Tecnologías de Recombinación Genética

Grupo: 5BM2

M. en C. Miguel Ángel Ontiveros Torres

Diciembre 2013

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

UPIBI

Receptor de oxitocina OXTR (Homo sapiens)

Álamo Moreno Thaney Betsabe

Tabla de contenido Marco teórico. ............................................................................................................................ 3

Formato FASTA .......................................................................................................................... 3

Secuencia de aminoácidos. ........................................................................................................ 7

Interactoma. .............................................................................................................................. 8

BLAST ....................................................................................................................................... 10

Clustal omega. ......................................................................................................................... 12

Árbol filogenético ..................................................................................................................... 14

Locus........................................................................................................................................ 14

Sitios de restricción. ................................................................................................................. 16

Polimorfismos (SNPS) ............................................................................................................... 19

Herramientas utilizadas. ........................................................................................................... 19

Tabla de ilustraciones. Figura 1. Estructura tridimensional de la proteína que codifica el gen del receptor de oxitocina

OXTR. ............................................................................................................................................. 8

Figura 2. Interactoma de OXTR. ...................................................................................................... 9

Figura 3. Pantalla de salida de herramienta STRING. Posibles proteínas que interactúan con OXTR. 9

Figura 4. BLAST . Homo sapiens- Rattus norvegicus . .................................................................... 10

Figura 5. Primer secuencia del BLAST . Homo sapiens- Rattus norvegicus. ................................... 11

Figura 6. Segunda secuencia del BLAST Homo sapiens- Rattus norvegicus . ................................. 12

Figura 7. BLAST . Homo sapiens- Macaca mulatta. ........................................................................ 12

Figura 8. Evidencia clustal omega. ................................................................................................ 13

Figura 9. Clustal omega. El * representa un alineamiento entre las tres secuencias (Homo sapiens,

Rattu norvegicuss, Macaca mulatta). ........................................................................................... 13

Figura 10. Árbol filogenético (distancias) ...................................................................................... 14

Figura 11. Localización del gen OXTR. ........................................................................................... 14

Figura 12. Amplificación del cromosoma 3. Herramienta Map viewer. El círculo amarillo indica la

posición del gen. .......................................................................................................................... 15

Figura 13. Ideograma del cromosoma 3. ...................................................................................... 15

Figura 14. Sitios de restricción del gen OXTR, enzimas involucradas. ............................................ 18

Receptor de oxitocina

OXTR (Homo sapiens)

Marco teórico. La oxitocina es una hormona y un neuropéptido, sintetizada por células nerviosas neurosecretoras

magnocelulares en el núcleo supraóptico y el núcleo paraventricular del hipotálamo, de donde es

transportada por su proteína transportadora, neurofisina, a lo largo de los axones de las neuronas

hipotalámicas hasta sus terminaciones en la porción posterior de la hipófisis (neurohipófisis),

donde se almacena y desde donde es segregada al torrente sanguíneo. Molécula proteica

precursora de mayor tamaño de la cual se deriva la oxitocina por digestión enzimática.

La secreción de esta sustancia en las terminaciones neurosecretoras está regulada por la actividad

eléctrica de las células oxitócicas del hipotálamo. Estas células generan potenciales de acción que

se propagan por el axón hasta las terminales nerviosas pituitarias; las terminales contienen gran

cantidad de vesículas ricas en oxitocina que se libera por exocitosis cuando se depolarizan las

terminales nerviosas.

La proteína codificada por el gen del receptor de oxitocina pertenece a la familia del receptor

acoplado a proteína G y actúa como un receptor para la oxitocina. Su actividad está mediada por

proteínas G que activan un sistema de segundo mensajero de fosfatidilinositol-calcio.

Formato FASTA

Para conocer la secuencia de nucleótidos del gen, se utilizó la herramienta NCBI. Dicha secuencia

se mostrará a continuación en formato FASTA con una extensión de 24.97 kb.

>gi|224589815:c8814180-8789212 Homo sapiens chromosome 3, GRCh37.p13 Primary Assembly

ACTGACCTCCCTGAGCAAGAAGGAATTCCGCAGCAGAGGACCTTTGGACTTGACCTGCAAAATCAGCTCTTCCCTGGGTCTCCAGCCTGTCAGCTCACTCTGAAGATTTTGGACTTGCCAGCCTCCATAACACATGAACCAATTCCTTAAATGAATCTCTTTCTCTACATATATACATCCCAATGGTTCTGTTTCTTTGGAAGACCGAAAGACACCCTGTAATGTCACATCTTTTGTCCATGCCTACAGCATCTCTTGCCTGGATCTCCAAGGCCTTCATAATGCCAGTATCTCCTTTCCCATCTTCCCTGTGGCTACCAGCATTCTCTCACCAAGCACAGATTTGAGTACGTTGTTTTGCTTGCAGTCCTTCCAGGCACCCCACCTTCCCCACCAATGCCTTCTAACCTCAGTCATCTTTACACTAGCACCTTCATGATTTTTGTTATATCAGACTTTCTCTTTGCTGACGTCAAAAGTAAGCAGAACTGAGAACTGAATTTCCTCCCTGTTATTCAGTATCACTCAATATTAAATTCACATTTAACACTATCAGAAAGTATTCCATCCCATATTTTGGGGAATGTTGGGTTACAGAATAAAACCCATTCTCCTTTACATGGCCTTGAAGTTCCTTTAGCATCAATAAGTACAGTTATCTCTTGGTATCCATGGGGGATTGGTTCCGGGAGCCTTCAAGGTACACAAATCCCTGATATAAAATGAAGCAGTATTTGCATATAACACGTGCATATCCTCTCACATACTTTAAGTCATCTCAAGATTACTTGTAACACCTAATGCAATGTCACTCGTCACTGCATTTGTGTGCATTCAGTGTTGTAGGTGGCACATGACAAATTCAATTTTTGCTTTTTGGAACTTTGAGGATTTTTTTTCCTGAATATTTTCAATCCATGATTGTTTGAATCCACTGAACTCACAGATACAGGGATATAGAGGGCCAACTGTATGTATTAAGTGCTGGCAATGTGCTAGGCACCAAGCAATTCATCTTTAGTCCTTCCTCCAAAACGCCAAAGTGATTCCCCTGCACCACTCTCTGAGAAGTATGCCTTTTTTCTTTGCTTCCTGGAGAACTCATTCTGGAGCTCTGAAATCCAGCTACCTCTTTGTAAAACGATCTCCCAAGTATTACCTCAGCCCCCAGCAGTCCTCACTTCTGTAACATCATTTATTGTTGTCACACTGCAAATATTAGGTTGATGCAAAAGTAATTGCAGTTTTTGCCATTATTTTTAATAGCAAAAACCACAATTACTTTTGCACCAATCTAATATGTGTTTTTCTCCCTGGCCGAAGCTCAAAGGTGAAGGAGCATGTCTTATTCATTGTTAGGAGTTTTCAAGGGGACCTCTCTATTTCCTGCCTGGTTTCTGCACACAATGAGAAATAAAACAAAAGACAGGAAATGGGGATCACACTATTACTGTTGTTGTTATTGTTGTTGTTTAGATTAAAACTAAGTTAGAGAATTTACCTTTTGCATGAGACTAAATAGCCCTGTTAGGTGAATCCAGAATTAGGCTGTCTCACGGGCTACGCGAGGACCACACAGGTAGGCAGGCTTCCCTACAAAGGGTAGAAGAGTCTGTCCTTGGTGAAGTGGCTCAGTAAACTTGCTCCCTAGAAAGCAGCTGTCTTCCAGGAGAAAGAAGGGCAGGCTTGGTTCTACAGGCCAGTGTTTTCCTTCTCACATTCACCGGTCAGGGGCTCATAGGGAAAAATCTGCCTTCATCCAGCCGTGGAGTGAGGCAGGGGTGTTTTACCTGCTAGGATTGAACCCTCAGATTGCACAGATTATACAGTTTCAGAAAACCAGAGGGACAGGACCTCAGACATTAGCTATCTTGACCAGTGCTCTCATTTTACATATGAGGAGACTGAGGCCCAAAGAGAAGGGGCTTGCCCAAGGTCACTTCATTCTCACCTGAGTCGTC

TGTAACTTTAATCTGTAATTTTCGAGGCCGATAGGTACTATTGACTAATATTGATTAATACTGCCTGCCACCCCTTGGCAATGCTGTCAAGATTCCCAGCCCCATTCTGGAATGATTACTCAGCTAGAACCCTGGGATCCAGGTGCTGTAAGGTTGGCCCCTGGGATATCTCGGCATGGGGCTGTAATTGTGGATTAAGGAAACCCAGTCCTTGGCTAACTCAAGTCTCTCCACATAATAAAAAGACGGAGAAGTGAAATGTCAGGAGGAAATACACATTTAATGCATTTTAAAGAGCCCTGTTTATTTTTGAATCCTGGCCTTTTTTTCTGACTTAATTCTTGGCCACTGTAAATTACTTCAAAAAATGATTTTAGAATAGAGAAGGGGCAGGGAGGCTGAGAAGCTGTCTTTAACATTTTATCTTCCTTTGGCATCATTTAGAATTTTAATTCCGAAGCGCGACAAGGAGGCAGAAACGGCTCTTGGGCGCAGACAAGCAGAATCACTTTAAATGAAGACAGTGTTGTGCTTCAGAATTTCCTCTAAAACTACCGAAAAAATAACGCCTCTCCCAGCACTGCTTAGAATAGAGGCCATTTCTAATTCCTCATTAACGGGAATAGGAACAAAAGTATTCCAAAGCAAAGACTTATTTGAGTTCACTGCTAAAGCCGCTACATCAAGCTGGAGGTGTGGGGGGAGAGAAAAGCCTGAAAATTAACATCATTTTTGGGAAATAATCAGTTTAAATGCTTTTGTAACTTCATCACTATCTACCCGGGGAAGAACATTATTATTCAAGCCTCCTATGTGTCTCGGAGTCAAGAGCTTCTAAACCAAGAAAGGAAGAAACGGGCGGGTTATTGACGAGTTCCCTCCCTCTCGCAGTTTTAAACCACTGCAAAATAAACCCATTTGTTAAGGCTCTGGGACCAACGCTGGGCGAACCAGCTCCGCTCCGGAGGGGTCTGCGCGGCTGGCCTCGCCCGCCCCCTAGCGGACCCGTGCGATAGTGCAGCCTCAGCCCCAGCGCACAGCGCCGCATCCAGACGCTGTCCGCGCGCGCAGCCTGGGAGGCGCTCCTCGCTCGCCTCCTGTACCCATCCAGCGACCAGCCAGGCTGCGGCGAGGGGATTCCAACCGAGGCTCCAGTGAGAGACCTCAGCTTAGCATCACATTAGGTGCAGCCGGCAGGCCATCCCAACTCGGGCCGGGAGCGCACGCGTCACTGGGGCCGTCAGTCGCCGTGCAACTTCCCCGGGGGGAGTCAACTTTAGGTTCGCCTGCGGACTCGGTGCAGGTAGCTGGGTGCTAAGCAGGGGTGGACGGGATGGCTAGGGCCGGTGGAGCCATCGGGACCCGAGTGGAGGTGGTGGGGTGCCTCGCACTCCTTGTTCCTGGAGGAGCTCGGGGTGTTCCGAGAGATTGTAAAGTGACTTCTCGGGATTGAGACTCAGAGTCCTTGATTATCTGGGTCCAAAGCGCAAGTCAGGGGTTCCAGAACTTTCGAGGCTGCCGGGCTGGGGAGGAGCCCCGCGGGAGGTGTCTATGCCAGGGTCTGGGAACAGCGCTTGGGCATCTTGGGCTTTGAGGCAGGGGTTCCCCCAGCAGGGACTGCAGAACCGGGTTTCCACCGAAGCAGGTGCTGTGGAAGTTCAGGGAGTGACGGCCGACCGTCTTAGAAAAGGGGGTTAGACGGGGAAGGACCAGAGCTGGGGTTTCCCAGGCAAGTGGCTATTTGGGGATTTCCGGAGGAAGTACTTGAATTAATGTTTACTAGGAGAGGGGCTGGTTTGGGGGTCCCGCGGCAGGTGGATATGCTGAGGGTCGGAGCCTGGGGCGAGTAGGTAGTTTGGAGATTCCCTCGGGGAGGTGATTTGGTTTTAGATTCCCACTCCCGGAGGAACGTTGCTGATTTTGACCCTCCCTTCTCCCCCAGTGGAAGCCGCTGAACATCCCGAGGAACTGGCACGCTGGGGGCTCTGGGCTTGTGGCCGGTAGAGGATTCCCGCTCATTTGCAGTGGCTCAGAGGAGGTACCTCCAACGGGGATTTCTGGGGTGGCGGCTGAGCAACCCGAGGCCGGCGGTTGTGCCCTGTTGTTTCAGATGAGTTGGGTTCCTGGGAATGGGACAAGCACGCCCTACCCGCGTCGGAAGAGAAACGCGGCGGTCTCCTCACGGCCCTCCCGGTTTGTTTCAGGGTGGACCCAGCAGATCCGTCCGTGGAGTCTCCAGGAGTGGAGCCCCGGGCGCCCCTACACCCTCCGACACGCCGGATCCGGCCCAGCCGCGCCAAGCCGTAAAGGGCTCGAAGGCCGGGGCGCACCGCTGCCGCCAGGGTCATGGAGGGCGCGCTCGCAGCCAACTGGAGCGCCGAGGCAGCCAACGCCAGCGCCGCGCCGCCGGGGGCCGAGGGCAACCGCACCGCCGGACCCCCGCGGCGCAACGAGGCCCTGGCGCGCGTGGAGGTGGCGGTGCTGTGTCTCATCCTGCTCCTGGCGCTGAGCGGGAACGCGTGTGTGCTGCTGGCGCTGCGCACCACACGCCAGAAGCACTCGCGCCTCTTCTTCTTCATGAAGCACCTAAGCATCGCCGACCTGGTGGTGGCAGTGTTTCAGGTGCTGCCGCAGTTGCTGTGGGACATCACCTTCCGCTTCTACGGGCCCGACCTGCTGTGCCGCCTGGTCAAGTACTTGCAGGTGGTGGGCATGTTCGCCTCCACCTACCTGCTGCTGCTCATGTCCCTGGACCGCTGCCTGGCCATCTGCCAGCCGCTGCGCTCGCTGCGCCGCCGCACCGACCGCCTGGCAGTGCTCGCCACGTGGCTCGGCTGCCTGGTGGCCAGCGCGCCGCAGGTGCACATCTTCTCTCTGCGCGAGGTGGCTGACGGCGTCTTCGACTGCTGGGCCGTCTTCATCCAGCCCTGGGGACCCAAGGCCTACATCACATGGATCACGCTAGCTGTCTACATCGTGCCGGTCATCGTGCTCGCTGCCTGCTACGGCCTTATCAGCTTCAAGATCTGGCAGAACTTGCGGCTCAAGACCGCTGCAGCGGCGGCGGCCGAGGCGCCAGAGGGCGCGGCGGCTGGCGATGGGGGGCGCGTGGCCCTGGCGCGTGTCAGCAGCGTCAAGCTCATCTCCAAGGCCAAGATCCGCACGGTCAAGATGACTTTCATCATCGTGCTGGCCTTCATCGTGTGCTGGACGCCTTTCTTCTTCGTGCAGATGTGGAGCGTCTGGGATGCCAACGCGCCCAAGGAAGGTAGCCAGGGCTGGGAGACCCAGGAGGAGGGAGCCTGGTGGCTGGGGGAGGCCCTTATCTTGCTGCCTCAGAATGTCCAGGGGTCTGTGGACTTCCTGGGGGATAAGCGGGTTTGAAATCCCACAGAGTCACTGCTCTGTCATCCCTTGACCAAGTGACTTAGGGCAATTAACCTCCCTGAGCCTCCACTTTCTCTTCTGTAAGGTGGCAATAAGGATAAAAGTACCAACTGTCACCAGGCATAGGGGAATGCCACGAGAAAATGCAGTTAAAGTCCTTAGCACAGTCCTTGGGCTGCATATGGGCTGTATGGTTTACTGTGGTGGTGGAAACAGGTTCAAGGGACTCCATCTGCTTTCCCACGTGGTTAGGAGGAGGTGGTGGAGGTAAGTTTGGAACCCCTGGCCAAGCTCAAGCTCCTTCAACTTTAAGTTCACGTTAAGATGAACTTCCACTTTAAGTTCAAGAAATCCAGCTGAAGCCAAGAAGTCTGGTTTGGACAAGGACAGCCTTGCAGGAGTGGCAATTTGTCCAACCAAGCACCTAGTAGTTGAAGGGGGTGTTGGGGGGCAGAGGAGTCCAAGGGAGAGGTGAAGACAAATCCCTGAACTCCTCATCGAGTGGAGGTGATGAGTCTCCATGCAGAGAGGTGAGTACTGCAAGGAGTGGTGGGCAGGCTTAGGGAGGAGAGCGCCCAGGACTGAGACTTCACTTCCACTTGGAGGAAAGAGAAGAAAGCCTTGAGGGGGACATTCAAGTTTGAGGGGGAGGCTGGGTGATTTCTGTAGGTGGGGAATGTGCCTTCCAGGTAGGAGGACTGCTGAGGACAAGGCTGAAGGTGGGGCAATTGTCCATTCTTGGCCTGTGCCAGAAAGCTAAGAGGAGGGCATAGAAGAGGGCGACCTAGGGAGAAAGCTTGGAGGAACAGAGGCACCCTAGGGCTCTGGGGTTTGTGGCTGGTGCTGGGTGGCTGTCCCCAAGGCACAGAGCACCAGGCAGCTTCCTGTCACTCCCTGCCCCCCAACCCCTTTCCAGTAGCTCATTTGGAAAGACCAGGAGGGGGTGATTGCTGGTGGTGAATGATTTATAAGTTTTTGTTTGAAGGCAATCCCATAACGCGTGCTGGATGCTGGGGACTTCAAATGTTTGTAAAGAAAGACCAAAGGATTTGCTTTCACCCTTTCTGCACTCCAGACACTGCAAATGTCCCATTTCTGTGTGCAGTTACTACTGCTCCCAATAGTCTCAAATACATGCATCCTGGGAAGCCGAAATCTCAGTGCCAGCTGCTTTCATTCAGTTTGGTAACTTTGCTTTGGTCCTTTCTGAAAATCACAGACTCCAGGCTTTATGGAACCCTCCCAGTTAGCTCAGTGTTTGCTTTAGTGGCCAAGACACTGGTTATTCAATATTTACCGAACACCTGTGGCCCCTGGTAACAACTTACAGAGAGGGTTCTAGGGCCCCGAGAGGGGAAGGCACTTGCACCAGGTCACACAGCAAGTCAGAGGCACAGCTGACGTTTCCTATGCCAGGGTTCTTATGAAGGACACATGATGAGGGAGTGGGGTTGGGCAAAAGCCAGTAGTGGAAGTCTCTAAGTAAGGCCTTAGGCCTCACCTGTTTCCTGGGCAGATCTGAAGAAACCAGATCCAGGTCTTGAGGAGCTCGAACACCAACTATCAAGAAAGTGAAACCAGCACCCTTTGGAGTAGATACTGGAGAGATGTGG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TACCACCCTGAACCCACTGCTGCCCTGGGCAGTGAGTGGCTTGTTTTTTCTCCTGGACTTGTAATTTCACTCCAGTATATTTTTACTTCTTCATTCTGGGATATTGTGAAAAGCGGTAAATATAGGATTGGTGACCAATTGGGTCAGGAAGTCCAGTGTTCTGGACTTGGGGTAAGCAGTGGGGTTGGGACCTCAGATGGGAAGGGTGGTGCTAAGATCCTCCTGACCTCAAAGTGTATTTGCCTTTAAGCGAACAAATGCTGGGGTCCTTGGGGACCAGCTTGTCAGAGGGTAGCCCTAAGAGAAGGGGATTACCTTGTAAGACCATCTGGCGCAGTGGACCTATTAGAACTTGGGTTAAAAATGTTTAAGAAGCTAATGTTTAAGAAGCATTTGGGAAAGAAAAAGAAATAAATGTATCCAGATAGGAAAAGAAGAAGTAAAACTATTTGCAGATGACACAGTTTTGTATATAGAAAATCCTAAGGAACTCACACACACACACACACACACACACGCACACAGCTATTAGAACTAATAAGCAAGTTCCGCAAGGTTTCAAGATACAAGATCAATATACAAAAATGAATTGTATTTCTTTATACTAGCAACAAACAATATGAAAACGAAGTTAAATAATTCCATTTATAATACCATCAGAAAGAATAAAATAGGAATCAACTTAACAAAACAAGTGCAAGACTGAAAACTACAAAATTGGAAAGAAATTAAAGAAGGCTTAAATAAATGGAAAGACATCCTGTGTTCATGGATCAGACTTAGTATTGTTAAGATGGCAATACTATCCTAACTGACATGCAGATTCAGTGCAATCCTTATGAAAATCATAGCTGGCTTCTTTACAGAAATTGATAAGCTAGTCCCAAAATTCATAAAGAAATGCAAGGGACCCAGAATATCCAAATAAGCCTTGAAAAAGAACAAAGTTGGTGGATTCACACTTCCTGATTTCATAATTTACGATAAAGGTAATCAGCTCAGTGTGTTACTGGTTTAAGGATAGACATACGGAGCAGAATAAAGAGTACAGATATGAACACTTATACTTACGGTCAATTGATTTTTGACAAGGTTCCCAAGACAATTCAATAGAGAAAGGAGAGTCTTTTCAACAAATGGCACCGAGACAATGATATGCAAGTGCAAAAGAATGAGGTTGGACCTTTACTCACACTATGTGCAAAAATCAACTCAAAACGCATCCAAGATCTAAATATAAGAGCTGAAACTATAAAATCTTAGAAAGAAACATAGGCATAGATCTTTGTAACCTTGAATTAGGCAGTGGTTTCTTAGATATGATACCAAAGACACAAGCAACCAATGGAAAAATAGGTAAATTGGACTTAATCAAGATTTGAAGCTTTTGTGATTGAAAAGACCCTATCAAGAAGGTGAAAAGATAACCTGC

AGAATGGGAGAAAATATTTGCGAGTCATATATATGATAAGGGGCTTGTATCTGGAATATATAAATAACTCTTATAACACAACAATAAGGAGAAAAATAAATCAATTTAAAAAATGGGCTAACGGTTTGAATAGACATTTCTCCAAAGAAGATATGCAAATGGCTACTAAGCACATGAAAAAATACTCAACATTATTATTCATTAGGGAAATGCAAGTCAAAATCACAATGAGATTCCAGTTTACAATCACTAGGATGGCTACAATAAAAAGATGGACAAGAACGAGTGTCGGTGAGGATGTAGAGAAACTGGTAGAAATTTAAATTGTTGGTGGGAATGTAAATGGTGCACCTGCTTTGAAAAACAGTTTGGCAGTACCTCAAAAAGTTAAACGTAGAGTGACCATATGACCCAGGAATGCCACTCCTAGGTATTTACCCAAGAGAAATGAAAACGTACATACACACAAAAACTTGTACACCAATGTTCATAGCAACATTATTTGTAATAGCCAAAAAGTGGAAACAACCCAAATGTCTACCAACTGATGAATGGGAAATAAAATGTGGTCTGTCCACGCAATGGAACATTATTAGACTCTAAAAAGAAATGAAGTACTCACACATGCCACAACATGGATGAGCCTTGAAAACTTGCTAAGTGAAAGAAGCCAGGTGCAAAAGCCCACATATTGTCTGACTGCATTGAAATGCAATGTCTAAAATGGACGAATCTATATAGAGTGAATATAGATTAGCGTTTGCCAGGGCCTGGAGGCTGTGAGAGATGAGGCATGACTACTAAGGGTTTGGGGTTTCTTTTTCGGGTGATGAAAATGTTCTGAAATTAGTGGTGATTGTGCACGATTTTGAGAATGTACTAAAAACCAATGAACTTTAAAAAATAAAAATAAACAAAAAAAATTCAACAGATGAATTCAGAGAAGGCCAGCTTGATGGATGAATTCCTTGGAATCTCTTGCCTCTCAGCACTTTTGTTTCTCTATGTGGCTCACTGCTTGAGAGGGATCTCATCATTTTCTTACTCAGTTTTACTGCAAGAGATGATGTCTCTATTTGGCAAAAAGTAACAGCAGTGAAAATATATCCCTACTTTGTAAAGGCACAAGTGATGCCTTGTAGCTGCAGGTTGTTATGTTTTATTTAAAATAGAAATTCACTAGAGGTGTCAGAGGTTTTTCTTACCTAGTGAACATGTTCTCAAATGTCCTCTCAGCCTTGAGGTTAGGACATGACCACGTCTAAGAAATACCTTTAGTCACTAAATACAGGACACTACTGATCAGAGGTTTACTGTCAGGGACTGGCCAGCTGAGTGCATGGTGGGGCACCTTTTAAGTTTCCAGGCACATTTTTGTACTTACTGAGATACAGCAGGAGCACTCTCAAAGGCCACAGATCCACTCTGTCTCTTTATAACACACTTTATTCTTCCTCCATGCTGCAGTAGCCACATAGCCACACACACGCGCATACACACACAATAGAATGAGCTAGCATTGTCTAGAGGTTCTGGGAGAAGAGAGGCTTGCACTGAAATGTCCACGTTCAAAGTCTAAGGATTTAGCACAAGGTCTTCAGTACTACCCGGAGACTGAAGATAGTATCGTCTTTGGACTGCAAAGCATTGCTCAGTGTTGCTGGGACATGCACGAAGAGGGTCAACACCAGCCAGTCCTTGCTCTTTGGGAAGCTAACAGGATGCAGTTCTGGGGCCTCTGTGCACATGTACTGGAGCACTGGTGAGCTCTGGGTGCAAATGCAGCAGCAGTGGGGTCTGTTAGCATTCATGCCTCGCTGCCCACCAGCCAGAGATGCCCCAGGACTCTGCTGTTCCCAGGGAAGTTGCCATCCTAGGAGCCAACAGAGGCCACTGGGGATCAAAGGGACAGCAACTCACAGTAGATTTTCTGACCAGGAGCACAGCCTTCCTGGGAACCCTGGAGTTATAAGACTCTTGGGCATCAGAACCAAGTGGGATGCTTTGTCACTCTCTTCGTGTGAAAGCTCTGGCGGGTACATTGGGTCTTATTATGGCGCAGGAGTCTGTTTTATGGCAAATAAGTGACATTCAATTTCAATAGCCCCACTGGATATACACCCCGACCCCCACCCATCTCCTTGAGAGCATTTTCACCATTTCTTAGTCTTTCCCCAACTAAAGCCTAGAAGAATGAGCGCAGGGGTTCAGAACGCTACCTTGGGTTCAGTTGTTTCTGGCCTCCTCCCCAGACCCCATGCCTGAGGTCTGCCAACCACCTTTCCCTACAGTTTCAGACTTGTTTACAACCATATGCATGGCCGGGGTTGCCAGGAAGTGGGAGCTGCAGATTGTCTTCTGCAATGTATCATGGCTCTGATCATCAAAAGTGAACGTGGAAACTCTGAGGCTTATTTCTTTAAGCGCTGGAAAAAAAAATCTGACACATACTTTGGTCTTCTTTTGGCTTGAGTCTATGTGTTGCCACTTCAGGAAATGTAAGGGGACAATGCAGGCTGTCTTTTAAGAAAATCCTGGTTTCAAAGTGTTTAACACTTTTTGTATTCAATAGCAATGAAACGCCACTTAAGGCAAAATGTGAACACCTTGATTTTGTTCTACTGTGGTGACCTGCTCTGGCACCCCTCTGTAACTGTGCCAGTTGGTGAATGACATGGCTGATCATAAGTTGTCTGCTTCATTAGCTGCTTGATAGAGAGTGCACTAGATAAACATTTGTTTCCATACATTGCTTTGCCCCCGTTCTTCCTCCCAAGAACGGTGACTGGAACTGGTGGCTTGTAGACCCCAGATCCCTGCAGGGCTTCAGAGTTATTGGCCTGATTACGGCACAGATGCATGGGCTGTGACAGGGTGTGGAAGGGGGCCCTGGTCCCATTCTCTGGAATCACAGGTGCACTCAGTTATCAGAGTTCTGTGGGAAGATGCTCTAAGATTCAGGAACAAACATCATGTATGATGTCCCTGAATCTGCTCTGAACCACAGTGGAACTCTGGGGATGATAGGATTCTAGACTGTTACCTTGAAGGAACCCTAACAAATATTTCTTAAAAGTGGATTTGGGAGCCATCTGTAGCATCACAAATGAGTTTGTGTTAACATGCTGATTCCTGGGCCCCACTACTGAATCAAACACTGTAGCTAGAGCCTTGGAACCTGCATTTCAAACAGGAGTCCCTGGTGGTCCCCTATGTATCTTATGAGAGGGAATGGAACTCCATCCTCCTGCCTCAGGCCCATTCTCATCATAACCCCAATGTGATTTTCTGCCTGCTACTTCTCAAGGAGATTCCTGGAGGGAGAACTCCTTGGACACCCATGCATCTCAGATGTGTGTCCTGTCTCTAGTTCTGTGAACTTTGTGGCTAATTAAGCACCGACCATAGTCTGCCCTTAGAGAAAGACAGTGAGCTTGAAAAATTGGAGTCATTGTCAAATCCAGTTATAGCAAATACCAAGATGGCAAATTCTCTACATAACCCAAGATTCCAAGTCTGAAATGGATGGCCTCGTGATTTCAAGAGACGTTTGAAAGGGCAGGCCCTTTGAGGAGGACATAAGTAACATCAGCCTTAGTCCTTTTCAGCAGGGAGGAGCCTGGGCCTGCTGAGCCCCCCGACAATGTGGAAGAGCCCCAAGGGAGAGCACAGGCAGCAGGCTGGAGCCACAGTGATAGTGCTGGCTAGGTGGGTGCCTTTTGGCAAGGTTCCTGACTTCTCTGGACTGTAACTTTCTCATCTGCAGAAACAAGGGCTAAATGATGAAGTGTTTAGGGGTA

Secuencia de aminoácidos. Una vez obtenida la secuencia de nucleótidos del gen, con ayuda de la herramienta de traducción

que ofrece ExPASY se procedió a obtener la secuencia de exones que codifican la secuencia de

aminoácidos (345AA) que componen al receptor de oxitocina OXTR, siendo esta última:

MEGALAANWSAEAANASAAPPGAEGNRTAGPPRRNEALARVEVAVLCLILLLALSGNACVLLALRTTRQ

KHSRLFFFMKHLSIADLVVAVFQVLPQLLWDITFRFYGPDLLCRLVKYLQVVGMFASTYLLLLMSLDRCLAI

CQPLRSLRRRTDRLAVLATWLGCLVASAPQVHIFSLREVADGVFDCWAVFIQPWGPKAYITWITLAVYIV

PVIVLAACYGLISFKIWQNLRLKTAAAAAAEAPEGAAAGDGGRVALARVSSVKLISKAKIRTVKMTFIIVLA

FIVCWTPFFFVQMWSVWDANAPKEGSQGWETQEEGAWWLGEALILLPQNVQGSVDFLGDKRV

Estructura tridimensional

Con la secuencia de aminoácidos, el ProteinModelPortal y el visualizador RasMol, se obtuvo la

estructura del receptor de oxitocina OXTR de Homo sapiens.

Figura 1. Estructura tridimensional de la proteína que codifica el gen del receptor de oxitocina OXTR.

Interactoma. El intercatoma se define como el conjunto completo de interacciones moleculares dentro de las

células, incluyendo las interacciones proteína-proteína, proteína-RNA y proteína-DNA. Debido a

que el receptor de oxitocina es una proteína, el interactoma que a continuación se muestra

representa interacciones proteína-proteína. Se obtuvo gracias a la herramienta STRING.

Figura 2. Interactoma de OXTR.

Figura 3. Pantalla de salida de herramienta STRING. Posibles proteínas que interactúan con OXTR.

La herramienta STRING proporciona, posibles proteínas que interactúan con el receptor de

oxitocina OXTR (entre más cercano a 1 sea el Score, es más confiable que exista una interacción),

algunas de las cuales se describen a continuación:

OXT. Oxitocina , prepropéptido ; neurofisina 1 se une específicamente oxitocina . ADRBK1. Adrenérgicos , beta, quinasa del receptor 1 ; fosforila específicamente la forma agonista ocupadas de los receptores beta-adrenérgicos y estrechamente relacionado , probablemente, la inducción de una desensibilización de ellos . GRK5. Proteína G - receptor acoplado quinasa 5 ; fosforila específicamente las formas activadas de los receptores acoplados a la proteína G. GNRH1. La hormona 1 (hormona luteinizante liberadora ) liberadora de gonadotropina; Estimula la secreción de gonadotropinas, estimula la secreción de ambas hormonas luteinizante y folículo - estimulante. CCK. Colecistoquinina; Esta hormona péptido induce la contracción de la vesícula biliar y la

liberación de enzimas pancreáticas en el intestino. Su función en el cerebro no es clara. La unión a los receptores CCK-A estimula la liberación de amilasa del páncreas, la unión a los receptores CCK-B estimula la secreción de ácido gástrico. NTS. Neurotensina puede jugar un endocrino o papel paracrino en la regulación del metabolismo de las grasas. Neurotensina, se provoca la contracción del músculo liso. TRH. Hormona liberadora de tirotropina; funciona como un regulador de la biosíntesis de la TSH en la glándula pituitaria anterior y como un neurotransmisor / neuromodulador en los sistemas nerviosos central y periférico. MAFF. v-maf homólogo de oncogén de fibrosarcoma musculoaponeurótico F (aviar) , que interactúa con la región del promotor corriente arriba del gen del receptor de oxitocina . Puede ser un promotor de la transcripción en la regulación del gen del receptor de la oxitocina en el parto. Ya que carece de un dominio de transactivación putativo, puede comportarse como un represor transcripcional cuando se dimeriza entre sí mismo. También puede servir como un activador transcripcional dimerizando con otras proteínas de cierre básicas (generalmente grandes) y la contratación de los mismos a los sitios de unión al ADN específicas. Pueden estar involucrados en la respuesta al estrés celular. KNG1. Quininógeno 1 ; (1) Quininógenos son inhibidores de proteasas tiol ; (2) de HMW quininógeno juega un papel importante en la coagulación de la sangre , ayudando a posicionar de manera óptima precalicreína y el factor XI junto al factor XII ; (3) de HMW - quininógeno inhibe la trombina y plasmina inducida por la agregación de los trombocitos ; (4) la bradiquinina péptido activo que se libera de HMW-quininógeno muestra una variedad de efectos fisiológicos:(4A) influencia en la contracción del músculo liso, (4B) la inducción de la hipotensión, (4C) y la natriuresis la diuresis , (4D) disminución en el nivel de glucosa en sangre , (4E) es un mediador de la inflamación . CASR. Calcio-detección del receptor; detecta los cambios en la concentración extracelular de iones de calcio . La actividad de este receptor está mediada por una proteína G que activa un sistema de segundo mensajero de fosfatidilinositol-calcio.

BLAST La herramienta de búsqueda de alineamiento local (BLAST por sus siglas en inglés) encuentra

regiones de similitud local entre secuencias. El programa compara de nucleótidos o secuencias de

proteínas a bases de datos de secuencia y calcula la significación estadística de partidos. BLAST

puede utilizarse para inferir las relaciones funcionales y evolutivas entre secuencias, así como

ayudar a identificar a los miembros de las familias de genes.

Se realizó un BLAST del receptor de oxitocina OXTR de Homo sapiens y de Rattus norvegicus:

Figura 4. BLAST . Homo sapiens- Rattus norvegicus .

La figura 4 describe de manera resumida las secuencias que produjeron alineamientos

significativos; se detectaron 2 secuencias, la primera con 1072 pb alineados y la segunda con 315

pb alineados. También se observa que sólo el 4% del gen de Homo sapiens tiene una similitud con

el de Rattuss norvegicus, siendo esta del 88% en ambas secuencias que produjeron alineamientos

significantes.

Figura 5. Primer secuencia del BLAST . Homo sapiens- Rattus norvegicus.

Figura 6. Segunda secuencia del BLAST Homo sapiens- Rattus norvegicus .

También se realizó BLAST del receptor de oxitocina OXTR de Homo sapiens y de Macaca mulatta,

sin embargo, sólo se muestra la imagen que resume el BLAST.

Figura 7. BLAST . Homo sapiens- Macaca mulatta.

A diferencia del primer BLAST realizado con Rattus norvegicus, con Macaca mulatta se obtuvieron

6 secuencias que produjeron alineamientos significativos, sin embargo debido a la extensión no se

muestran en el presente trabajo, no obstante, de la imagen anterior se puede rescatar que el 79%

del gen OXTR de Homo sapiens tiene una similitud con el gen de Macaca mulatta, siendo dicha

similitud del 91%.

Clustal omega. Clustal omega es una herramienta ampliamente utilizada para realizar alineamientos múltiples de

secuencias. S e realizó Clustal omega al gen del receptor de oxitocina OXTR de Homo sapiens,

Rattus norvegicus y Macaca mulatta.

Figura 8. Evidencia clustal omega.

Debido a la extensión del gen OXTR, no se muestra todo el clustal omega, sin embargo, se ofrece

un link de consulta:

http://www.ebi.ac.uk/Tools/services/web/toolresult.ebi?tool=clustalo&jobId=clustalo-

E20131130-200052-0016-5765420-es

Para explicar el funcionamiento del clustal se hará uso de la siguiente imagen, en la cual se

observa la comparación de las 3 secuencias que se deseaba alinear:

Figura 9. Clustal omega. El * representa un alineamiento entre las tres secuencias (Homo sapiens, Rattu norvegicuss,

Macaca mulatta).

Árbol filogenético Con ayuda del Clustal omega se obtuvo el árbol filogenético de los genes de las tres especies que

se están analizando.

Figura 10. Árbol filogenético (distancias)

Cada secuencia de ADN proporcionada se separa por ramas, que se conectan por nudos. Mientras más

cercanos están los nudos entre una u otra secuencia, significa que dichas secuencias son muy cercanas, y

por ende, las especies a las que pertenecen. Por otra parte, se tiene la longitud de las ramas que significa

cierta cantidad de cambios en las pares de bases en las secuencias de ADN analizadas. En el árbol

filogenético se observa que la especie Homo sapiens y Macaca mulatta, son muy cercanas entre sí,

teniendo una diferencia en la longitud de rama muy pequeña, al contrario de lo que se encuentra

la especie Rattus norvegicus, esto significa que la especie Rattus novergicurs, está muy alejada de

la especie Homo sapiens. Lo anterior es específico del gen del receptor de oxitocina OXTR.

Locus. EN Homo sapiens, el gen del receptor de oxitocina OXTR se encuentra en el cromosoma 3.

Figura 11. Localización del gen OXTR.

Para tener una mejor visualización de la localización del gen, se recurrió a la herramienta Map

viewer .

Figura 12. Amplificación del cromosoma 3. Herramienta Map viewer. El círculo amarillo indica la posición del gen.

Figura 13. Ideograma del cromosoma 3.

Localización del gen OXTR

3p25 entre la posición

8792094-8811300

Sitios de restricción. Usando el programa Seria Cloner 2.6.1 se obtuvieron los sitios de restricción y las enzimas

involucradas, a continuación se muestran los fragmentos de la secuencia del gen receptor de

oxitocina OXTR en donde existen sitios de restricción.

Figura 14. Sitios de restricción del gen OXTR, enzimas involucradas.

Polimorfismos (SNPS) Se han encontrad 38 polimorfismos citados en PubMed en la base de datos NCBI.

POLIMORFISMO

rs1042778 [Homo sapiens] rs1091826 [Homo sapiens] rs11131149 [Homo sapiens] rs11706648 [Homo sapiens] rs13316193 [Homo sapiens] rs1465386 [Homo sapiens] rs1488467 [Homo sapiens] rs2139184 [Homo sapiens] rs2228485 [Homo sapiens] rs2254298 [Homo sapiens] rs2268490 [Homo sapiens] rs2268491 [Homo sapiens] rs2268493 [Homo sapiens] rs2268494 [Homo sapiens] rs2268497 [Homo sapiens] rs2268498 [Homo sapiens] rs2301260 [Homo sapiens] rs237885 [Homo sapiens] rs237887 [Homo sapiens]

rs237888 [Homo sapiens] rs237889 [Homo sapiens] rs237895 [Homo sapiens] rs237897 [Homo sapiens] rs237898 [Homo sapiens] rs237899 [Homo sapiens] rs237902 [Homo sapiens] rs237911 [Homo sapiens] rs237913 [Homo sapiens] rs237915 [Homo sapiens] rs3806675 [Homo sapiens] rs4564970 [Homo sapiens] rs4686301 [Homo sapiens] rs4686302 [Homo sapiens] rs53576 [Homo sapiens] rs6770632 [Homo sapiens] rs968389 [Homo sapiens] rs9840864 [Homo sapiens] rs9872310 [Homo sapiens]

Herramientas utilizadas.

NCBI(National Center for Biotechnology Information) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

BLAST http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

STRING http://string-db.org/

ProteinModelPortal http://www.proteinmodelportal.org/

ExPASY http://www.expasy.org/

Clustal Omega http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/

Serial Cloner 2.6.1

Ras Win