uorescence

LIVE/DEAD® Fixable Violet �uorescence

A B

C D

SSC

Lymphocyte gate Viability gate

Live cells Dead cells

CD

4–C

y®5.

5-P

E �

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scen

ce

CD

4–C

y®5.

5-P

E �

uore

scen

ce

FSC

-A

FSC

-A

CD8–Q705 �uorescenceCD8–Q705 �uorescence

LIVE/DEAD® Fixable Violet �uorescence

A B

C D

A B

C D


细胞分析

图23. 使用Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor® 488流式细胞分析试剂盒和FxCycle™ Violet染料进行细胞增殖分析。按照Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor®488流式细胞分析试剂盒的实验方案(货号：C10632)，使用10 μM EdU处理Jurkat细胞1小时，用Alexa Fluor® 488叠氮甲基吡啶染色，再用FxCycle™ Violet染料(货号：F10347)染色。用488 nm激发滤光片(用于Click-iT® EdU Alexa Fluor® 488染料)或405 nm激发滤光片(用于FxCycle™ Violet染料)对细胞进行

流式细胞分析。(A)直方图清楚地分辨出了S期细胞(DNA合成，包括EdU掺入)及G2/M或G0/G1细胞。(B)直方图显示了DNA含量的分布，使用FxCycle™ Violet染料，G0/G1和G2/M期直方图的峰被S期分布间隔开。(C)双参数Click-iT® Plus EdU和FxCycle™曲线显示的双阳性细胞可直接检测处于S期细胞的

所占百分比。

细胞增殖细胞增殖以及促进或抑制细胞增殖的物质的鉴定是细胞生物学和药物开发研究中一项极其重要的领域。我们既可以提供传

统的细胞增殖检测试剂(CellTrace™细胞增殖试剂盒)，还开发出了最新的新DNA合成检测技术(Click-iT® Plus EdU标记) (表

11)。如需了解更多信息及产品，请登录lifetechnologies.com/flow-cellproliferation

Click-iT® Plus EdU流式细胞分析试剂盒

• 与BrdU测定相比，具有更高的准确度，差异极小(低CV值)

• 简单的五步实验方案

• 可与GFP、mCherry、APC、PerCP、PE及其他荧光探针同时使用进行多重分析

通过检测新合成DNA中掺入的修饰性核苷酸，间接观察细胞的生长。EdU (5-乙炔-2’-脱氧尿苷)是核苷酸类似物，它可在DNA

合成过程中掺入DNA。Click-iT® Plus EdU流式细胞分析试剂盒通过铜催化下炔烃和荧光染料标记的叠氮甲基吡啶间发生反

应，在反应物之间形成稳定的共价键，实现EdU (包含炔烃)检测。叠氮甲基吡啶分子很小，这意味着荧光标记物可以高效进

入完整的DNA，无需进行复杂且苛刻的细胞处理。

以往的DNA合成检测是通过将核苷酸类似物溴脱氧尿苷(BrdU)掺入DNA，然后采用抗BrdU抗体进行检测。该方法尽管当时

十分有用，但它需要DNA变性(使用酸、热或DNA酶)暴露BrdU-该步骤会对样本质量产生不利影响。Click-iT® Plus EdU

流式细胞分析无需变性DNA，从而大大简化了分析过程，同时可以获得可比较的准确结果(图23)。Click-iT® Plus EdU标记

适用于固定实验方案。

由于Click-iT® Plus反应采用修饰性叠氮化物取代了之前的Click-iT®反应中的叠氮，因此Click-iT®试剂盒可与荧光蛋白兼容。

经过修饰后，样本中游离铜的浓度明显降低，荧光蛋白(如R-PE、R-PE串联染料和GFP)发出的荧光信号不会发生淬灭。Click-

iT® Plus EdU反应的速度和准确度与之前的Click-iT® EdU反应相当。相关试剂盒请参见第30页的产品列表。

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FxCycle™ Violet �uorescence (x106) FxCycle™ Violet �uorescence (x106)Click-iT® EdU plus Alexa Fluor® 488 �uorescence

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A B C


细胞分析

图24. 使用CellTrace™试剂进行世代追踪。(A)使用CellTrace™ Violet试剂追踪8代细胞增殖。收集人外周血单核细胞，使用CellTrace™ Violet试剂进行

染色，然后用小鼠抗人CD3 (货号：MHCD0300)和白介素2 (货号：PHC0027)刺激7天。直方图上独立的峰代表了连续传代的活的CD4阳性细胞。未经刺

激的亲代细胞用红色峰表示。(B)和(C)图使用CellTrace™ CFSE (B)和CellTrace™ Far Red (C)试剂追踪了7代细胞增殖。收集人T淋巴细胞，使用试剂进

行染色，然后用抗人CD3 (货号：MHCD0300)刺激细胞5天。这些直方图上独立的峰代表了连续传代的活的SYTOX® Green (货号：S34860)阴性细胞。未

经刺激的亲代细胞用蓝色(CellTrace™ CFSE)或紫色(CellTrace™ Far Red)表示。所有分析均通过Attune®声波聚焦流式细胞仪进行检测，仪器使用405 nm激发滤光片和450/40 nm带通发射滤光片检测CellTrace™ Violet；使用488 nm激发滤光片和530/30 nm带通发射滤光片检测CellTrace™ CFSE；使用

638 nm激发滤光片和660/20 nm带通发射滤光片检测CellTrace™ Far Red。

CellTrace™细胞增殖试剂盒

• 明亮的单峰染色可方便地观察多代细胞

• 染色后可在细胞内保留数天

• 无细胞毒性效应，不影响细胞增殖能力或细胞生物学效应

• 有多种颜色可供选择，可与细胞功能抗体或标记物(如GFP)轻松结合

• 简单、稳定的染色实验方案

CellTrace™系列染料包括CellTrace™ CFSE染料(货号：C34554)、CellTrace™ Violet染料(货号：C34557)和CellTrace™ Far

Red染料(货号：C34564)，这些染料可与赖氨酸侧链及其他氨基基团反应，自发且不可逆地与细胞蛋白质结合。当细胞分裂

时，CellTrace™染料标记可平均分配至两个子代细胞中，在一个增殖细胞群中，各连续传代细胞具有细胞荧光强度呈1/2递

减的特征。使用CellTrace™ CFSE和CellTrace™ Violet染料可以鉴别八至十代的连续传代细胞(图24)。所有CellTrace™染料

均可与其他细胞功能探针或标记物结合使用。由于CellTrace™ Violet和CellTrace™ Far Red采用激光和检测通道将其与绿色

荧光区分开来，因此可与GFP、荧光素或其他绿色荧光探针配合用于多重分析。

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CellTrace™ CFSE �uorescence CellTrace™ Far Red �uorescenceCellTrace™ Violet �uorescence

A B C

表11. 细胞增殖分析选择指南。

产品靶点是否可固定? 多重分析？应用

Click-iT® Plus EdU流式细胞分析试剂盒掺入新合成的DNA 是是细胞增殖

CellTrace™ 细胞增殖试剂盒含有赖氨酸的蛋白质是是传代分析


细胞分析

图25. 使用Vybrant® DyeCycle™染料对活细胞设门。先

后使用Vybrant® DyeCycle™ Green染料(货号：V35004)及SYTOX® Blue死细胞染料(货号：S34857) 对过度培养

的Jurkat细胞进行染色，然后利用流式细胞仪采用488 nm和405 nm激发光进行分析。直方图(B)对活细胞设门

(A)，显示了活细胞中的DNA含量分布：G0/G1和G2/M期的峰被S期分布间隔开。将死细胞计入在内会造成结

果不准确。

细胞周期DNA含量检测可以帮助您简单了解细胞群体中处于不同细胞周期阶段的细

胞。将流式细胞术与建模算法相结合，可评估G0/G1期与S期、G2/M期或显

示多倍体的细胞。采用Molecular Probes®荧光染料可以对活细胞或固定细

胞群体进行准确的细胞周期分析(表12)。如需了解更多信息并查看更多产

品，请登录lifetechnologies.com/flow-cellcycle

Vybrant® DyeCycle™染料

• 准确的活细胞细胞周期分析

• 低细胞毒性，适用于细胞分选及其他活细胞实验

• 多种颜色方案，简化了多重分析

• 能够根据细胞周期进行分选

• 能够使用紫色激光鉴别干细胞侧群

Vybrant® DyeCycle™染料能够对活细胞进行染色以确定其DNA图谱，有

405、488、532或633 nm激发波长可供选择。染料一般与死细胞染料(图25)

结合使用，将死细胞排除在分析之外，但Vybrant® DyeCycle™染料无细胞

毒性，可以在确定细胞周期后对染色细胞进行分选，然后培养细胞或采用

其他功能分析进行评估。相关试剂请参见第30页的产品列表。

FxCycle™染料

• 更高的灵活性，适用于多色细胞周期研究

• 使用488 nm激发染料时几乎无需补偿

• 提高了分析的准确度，CV值更小

使用FxCycle™ Violet染料(货号：F10347)、FxCycle™ PI/RNA酶染液

(货号：F10797)或FxCycle™ Far Red染料(货号：F10348)进行细胞周期分

析，可结合其他细胞分析产品，解放了其他激光和检测通道可轻松实现多

重分析，如检测细胞增殖(第22页，图23)、免疫表型、细胞凋亡或细胞活

性。FxCycle™染料适用于经过固定和透化处理的细胞，其荧光信号与细胞

群体中每个细胞的DNA含量成正比。

表12. 细胞周期分析选择指南。

产品名称靶点活细胞？多重分析？应用

Vybrant® DyeCycle™ 染料 DNA 是是活细胞分析

FxCycle™ 染料 DNA 否是固定细胞分析

Vybrant® DyeCycle™ Green �uorescence

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A B


细胞分析

图26. 使用CellEvent® Caspase-3/7 Green流式细胞分析试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase活性。采用(A) DMSO或(B) 10 μM喜树碱处理Jurkat细胞(人T细胞白血病细胞) 3小时，然后采用CellEvent® Caspase-3/7 Green流式

细胞分析试剂盒(货号：C10427)标记细胞。通过配备488 nm激光的Attune®

声波聚焦流式细胞仪对染色样本进行分析，仪器使用530/30 nm带通滤光片

采集CellEvent®试剂的荧光，使用690/50 nm带通滤光片采集SYTOX® AAD-vanced™染料(试剂盒中亦有提供) 的荧光。结果显示，经过处理的细胞中凋

亡细胞(B)的比例高于对照组细胞(A)的基础凋亡水平。A，凋亡细胞；N，坏

死细胞；V，活细胞。

细胞凋亡通过生物化学和形态学变化可以区分凋亡细胞与坏死细

胞。与坏死细胞不同的是，凋亡细胞的形态学特征为核染

色质固缩、细胞皱缩以及产生膜包裹凋亡小体；在生物化

学特征上细胞凋亡是基因组的片段化及几种细胞蛋白的解

离或降解。就像细胞活性一样，我们无法通过任何单一参

数来准确界定细胞彻底死亡；因而采用几种不同的方法研

究细胞凋亡通常十分有利。下面我们介绍了几种评估细胞

凋亡的方法和Molecular Probes®产品(表13)。如需了解有关

细胞凋亡的更多信息及产品，请登录lifetechnologies.com/

flow-apoptosis

CellEvent® Caspase-3/7 Green

流式细胞分析试剂盒

• 优化的caspase-3/7底物用于细胞凋亡分析

• 简单且无需清洗的实验方案有助于保护易损的凋亡细胞

• 适用于活细胞荧光成像和甲醛固定的方法

Caspase是一类在凋亡启动和执行过程中具有关键作用的

酶家族，凋亡早期的显著特征是Caspase酶的活化。我们

可提供各种适用于流式细胞分析的Caspase检测产品，包

括CellEvent® Caspase-3/7 Green流式细胞分析试剂盒(货

号：C10427)，它利用被Caspase-3或Caspase-7剪切的底物

与DNA结合并发出明亮的荧光，检测Caspase的活性(图26)。

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CellEvent® Caspase-3/7 Green �uorescence CellEvent® Caspase-3/7 Green �uorescence

表13. 凋亡分析选择指南。

产品名称靶点是否可固定? 多重分析？使用的通道数

CellEvent® Caspase-3/7 Green流式细胞分析试剂盒 Caspase 3/7 否是 1

膜联蛋白V结合物磷脂酰丝氨酸易位是是 1

MitoProbe™ JC-1分析试剂盒线粒体膜电位否是 2

紫色膜不对称性比率探针/死细胞凋亡试剂盒不对称膜否是 3


细胞分析

图27. 使用Alexa Fluor® 488膜联蛋白V结合物和碘

化丙啶对Jurkat细胞进行流式细胞术分析。首先

用10 μM喜树碱处理Jurkat人T细胞白血病细胞四

小时(A)，或者不对细胞进行处理(用作对照组B)。然后使用死细胞凋亡试剂盒中的试剂及膜联蛋白V Alexa Fluor® 488与碘化丙啶(货号：V13245)处理

细胞，并利用流式细胞仪进行分析。结果显示，

经喜树碱处理的细胞中凋亡细胞(用“A”表示)的比例显著高于对照组细胞的基础水平。V，活细

胞；D，死细胞。

膜联蛋白V结合物和试剂盒

• 与Molecular Probes®染料结合，具有更高的灵敏度

• 适用于所有激光的结合物，提升了多重分析性能

• 可作为独立试剂提供，亦可作为即用型试剂盒提供

凋亡的另一个标志是细胞膜的胞浆侧表面的磷脂酰丝氨酸(PS)翻转，其正常情

况下位于细胞的外表面。凋亡细胞中一旦发生PS翻转，则可以通过与荧光标记

的膜联蛋白V (一种PS结合蛋白)的结合进行检测。我们可提供一系列膜联蛋白

V荧光结合物，包括Molecular Probes®明亮且光稳定的Alexa Fluor®染料结合物

(图27)。此外，我们还可提供适用于流式细胞分析的试剂盒，将我们其他的一

些细胞活性和细胞功能探针与膜联蛋白相结合，提供细胞凋亡状态的多参数数

据。第31页的产品列表中介绍了其中三种试剂盒和几种膜联蛋白V荧光结合物。

如需查找所有凋亡试剂盒，请登录lifetechnologies.com/flow-annexin

MitoProbe™ JC-1分析试剂盒

• 使用简单，适用于现有的研究方案

• 适用于多种细胞类型

• 488 nm和633/635 nm激发光源

• 几乎无需补偿

MitoProbe™ JC-1分析试剂盒(货号：M34152)提供了阳离子染料JC-1、羰基氰-3-

氯苯腙(CCCP，线粒体膜电位解偶联剂)、二甲基亚砜(DMSO)和浓缩的磷酸盐缓

冲液(PBS)，可用于线粒体膜电位研究。JC-1可以电位依赖性地聚集于线粒体

内，表现为发射荧光从绿色(~529 nm)变为红色(~590 nm)，其原因是浓度依赖性

的红色荧光的J-聚集物的形成(图28)。因此，线粒体去极化表现为红色与绿色荧

光强度比值下降，这仅仅取决于膜电位，而与其他因素(如线粒体大小、形状或密

度)无关-它们会对单一组分荧光检测产生影响。研究人员可以利用荧光比值检

测对膜电位进行参比测定，并确定细胞群体中响应某一刺激的细胞百分比。

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图28. 采用2 µM JC-1染色的Jurkat细胞。使用MitoProbe™ JC-1分析试剂盒(货号：M34152)中的试剂，在37°C、5% CO2条件下染色细胞20分钟，用PBS清洗，并通过Attune®声波聚焦流式

细胞仪进行分析，仪器使用488 nm激发滤光片及530/30 nm带通和>640 nm长通发射滤光片。

图中显示了未经处理的培养细胞(A)和在37°C下经10 μM喜树碱诱导凋亡5小时的处理细胞(B)。


细胞分析

膜不对称性探针

• 对胰蛋白酶消化细胞的准确凋亡分析

• 简单的5分钟染色实验方案

• 可与其他蓝光激发凋亡染料相兼容

紫色膜不对称性比率探针/死细胞凋亡试剂盒(货号：A35137)提供了一种利用紫色激光流式细胞仪简单高效地检测细胞凋亡与

细胞死亡的方法(图29)。紫色膜不对称性比率探针可检测凋亡过程中细胞膜的不对称性变化。它用于贴壁细胞和悬浮细胞均

可获得极佳的性能，且可与其他凋亡指示剂(如Caspase检测和线粒体膜电位改变)相关联。该染料能产生激发态分子内质子迁

移效应，产生波长为530 nm和585 nm的双发射光谱，可对表面电荷的变化产生双重颜色比率的响应。F2N12S探针与SYTOX®

AADvanced™死细胞染料结合，该染料仅能穿过晚期凋亡细胞或坏死细胞的细胞膜，从而将其与早期凋亡细胞区分开来。

与基于Annexin的分析不同，该分析方法无需特殊的缓冲液或冲洗步骤，而且在对贴壁细胞分析时，它不易出现物理或化学清

除步骤中常见的细胞膜损伤，从而可以提供更佳的数据准确性。

图29. 紫色膜不对称性比率探针用于细胞凋亡检测。用10 μM喜树碱处理Jurkat细胞(人T细胞白血病细胞) 4小时(图B和图D)或不处理(图A和图C)用作对照。在

流式细胞仪上分析样本，对F2N12S采用405 nm激发光和585 nm和530 nm带通滤光片，对SYTOX® AADvanced™ 死细胞染料采用488 nm激发光和695 nm带

通滤光片。可通过F2N12S两种发射光的相对强度把活细胞与凋亡细胞和死细胞区分开来(A和B)。在图C和图D中，以SYTOX® AADvanced™死细胞荧光染色对

F2N12S的两种发射光(585/530 nm)的比值作图。A = 凋亡细胞，L = 活细胞，D = 死细胞。

F2N12S orange �uorescence

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细胞分析

其他细胞功能分析CellROX®流式细胞分析试剂盒

• 荧光探针在活性氧(ROS)存在的条件下会被氧化为荧光形式

• 与其他激光激发的荧光基团光谱几乎无重叠，可轻松实现多重分析

• 可在完全培养基或其他适当的缓冲液中进行细胞染色，无需无血清培养基

有氧生物体和健康细胞中ROS生成是不可避免的，且处于可控的状态。在氧化应激条件下，ROS生成显著上升，从而进一

步引发膜脂质、蛋白质和核酸的变化。这些生物分子的氧化损伤与衰老及各种病理学事件有关，包括动脉粥样硬化、致

癌、缺血再灌注损伤和神经退行性疾病。

CellROX®试剂是用于检测细胞内的氧化应激水平的一种荧光探针，它可采用荧光显微镜、高容量筛选、微孔板荧光光度计

或流式细胞仪进行检测(图30)。在还原状态下，这些染料无荧光，一旦被氧化，则可以发出明亮的荧光。用于流式细胞分析

的Molecular Probes®试剂盒包括CellROX® Green流式细胞分析试剂盒(货号：C10492)、CellROX® Orange流式细胞分析试剂

盒(货号：C10493)和CellROX® Deep Red流式细胞分析试剂盒(货号：C10491)。如需了解更多信息，请登录lifetechnologies.

com/flow-cellrox

图30. 流式细胞分析检测ROS。(A)使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)对Jurkat细胞进行预处理，然后再用氧化剂处理，采用CellROX® Deep Red试剂(CellROX® Deep Red流式细胞分析试剂盒(货号：C10491)中提供)检测发现细胞的ROS水平下降。采用CellROX® Deep Red试剂对经叔丁基过氧化氢(TBHP)处理的细胞(红色)进行染色，相比先用NAC进行预处理再用TBHP处理的细胞(蓝色)和未经处理的对照组细胞(绿色)，其染色程度较深。(B, C) CellROX® Deep Red试剂可与SYTOX® Blue死细胞染料结合使用，用于区分活的应激细胞与死细胞。采用(B) PBS或(C) 200 μM TBHP处理Jurkat细胞30分钟，然后用CellROX® Deep Red流式细胞

分析试剂盒标记。值得注意的是，处理细胞(C)中氧化应激状态的细胞百分比高于对照组细胞中观察到的基础ROS水平(B)。

CellROX® Deep Red �uorescence

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细胞分析

pHrodo® E. coli BioParticles®吞噬试剂盒

• 特异性地检测并监控吞噬作用和内吞作用

• 采用pHrodo®标记物追踪抗体内化作用

• 采用pHrodo® 标记物追踪配体内化作用

• 可与红色或绿色染料兼容使用，用于多重分析实验

Molecular Probes®的专利染料pHrodo®，是一种pH敏感的染料，在中性pH下几乎无荧光，在酸性环境下可发出明亮的荧光，可

在各种应用领域用作pH指示剂，包括吞噬作用及内吞过程研究。通过流式细胞分析，使用pHrodo® Green E. coli BioParticles®

吞噬试剂盒(货号：P35381)和pHrodo® Red E. coli BioParticles®吞噬试剂盒(货号：A10025；图31)可实现全血样本和活细胞的吞

噬活性检测。该试剂盒包括了颗粒摄取和红细胞裂解评估所需的所有试剂。此外，还可以采用pHrodo®吞噬颗粒标记试剂盒(货

号：A10026)及pHrodo® Red染料标记您自己的细菌样本。如需了解更多信息及产品，请登录lifetechnologies.com/flow-phrodo

图31. 流式细胞分析分析显示，采用pHrodo® Red BioParticles®标记物处理的粒细胞具有更高的荧光强度。收集全血样本并使用肝素处理，制备两份100 μL样本。使用pHrodo® Red E. coli BioParticles®标记物 (pHrodo® Red E. coli BioParticles®吞噬试剂盒(货号：A10025)中使用)处理这两份样本，涡旋振荡。将

其中一份样本置于37°C水浴箱中，另一份样本 (阴性对照) 置于冰上。孵育15分钟后，使用氯化铵裂解缓冲液裂解红细胞。以500 x g离心样本5分钟，清洗一

次，重悬于Hanks平衡盐溶液中。在BD FACSCalibur™细胞仪上采用488 nm氩离子激光和564–606 nm发射滤光片对样本进行分析。在37°C下孵育的样本，

显示出较高的细胞吞噬的pHrodo® Red BioParticles®标记物荧光强度(红色)，而阴性对照样本被置于冰上，则抑制了细胞吞噬(蓝色)，因而其荧光强度较低。


细胞分析

类别产品名称激光类型 Ex/Em* 适用† 规格货号

细胞活性 LIVE/DEAD® Fixable Blue死细胞染料试剂盒紫外光 350/450 RUO 200 assays L23105

LIVE/DEAD® Fixable Violet死细胞染料试剂盒紫色 416/451 RUO 200 assays L34955

LIVE/DEAD® Fixable Aqua死细胞染料试剂盒紫色 367/526 RUO 200 assays L34957

LIVE/DEAD® Fixable Yellow死细胞染料试剂盒紫色 400/575 RUO 200 assays L34959

LIVE/DEAD® Fixable Green死细胞染料试剂盒蓝色 495/520 RUO 200 assays L23101

LIVE/DEAD® Fixable Red死细胞染料试剂盒蓝色 595/615 RUO 200 assays L23102

LIVE/DEAD® Fixable Far Red死细胞染料试剂盒红色 650/665 RUO 200 assays L10120

LIVE/DEAD® Fixable Near-IR死细胞染料试剂盒红色 750/775 RUO 200 assays L10119

LIVE/DEAD® 可固定死细胞染料采样试剂盒多种 Various RUO 320 assays L34960

SYTOX® Blue死细胞染料紫外光/紫色 444/480‡ RUO 1 mL S34857

SYTOX® Green死细胞染料蓝色 504/523‡ RUO 1 mL S34860

SYTOX® Orange死细胞染料黄色 547/570‡ RUO 1 mL S34861

SYTOX® Red死细胞染料红色 640/658‡ RUO 1 mL S34859

SYTOX® 死细胞染料采样试剂盒多种 Various‡ RUO 1 kit S34862

SYTOX® AADvanced™ 死细胞染料蓝色 546/647‡ RUO5 x 0.5 mL S10274

S10349

细胞增殖 Click-iT® Plus EdU Pacific Blue™ 流式细胞分析试剂盒

紫色 404/450 RUO 50 assays C10636

Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor® 488流式细胞分析试剂盒

蓝色 495/519 RUO50 assays C10632

100 assays C10633

Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor® 647流式细胞分析试剂盒

红色 650/670 RUO50 assays C10634

100 assays C10635

CellTrace™ Violet细胞增殖试剂盒紫色 405/450 RUO 180 assays C34557

CellTrace™ CFSE细胞增殖试剂盒蓝色 492/517 RUO 1 kit C34554

CellTrace™ Far Red细胞增殖试剂盒红色 630/661 RUO 1 kit C34564

细胞周期 Vybrant® DyeCycle™ Violet染料紫色 369/437‡ RUO 200 μL V35003

Vybrant® DyeCycle™ Green染料蓝色 506/534‡ RUO 400 μL V35004

Vybrant® DyeCycle™ Orange染料蓝色 519/563‡ RUO 400 μL V35005

Vybrant® DyeCycle™ Ruby染料红色 638/686‡ RUO100 assays V10309

400 assays V10273

FxCycle™ Violet染料紫色 358/461 RUO 500 assays F10347

FxCycle™ PI/RNA酶染液蓝色 535/617 RUO 100 mL F10797

FxCycle™ Far Red染料红色 640⁄658 RUO 500 assays F10348

* 最大激发和发射波长 (nm)。† RUO，仅供研究使用，不得用于诊断。‡ 与DNA结合时的激发/发射波长 (nm)。§ 红色荧光的J-聚集物形成时 (浓度依赖性) 出现发射光偏移。

细胞分析产品列表


细胞分析

类别产品名称激光类型 Ex/Em* 适用† 规格货号

细胞凋亡

CellEvent™ Caspase-3/7 Green流式细胞分析试剂盒

蓝色/绿色

511/533 (CellEvent™ Green)‡

546/647 (SYTOX® AADvanced

Stain)‡

RUO 100 assays C10427

膜联蛋白V，Pacific Blue™ 结合物紫色 410/455 RUO 500 μL A35122

膜联蛋白V，FITC结合物蓝色 494/518 RUO 500 μL A13199

膜联蛋白V，Alexa Fluor® 488结合物蓝色 495/519 RUO 500 μL A13201

膜联蛋白V，PE结合物蓝色 496, 546, 565/578 RUO 250 μL A35111

膜联蛋白V，APC结合物红色 650/660 RUO 250 μL A35110

膜联蛋白V，Alexa Fluor® 647结合物红色 650/665 RUO 500 μL A23204

Pacific Blue™ Annexin V/SYTOX® AADvanced™ 凋亡试剂盒

紫色/蓝色

410/455 Pacific Blue™ dye

546/647 (SYTOX®

AADvanced™ dye)

RUO 50 assays A35136

死细胞凋亡试剂盒及Alexa Fluor® 488膜联蛋白V和碘化丙啶

蓝色

495/519 (Alexa Fluor® 488 dye) RUO

50 assays V13241

535/617 (PI) 250 assays V13245

死细胞凋亡试剂盒及FITC膜联蛋白V和碘化丙啶蓝色494/519 (FITC)

535/617 (PI)RUO 50 assays V13242

紫色膜不对称性比率探针/死细胞凋亡试剂盒紫色/蓝色

405⁄530, 585(F2N12S)546/647‡

(SYTOX® AADvanced™ dye)

RUO 100 assays A35137

MitoProbe™ JC-1分析试剂盒蓝色 514/529, 590§ RUO 100 assays M34152

其他细胞功能分析

CellROX® Green流式细胞分析试剂盒蓝色

508/525(CellROX® Green)

640/658(SYTOX® Red)‡


CellROX® Orange流式细胞分析试剂盒绿色 (532 nm)

545/565(CellROX® Orange)

640/658(SYTOX® Red)‡


CellROX® Deep Red流式细胞分析试剂盒红色

640/665(CellROX® Deep Red)

444/480(SYTOX® Blue)‡


pHrodo® Green E. coli BioParticles® 吞噬试剂盒

蓝色 509/533 RUO 100 assays P35381

pHrodo® Green S. aureus BioParticles® 吞噬试剂盒

蓝色 509/533 RUO 100 assays P35382

pHrodo® Red E. coli BioParticles® 吞噬试剂盒

蓝色 560/585 RUO 100 assays A10025

pHrodo® 吞噬颗粒标记试剂盒蓝色 560/585 RUO 100 assays A10026

* 最大激发和发射波长 (nm)。† RUO，仅供研究使用，不得用于诊断。‡ 与DNA结合时的激发/发射波长 (nm)。§ 红色荧光的J-聚集物形成时 (浓度依赖性) 出现发射光偏移。

BOUNDARY-BREAKING Acoustic focusing cytometry

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