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1Monitoreo y detección de epinotia

MONITOREO Y DETECCIÓN DE EPINOTIA(Crocidosema aporema, Lepidoptera:Tortricidae)

CON TRAMPAS DE FEROMONAS

Proyecto FPTA- 208Desarrollo de una tecnología basada en feromonas

para el monitoreo de Epinotia aporema en cultivos deoleaginosas y pasturas: caracterización química de la

feromona sexual; implementación y evaluación encampo de trampas de monitoreo

Editores: Paula Altesor*

Andrés González**

Equipo de trabajo: Paula Altesor, Andrés González, Carmen Rossini, Paola Liberati.

Laboratorio de Ecología Química, Facultad de Química.

Horacio Silva, Enrique Castiglioni.

Depto. de Protección Vegetal, Facultad de Agronomía (EEMAC).

Daniela Gamenara, Leticia Alves, David González, Juan Ramos, Ignacio Carrera.

Gustavo Seoane.

Laboratorio de Síntesis Orgánica, Facultad de Química.

* Lic. MSc. Laboratorio de Ecología Química, Facultad de Química, Universidad de la República. **Dr. PhD. Laboratorio de Ecología Química, Facultad de Química, Universidad de la República.

2 Monitoreo y detección de epinotia

Impreso en Editorial Hemisferio Sur S.R.L.Buenos Aires 335Montevideo - Uruguay

Depósito Legal 362-134/13

Título: MONITOREO Y DETECCIÓN DE EPINOTIA (Crocidosema aporema, Lepidoptera:Tortricidae) CON TRAMPAS DE FEROMONAS

Editores: Paula Altesor

Andrés González

Equipo de trabajo: Paula Altesor; Andrés González Carmen Rossini; Paola Liberati;Horacio Silva; Enrique Castiglioni; Daniela Gamenara; Leticia Alves;David González; Juan Ramos; Ignacio Carrera; Gustavo Seoane

Serie: FPTA N° 46

© 2013, INIA

Foto de tapa: Macho de Crocidosema (=Epinotia) aporema atraído por la feromona sexualde la hembra liberada desde un septo de goma. La feromona fue químicamentecaracterizada y sintetizada en este proyecto, con el fin de producir trampas demonitoreo para este insecto plaga de leguminosas.

Editado por la Unidad de Comunicación y Transferencia del Tecnología del INIA

Andes 1365, Piso 12. Montevideo - Uruguayhttp://www.inia.org.uy

Quedan reservados todos los derechos de la presente edición. Esta publicación no se podráreproducir total o parcialmente sin expreso consentimiento del INIA.


Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria

Integración de la Junta Directiva

Ing. Agr., MSc., PhD. Álvaro Roel - Presidente

D.M.T. V., PhD. José Luis Repetto - Vicepresidente

Ing. Agr. Joaquín Mangado

Ing. Agr. Pablo Gorriti

D.M.V. Álvaro Bentancur

D.M.V., MSc. Pablo Zerbino


FONDO DE PROMOCIÓN DE TECNOLOGÍA AGROPECUARIA

El Fondo de Promoción de Tecnología Agropecuaria (FPTA) fue instituido por elartículo 18º de la ley 16.065 (ley de creación del INIA), con el destino de financiarproyectos especiales de investigación tecnológica relativos al sector agropecuario delUruguay, no previstos en los planes del Instituto.

El FPTA se integra con la afectación preceptiva del 10% de los recursos del INIAprovenientes del financiamiento básico (adicional del 4o/oo del Impuesto a la Enaje-nación de Bienes Agropecuarios y contrapartida del Estado), con aportes voluntariosque efectúen los productores u otras instituciones, y con los fondos provenientes definanciamiento externo con tal fin.

EL FPTA es un instrumento para financiar la ejecución de proyectos de investiga-ción en forma conjunta entre INIA y otras organizaciones nacionales o internacionales,y una herramienta para coordinar las políticas tecnológicas nacionales para el agro.

Los proyectos a ser financiados por el FPTA pueden surgir de propuestaspresentadas por:

a) los productores agropecuarios, beneficiarios finales de la investigación, o por susinstituciones.

b) por instituciones nacionales o internacionales ejecutoras de la investigación, deacuerdo a temas definidos por sí o en acuerdo con INIA.

c) por consultoras privadas, organizaciones no gubernamentales o cualquier otroorganismo con capacidad para ejecutar la investigación propuesta.

En todos los casos, la Junta Directiva del INIA decide la aplicación de recursos delFPTA para financiar proyectos, de acuerdo a su potencial contribución al desarrollo delsector agropecuario nacional y del acervo científico y tecnológico relativo a lainvestigación agropecuaria.

El INIA a través de su Junta Directiva y de sus técnicos especializados en lasdiferentes áreas de investigación, asesora y facilita la presentación de proyectos a lospotenciales interesados. Las políticas y procedimientos para la presentación deproyectos son fijados periódicamente y hechos públicos a través de una amplia gamade medios de comunicación.

El FPTA es un instrumento para profundizar las vinculaciones tecnológicas coninstituciones públicas y privadas, a los efectos de llevar a cabo proyectos conjuntos.De esta manera, se busca potenciar el uso de capacidades técnicas y de infraestruc-tura instalada, lo que resulta en un mejor aprovechamiento de los recursos nacionalespara resolver problemas tecnológicos del sector agropecuario.

El Fondo de Promoción de Tecnología Agropecuaria contribuye de esta manera ala consolidación de un sistema integrado de investigación agropecuaria para elUruguay.

A través del Fondo de Promoción de Tecnología Agropecuaria (FPTA), INIA hafinanciado numerosos proyectos de investigación agropecuaria a distintas institucio-nes nacionales e internacionales. Muchos de estos proyectos han producido resulta-dos que se integran a las recomendaciones tecnológicas que realiza la institución porsus medios habituales.

En esta serie de publicaciones, se han seleccionado los proyectos cuyos resulta-dos se considera contribuyen al desarrollo del sector agropecuario nacional. Surelevancia, el potencial impacto de sus conclusiones y recomendaciones, y su aporteal conocimiento científico y tecnológico nacional e internacional, hacen necesaria laamplia difusión de estos resultados, objetivo al cual se pretende contribuir con estapublicación.


Página

CONTENIDO

Capítulo 1

Introducción: el uso de feromonas en el manejo de lepidópteros plaga ............ 9

Capítulo 2

Crocidosema (=Epinotia) aporema: biología e importancia ............................... 13

Capítulo 3

Estrategia experimental ......................................................................................... 17

Capítulo 4

Comportamiento reproductivo de epinotia ............................................................ 23

Capítulo 5

Identificación de la feromona sexual de epinotia ................................................ 25

Capítulo 6

Ensayos con feromona sintética en laboratorio y campo .................................. 29

Capítulo 7

Discusión, conclusiones y perspectivas .............................................................. 33

Bibliografía ............................................................................................................... 35


CAPÍTULO 1.

Proyecto FPTA 208

Período de Ejecución: Ene. 2007-Dic. 2009

Paula Altesor*

Carmen Rossini*

Andrés González*

*Laboratorio de Ecología Química,Facultad de Química.

La comunicación química en insectosha sido mayormente investigada en pla-gas agrícolas y forestales con el objetivode desarrollar estrategias de manejo al-ternativas al uso de insecticidas, de modode racionalizar su empleo y mitigar susefectos nocivos para la salud y el medio-ambiente. Los semioquímicos (señalesquímicas) que se han utilizado con máséxito en este contexto son indudable-mente las feromonas sexuales de lepi-dópteros (Witzgall et al., 2010). Otrossemioquímicos importantes e intensa-mente estudiados en los últimos años,como los atrayentes volátiles de plantasy los volátiles que median interaccionestritróficas, presentan un futuro promiso-rio en la búsqueda de aplicaciones parael control de plagas.

El empleo de semioquímicos respec-to a los plaguicidas convencionales tienela ventaja de no dejar residuos tóxicos,afectar únicamente a la especie diana, yrequerir pequeñas cantidades de produc-tos volátiles e inocuos (Howse et al.,

1998; Witzgall et al., 2010). El uso sos-tenido de semioquímicos incrementa supropia efectividad, ya que se estabilizanlas poblaciones de organismos benéfi-cos como depredadores y parasitoides,los que potencialmente controlan el sur-gimiento de plagas secundarias.

Las feromonas de lepidópteros se uti-lizan para la detección y monitoreo po-blacional de plagas, así como para elcontrol de las mismas. El monitoreo es-pacial y temporal de plagas permite unuso informado de estrategias de controlquímico, lo cual disminuye significativa-mente las aplicaciones de insecticidasrespecto al uso preventivo de los mis-

mos. Por otro lado, el control de plagasbasado en feromonas puede eliminar oreducir en forma muy importante la nece-sidad de control químico, y es utilizadocon éxito para aproximadamente unadecena de especies, aunque su poten-cial es significativamente mayor (Witz-gall et al., 2010).

I) DETECCIÓN Y MONITOREO

La aplicación más extendida de fero-monas sexuales consiste en su uso paradetección y monitoreo de insectos plaga.Las feromonas sintéticas se cargan enseptos de goma en cantidades que osci-lan entre 0,1 y 1 mg, y se colocan dentrode trampas que retienen a los machosatraídos. Los datos de capturas de ma-chos permiten determinar cuándo y dón-de la plaga está presente, y ademásestimar su dinámica poblacional, esta-bleciendo así los momentos precisos deaplicación de estrategias de control. Enalgunas especies se ha desarrollado unacorrelación precisa entre las capturas demachos y la población de larvas espera-das para la generación siguiente. Estopermite la utilización de umbrales decapturas que disparen medidas de con-trol, lo cual requiere que los datos decapturas sean confiables en términosabsolutos, remarcando la necesidad deluso de trampas estandarizadas para ase-gurar la constancia de los mismos (Arn et

al., 1997; Witzgall et al., 2010).

Las trampas de feromonas son losuficientemente sensibles y específicaspara detectar bajas densidades de unaespecie. Esto posibilita la detección deespecies invasoras que puedan conside-

Introducción: el usode feromonas en el

manejo delepidópteros plaga


rarse plagas cuarentenarias, el segui-miento de una especie exótica ya esta-blecida, así como el éxito en la introduc-ción de una especie benéfica (Cossé et

al., 2005) o un programa de erradicación(El-Sayed et al., 2006; Kean y Suckling2005). En tiempos de intensos movi-mientos de plagas importantes, como laprincipal plaga de viña en Europa Lobesia

botrana, el uso de trampas de feromonaspara la detección preventiva y tempranaes una herramienta poderosa para plani-ficar estrategias de erradicación cuandoel insecto aún se encuentra en una etapade instalación, por ende más vulnerable.

La información sobre variaciones po-blacionales de una plaga, en combina-ción con el conocimiento del desarrollodel insecto y su relación con la tempera-tura, son extremadamente importantescuando se emplean medidas de controlcuya efectividad depende de una ventanaestrecha de tiempo. Por ejemplo, el usode productos específicos para ciertosestadios inmaduros del insecto, o la libe-ración de agentes biológicos de control,se ven facilitados por una precisa infor-mación espacio-temporal de la presen-cia de la plaga objetivo.

Las feromonas de unas 600 especiesde lepidópteros se han caracterizadoquímicamente (El-Sayed 2011), y en laactualidad decenas de especies plagason rutinariamente monitoreadas median-te septos de feromonas comercializadospor distintas empresas regionales o in-ternacionales. Se estima que unos 20millones de septos de feromona son pro-ducidos cada año, en su mayoría paraespecies de lepidópteros (Witzgall et

al.,, 2010). Una perspectiva a futuro es lacombinación de programas regionalesde monitoreo con sistemas de informa-ción geográfica, los que permitirán unaconcentración de medidas de control enzonas focales de la especie plaga (Tobinet al., 2007).

II) CONTROL

Aunque el objetivo central de esteproyecto FPTA fue el desarrollo de tram-pas de monitoreo, cabe hacer mención alas estrategias de control basadas enferomonas: el trampeo masivo, los atrac-ticidas y la confusión sexual. Aunque

esta última ha sido y continúa siendo lamás importante, tanto a nivel de investi-gación como de aplicación (Witzgall et

al., 2010), en los últimos años ha aumen-tado la importancia relativa de los estu-dios de atracticidas, probablemente porla posibilidad de disminuir los costos deaplicación al reducir la cantidad de fero-mona necesaria.

El trampeo masivo y el uso de atrac-ticidas comparten el concepto de atraer yeliminar una proporción importante deinsectos en un área, de modo de mante-ner sus poblaciones por debajo del um-bral de daño. La diferencia entre ellasradica en la forma de eliminación, me-diante trampas (trampeo masivo) o in-secticidas (atracticidas). Si se utilizanatrayentes para ambos sexos, por ejem-plo feromonas de agregación o cebosalimenticios, se reducen las poblacionesde machos y hembras, con mayor proba-bilidad de éxito en el control de la plaga.Sin embargo, si se emplean feromonassexuales, como es el caso en lepidópte-ros, se reduce únicamente la poblaciónde machos, con la intención, no siemprerealista, de que esta reducción tenga unaincidencia significativa en la probabilidadde que las hembras copulen. Ambosmétodos requieren menor cantidad deferomonas que la confusión sexual, locual puede reducir significativamente loscostos de utilización (Witzgall et al.,

2010).

La técnica de confusión sexual, porsu parte, consiste en sobrecargar elambiente con grandes cantidades de fe-romona sexual, de manera de alterar elcomportamiento del macho. Esta técni-ca causa desorientación e interrupciónde la comunicación entre los sexos, ypor lo tanto retrasa, reduce o previene lafertilización de las hembras. A diferenciade las técnicas descritas anteriormente,en confusión sexual no es necesario elempleo de la mezcla natural que compo-ne la feromona sexual, ya que el efectode confusión puede ocurrir con mezclassimplificadas o simplemente con el com-ponente mayoritario, con importantesventajas en cuanto al costo del método(Stelinski et al., 2008).

En forma general, se requiere la apli-cación de 10 a 100 gramos de feromonapor hectárea y por temporada para lograr


la interrupción de la comunicación sexual(Witzgall et al., 2010). Por lo tanto, eldesarrollo de esta estrategia de controlen escala comercial requiere que la fero-mona necesaria sea sintetizada en unaescala del orden de cientos a miles dekilogramos, lo cual representa una limi-tante importante en la aplicación masivade esta técnica.

La permeación eficiente del aire en uncultivo es un aspecto fundamental para eléxito de la confusión sexual, por lo que latecnología asociada al desarrollo de libe-radores ha jugado un papel importante enel avance de esta técnica. Se han desa-rrollado una gran variedad de liberadoresde feromona, incluyendo algunos asper-jables como microcápsulas o fibras hue-cas, y otros de aplicación manual, queson los más utilizados. Entre éstos, losmás comunes son los liberadores dealambre forrados en polietileno (rope dis-pensers), los que se pueden moldearpara asegurarlos en ramas u otras es-tructuras. Éstos se aplican en cantida-des entre 500 y 1000 por hectárea, ycada uno emite aproximadamente 1000veces más feromona que una hembra(Witzgall et al., 2008).

La confusión sexual es más efectivaen grandes áreas, debido en parte a quese reduce el impacto de hembras copula-das que migran al área tratada, ademásque se facilita una permeación homogé-nea del aire por el aumento de la relaciónárea/borde. Por lo tanto, en cultivos yregiones donde la producción se realizaen forma fragmentada, es esencial lacoordinación de productores para aplicarla técnica simultáneamente.

El uso de confusión sexual como es-trategia de control tiene inconvenientes,que explican en parte lo limitado de suaplicación. La especificidad e inocuidadde las feromonas, aspectos destacadoscomo positivos, pueden también ser suprincipal problema. Los cultivos afecta-dos por una diversidad de plagas requie-ren el desarrollo de estrategias de confu-sión en paralelo, o la combinación deconfusión sexual para la plaga principal

con otros métodos para el control deplagas secundarias. Asimismo, cadaespecie requiere liberadores específicos,y la síntesis de feromonas en la escalanecesaria para confusión sexual es eco-nómicamente factible únicamente paraalgunas especies, dependiendo de laestructura química, la distribución de laespecie plaga, y la propia demanda pormétodos de control basados en feromo-nas. Indudablemente, muchas especiespodrían ser controladas por este método,más allá de la decena para las cuales seutiliza, de existir la disponibilidad deproductos comerciales para un universomayor de especies. Finalmente, al ser untratamiento inocuo, es totalmente inútilen situaciones en la cuales pueden in-gresar hembras copuladas al predio tra-tado con feromonas (Witzgall et al., 2008).

La ecuación de costos de manejo deplagas es otro aspecto importante, yésta depende de muchos factores. Enpaíses donde una variedad de insectici-das de amplio espectro como organofos-forados y carbamatos son aun permiti-dos, el bajo costo de éstos generalmentelimita la competitividad de la confusiónsexual, la cual a su vez es altamentedependiente del alto costo de las feromo-nas sintéticas. Es aquí que la tecnologíade liberadores «inteligentes» podría serfundamental, ya que se lograría disminuiren forma muy importante la cantidad deferomona necesaria. Las regulacionespúblicas sobre el uso de insecticidas, lademanda de los consumidores, así comolas barreras impuestas por algunos mer-cados en base a residuos de plaguicidas,forman un conjunto de condiciones queafectan la motivación del productor pordemandar y utilizar estrategias alternati-vas de control de plagas, aunque lasmismas sean más caras o complejas ensu aplicación. Esta motivación es unfactor importante para explicar la sustan-cial diferencia a nivel regional en la apli-cación de confusión sexual para espe-cies como C. pomonella, cuya eficaciaha sido sól idamente comprobada(Witzgall 2001).


Crocidosema (=Epinotia) aporema (Le-pidoptera: Tortricidae), comúnmente de-nominada «lagarta o barrenador de losbrotes», o simplemente «epinotia», esuna especie regional que se alimenta deleguminosas, siendo por lo tanto unaplaga relevante tanto en cultivos de in-vierno (leguminosas forrajeras) como deverano (soja). Su distribución abarca elsur de EE.UU. hasta Chile, Argentina yUruguay. Los adultos miden 1 cm aproxi-madamente, los sexos se diferencian porla coloración del cuerpo, presentando lashembras el dorso oscuro en la región

CAPÍTULO 2.

Crocidosema

(=Epinotia) aporema:biología e importancia

anterior y los flancos claros en la regiónposterior; en los machos el dorso esclaro y los flancos son oscuros (Figura1). Las hembras ponen entre 130 y 200huevos a lo largo de su vida. Estos midenmenos de 1 mm y se depositan de formaaislada sobre el follaje. Las larvas reciénnacidas miden 1 mm, pasan por 5 esta-dios y en su estadio final llegan a medir1 cm. Las pupas miden unos 7 mm, sonde color castaño-rojizo, pudiéndose dife-renciar hembras de machos por el núme-ro de segmentos abdominales (Bentan-court y Scatoni 2006) (Figura 2).

Figura 1. Adultos de Crocidosema aporema. Izquierda: hembra; derecha: macho.

Paula Altesor*

Carmen Rossini*

Andrés González*



La temperatura es una de las varia-bles ambientales con mayor incidenciaen la duración del ciclo vital de los insec-tos. Para una temperatura de 21-23 °C, elciclo total de epinotia se completa en 33-46 días, teniendo la etapa de huevo unaduración de 4-5 días, la larva de 21-25días, la pupa de 11-15 días y el adulto de10-25 días. Presenta de 5 a 6 generacio-nes por año, permaneciendo activa en elinvierno dada la presencia de legumino-sas en ese período (lotus, trébol, alfalfa,entre otras) (Bentancourt y Scatoni 1999).Los enemigos naturales que posee sonescasos; como depredadores se desta-can Geocoris sp. (Lygaeidae) y Orius sp.(Anthocoridae); el parasitoide Itoplectis

niobe (Hymenoptera) y los entomopató-

genos Zoophthora radicans (Zigomycete) yel virus de la granulosis (Baculoviridae)(Alzugaray et al., 1999, Alzugaray y Ribei-ro 2000, Bentancourt y Scatoni 2006).

Con el aumento significativo del culti-vo de soja en Uruguay (Figura 3), se haregistrado un crecimiento notorio en laimportación de insecticidas (Figura 4).Entre los insecticidas que más se utili-zan en el control de lepidópteros seencuentra el clorpirifós, organofosforadomoderadamente tóxico para humanos, yla cipermetrina, piretroide moderadamen-

Figura 2. A: huevo, B: larva de primer estadio (señalada con unaflecha), C: larva de 5 estadio, D: pupas hembra y machode epinotia.

A B

C

D


te peligroso, según clasificación de laOrganización Mundial de la Salud (OMS)(Blum et al., 2008).

Epinotia es generalmente la primerplaga que aparece en la soja, alimentán-dose fundamentalmente de los brotesfoliares, florales y chauchas. El manejoque se define para esta plaga incide en elposterior manejo del cultivo, ya que lasaplicaciones tempranas de insecticidastienen un efecto negativo en el control delas plagas que suceden a epinotia, comoson las lagartas defoliadoras, que a dife-rencia de epinotia, poseen un sistemaeficiente de controladores biológicos(Bentancourt y Scatoni 2001). En legu-minosas forrajeras epinotia tiene impor-tancia especial ya que el daño se produ-ce en el momento de la floración, períodoen el cual es muy dificultoso aplicar

Figura 3. Evolución del área sembrada de soja en Uruguay. Fuente: DIEA/MGAP.

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Figura 4. Evolución de la importación de insecticidas en Uruguay. Fuente: MGAP,Dirección General de Servicios Agrícolas.

insecticidas por la presencia de poliniza-dores.

Dado que las larvas de epinotia tienenhábitos endofíticos, el control químicoresulta generalmente ineficiente, tenien-do que reforzarse las aplicaciones parareducir las poblaciones de la plaga(Bentancourt y Scatoni 2001). Buscaralternativas al uso de insecticidas, comopuede ser la utilización de la feromona deepinotia en el monitoreo del insecto, espor lo tanto de vital importancia en elcaso de esta especie de difícil manejo.

La feromona de epinotia no había sidoaún estudiada químicamente, por lo queel objetivo central del proyecto aquí pre-sentado fue la caracterización químicade la feromona sexual de Crocidosema

(=Epinotia) aporema, y el desarrollo deuna tecnología basada en feromonas para


el monitoreo de esta plaga en legumino-sas forrajeras y soja. Para alcanzar esteobjetivo, se realizaron actividades ten-dientes a la identificación de los compo-nentes químicos de la feromona de epi-notia y sus proporciones relativas; la

síntesis de los componentes identifica-dos; y la determinación de una formula-ción óptima para la utilización de la fero-mona en trampas de monitoreo en culti-vos de oleaginosas y pasturas.


CAPÍTULO 3.

EstrategiaExperimental

El desarrollo del proyecto se basó entres etapas fundamentales: estudios decomportamiento reproductivo en el labo-ratorio, identificación y síntesis de loscomponentes de la feromona, y ensayoscon feromona sintética en laboratorio ycampo. En este capítulo se detallan losaspectos metodológicos utilizados endichas etapas, mientras que los resulta-dos se describen en los tres capítulossubsecuentes.

ESTUDIOS DECOMPORTAMIENTO

REPRODUCTIVO EN ELLABORATORIO

El estudio químico de las feromonasde un insecto requiere como primer pasoel estudio del patrón temporal de la emi-sión de feromona. Con este objetivo, semantuvo una cría de epinotia sobre dietaartificial, renovando la población con larvasrecolectadas en campo (INIA–La Estan-zuela). Todos los estadios se mantuvieronen incubadora a 22 ± 1 oC, 60-70 % dehumedad relativa y fotoperiodo de 14: 10(luz: oscuridad). Las larvas fueron ali-mentadas con una dieta artificial están-dar para la cría de tortrícidos (Shorey yHale 1965). Las pupas se separaron porsexo, de modo de tener adultos vírgenespara los experimentos. Estos últimosfueron alimentados ad libitum con unadieta basada en agua y miel.

Los estudios de comportamiento dellamada se realizaron por observacióndirecta de hembras vírgenes en cautive-rio (N = 25), colocadas individualmenteen recipientes cilindros de plástico (7 cmdiámetro x 10 cm altura). Se registrócada 15 minutos el comportamiento delas hembras desde el día de la emergen-cia hasta el séptimo día a lo largo de la

fase oscura. Las hembras, mantenidasdurante la fase clara en incubadora, fue-ron colocadas para su aclimatación unahora antes del experimento en la cámarade observación (26-28 oC, 50-60 % dehumedad relativa). Se utilizó luz roja paralas observaciones, ya que los insectosno ven en el rango de frecuencia corres-pondiente a ese color (Figura 1).

La proporción de hembras llamandose analizó mediante un ANOVA de dosfactores para la evaluación del efecto dela edad de las hembras y las horas de lafase oscura en el comportamiento dellamada (datos transformados según ar-coseno √p). Para la comparación de lasmedias se utilizó el test de Tukey,P< 0,05.

Figura 1. Hembras en recipientes individuales durantela fase oscura, iluminadas con luz roja parael registro del comportamiento de llamada.

IDENTIFICACIÓN Y SÍNTESISDE LOS COMPONENTES DE

LA FEROMONA

Una vez conocido el comportamientoreproductivo de la especie, y en particu-lar sus aspectos temporales, se trabajóen la identificación de los componentes

Paula Altesor*

Andrés González*



químicos de la feromona sexual y susproporciones relativas, determinando enbioensayos de laboratorio la formulaciónmás atrayente de los componentes de laferomona.

Disección y extracción deglándulas de feromonas

La disección de glándulas de hem-bras se realizó en el pico de llamadaidentificado en el estudio de comporta-miento (5-7 h de la fase oscura), utilizan-do hembras de 2-6 días de emergidas,mantenidas en las mismas condicionesya descritas. Observando a través de unalupa, fueron escindidas las glándulas pre-sionando con pinzas la región final delabdomen (Figura 2). Se acumularon glán-dulas en un vial cónico (0,2 mL) a -15 °C,hasta su extracción con 100 µL de hexa-no por 20 min. El extracto fue separadode las glándulas y concentrado con N

2

para obtener un equivalente de hembra(el contenido de una glándula) por µL desolución. Se realizaron extracciones du-rante varias generaciones, mejorando latécnica de escisión de las glándulas yaumentando su número dada la poca

cantidad de feromona producida por lashembras. Finalmente se obtuvo un extrac-to de 83 glándulas con el que se efectuó elestudio de identificación química.

Análisis químico de la feromona

El análisis químico del extracto fuerealizado por cromatografía gaseosa aco-plada a electroantenografía (GC-EAD)(Figura 3) y cromatografía gaseosa aco-plada a espectrometría de masas (GC-MS). El GC-EAD consiste en un acopleentre un cromatógrafo de gases y unsistema de electrodos/amplificador queregistra la respuesta nerviosa (eléctrica)de una antena, la cual se fija sobre loselectrodos mediante un gel conductor(Figura 3, derecha abajo) (Bjostad 1998).

Una solución de n-alcanos co-in-yectada con el extracto de glándulasen GC-EAD permitió utilizar el tiempode retención como un criterio adicionalde identificación de los compuestos,mediante el cálculo de índices de re-tención (IR

x) (Adams 2007).

Para la corroboración de los com-puestos de la feromona, los mismos es-tudios en GC-EAD y GC-MS con el ex-tracto se efectuaron con estándares sin-téticos. La metodología de síntesis no seincluye en este reporte por ser informa-ción técnica muy específica, la mismaestá disponible en el informe técnico delproyecto, y en una publicación científica(González et al., 2012).

ENSAYOS CON FEROMONASINTÉTICA EN LABORATORIO

Y CAMPO

Una vez identificados químicamentelos componentes de la feromona, se pro-cedió a comprobar que éstos eran acti-vos comportamentalmente; esto es, silos machos de epinotia volaban haciacebos de feromona sintética, tanto en ellaboratorio como en ensayos de campo.

Ensayos en túnel de viento

El túnel de viento utilizado en estetrabajo consistió en un cilindro de acríli-co transparente de 150 cm de largo y40 cm de diámetro, con una base que

Figura 2. Disección de la glándula productora de feromona.En el extremo del abdomen se visualiza laglándula y el ovipositor, que fueron escindidoscon una pinza.


incluye un patrón de forma y color quesirve al insecto como marco de referen-cia en su vuelo orientado (Figura 4 ). Porel túnel de viento se hizo pasar aire conflujo laminar a 0,3 m/s, mediante unabomba suctora ubicada al final del mis-mo. El aire fue filtrado previo al pasaje porel túnel mediante filtros de carbón activa-do acoplados en la entrada. El aire utili-zado salió de la pieza a través de un tubopara no contaminar el sitio de experimen-tación (Hare 1998). La temperatura yhumedad relativa fue de 20-25 °C y 50-70%, respectivamente. Se utilizó luz rojapara las observaciones, y las pruebas seiniciaron 3-4 h después del inicio de lafase oscura, y hasta 2 h antes de la faseclara.

Los individuos utilizados se ubicaronen la pieza 4 h antes del inicio del expe-rimento para su aclimatación. Los ma-chos vírgenes (1-5 días) fueron coloca-dos individualmente en cilindros de vidrio(8 cm largo x 4,5 cm diámetro) y lashembras vírgenes (2-5 días) en grupos de5 en cilindros de vidrio (10 cm largo x 8cm diámetro), ambos cerrados con tul.Los diferentes estímulos (hembras lla-mando y feromona) se dispusieron en laentrada del túnel, y los machos a obser-var al final del mismo, ambos colgandoen el centro del túnel.

Como estímulos se utilizaron hem-bras vírgenes (al menos una en posturade llamada), y feromona sintética en

Figura 3. A: Equipo de GC-EAD. B: Ubicación de loselectrodos conectados a un amplificador,a la salida de los efluentes del GC. C:Antena sobre electrodos, con gel conductorpara establecer contacto.

A B

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Figura 4. Túnel de viento del Laboratorio de EcologíaQuímica (Facultad de Química, UdelaR; encomodato de INIA).

diversas proporciones de sus dos com-ponentes. Con las hembras vírgenes seevaluaron 28 machos, y con el resto delos tratamientos 10 machos en cada uno.En el caso de feromona sintética, semantuvo un total de 1,6 µg de feromona


por septo, combinando acetato de (Z,Z)-7,9-dodecenilo (Z7,Z9-12:Ac) y (Z,Z)-7,9-dodecenol (Z7,Z9-12:OH) en proporcio-nes 15:1, 1:1 y 1:0. Las diferentes mez-clas se aplicaron a septos de goma natu-ral que actuaron como dispensadores,apoyados dentro de un cilindro de vidriode iguales características que los utiliza-dos con las hembras. El control consis-tió en la aplicación de solvente (hexano)en los septos. Se utilizó un nuevo septopor cada macho a ensayar, preparándo-se antes del comienzo de los experimen-tos y manteniéndose en frío hasta suutilización, para evitar la evaporación delos compuestos.

El experimento comenzó al retirar eltul al tubo conteniendo el macho, demodo que pudiera volar libremente por eltúnel. Se observó durante 10 min el com-portamiento del macho, registrando eltiempo de inicio de vuelo, la observaciónde vuelo en zig-zag característico delvuelo orientado hacia una fuente de fero-mona (vuelo en la pluma), la presencia dealeteos rápidos típicos de una respuestaa feromona, y la llegada a la fuente deestímulo odorífero.

Se utilizó un ANOVA para la compara-ción del tiempo de inicio de vuelo de los

diferentes tratamientos, previa transfor-mación a log (x+1) para normalizar losdatos. Como prueba a posteriori se usoel test de Dunnett que no asume varian-zas iguales. El test de Chi Cuadrado seutilizó en la comparación del porcentajede machos que respondió a los diferen-tes estímulos, mediante tablas de Con-tingencia de 2x2 (P < 0,05).

Ensayos de campo

Una vez conocidos los componentesde la feromona sexual, sus proporcionesrelativas en la glándula de la hembra, ylas proporciones más atractivas en ellaboratorio, se trabajó en la determina-ción de la formulación más atrayente delos componentes de la feromona, me-diante ensayos de campo en una chacraexperimental de soja en Paysandú.

Se colocaron trampas de tipo delta deplástico corrugado (15 x 15 x 25 cm) conseptos de feromona en su interior, en uncampo de soja de 2 ha en la EstaciónExperimental «Dr. Mario Cassinoni»(EEMAC), Facultad de Agronomía, De-partamento de Paysandú (32,5° de lati-tud sur y 58° de longitud oeste), duranteseis semanas entre marzo y abril de2009 (Figura 5).

A

B

Figura 5. A: Campo de soja con trampas deferomona en la estación experimentalDr. Mario E. Cassinoni, Facultad deAgronomía, Paysandú. B: trampa tipodelta con el septo de feromona en suinterior. El septo cuelga cerca del pisoengomado de la trampa, de modo quelos machos atraídos por la feromonaquedan pegados al ingresar a latrampa.


Los tratamientos con diferentes pro-porciones de los dos componentes de laferomona (Z7,Z9-12:OH y Z7,Z9-12:Ac)fueron la proporción 15:1 (OH:Ac) (pre-sente en la glándula), 1:1, 1:0 , 0:1, asícomo el control (igual volumen de hexanoen el septo), utilizándose 0,1 mg deferomona por septo. Se dispusieron ochobloques conteniendo cada uno todos lostratamientos, con una distancia mínimaentre bloques de 30 m, y de las trampasdentro de cada bloque de 15 m (Figura 6).La altura de las trampas varió según eltamaño de las plantas, colocándolassiempre en la parte superior del follaje osobre ellas. La posición de cada trata-miento fue aleatorizada cada día de mues-treo, realizado dos veces por semana.Personal del laboratorio de entomologíade la EEMAC realizó la identificación y elconteo de las especies atrapadas, reti-rándolas de la trampa en cada muestreo.

A su vez, se realizaron dos muestreos delarvas a lo largo del experimento, revisan-do 10 plantas al azar dentro de cadabloque.

Dado que en algunos casos se perdie-ron datos de capturas por caerse lastrampas, los datos faltantes fueron esti-mados según Snedecor y Cochran (1980),mediante el cálculo iterativo de los valo-res hasta que permanecieron incambia-dos, estimando el valor inicial del datofaltante y teniendo en cuenta los restan-tes datos y la suma de bloques y trata-mientos. Se realizó un ANOVA multifac-torial para comparar medias de trata-mientos, teniendo en cuenta el efecto debloques y días de muestreo. Los datosse transformaron previamente a log (x+1)para normalizarlos. Se utilizó el test deTukey para evaluar diferencias entre pa-res de medias de tratamientos (P < 0,05).

Figura 6. Esquema del campo de soja con la distancia entre los ocho bloques. Cada bloqueincluyó los cinco tratamientos, posicionados de forma aleatoria a 15 m entre sí.

3 1 2 4 5

4 5 2 3 1

1 2 5 3 4

3 2 1 4 5

5 1 2 3 4

2 3 5 4 1

4 5

2 1

3

2 5

1 3

4

I

II

III

IV

V

VI

VII VIII

SUR

NORTE

30 m

160 m

60

m

110 m


La postura de llamada de las hembrasse observó claramente en contraposicióna la postura de reposo. Durante el llama-do las hembras separaron las alas delcuerpo, levantando el abdomen y curván-dolo hacia adentro, permaneciendo in-móviles en esa posición. Se observó asi-mismo la extrusión de una estructuraabdominal que contiene a la glándulaemisora de feromona (Figura 1).

Se encontraron diferencias significati-vas en el comportamiento de llamada delas hembras tanto en relación a los días(edad) como a las horas de la fase oscura(ANOVA de dos factores para edad, F =339,01; P < 0,001; ANOVA de dos facto-

res para horas, F = 274,06; P < 0,001). Elprimer día de emergidas, la mayoría delas hembras no realizó postura de llama-da, observándose dicho comportamientoa partir del segundo día (en 88 % de lashembras) y encontrándose del tercero enadelante una mayor proporción de hem-bras llamando (test de Tukey, P < 0,05)(Figura 2). A medida que pasaron losdías se observó también que las hembrascomenzaron antes a llamar, y el últimodía se registró la disminución en el núme-ro de hembras llamando (90 %), sugirien-do el comienzo de la senescencia repro-ductiva de las hembras.

CAPÍTULO 4.

Comportamientoreproductivo de

epinotia

Figura 1. Hembra de epinotia en postura de llamada. En el extremo del abdomense observa la glándula emisora de feromona, visible únicamente cuandola hembra está en la postura típica de llamada.

Paula Altesor*

Andrés González*



Tomando en cuenta únicamente losdías de mayor número de hembras lla-mando (3 a 7) se encontró que un mayornúmero de hembras se colocó en dichapostura entre las 5 y las 7 h después del

comienzo de la fase oscura (test deTukey, P < 0,05) (Figura 3). El tiempopromedio de llamada de las hembras fuede 339 ± 25 min (prom. ± EE), con unrango de 75-585 min (calculado para eldía 5).

Pro

po

rció

n d

e h

em

bra

s lla

ma

nd

o

Figura 2. Proporción de hembras llamando a lo largo de la fase oscura, durante 7 díasa partir de la emergencia de los adultos. Distintas letras en los días de laleyenda indican diferencias significativas en comparaciones de pares post-ANOVA de dos factores (P < 0,05; test de Tukey).

Pro

po

rció

n d

e h

em

bra

s lla

ma

nd

o

Figura 3. Proporción de hembras llamando durante las horas de la fase oscura entrelos días 3 y 7 a partir de la emergencia de la hembra adulta. Las barras deerror indican error estándar. Letras distintas sobre las barras muestrandiferencias significativas en comparaciones de pares post-ANOVA de dosfactores (P < 0,05; test de Tukey).


CAPÍTULO 5.

Identificación de laferomona sexual de

epinotia

El extracto de glándulas deferomonas analizado por GC-EAD(electroantenograma acoplado acromatografía de gases) resultóen dos claras señales de las ante-nas de machos. Una de estasseñales se correspondió con unpico muy débil en el detector delGC (FID), mientras que la otra notuvo correlato con un pico en elFID dada la poca cantidad de estecompuesto en el extracto (Figura1a). La coinyección en GC-EADdel extracto con una solución dehidrocarburos permitió el cálculode los índices de retención de loscompuestos a los que la antenafue activa (IR = 1076 e IR = 2155 encolumna polar, IR = 1529 e IR =1664 en columna apolar) (Figura2). Asimismo, el intercambio delas columnas de fases estaciona-rias distintas, permitió descubrirque los dos componentes cambia-ron el orden relativo de elusión deuna columna a la otra, con elcompuesto mayoritario eluyendoantes en la columna apolar (IR =1529) y segundo en la columnapolar (IR = 2159). Esta inversión, yla diferencia de 135 unidades en-

tre los índices de retención de amboscompuestos en la fase apolar, permitie-ron suponer que se trataba de una mez-cla alcohol/acetato. Los índices de re-tención en ambas fases se correspondie-ron además con los reportados para alco-holes y acetatos dodecadienilos conju-gados, por lo que se decidió comparar elextracto con dos dodecadienilos reporta-dos para una especie europea del géneroEpinotia (E. tedella; Z7,Z9-12:Ac y Z7,Z9-12:OH).

El análisis comparado de dichos es-tándares sintéticos se correspondió enforma exacta, tanto en GC-EAD como enGC-MS, con los compuestos presentesen el extracto de glándulas (Figuras 1b y3). Asimismo, una comparación de dis-tintos isómeros de dodecadienilos conju-gados permitió observar una clara se-paración de los mismos, y una correla-ción entre tiempos de retención delZ7,Z9-12:OH con el componente ma-yoritario EAD-activo del extracto (Figu-ra 4). Los resultados obtenidos permi-tieron concluir que la feromona de epi-notia está constituida por una mezcla15:1 de Z7,Z9-12:OH: Z7,Z9-12:Ac (Fi-gura 5), según la proporción de susáreas relativas en el cromatograma deiones totales del GC-MS.

Paula Altesor*

Andrés González*



Figura 1. Resultado del análisis por GC-EAD de a) extracto de glándulas deferomonas de hembras de epinotia, y b) una solución 100 ppm de losestándares sintéticos. La parte superior de ambas gráficas muestra larespuesta de la antena del macho (EAD), y la parte inferior la señal deldetector del GC (FID). Se observa claramente que los estándaressintéticos coincidieron en tiempo de retención con los compuestosactivos del extracto, y produjeron a su vez la misma respuestaelectrofisiológica en la antena del macho.

Figura 2. Resultado de la coinyección del extracto de glándulas con una soluciónde hidrocarburos para el cálculo de índices de retención de loscompuestos activos. La parte superior muestra la respuesta de laantena del macho y la inferior la señal simultánea del FID (coinyeccióndel extracto con la solución de hidrocarburos).


Figura 3. Comparación de los cromatogramas de iones totales obtenidos del análisis del extracto dehembras (a, superior) con los compuestos sintéticos Z7,Z9-12:Ac y Z7,Z9-12-OH (a, inferior).Los espectros de masa de los compuestos naturales (b,d) fueron virtualmente idénticos a losde los compuestos sintéticos (c,e), al igual que sus tiempos de retención.


Figura 4. a) Comparación de los tiempos de retención de Z7,Z9-12:OH(rojo) con el compuesto del extracto de glándulas identificadocomo tal; b) separación cromatográfica de distintos isómerosposicionales de dodecadienoles conjugados en GC-MS.

Figura 5. Estructuras químicas de Z7,Z9-12:OH (1) y Z7,Z9-12:Ac (2), componentesidentificados en la feromona sexual de C. aporema (epinotia).


CAPÍTULO 6.

Ensayos conferomona sintética

en laboratorioy campo

ENSAYOS EN TÚNEL DEVIENTO

El tiempo de inicio de vuelo de losmachos en el túnel varió de unos pocossegundos hasta varios minutos. Frente ahembras los machos iniciaron el movi-miento por el túnel rápidamente, siendoeste resultado significativamente diferen-te del control aunque no de los restantestratamientos con diferentes proporcio-nes de la feromona (Figura 1).

Por su parte, el comportamiento dealeteo y vuelo en la pluma de los machosfrente a la feromona fue mayor teniendocomo estímulo la proporción 15:1 (OH:Ac)(70 % de los machos respondieron). Por

su parte, la proporción 1:1 (OH:Ac) fue lamenos atractiva de las 3 proporcionesensayadas (20 % de los machos respon-dieron), siendo diferente significativamen-te de la proporción más atractiva (15:1)(OH:Ac) (Figura 2).

Respecto a la llegada a la fuente deolor, una cantidad significativamentemayor de machos probados en el trata-miento 15:1 (OH:Ac) (60 %) llegó a tocarel estímulo en relación a los demás trata-mientos, incluyendo las hembras (Figura3). La mayoría de los machos que seposaron en la fuente de olor desarrollaronconductas de cortejo, tanto frente a hem-bras como a los septos de feromona,exponiendo las estructuras de pelos (co-remata) del final del abdomen (Figura 4).

Figura 1. Tiempo de inicio del vuelo de los machos en túnel de viento frente a losdiferentes tratamientos. Las barras indican error estándar. Letras distintassobre las barras muestran diferencias significativas entre tratamientos(Test de Dunnett, P < 0,05).

Paula Altesor*, Horacio Silva**Paola Liberati*, Leticia Alves***Juan Ramos***, Daniela Gamenara***,David González***, Ignacio Carrera***Gustavo Seoane***, Carmen Rossini*Enrique Castiglioni**, Andrés González*

* Laboratorio de Ecología Química, Facultad de Química.** Departamento de Protección Vegetal. Facultad de Agronomía.***Laboratorio de Síntesis Orgánica, Facultad de Química.


Figura 2. Porcentaje de machos que respondió con vuelos en la pluma y aleteosfrente a los diferentes tratamientos. Letras distintas sobre las columnasindican diferencias significativas entre tratamientos (Test de ChiCuadrado, P < 0,05).

Figura 3. Porcentaje de machos que llegó a la fuente de olor de los distintostratamientos. Letras distintas sobre las columnas indican diferenciassignificativas (Test de Chi Cuadrado, P < 0,05).


ENSAYOS DE CAMPO

El control y la proporción 0:1 (OH:Ac)no capturaron machos, por lo que no seincluyeron en el análisis. Considerandolas capturas promedio de los restantestratamientos (Figura 5), encontramos unpico máximo de capturas alrededor delos 30 días del experimento. Las captu-ras promedio del tratamiento con la pro-porción 1:1 (OH:Ac) fueron significativa-

A

B

Figura 4. Macho de epinotia volando en túnel de viento, atraído por elsepto conteniendo la proporción 15:1 de los compuestos dela feromona (A) y una vez posado sobre el septo, intentandocortejarlo (B). Se observan las escamas levantadas y elcoremata expuesto (Fotos: A. González).

mente mayores que las de los otros dostratamientos (Test de Tukey, P < 0,05).Las capturas acumuladas se muestranen la Figura 6, atrapando el tratamiento1:1 (OH:Ac) un promedio de 47,5 ma-chos, el tratamiento 1:0 (OH:Ac) 27,6machos y el tratamiento 15:1 (OH:Ac)20,6 machos en los 41 días que duró elexperimento.

El muestreo de larvas arrojó un resul-tado muy bajo de infestación del cultivo,


encontrándose solamente una larva enun total de 2790 brotes revisados. Por

este motivo no se pudo correlacionarcapturas de adultos en trampas con lapresencia de larvas en las plantas.

Figura 5. Capturas promedio de machos por tratamiento durante el experimento.Letras distintas en la leyenda indica diferencias significativas entretratamientos (Test de Tukey, P < 0,05).

Figura 6. Capturas acumuladas de machos por tratamiento durante el experimento

Ma

cho

sM

ach

os


En la mayoría de los lepidópterosnocturnos la emisión de feromonas estáasociada con una postura estereotipada,determinada generalmente por la separa-ción y vibración de las alas y la extrusión,a veces rítmicamente, de la glándulaproductora de feromona, ubicada al finaldel abdomen (Cardé y Haynes 2004). Elcomportamiento de llamada de las hem-bras de epinotia consiste en el manteni-miento de una postura inmóvil caracteri-zada por la separación de las alas res-pecto al cuerpo, curvatura hacia adentrodel abdomen, y extrusión de la glándulade feromonas.

Como también ocurre en la mayoríade los lepidópteros nocturnos, la activi-dad sexual de epinotia está regulada porel fotoperiodo. A partir del inicio de la faseoscura se incrementa la actividad devuelo de ambos sexos, disminuyendocon el inicio de la fase clara. El aparea-miento ocurre durante la noche, mayor-mente entre las 4 y 6 h de la fase oscura,estando relacionado con el período demayor cantidad de hembras en posturade llamada (5-7 h de la fase oscura)(Altesor et al., 2010). A diferencia de dostortrícidos relacionados, Pandemis pyru-

sana y Argyrotaenia citrana, que son acti-vos sexualmente desde la primer noche deemergidos (Knight 1996, Knight y Turner1998), epinotia no presenta actividad algu-na en su primer noche. Sin embargo, lamayoría de las hembras llaman a partirde la segunda noche y se aparean rápida-mente (Altesor et al., 2010).

La cantidad de feromona producidapor las hembras de lepidópteros es muybaja (en el orden de nanogramos) aunquesuficiente para atraer a los machos des-de grandes distancias (Cardé y Haynes2004). Con miras a lograr identificar la

feromona sexual de epinotia, la descrip-ción de su patrón temporal de llamadafue imprescindible para obtener una ma-yor cantidad de feromona, realizando ladisección de las glándulas durante elpico de llamada de las hembras (5-7 h dela fase oscura) y a partir del segundo díade emergidas.

Los compuestos Z7,Z9-12:OH y Z7,Z9-12:Ac fueron identificados como consti-tuyentes de la feromona de epinotia enuna proporción de 15:1 (OH:Ac) en lasglándulas de las hembras. La proporciónde los compuestos presentes en la glán-dula de feromona de epinotia podría noser la misma que la efectivamente emiti-da. Sin embargo, la proporción 15:1 delos compuestos Z7,Z9-12:OH: Z7,Z9-12:Ac fue la más atractiva en túnel deviento. Inclusive, dicha respuesta fuesuperior a la obtenida frente a hembrasllamando, lo cual puede deberse a quelas hembras no emiten feromona en for-ma continua, a pesar de mantenerse enpostura de llamada durante todo el expe-rimento.

La proporción 1:0 (OH:Ac), contenien-do únicamente el compuesto mayorita-rio, genera una respuesta atractiva de losmachos, que no obstante no se concretaen el arribo a la fuente. Esto demuestra locrucial de la presencia del acetato en lamezcla para producir una respuesta com-portamental completa en los machos, apesar de presentarse en pequeña canti-dad respecto al alcohol. Por su parte, laproporción 1:1 (OH:Ac) redunda tambiénen una menor respuesta de llegada de losmachos a la feromona, debido en estecaso al exceso del compuesto minorita-rio. La especificidad de la respuesta a laferomona sexual de lepidópteros resideno solamente en los componentes de la

CAPÍTULO 7.

Discusión,conclusiones y

perspectivas

Paula Altesor*

Andrés González*



misma, sino también en sus proporcio-nes relativas, siendo crítico en especiessimpátricas que utilizan los mismos com-puestos para la atracción entre sexos(Ando et al., 2004). Es así que la deter-minación de los compuestos presentesen la feromona de este insecto, y lamezcla más atractiva de los mismos,constituye un paso crucial para la imple-mentación de trampas de monitoreo deepinotia en cultivos.

A diferencia del experimento en túnelde viento, donde se obtuvo una mayorllegada de machos al septo con la pro-porción presente en la glándula (15:1OH:Ac) (Altesor et al., 2009), en el expe-rimento de campo el promedio de captu-ras en trampas de feromona fue mayorpara la proporción 1:1 (OH:Ac) (Gonzá-lez et al., 2102). Una posible explicaciónpara la diferencia encontrada en túnel deviento y campo, es que en éste se da laevaporación paulatina y diferencial de loscompuestos absorbidos en el septo,mientras que en el primero cada réplicase realiza con un septo nuevo e inmedia-tamente después de cargar el mismo conla mezcla a evaluar. En la evaporación delos compuestos que componen la fero-mona incide tanto el peso molecular comoel grupo funcional presente (Butler yMcDonough 1979, Butler y Mc Donough1981, Gut 2004). Los compuestos conmayor peso molecular tienen menor pre-sión de vapor, y por tanto se evaporanmenos que los compuestos con menorpeso molecular. El grupo funcional hi-droxilo (OH), por su parte, resulta en uncompuesto más polar y por tanto menosvolátil, a diferencia del grupo acetilo (Ac)(Gut 2004). En este contexto, podríasuponerse que en condiciones de campoel tratamiento con la proporción 15:1(OH:Ac) de la feromona pasó rápidamen-te a ser similar al de la proporción 1:0(OH:Ac), tratamientos que registraron si-milares niveles de captura. Asimismo, eltratamiento con la proporción 1:1 (OH:Ac)fue enriqueciéndose en el alcohol, acer-cándose durante el correr del experimentoa la proporción presente en la glándula(15:1, OH:Ac), y siendo por lo tanto másatractiva que los restantes tratamientosdurante la mayor parte del experimento.

El aumento del nivel de capturas enlos tratamientos 15:1 (OH:Ac) y 1:0(OH:Ac) a los 30 días del experimento

puede haber registrado un pico poblacio-nal del insecto, indicando que las tram-pas de feromonas para el monitoreo po-blacional de epinotia tendrían una dura-ción significativa en campo. A pesar delprácticamente nulo nivel de infestaciónde larvas, las trampas de feromona fue-ron capaces de capturar adultos, mos-trando que son eficientes en la deteccióndel insecto aún con cargas muy bajas deferomona en el septo (0.1 mg/septo), yen niveles poblacionales bajos.

Epinotia es una plaga consideradaimportante en cultivos de leguminosas,aunque ha devenido en menor relevanciaen los últimos años, posiblemente porefectos climáticos y la ausencia de hos-pederos invernales. En particular, la tem-porada del experimento de campo (2009)se caracterizó por una intensa sequíaque afectó considerablemente los culti-vos de verano, y en particular la soja. Enel mismo período del año anterior, untrabajo preliminar con trampas cebadascon la proporción 1:1 (OH:Ac), arrojó unnivel máximo de capturas de 653 ma-chos, cifra mucho mayor a la obtenida en2009 (47,5 machos).

La síntesis de los componentes dela feromona sexual de epinotia es unpaso esencial para el desarrollo de unaherramienta de monitoreo, ya que éstosno están disponibles en el mercado. Loscomponentes no resultaron sencillos desintetizar, en particular por la presenciade un sistema conjugado de configura-ción Z,Z. Se logró inicialmente sintetizaruna pequeña cantidad que permitió reali-zar los experimentos de campo, y másrecientemente se logró la síntesis demayores cantidades (González et al.,

2012), lo cual hace viable el desarrollo detrampas de monitoreo a escala producti-va. Los detalles técnicos de la síntesisdesarrollada exceden los objetivos deesta publicación.

Como conclusiones finales, el marcode este proyecto se identificó química-mente la feromona sexual de Crocidose-

ma (=Epinotia) aporema, siendo éste elprimer caso de una feromona química-mente identificada en Uruguay. La fero-mona está compuesta por (Z,Z)-7,9-do-decadien-1-ol y acetato de (Z,Z)-7,9-do-decadienilo. El alcohol es el componentemayoritario en las glándulas de las hem-bras, sin embargo, la proporción más


efectiva para el monitoreo de epinotia encampo, y por lo tanto la recomendaciónde uso como resultado de este proyecto,es la formulación 1:1. Las evaluacionesde campo demostraron que aún con nive-les mínimos de la feromona en trampasde tipo delta (0,1 mg por trampa, sinreposición), la capacidad de captura dela feromona alcanza los 40 días. Por lotanto, el uso de trampas de feromonaspara el monitoreo de poblaciones de epi-notia en soja y leguminosas forrajeras esviable, tanto por la buena capacidad decaptura observada en nuestros experi-mentos, como por la duración de lastrampas. En el caso de cultivos de soja,donde las evaluaciones de campo fueronrealizadas, las trampas deben ubicarseinmediatamente sobre la altura del follaje.

La captura de machos en las trampasde feromona fue alta, aún cuando laspoblaciones de larvas fueron práctica-mente nulas. De esta manera, no selogró realizar una correlación cuantitativaentre capturas de machos en trampas ypoblación residente o esperable de lar-vas. Por lo tanto, las trampas de feromo-na de epinotia serían aplicables comoestrategia de detección del insecto, que-dando pendiente un estudio para estable-cer umbrales de captura y correlacióncaptura/daño.

La baja en las poblaciones de epino-tia es un patrón general que se ha observa-do en los últimos años, y que puede deber-se a una variedad de razones ecológicas (yagro-ecológicas), como la sustitución deun sistema tradicional de rotación entrepasturas y cultivos de invierno por grandesextensiones de soja, y una disminución enel área destinada a pasturas. El sistematradicional de producción proporcionabahospederos para epinotia durante todo elaño, situación que ha cambiado en losúltimos años. Es de prever, sin embargo,que los sistemas de producción agrícola-ganadera en Uruguay sean cambiantes, ycon ellos, pueden darse las condicionespara favorecer la vuelta de epinotia comoplaga primaria. En este caso, se dispondráde una herramienta de monitoreo basadaen feromonas como resultado de la ejecu-ción de este proyecto. La viabilidad dealcanzar la producción nacional y comer-cialización de trampas de feromonas deepinotia depende únicamente del surgi-miento de una demanda para las mismas,

y del interés de un mediador comercial, yaque los componentes de la feromona pue-den producirse en Uruguay, y las trampaspueden formularse y confeccionarse a nivellocal.

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