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NUEVAS PERSPECTIVAS PARA EL EMBRIÓLOGO: PAPEL EN ELBANCO DE LÍNEAS CELULARES DE ANDALUCÍA (NODO CENTRALBANCO NACIONAL DE LÍNEAS CELULARES)

New perspectives for the embryologist: role in the Andalusian Stem Cell Bank (Spanish Central Node)

José Luis Cortés*, Fernando Cobo, Carmen Cabrera, Angela Helen Barnie, Purificación Catalina, Ana Nieto, Rosa Montes, AliciaBarroso, Ángel Concha

Banco de Líneas Celulares de Andalucía (Nodo Central Banco Nacional de Líneas Celulares).

* Banco de Líneas Celulares de Andalucía. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. Avda Fuerzas Armadas 2, 18014 Granada. E-mail: josel.cortes.sspa@juntadeandalucia.es

RESUMEN: Un banco de líneas celulares troncales tiene como funciones la elaboración, el almacenamiento, laconservación y la gestión de líneas celulares de diverso tipo, de acuerdo con las normas y estándares que determinala legislación nacional e internacional. Dentro de los tipos de líneas celulares se encuentran las de origenembrionario, obtenidas a partir de la masa celular interna de blastocistos procedentes de preembriones sobrantes deciclos de FIV, donde la figura de un embriólogo que manipule los preembriones es necesaria. Para poder definiraspectos en cuanto al perfil de este tipo de profesional, debemos buscar las similitudes con los centros dereproducción asistida. Mediante este trabajo se pretenden describir las funciones de un embriólogo dedicado a laderivación de líneas celulares embrionarias humanas dentro del Banco de Líneas Celulares de Andalucía.

PALABRAS CLAVE: Banco de líneas celulares troncales, blastocisto, célula troncal embrionaria, embriólogo, FIV, masa celular interna.

SUMMARY: The functions of a stem cell bank are the elaboration, storage, conservation and management of all thecell line types, according to national and international regulations currently in force. One of these cell lines is theembryonic stem cell line, which is obtained from the inner cell mass of blastocysts of IVF spare embryos, where thefigure of an embryologist who manipulates the embryos is necessary. To be able to define some aspects about theprofile of this type of professional, we must look for the similarities with the Assisted Reproduction Centres. Adescription of the functions of the embryologist who derives human embryonic stem cell lines in the Andalusian StemCell Bank has been carried out.

KEY WORDS: Stem cell bank, blastocyst, embryonic stem cell, embryologist, IVF, inner cell mass.

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INTRODUCCIÓN

La creación de bancos de líneas celu-lares troncales públicos es un hechoreciente en Europa (aproximadamen-te 5 años), siendo España pionera eneste sentido, con la inauguración delBanco de Líneas Celulares deAndalucía (BLCA), en Granada, el 23de Enero de 2004. Tanto la derogadareforma de la Ley 35/1988 (Ley45/2003, de 21 de Noviembre), comola actual Ley 14/2006, de 26 de Mayo,sobre Técnicas de ReproducciónAsistida, así como la Directiva Europea(European Union, 2004), permiten a losbancos de líneas celulares españolesderivar líneas celulares embrionariashumanas (siglas inglesas hESCs hu-man embryonic stem cells) a partir depreembriones sobrantes de ciclos deFIV, siempre bajo el consentimiento in-formado de los progenitores.

Algo novedoso en la Ley es la elimi-nación de las diferencias en la consi-deración de los preembriones crio-conservados con anterioridad a la en-trada en vigor de la Ley 45/2003, y losque pudieran generarse posterior-mente, en cuanto a sus posibles des-tinos, siempre supeditados a la volun-tad de los progenitores. Es decir, cual-quier preembrión crioconservado, seacual fuere su tiempo de crioconserva-ción, podría ser utilizado para fines deinvestigación siempre y cuando losprogenitores firmen el consentimientoy estén asociados a un proyecto con-creto que deberán autorizar posterior-mente los Comités Éticos correspon-dientes.

PERFIL Y FUNCIONES DEL EMBRIÓLOGO

Aunque no es aún un título oficial,el embriólogo es aquel Licenciado enCiencias Biomédicas (Medicina,Veterinaria, Farmacia, Biología oQuímica) con experiencia en Biologíade la Reproducción. Según el R.D.413/1996, de 1 de Marzo, para que uncentro esté autorizado en la aplicaciónde las técnicas de reproducción asisti-da deberá estar dotado de una perso-na que cumpla los requisitos anterio-res. Hasta ahora, la figura del embrió-logo ha estado siempre relacionadacon las clínicas de reproducción asis-tida, pero con el descubrimiento del

poder regenerativo de las células tron-cales embrionarias, numerosos cen-tros de investigación han iniciado pro-yectos de derivación de hESCs, don-de la figura del embriólogo adquiereotra perspectiva.

Aún así, para poder definir aspectosreferentes a la figura del embriólogoen un centro de investigación debe-mos buscar las “homologías” con elpapel desempeñado en los centros dereproducción asistida.

ASEBIR ha publicado en el año2006, dentro del programa deCuadernos de Embriología Clínica, unasRecomendaciones sobre RecursosHumanos y Físicos para el Laboratoriode Reproducción Asistida Humana. Enestas recomendaciones, el embriólogosería el encargado de tomar las decisio-nes clínicas dentro del laboratorio deacuerdo con los protocolos estableci-dos, y realizaría la mayor parte de lalabor asistencial del laboratorio de an-drología y embriología.

Respecto a la formación del embrió-logo, éste deberá haber obtenido elgrado de Licenciado en CienciasBiomédicas, como hemos expuestoanteriormente, poseer conocimientosde fisiología humana, endocrinologíareproductiva, genética, técnicas de la-boratorio de andrología y embriología,y conocimientos de cultivo celular.Además deberá poseer una experien-cia de al menos 2 años y acreditar larealización de 100 ciclos de FIV conICSI y 200 preparaciones de semenpara inseminación artificial, supervi-sados por el coordinador del laborato-rio en cuestión, o por otro embriólogo

ya formado.

La ASMR 2004, en la guía para labo-ratorios de embriología y andrología,enumera los servicios que ofrecen enconcreto los laboratorios de embriolo-gía clínica:

- Preparación de los medios de cultivo y control de calidad- Identificación de ovocitos medianteexamen del líquido folicular- Evaluación de la madurez y calidadovocitaria- Preparación del esperma: recolec-ción y análisis del semen, lavado y ca-pacitación espermática- Inseminación de los ovocitos- Determinación de la fertilización y evaluación de la calidad del zigoto- Cultivo embrionario y evolución de la calidad embrionaria- Transferencia embrionaria- Crioconservación, almacenaje y descongelación de esperma, ovocitosy embriones- Micromanipulación de ovocitos humanos y/o embriones

Es obvio que en los centros de inves-tigación en los que se deriven hESCs, lafunción del embriólogo será diferente alas descritas anteriormente, pero pen-samos que la persona encargada de de-rivar estas líneas sí debe de haber ad-quirido anteriormente una amplia expe-riencia en este campo, lo que le otorga-rá propiedad a la hora de manipular lospreembriones destinados a generar unalínea celular.

De esta manera, las funciones del pro-fesional responsable del Área deEmbriología dentro del BLCA son(Figura 1):

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- Descongelación de preembriones crioconservados. Como los preem-briones provienen de distintos cen-tros, es competencia de esta áreael conocimiento de todos los proto-colos de congelación/descongela-ción utilizados para optimizar losresultados en cuanto a la obtenciónde hESCs.

-Clasificación de preembrionescrioconservados descongelados, si-guiendo criterios morfológicos (Calderón et al., 2002):

o Ritmo de división de las blastómeraso Apariencia del citoplasma de las blastómeras

o Contacto entre las blastómeraso Aspecto de la zona pelúcidao Fragmentación de las blastómeraso Multinucleación de las blastómeraso Evaluación de la calidad blastocitaria

Aunque algunos autores no rela-cionan la calidad embrionaria y blas-tocitaria con la tasa de obtención delíneas celulares (Mitalipova et al.,2004), desde nuestro centro pensa-mos que esta clasificación sí es im-portante a la hora de elegir el méto-do de aislamiento de la masa celu-lar interna (MCI) y posterior deriva-ción de la línea celular (Ver abajo).

- Cultivo y evolución de los preem-briones hasta estadio de blastocis-to, donde se encuentra la MCI,compuesta por las células tronca-les, que darán lugar a las hESCs.Para evaluar la calidad blastocitariaatendemos al modelo propuestopor el Instituto Cornell (Veeck andZaninovic, 2004), donde se valorael grado de expansión del blastocis-to, así como el aspecto del trofoecto-dermo y la MCI, quedando estable-cidas tres categorías:

o Blastocistos de buena calidad con una MCI bastante distinguible y con tamaño adecuado.

o Blastocistos con una pequeña pero distinguible MCI.

o Blastocistos de mala calidad con una MCI poco definida.

- Derivación de hESCs. Existen va-

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rios métodos que consisten en elaislamiento de la MCI y la elimina-ción de las células del trofoectoder-mo de los blastocistos. En nuestrocentro hemos experimentado dosmétodos para realizar el aislamientode la MCI dependiendo de la cali-dad blastocitaria. Por un lado, unmétodo mecánico, bien por micro-manipulación o por empleo del di-sector láser, cuando los blastocistosson de buena calidad con una MCIbastante distinguible y con tamañoadecuado.

El empleo del láser es un nuevométodo de aislamiento de la MCIprobado en modelo murino por va-rios grupos, dando buenas tasas dederivación de líneas celulares em-brionarias murinas (mESCs)(Tanaka et al., 2006; Cortés et al.,2006). Consiste en ir aplicando elláser a las células del trofoectoder-mo destruyéndolas, siendo sola-mente las células de la MCI las quese adhieren a la superficie de culti-vo elegida (Fibroblastos murinos yhumanos, MatrigelTM).

Para los blastocistos con una pe-queña o nada visible MCI, utiliza-mos el método de cultivo directo delblastocisto sobre la superficie decultivo elegida (Kim et al., 2005).Así, tanto las células del trofoecto-dermo, como las de la MCI se ad-hieren a dicha superficie. Pasadosunos días, los dos tipos celularessufren un crecimiento, y mecánica-mente se separa la MCI. Aparteexiste otro método de aislamientode la MCI mediante inmunocirugía(Solter and Knowles, 1975), peroque está en desuso debido a que losmedios utilizados contienen produc-tos de origen animal, con el riesgo decontaminación cruzada.

- Coordinador entre los centros de re-producción y el banco para la perfec-ta interlocución en la donación depreembriones para fines científicos.- Coordinador de la labor de obten-ción de los consentimientos infor-mados. La Guía para la Investigacióny Terapia con Células Troncales pro-puesta por la Indian Council of

Medical Research (ICMR-DBT,2006) expone que el profesionalque realice el tratamiento de fertili-dad y el investigador que derive lalínea celular o que trabaje con ellasno sean la misma persona. Ademásexplica que la decisión sobre el des-tino de los preembriones debe estarlibre de la influencia de los investi-gadores que podrían alentar a losprogenitores hacia su uso con finesde investigación.

En cambio, nosotros pensamosque el embriólogo del banco de cé-lulas troncales sí debe ser parte ac-tiva en el proceso de entrevista, ex-plicación y firma del consentimien-to informado por parte de la pareja,o la mujer en su caso, estando dis-ponible para realizar las entrevistascuando sea necesario, ya que esexperto en cuanto a cualquiera delos destinos propuestos por la Leyespañola (Ley 14/2006).

El BLCA es un centro multidiscipli-nario donde varias áreas interaccio-nan para una adecuada coordina-ción, con el objetivo de elaborar, al-macenar, conservar y gestionar to-dos los tipos de líneas celulares, deacuerdo a las actuales normativasnacionales e internacionales. Estasáreas o secciones son las siguientes(Figura 1): Área de calidad; área detrazabilidad; área de embriología;área de cultivo celular; área de cito-genética y biología molecular; áreade microbiología y área de investi-gación.

CONCLUSIÓN

En el BLCA pensamos que existeuna nueva figura de embriólogo in-vestigador especializado en la ma-nipulación de preembriones huma-nos destinados a generar nuevashESCs. Este embriólogo debe haberacreditado experiencia previa enembriología clínica, y debe de estaren contacto con las clínicas de re-producción para la perfecta coordi-nación en la donación de preem-briones con fines de investigación.Además, el área de embriología alque estará integrado el embriólogo

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formará parte del Banco de CélulasTroncales, con un stock propio delíneas celulares embrionarias, parasu distribución a centros de investi-gación que las puedan utilizar parainvestigación básica y futuras apli-caciones clínicas.

AGRADECIMIENTO

Al Dr. José Antonio Castilla por suasesoramiento en la elaboración deeste artículo.

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Figura 1. Funciones del Área deEmbriología dentro del organigrama delBanco de Líneas Celulares deAndalucía.

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