NTC4772 Deteccion E-coli en Aguas

NORMA TÉCNICA NTC COLOMBIANA 4772

2008-04-30

CALIDAD DEL AGUA. DETECCIÓN Y RECUENTO DE Escherichia coli y DE BACTERIAS COLIFORMES. PARTE 1: MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA E: WATER QUALITY. DETECTION AND ENUMERATION OF

Escherichia coli and COLIFORM BACTERIA. PART 1: METHOD BY MEMBRANE FILTRATION.

CORRESPONDENCIA: esta norma adopción modificada

(MOD), respecto al documento de referencia, la norma ISO 9308-1:2001

DESCRIPTORES: agua; método horizontal; método de

análisis; microbiología; análisis microbiológico; recuento; recuento en placa; E coli.

I.C.S.: 07.100.20; 07.100 Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproducción Primera actualización Editada 2008-05-13

PRÓLOGO El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La NTC 4772 (Primera actualización) fue ratificada por el Consejo Directivo de 2008-04-30. Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología. ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A. ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. ANNAR DIAGNÓSTICA IMPORT LTDA. ARCHIVO DE BOGOTÁ ASBIOQUIM LTDA. ASEBIOL LABORATORIO LTDA. ASINAL LTDA. ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA COSMÉTICA –ACCYTEC- AVESCO KOKORICO S.A. BIANÁLISIS BIOCONTROL LTDA. BIOQUILAB LTDA. BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA. CALIDAD INDUSTRIAL LTDA. CARULLA VIVERO S.A. CONGELAGRO S.A. DUPONT QUALICON DE COLOMBIA ENZIPÁN DE COLOMBIA LTDA. INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZENÚ S.A. INSTITUTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. JHONSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. KOYOMAD S.A. LABCONTROL E.U.

LABFARVE LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA VEGETAL LABORATORIO EMICAL LTDA. LABORATORIOS GRAM LTDA. LABORATORIOS MICROLAB LTDA. LABORATORIO SFC LTDA. LESNIAK E.U. MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S.A. MERCK S.A. MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS LTDA. NULAB LTDA. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS LTDA. QUIK LTDA. QUALA S.A. SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE BOGOTÁ SERVICIOS DE LABORATORIO CLÍNICO LTDA. SUIZO S.A. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA VILASECA LTDA.

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: 3M COLOMBIA S.A. ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ALGARRA S.A. AQUALAB BAVARIA S.A. BIOMERIEUX COLOMBIA BLANCA USECHE CASA LUKER S.A. CENICAÑA CENTROAGUAS S.A. E.S.P. CERCAL LTDA. CERVECERÍA LEONA COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. COOPERATIVA DE GANADEROS DE CARTAGENA LTDA. CREPES Y WAFLES S.A. EMPRESA DE ACUEDUCTO Y ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ FABRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS EL REY S.A. FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. FRIGORÍFICO SUIZO S.A. FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. FRUGAL S.A. HOSPITAL DEPARTAMENTAL DE VILLAVICENCIO INGENIO PICHICHI S.A. INGENIO RIOPAILA INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO -ICA-

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD INVIMA - INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA MÉDICA LA CONSTANCIA COLOMBIA LABORATORIO DE GENÉTICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS LABORATOTORIO MICROBIOLÓGICO DE BARRANQUILLA LARKIN LEVAPÁN S.A. LLOREDA GRASAS S.A. MEDIIMPLANTES LTDA. MICROLABY LTDA. MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL. NESTLÉ DE COLOMBIA S.A. PASIFLORA COLOMBIANA S.A. PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y JUGOS DE FRUTA QUIOS LTDA. REPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS LTDA. RICA RONDO, INDUSTRIA NACIONAL DE ALIMENTOS S.A. SCHERING COLOMBIANA S.A. TECNIMICRO LABORATORIO DE ANÁLISIS UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO VIKINGOS VILASECA LTDA.

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

CONTENIDO

Página 0. INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1 1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN ........................................................................ 1 2. REFERENCIAS NORMATIVAS ................................................................................... 2 3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES ..................................................................................... 2 4. FUNDAMENTO ............................................................................................................ 3 4.1 DESCRIPCIÓN GENERAL DEL MÉTODO ................................................................. 3 4.2 FILTRACIÓN E INCUBACIÓN ..................................................................................... 3 4.3 EVALUACIÓN Y CONFIRMACIÓN, ENSAYO ESTÁNDAR ....................................... 3 4.4 EVALUACIÓN Y CONFIRMACIÓN, ENSAYO RÁPIDO ............................................. 3 5. EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRIO ........................................................................... 3 6. MEDIO DE CULTIVO Y DILUYENTE ........................................................................... 4 7. MUESTREO .................................................................................................................. 5 8. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 5 8.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA ............................................................................. 5 8.2 FILTRACIÓN ................................................................................................................ 5 8.3 INCUBACIÓN Y DIFERENCIACIÓN, ENSAYO ESTÁNDAR ..................................... 5 8.4 INCUBACIÓN Y DIFERENCIACIÓN, ENSAYO RÁPIDO ........................................... 6


Página 9. EXPRESIÓN DE RESULTADOS ................................................................................. 6 10. INFORME DE ENSAYO ............................................................................................... 7 11. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ......................................................................... 7 DOCUMENTO DE REFERENCIA .......................................................................................... 20 ANEXOS ANEXO A (Informativo) INFORMACIÓN MICROBIOLÓGICA COMPLEMENTARIA SOBRE LAS BACTERIAS COLIFORMES .................................................................................................... 8 ANEXO B (Normativo) MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS ................................................................................... 9 ANEXO C (Informativo) VOLÚMENES DE MUESTRAS ORIENTATIVOS ...................................................................... 13 ANEXO D (Informativo) TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO ALTERNATIVAS SEGÚN EL STANDARD METHOD 9222 PARA EL RECUENTO TOTAL DE COLIFORMES POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA ........................................................................ 14 BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................... 20


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CALIDAD DEL AGUA. DETECCIÓN Y RECUENTO DE Escherichia coli y DE BACTERIAS COLIFORMES. PARTE 1: MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA 0. INTRODUCCIÓN La presencia y el nivel de contaminación fecal constituye un factor importante en la evaluación de la calidad de una masa de agua y del riesgo de infección que representa para la salud humana. El análisis de muestras de agua para detectar la presencia de Escherichia coli, que normalmente habita en el tracto intestinal de hombres y otros animales de sangre caliente, proporciona una indicación de este tipo de contaminación. Los resultados del análisis de bacterias coliformes pueden resultar más difíciles de interpretar dado que algunas bacterias coliformes viven en el suelo y en las aguas dulces superficiales y, por tanto, no tienen siempre un origen intestinal. La presencia de bacterias coliformes, aunque no pruebe de forma concluyente una contaminación de origen fecal, si puede indicar fallos en el tratamiento o en la distribución del agua. La identificación de las cepas aisladas puede permitir en ocasiones obtener información acerca de su origen. 1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN La presente norma especifica un método de referencia (ensayo estándar) para la detección y recuento de Escherichia coli y bacterias coliformes en agua destinada al consumo humano. El método estándar se basa en la filtración por membrana, el posterior cultivo en un medio de agar de diferenciación y el cálculo del número de los organismos objeto de ensayo en la muestra. El método estándar es poco selectivo y permite la detección de bacterias dañadas. Debido a esta baja selectividad, el crecimiento de la flora bacteriana general puede afectar a la fiabilidad del recuento de E. coli y bacterias coliformes, por ejemplo, en algunas aguas potables, tales como las aguas de pozos poco profundos, que no han sido desinfectadas y que dan lugar a importantes crecimientos de flora interferente. Esta norma es, por tanto, especialmente adecuada para agua desinfectada y otras aguas potables con bajas densidades bacterianas. La presente norma incluye un método rápido (ensayo rápido) para la detección, en menos de 24 h, de E. coli en aguas destinadas al consumo humano, y que puede resultar muy útil en aquellos casos en los que se requiere una rápida información. El ensayo rápido se basa en la filtración por membrana, el posterior cultivo, en condiciones selectivas, y el cálculo del número de E. coli en la muestra.


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Los ensayos estándar y rápidos descritos en la presente norma, son aplicables a otros tipos de aguas, siempre que la materia en suspensión o la flora de fondo no interfieran en la filtración, el cultivo y el recuento. 2. REFERENCIAS NORMATIVAS Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada. Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo referenciado. (incluida cualquier corrección). NTC 4491-1, Microbiología de los alimentos para consumo humano y animal. Preparación de las muestras de ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para examen microbiológico. Parte 1: Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y las diluciones decimales. (ISO 6887-1). NTC 5395, Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de análisis. NTC-ISO 5667-1, Calidad del agua. Muestreo. Parte 1: Directrices para el diseño de programas de muestreo. NTC-ISO 5667-2, Calidad del agua. Muestreo. Parte 2:Técnicas generales de muestreo. NTC-ISO 5667-3, Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Directrices para la preservación y manejo de las muestras. ISO 3696, Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de ensayo. ISO 7704, Water quality. Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses. ISO 8199, Water quality. General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture. ISO 19458, Water quality. Sampling for microbiological analysis. ISO/IEC Guía 2. Normalización y actividades relacionadas. Vocabulario general. 3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES Para los propósitos de esta norma se aplican los siguientes términos y definiciones dados en la Guía ISO/IEC 2 así como las siguientes: 3.1 Bacterias lactosa-positivas. (Ensayo estándar) bacterias capaces de formar colonias en condiciones aerobias a (36 ± 3) °C en un medio de cultivo de lactosa selectivo y diferencial, con producción de ácido en (21± 3) h. 3.2 Bacterias coliformes. (Ensayo estándar) bacterias lactosa-positivas según la definición indicada en el numeral 3.1 y que son oxidas a-negativas. 3.3 Escherichia coli. (Ensayo estándar) bacterias coliformes según la definición indicada en el numeral 3.2 y que, además, producen indol a partir de triptófano en (21 ± 3) h a (44,0 ± 0,5) °C.


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3.4 Escherichia coli. (Ensayo rápido) bacterias resistentes a la bilis y que, además, producen indol a partir de triptófano en (21 ± 3) h a (44,0 ± 0,5) °C.


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BIBLIOGRAFÍA [1] BARRELL, R.A.E. (1992). A Comparison Between Tryptone Bile Agar and Membrane

Lauryl Sulphate Broth for the Enumeration of Presumptive Escherichia coli in Water. Water Res. 26:677-681.

[2] HA VELAAR, A.H. y DURlNG, M. (1988). Evaluation of the Anderson Baird-Parker Direct

Plating Method for Enumerating Escherichia coli in Water. J Appl. Bacterial. 64: 89-98. [3] SCHETS, F.M. y HAVELAAR, A.H. (1991). Comparison of lndole Production and β-

Glucuronidase Activity for the Detection of Escherichia coli in a Membrane Filtration Method. Lett.Appl.Micrabiol. 13: 272-274.

[4] SCHETS, F.M., MEDEMA, G.J. y HAVELAAR, A.H. (1993). Comparison of Colilert with

Dutch Standard Enumeration for Escherichia coli and Total Coliforms in Water. Lett. Appl. .Microbiol. 17:17-19.

[5] Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater, 18 th ed, APHA,

AWWA, WPCF, 2005. …


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IMPORTANTE Este resumen no contiene toda la información necesaria para la aplicación del documento normativo original al que se refiere la portada. ICONTEC lo creo para orientar a su cliente sobre el alcance de cada uno de sus documentos y facilitar su consulta. Este resumen es de libre distribución y su uso es de total responsabilidad del usuario final. El documento completo al que se refiere este resumen puede consultarse en los centros de información de ICONTEC en Bogotá, Medellín, Barranquilla, Cali o Bucaramanga, también puede adquirirse a través de nuestra página web o en nuestra red de oficinas (véase www.icontec.org). El logo de ICONTEC y el documento normativo al que hace referencia este resumen están cubiertos por las leyes de derechos reservados de autor. Información de servicios aplicables al documento aquí referenciado la encuentra en: www.icontec.org o por medio del contacto [email protected]

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DOCUMENTO DE REFERENCIA INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Water Quality. Detection and Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria. Part 1: Method by Membrane Filtration. Geneve, 2001 (ISO 9308-1:2001).

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