NTC 4566 Determinación de almidón Método espectrofotométricoAndrés David Vela

Introducción Los almidones son polisacáridos con  una gran molécula, compuesta de amilosa (20-28%) y amilopectina (72-80%). La amilosa está formada por cadenas sin ramificar de glucosa,  consta de una cadena principal de glucosa con cadenas laterales en intervalos. Tienen función aglutinante y de relleno en las formulaciones cárnicas.Las funciones de los almidones  son:

Incrementa la capacidad de ligazón de agua y previene la pérdida de humedad

Aglutinante y de relleno Ayuda a la estabilidad de la emulsión Mejora la textura y la sensación de  mordida. Gelatiniza a temperaturas bajas. Ayuda a dar jugosidad a los productos bajos en grasa. El almidón modificado gelatinizará a temperaturas más bajas

OBJETO Esta norma especifica dos métodos de referencia para la determinación del contenido de almidón en productos cárnicos y verificar los parámetros mínimos especificados en la NTC 1325 según la formulación del producto y el tipo del mismo.

CAMPO DE APLICACIÓN La presente norma se aplica solamente a productos que no contienen sustancias agregadas diferentes del almidón.

MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO

Este método consiste en la extracción previa de los azúcares y grasas presentes en la muestra, con posterior separación del almidón, desarrollo de color con el reactivo antrona y determinación espectrofotométrica del contenido total de almidón presente en la muestra.

La Antrona forma un compuesto verde en medio ácido fuerte (Acido sulfúrico o acido perclórico) con ciertos carbohidratos y sacáridos, en especial con azúcares y almidones. La reacción de la Antrona (9.10 dihydro 9 ketoantraceno) en medio sulfúrico produce un derivado del furano que tiene su máximo de absorción en 620 nm.

EQUIPOS Y MATERIALES• Tubo de ensayo• Tubos de Centrifuga de 50 ml

a 100 ml• Matraces aforados de 100 ml

y 200 ml• Pipetas aforadas• Balanza analítica• Centrífuga 2 500 rpm• Espectrofotómetro

o Fotocolorímetro.• Baño de agua hirviendo• Baño con hielo

REACTIVOS• Solución de éter etílico -

éter de petróleo (1:3)• Alcohol etílico al 80 % (V/V)• Solución de ácido

perclórico (HClO4) al 52 %• 9,10 - dihidro - 9

- oxoantraceno (C14H10O) (antrona), para análisis

• Papel de filtro• Almidón soluble• Agua destilada• Solución de Antrona.

Solución de antrona. Disuelva 0,5 g de antrona (9,10 - dihidro - 9 - oxoantraceno) en 250 ml de ácido sulfúrico concentrado de 96 %. El reactivo sirve por 3 d a 4 d conservándolo a 0 °C.Solución patrón de glucosa Disolver 100 mg de glucosa anhidra en 100 ml de agua destilada. (Preferiblemente utilizar glucosa grado reactivo para inyectables, desecada a 105 °C).

Extracción grasas y azucaresPese 2 g de muestra previamente molida y homogeneice según la NTC 5554 en un tubo de centrífuga de 50 ml a 100 ml con tapa hermética.

Añada 25 ml de la solución éter etílico - éter de petróleo, tape y agite vigorosamente.

Centrifugue a 2 500 rpm durante 5 min. Decantar y descartar la solución éter etílico -éter de petróleo.

 Añada 10 ml de alcohol etílico al 80 % calentado previamente a 80 °C, agite y centrifugue a 2 500 rpm durante 5 min.

Descarte la solución alcohólica y repita la extracción con alcohol etílico calentado a80 °C. Elimine el alcohol.

Extracción de AlmidonesAñada 5 ml de agua destilada al residuo obtenido en la extracción de azúcares, agite bien.

Añada 6,5 ml de la solución de ácido perclórico 52 %, mezcle y agite por 5 min.

Deje en reposo por 15 min.

Añada 20 ml de agua y centrifugue por 5 min.

Transfiera la solución sobrenadante a un matraz aforado de 100 ml.

Añada 5 ml de agua al residuo, mezcle bien, adicione 6,5 ml de solución de ácido perclórico y deje en reposo por 30 min.

Agite, lave el contenido total del tubo de centrífuga y transferiera al matraz aforado de100 ml que contiene el primer extracto. Lleve a volumen y filtre a través de papel de filtro.

Determinación de Almidón Diluya 5 ml del filtrado en un matraz aforado de 200 ml y lleve a volumen con agua destilada.

Tome una alícuota de 5 ml en un tubo de ensayo y enfríe en baño de agua con hielo.

Añada 10 ml de la solución de antrona, teniendo cuidado con el desprendimiento de calor.

Mezcle bien y caliente por 7,5 min a 100 °C.

Retire el tubo de ensayo del baño agua hirviendo y enfríe rápidamente a 25 °C.

Determine la absorbancia a 630 nm dentro de los primeros 30 min, ya que el color es estable sólo este período, pasados los cuales comienza su disminución. Lea en la curva patrón la concentración de dextrosa equivalente a la absorbancia medida

Un espectrofotómetro es un instrumento que descompone un haz de luz (haz de radiación electromagnético), separándolo en bandas de longitudes de onda específicas, formando un espectro atravesado por numerosas líneas oscuras y claras, semejante a un código de barras del objeto, con el propósito de identificar, calificar y cuantificar su energía

espectrofotómetro

Componentes Básicos Fuente de luz Monocromador Portamuestra Detector y Sistema de Lectura

Distribución de la luz en el espectrofotómetro

Componentes.1. Fuente de luz.Es la que se encarga de iluminar la muestra. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral continua.

2. Monocromador.Este se encarga de obtener la luz monocromática, esta constituido por rendijas de entrada y de salida, colimadores y elementos de dispersión.

3. Fotodetectores.Este se encarga de percibir la señal de forma simultanea cubriendo el espectro visible, reduciendo el tiempo de medida.

MATERIALES DE LOS

COMPONENTES OPTICOS

En la Figura se muestran que tipo de material se emplea en función de la λ (región espectral) para cubetas , ventanas, lentes, prismas y selectores de λ.

COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCÓPICOS

FUENTES DE RADIACIÓN Y

DETECTORES En la Figura se

resumen los diferentes

sistemas de detección de la

señal así como las fuentes usadas en

función de la λ (región espectral).

COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCÓPICOS

1.- FUENTES DE RADIACIÓN Su misión es la generación de un haz de radiación con suficiente potencia de salida y

estabilidad para que se detecte y se mida con facilidad. Pueden ser CONTINUAS , que emiten radiación que varia su intensidad en un amplio Δλ y

DISCONTINUAS O DE LÍNEAS, que emiten un número limitado de líneas o bandas de radiación, cada una de las cuales abarca un limitado Δλ.

FUENTES USADAS EN ESPECTROSCOPÍAFUENTE Δλ (nm) TIPO DE ESPECTROSCOPIA

CONTINUAS

Lámpara de Xenón 250-600 Fluorescencia molecular y RamanLámpara de

Hidrogeno/Deuterio 160-380 Absorción molecular (UV)

Lámpara de Wolframio 350-2200 Absorción molecular (Visible/IR cercano)Lámpara de

Wolframio/Halógeno 240-2500 Absorción molecular (UV/Visible/IR cercano)

Lámpara de Nicrom 750-20000 Absorción molecular (IR)Lámpara de Nernst 400-20000 Absorción molecular (IR)

Fuente Globar 1200-40000 Absorción molecular (IR)

DE LINEAS

Lámpara de Cátodo hueco UV-Visible Absorción y fluorescencia atómicaLámpara de descarga sin

electrodos UV-Visible Absorción y fluorescencia atómica

Lámpara de vapor metálico UV-Visible Absorción atómica, Fluorescencia molecular y Raman

Lámpara LASER UV-Visible-IR Absorción molecular , Fluorescencia molecular y Raman

COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCÓPICOS

CUIDADOS Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse

turbias o con precipitados. El volumen de la muestra en la cubeta, no debe ser

excesivo para evitar que se desborde, en caso de que sucediera, se debe limpiar con un paño limpio o papel absorbente suave, para evitar rayarla.

La cubeta se sujeta por los lados opacos. La cantidad a adicionar es, máximo, hasta ¾ partes

de la cubeta No se deben derramar líquidos, sobre todo

solventes, ácidos o álcalis; dentro del contenedor de la cubeta, se puede dañar parte del mecanismo

Se debe mantener, el espectrofotómetro, limpio y libre de humedad

Fuentes de errorLas posibles fuentes de error que pueden interferir en este método están:

• Inestabilidad del reactivo• Variación del tiempo de calentamiento• Temperatura del baño• Variación de la concentración del acido en el reactivo• Variación de la forma de adicionar el reactivo.• Estabilidad del color• Perdida por evaporación durante el calentamiento.

PREPARACIÓN DE LA CURVA PATRÓN

 

Diluya a volumen 1 ml, 2 ml, 3 ml, y 4 ml de la solución patrón de glucosa en una seriede matraces aforados de 200 ml.

Determine la absorbancia correspondiente a cada una de estas soluciones a 630 nm.Con las lecturas de absorbancia obtenidas para cada una de las soluciones elabore una curvapatrón de valores de absorbancia contra miligramos de dextrosa.

EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOSDetermine la concentración de almidón en la muestra a partir de la curva patrón mediante la siguiente expresión: 

En donde1,06 = es el Factor de conversión de Dextrosa en Almidón.Los resultados se refieren a 100 g y se expresan como porcentaje de almidón, utilizando la siguiente expresión: 

en donde m = es el peso de la muestra, expresado en gramos

Gracias ¡¡¡