Paper 1 Metodología de La Investigación (1)
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Grupo 1 Metodología de la investigación.
Modificación de la composición de la leche materna respecto del ácido
docosahexaenoico en mujeres nodrizas que recibieron ácido alfa linolénico
en aceite de chía durante la gestación y lactancia. Rodrigo Valenzuela 1,2,*, Karla A. Bascuñán 1 , Rodrigo Chamorro 1 , Cynthia Barrera 1 , Jorge
Sandoval 3 , Claudia Puigrredon 3 , Gloria Parraguez 1 , Paula Orellana 1 , Valeria Gonzalez 1
and Alfonso Valenzuela 2
Resumen
ácido α-linolénico (ALA) es el precursor de ácido docosahexaenoico (DHA) en los seres
humanos, que es fundamental para el cerebro y la función visual. Dieta occidental ofrece
bajo ALA y DHA, que se refleja en bajos de DHA en la leche materna. Aceite de Chía extraído
de chía (Salvia hispanica L.), una planta nativa de algunos países de América Latina, es alta
en ALA (hasta 60%) y por lo tanto es una alternativa para ofrecer ALA con el objetivo de
reducir el déficit de DHA. Se evaluó la modificación del perfil de ácidos grasos de la leche
obtenida de las madres chilenas que recibieron aceite de chía durante la gestación y la
lactancia. Cuarenta mujeres embarazadas sanas (22-35 años de edad) tabulados para el
consumo de alimentos, se separaron aleatoriamente en dos grupos: un grupo de control con
la alimentación normal (n = 21) y un grupo chía (n = 19), que recibió 16 ml de aceite de chía
todos los días del tercer trimestre del embarazo hasta los primeros seis meses de lactancia. El
perfil de ácidos grasos de los fosfolípidos de eritrocitos, medido a los seis meses de embarazo,
en el momento de la entrega ya los seis meses de lactancia, y el perfil de ácidos grasos de la
leche recogida durante los primeros seis meses de lactancia fueron evaluados por
cromatografía de gases. El grupo de chía, en comparación con el grupo control, mostró un
aumento significativo de la ingestión de ALA y una reducción significativa de la ingestión de
ácido linoleico, ninguna modificación proyección de ácido araquidónico (AA), ácido
eicosapentaenoico (EPA) y DHA; un aumento significativo de eritrocitos ALA y EPA y una
reducción de LA. AA y DHA no se modificaron; un aumento del contenido de la leche de ALA
durante los seis meses de lactancia, mientras que LA mostró una disminución. AA y EPA no se
modificaron, sin embargo DHA aumentó sólo durante los tres primeros meses de lactancia. El
consumo de aceite de chía durante el último trimestre del embarazo y los tres primeros meses
de lactancia aumenta transitoriamente el contenido de la leche de DHA.
Palabras clave: embarazo y la lactancia; aceite de chía; fosfolípidos de eritrocitos; ALA y DHA
en la leche
Introducción
Varios estudios han establecido el papel fisiológico importante de ácidos grasos n-3 en el
crecimiento y el desarrollo infantil, especialmente su importancia para el desarrollo neuronal
y visual [1,2]. Ácidos grasos n-3 son una familia de nutrientes esenciales derivados de ácido
alfa-linolénico (C18: 3 n-3, ALA), el precursor de los ácidos fisiológicamente activos
Grupo 1 Metodología de la investigación.
poliinsaturados de cadena larga grasos n-3 (n-3 LCPUFA), eicosapentaenoico ácido (C20: 5,
EPA) y ácido docosahexaenoico (C22: 6, DHA) [3]. ALA es un nutriente esencial para los seres
humanos, y su deficiencia produce alteraciones neurológicas en los lactantes [4] y trastornos
dermatológicos en adultos [5]. A través de una serie de reacciones enzimáticas de elongación
y desaturación, que se produce principalmente en el hígado, ALA se transforma primero en
EPA y DHA a continuación, que es el principal producto metabólico final. DHA está implicado
en múltiples funciones en el cuerpo humano donde ejerce un papel central en el desarrollo
fisiológico y normal del individuo de la etapa embrionaria en [6].
La acreción de DHA es crítico durante el embarazo y durante el primer año de la vida en los
seres humanos, debido a que el ácido graso es esencial para la formación y la función de los
sistemas nervioso y visuales [7]. DHA comprende 10% del peso seco del cerebro humano, el
ácido graso que constituye 35% -40% de la total del cerebro AGPICL [8]. En el tejido nervioso,
y en particular en el cerebro, el DHA es esencial para todos los aspectos de desarrollo
neurológico y la función cerebral, incluyendo la neurogénesis, la proliferación de las neuritas
y el crecimiento, la transmisión del impulso nervioso a través de la bomba de sodio-potasio, la
integridad neuronal y la vitalidad, el transporte de glucosa en sangre y la expresión génica en
el cerebro [9-11]. La mujer embarazada y en lactancia tiene un requisito fisiológico de n-3
AGPICL, y en concreto de DHA, para asegurar el crecimiento y desarrollo adecuado y normal
del niño [12]. Transformación de ALA en sus productos metabólicos (EPA y DHA) se produce
principalmente en el tejido hepático a través de procesos enzimáticos de elongación y
desaturación [13]. EPA se dirige principalmente a la formación de derivados de eicosanoides,
que tienen acciones anti-inflamatorias y efectos reguladores sobre la actividad vascular
endotelial [14]. Casi todo el DHA es transportado a la placenta durante el embarazo y
acreción activamente en el cerebro fetal y los tejidos visuales [15]. Después del nacimiento,
DHA se proporciona al recién nacido a través de la leche materna, que contiene una
pequeña pero significativa cantidad de DHA (0,30% -0,32%) [16]. La dieta occidental ofrece
muy bajas cantidades de DHA, ya que sólo cuenta con pequeñas cantidades de los
principales proveedores de este ácido graso (alimentos marinos) [17]. Por lo tanto la
suplementación con DHA para las mujeres durante el embarazo y la lactancia se ha sugerido
[18]. Sin embargo, esta suplementación no es fácilmente aceptado en el período perinatal,
ya que algunos suplementos nutricionales de DHA se derivan de aceite de pescado de los
cuales las madres pueden mostrar baja tolerancia [19]. Debido a que el ALA es el precursor
nutricional de DHA, se ha propuesto que la ingestión de alimentos que contienen ALA puede
compensar crónicamente la baja ingesta de DHA en la mujer durante el período perinatal,
proporcionando la ingestión de ALA en cantidades suficientemente altas debido a su
transformación metabólica baja a DHA (menos de 1%) [20]. Una amplia variedad de aceites
vegetales que tienen un alto contenido de ALA (30% -65%) están disponibles en la actualidad,
tal como aceite de camelina (camelina sativa L., 36%), aceite de perilla (Perilla frutescens L.,
53%), aceite de chía (Salvia hispánica L., 60% -65%), aceite de linaza (Linum usitatissimun L.,
57%), aceite de sacha inchi (Plukenetia volubilis L., 49%) [3]. Estos aceites, que son producidos
y disponibles en el mercado en muchos países, especialmente en América del Sur, son
posibilidades para la suplementación dietética de ALA con el objetivo de aumentar los niveles
Grupo 1 Metodología de la investigación.
de DHA en la leche materna. La investigación anterior de nuestro grupo ha demostrado que
el suministro de ALA a partir de aceite de chía a ratas adultas resultados en un aumento de la
acumulación de DHA en varios tejidos, especialmente en el hígado y el cerebro [21], lo que
sugiere una transformación eficiente de ALA en DHA. La semilla de chía y su aceite han sido
muy bien caracterizado en su composición química y el valor antioxidante [22]. En el presente
informe se evaluó el efecto del aceite de chía como la principal fuente diaria de ALA
midiendo el contenido de DHA de los fosfolípidos de eritrocitos y la leche materna obtenida
de mujeres que recibieron el aceite durante un período de la gestación y la lactancia.
Sujetos y Métodos
Diseño del estudio y sujetos
El estudio fue un ensayo clínico aleatorizado que incluyó a 40 mujeres embarazadas que
asisten actualmente al servicio de salud del Hospital Obstétrico y Ginecologico de la
Universidad de Chile. El estudio fue llevado a cabo durante el período comprendido entre
enero de 2012 y diciembre de 2013. Los criterios de inclusión fueron: edad de 22-35 años, una
edad gestacional de al menos 22 a 25 semanas de acuerdo a la fecha de la última
menstruación y confirmados por ultrasonido, 1 a 4 hijos y una historia clínica sana. Las mujeres
reclutadas pertenecían principalmente al nivel socioeconómico bajo y medio según la
ESOMAR (ESOMAR) [23], todas de origen hispano. Las mujeres con historia de consumo de
drogas o alcohol, una dieta que incluye ácidos grasos poliinsaturados (PUFA, los suplementos
de ALA) o AGPICL (EPA y o suplementos de DHA), con bajo peso según la definición de la
tabla de Chile para las mujeres embarazadas [24], con hijos gemelos o que padecieran
enfermedades crónicas como la diabetes, hipertensión arterial, obesidad u otras
enfermedades que pudieran afectar el crecimiento fetal, fueron excluidos del estudio. En el
momento de la contratación, a todas las mujeres que cumplan los criterios de inclusión se les
dio información general sobre el estudio, y un dietista explicó los objetivos y las principales
características de diseño del estudio. El protocolo de estudio fue revisado y aprobado por la
Junta de Revisión Institucional de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile
(Protocolo # 073 a 2.011) y por el Comité de Ética del Hospital Clínico de la Universidad de
Chile (Protocolo ° 507/11). Toda la información sobre el estudio fue dada a las participantes
que voluntariamente aceptaron participar y firmar el consentimiento informado.
Durante la primera cita para las evaluaciones nutricionales, las mujeres embarazadas fueron
asignadas al azar a los grupos de control (n = 21) o al grupo experimental (que recibió la
suplementación de la dieta con aceite de chía) (grupo de chía, n = 19). El perfil de ácidos
grasos y el contenido de ALA (65% -68%) del aceite fueron previamente por nuestro grupo [21].
A todas las mujeres embarazadas se les realizó una entrevista nutricional completa, incluyendo
el diagnóstico nutricional y asesoramiento de acuerdo con las directrices dietéticas para las
mujeres embarazadas. Ambos grupos fueron aconsejados para tener una ingesta controlada
de aceite vegetal (girasol / aceite de soja, 80:20 v / v) en casa. Cada mujer recibió cucharillas
de plástico (4 ml) que permitieron medir su consumo de aceite vegetal. Un estudio anterior
había demostrado una buena tolerancia de las mujeres embarazadas de aceite de chia [25].
Grupo 1 Metodología de la investigación.
La indicación específica para el grupo control fue de consumir cuatro cucharaditas de aceite
vegetal crudo por día (16 ml / día), principalmente en ensaladas en el almuerzo y la cena. El
grupo de Chia fue instruido para reemplazar su ingesta de aceite usual con aceite de chía
(16 mL / día; 10,1 g ALA / día). A las mujeres pertenecientes a cada grupo se les dio 4,500 ml
de cada aceite en 250 ml botellas. El control y los grupos de chía consumen los respectivos
aceites del sexto mes del embarazo hasta el sexto mes de lactancia (intervención en total: 9
meses). Todas las mujeres recibieron un registro dietético para registrar el consumo diario de
aceite vegetal y se visitaron semanalmente para evaluar el consumo de petróleo. Aceite de
Chia obtenido por presión en frío de las semillas de chía era un regalo de Benexia Co.
(Santiago, Chile).
Evaluación del Estado Nutricional
Los participantes fueron sometidos a una evaluación clínica cuando se incorporaron en el
estudio. Un médico y una enfermera evaluaron cada participante respecto a la salud
siguiendo el enfoque clínico estándar para las mujeres embarazadas. Los datos
antropométricos de peso (kg) y la altura (m) se evaluaron para determinar el índice de masa
corporal (IMC, kg / m2). El IMC se utilizó para establecer el estado nutricional materno de
acuerdo a las referencias chilenas para las semanas de gestación [24]. Los requerimientos de
energía y nutrientes se establecieron de acuerdo a criterios de la OMS [26] y de la ingesta
diaria recomendada de acuerdo con el Instituto Americano de Medicina, 2001 [27].
Ingesta Dietética de Madres
Todas las madres fueron entrevistadas por un dietista, el que les pidió incluir todos los grupos
de alimentos que se consumen en la entrada del estudio, durante la primera semana después
del parto y seis meses después del parto, utilizando un cuestionario de frecuencia de
alimentos. Además del cuestionario de frecuencia de alimentos, los nutricionistas utilizaron
datos fotográficos: "Atlas de alimentos de consumo habitual en Chile" [28], un instrumento
gráfico validado que ayuda a estimar la cantidad de cada alimento consumido. Los datos
dietéticos del cuestionario de frecuencia de alimentos se agrupan en nueve grupos de
alimentos (cereales, frutas y verduras, lácteos, carnes y huevos, legumbres, pescado y
mariscos, de alto de lípidos alimentos, aceites y grasas, azúcares y alimentos procesados).
Cereales incluyen todos los cereales y patatas; frutas y verduras incluyen todo tipo de frutas,
jugos de frutas naturales y verduras; productos lácteos incluyen leche, queso, queso fresco y
yogures; carnes y huevos incluyen carne de res, pollo, cerdo y carne de pavo, y todos sus
productos derivados, y huevos; pescados y mariscos incluyen la caballa, el atún, el salmón y
mariscos (fresco y congelado); legumbres incluyen los frijoles, garbanzos y lentejas; alimentos
ricos en lípidos incluyen aceitunas, almendras, cacahuetes, nueces, aguacates, pistachos y
avellanas; aceites y grasas incluyen aceites vegetales (principalmente girasol / soja, canola,
semilla de uva y aceite de oliva) y grasas (manteca de cerdo, mantequilla, margarina,
mayonesa y crema); azúcares y procesos alimentos incluyen azúcar, miel, mermelada,
delicadeza, refrescos, jugos artificiales, chocolates, galletas y aperitivos dulces y salados.
Grupo 1 Metodología de la investigación.
Los datos de la dieta fueron analizados mediante el software SQLr de procesador de alimentos
(ESHA Research, Salem, Oregón, EE.UU.), para el cálculo de la energía y la ingesta de
nutrientes. La composición de la dieta se obtuvo utilizando una base de datos de la National
USDA, Base de Datos de Nutrientes para Referencia Estándar, que también contenía
información de los datos de composición de nutrientes generados localmente.
Recolección de sangre y leche materna Muestras
Las muestras de sangre se obtuvieron en la entrada del estudio, inmediatamente después del
parto y seis meses después del parto. Hidroxitolueno butilado (BHT) se añadió a las muestras
de sangre como antioxidante y las muestras se centrifugaron inmediatamente para obtener
la fracción de eritrocitos (3.000 g durante 10 min a 20 C) y luego se congelaron a 80 C hasta
su posterior análisis. La leche materna (5 ml) se extrajo por las mismas madres después de que
el bebé había sido alimentado durante al menos 2 minutos y se recogió en viales de plástico.
Las muestras de leche se congelaron inmediatamente en 80 C hasta su posterior análisis.
Eritrocitos congelados y muestras de leche fueron trasladados al Laboratorio de Lípidos del
Área de Investigación Bioquímica Nutricional del Departamento de Nutrición de la Facultad
de Medicina de la Universidad de Chile, para los procedimientos analíticos.
Análisis de ácidos grasos
Extracción de lípidos de eritrocitos y leche materna.
La extracción cuantitativa de lípidos totales de los eritrocitos y la leche materna se llevó a
cabo de acuerdo con Bligh y Dyer con la adición de BHT. Los eritrocitos y las muestras de leche
materna se mezclaron por separado con enfriado con hielo cloroformo / metanol (2: 1 v / v,
que contiene 0,01% de BHT), se añadió cloruro de magnesio (0,5 N), y la mezcla se
homogeneizó en un homogeneizador Ultraturrax (Janke y Kunkel, Stufen, Alemania). Los lípidos
totales extraídos de los eritrocitos y la leche se separaron por cromatografía de capa fina (TLC)
(20 láminas de aluminio 20 cm, gel de sílice 60 F-254; Merck?), Utilizando el sistema de
disolvente hexano / éter dietílico / ácido acético (80:20: 1 v / v). Tras el desarrollo de las placas
y la evaporación del disolvente, manchas de lípidos se visualizaron mediante la exposición de
las placas a un lámpara Camag UV (250 nm) diseñado para TLC. El sistema disolvente permite
la separación de fosfolipidos, triglicéridos, ésteres de colesterol y de colesterol de acuerdo con
su movilidad relativa. Manchas correspondientes a los fosfolipidos se rasparon de las placas
de TLC y se extrajeron por elución, ya sea con, éter dietílico o cloroformo / metanol (2: 1 v / v),
de acuerdo con Ruiz-Gutiérrez et al.
Preparación de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAMEs)
Ésteres metílicos de ácidos grasos (FAMEs) de los fosfolípidos de eritrocitos y ácidos grasos de
la leche se prepararon según Morrison y Smith. Las muestras habían sido previamente disuelto
en cloroformo / metanol (2: 1 v / v) y luego se evaporaron bajo corriente de nitrógeno hasta
que se redujo a la mitad el volumen, a continuación, trifluoruro de boro (12% de solución
Grupo 1 Metodología de la investigación.
metanólica) e hidróxido de sodio (0,5 N solución metanólica) se añadieron y la mezcla se
enfrió. FAMEs se extrajeron con 0,5 ml de hexano.
Análisis cromatográfiico de gases de FAMEs
FAMEs fueron identificados y cuantificados por cromatografía de gas-líquido en un equipo
Agilent (modelo 7890B, Santa Clara, CA, EE.UU.) equipado con una columna capilar (Agilent
HP-88, 100 m x 0.250 mm; I.D. 0,25 m) y un detector de ionización de llama (FID). La temperatura
del inyector se fijó en 250 C y la temperatura de FID en 300 C. La temperatura del horno en la
inyección de la muestra se fijó inicialmente en 120 °C y se programa para que aumente a 220
°C y a un FID de 5 °C por min. El hidrógeno se utiliza como gas portador a una velocidad de
flujo de 35 cm por segundo en la columna, y la relación de división de entrada se fijó en 20: 1.
La identificación y cuantificación de FAMEs se lograron mediante la comparación de los
tiempos de retención y los valores de % de área de pico de muestras desconocidas a las del
estándar de lípidos comercial (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EE.UU.). C23: 0 fue utilizado
como patrón interno (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EE.UU.) y los datos se procesaron
mediante el sistema de software de Hewlett-Packard Chemstation.
Analisis estadístico
Los datos dietéticos se comprobaron mediante el contraste de la composición de los datos
de consumo de energía / nutrientes con cuestionarios dietéticos, identificando valores atípicos
potenciales. En el caso de los valores extremos, se hizo una revisión cuidadosa de cada
cuestionario de frecuencia alimentaria. Se realizó un análisis descriptivo y el análisis de la
distribución de la variable se realizó mediante una prueba de Shapiro-Wilk. Los resultados se
expresan como la media ± SD. La ingesta dietética de nutrientes y fosfolípidos de eritrocitos y
la composición de ácidos grasos de la leche materna en los tres puntos de muestreo de la
intervención se compararon a través de una vía ANOVA y Newman-Keuls. Para todas las
comparaciones, significación estadística se fijó a α nivel 0.05. El software estadístico utilizado
fue el SPSS 15.0 (Chicago, IL, EE.UU.) y GraphPad Prism v. 6.0 (GraphPad Software, San Diego,
CA, EE.UU.) para el procesamiento figura.
Resultados
Antecedentes y datos antropométricos de los grupos
La Tabla 1 muestra los antecedentes y datos antropométricos de la muestra total y de cada
grupo. La muestra total se compone de mujeres jóvenes (28,6 ± 5,8 años), principalmente de
nivel socioeconómico medio (70,9%), y teniendo períodos de gestación, sexo, peso al nacer
y estatura de sus hijos muy similares. No se observaron diferencias significativas para el grupo
de chía en comparación al grupo de control para todos los antecedentes y datos
antropométricos.
Grupo 1 Metodología de la investigación.
Los
datos se expresan como la media ± S.D., o porcentaje (%) cuando esté indicado. * SES: nivel
socioeconómico evaluado utilizando los criterios de ESOMAR; IMC: índice de masa corporal =
kg / m2. a Las medidas antropométricas tomadas en el registro del estudio.
Ingesta Dietética
La ingesta dietética de ambos grupos se muestra en la Tabla 2. La energía y la ingesta de
macronutrientes (hidratos de carbono, proteínas y grasas), incluyendo fibra, de ambos grupos
fue similar, sin diferencias significativas. Las excepciones fueron la energía y el consumo de
hidratos de carbono para el grupo control en el inicio (sexto mes de embarazo) y al final del
estudio (sexto mes de lactancia). La ingesta ácidos grasos saturados totales (SFA), ácidos
grasos monoinsaturados (MUFA) y ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) también fueron
similares en ambos grupos experimentales. Sin embargo, como resultado de la intervención,
se observaron diferencias significativas para n-6, n-3 PUFA y algunos ácidos grasos individuales
(LA y ALA). En el momento del parto y al sexto mes de lactancia, en comparación con el sexto
mes de embarazo (inicio de la intervención) se observó un aumento significativo de la ALA y
una reducción significativa de LA en el grupo de chía cómo se espera de la ingesta de aceite
de chía. Relación n-6 / n-3 también fueron significativamente modificadas por la ingesta de
aceite de chía. La ingesta de n-6 AGPICL (AA) y n-3 AGPICL (EPA y DHA) no se modificado
durante la intervención.
Perfil de ácidos grasos de los fosfolípidos de eritrocitos
La Tabla 3 muestra la composición de ácidos grasos de los fosfolípidos de eritrocitos obtenidos
de las mujeres durante el embarazo y el período de lactancia. El primer muestreo (sexto mes
de embarazo) no mostró diferencias en los perfiles de ácidos grasos cuando se compararon
los grupos de control y de chía. Sin embargo, en el segundo muestreo (en el parto) se
observaron algunas diferencias significativas. Aunque el total de SFA, el total de ácidos grasos
Grupo 1 Metodología de la investigación.
monoinsaturados y el total de PUFA no mostraron modificaciones, no se observaron diferencias
cuando se compararon total de n-6 y el total de PUFA n-3 y algunos ácidos grasos individuales.
El grupo de chía, en comparación con el grupo control, mostró una reducción significativa en
el total de n-6 PUFA, como LA y AA no fueron modificados. Total n-3 PUFA, ALA y EPA se
incrementaron en el grupo de chía, pero DHA no se modificó. La relación n-6 / n-3 PUFA fue
significativamente reducida en el grupo de chía. El tercer muestreo (6 meses de lactancia)
mostró niveles similares de ácidos grasos totales e individuales y la relación n-6 / n-3, como se
observó en el segundo muestreo (en el parto).
Tabla 2. Energía y composición de la dieta ingerida por madres durante el embarazo y la
lactancia.
Los datos están expresados como la media_ D.S. de n=21 mujeres (Grupo Control) y n=19
(Grupo Chía). Significancia estadística (p<0.05), a: diferencia significativa del Grupo control a
los 6 meses de embarazo; b: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses
de embarazo; c: del Grupo Control en el parto; d: diferencia significativa del grupo tratado
con Chía en el parto; e: diferencia significativa del Grupo Control a los 6 meses de lactancia;
f: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses. Una cola ANOVA and test
Neuman-Keuls. Ácidos grasos saturados (SFA). Ácidos grasos monoinsaturados (MUFA). Ácidos
grasos poliinsaturados (PUFA).
Tabla 3. Composición de los ácidos grasos de los fosfolípidos de los eritrocitos de madres
durante el embarazo y la lactancia.
Los datos se expresan en g de ácidos grasos por 100 g de ácidos grasos metil esteárico (FAME)
y representan la media_D.S. de n=21 mujeres (Grupo Control) y n=19 (Grupo tratado con
Chía). La significancia estadística (p<0.05), a: diferencia significativa del Grupo Control a los 6
meses de embarazo; b: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses de
embarazo; c: diferencia significativa del Grupo Control en el parto; d: diferencia significativa
del grupo tratado con Chía en el parto; e: diferencia significativa del Grupo Control a los 6
meses de lactancia; f: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses. Una
cola ANOVA y test de Newman-Keuls. Ácidos saturados (SFA) corresponden a 6:0, 8:0, 10:0,
12:0, 14:0, 16:0, 18:0, 20:0 y 22:0, 24:0. Ácidos monoinsaturados (MUFA) corresponden a 14:1 n-
5, 16:1 n-7 y 18:1, n-9. Ácidos poliinsaturados (PUFA) corresponden a 18:2 n-6, 183 n-3, 20:4 n-6,
20:5 n-3, 22:5 n-3 y 22:6 n-3, n-6/n-3 ratio es 20:4 n-6/ (20:5, n-3 + 22:5, n-3 + 22:6, n-3).
3.4. Perfil de los ácidos grasos de la leche materna.
SFA, MUFA, PUFA totales, y n-6 PUFA y n-3 PUFA totales de la leche materna, se muestran en la
Figura 1E. SFA total (Figura 1A), MUFA total (Fig. 1B) y PUFA total (Fig. 1C), no fueron modificados
durante la intervención dietaria con aceite de chía al ser comparado con el grupo control.
N-6 PUFA (Fig. 1D) se redujo significativamente y el total de n-3 PUFA (Fig. 1E) se incrementó
significativamente después de la ingesta de aceite de chía. Figura 2, muestra la modificación
Grupo 1 Metodología de la investigación.
individual de la los ácidos más relevantes, n-6 y PUFA n-3 y n-6/n-3 ratio después de la ingesta
de aceite de chía. LA disminuyó significativamente en el grupo tratado con chía (Fig. 2A)
mientras que ALA se incrementó significativamente (Fig. 2B) durante todo el período de la
ingesta de aceite de chía. AA (Fig. 2C) y EPA (FIG. 2D) no se vieron modificados en ese grupo.
Sin embargo, DHA (Fig. 2E) se incrementó significativamente en el grupo consumidor de chía
solo durante el primer, segundo y tercer mes de lactancia, retornando hacia valores similares
a los del grupo control después de pasado el período inicial de tres meses. El n-6/n-3 PUFA
ratio (Fig. 2F), se redujo significativamente en el grupo tratado con chía durante el sexto mes
de lactancia.
Figura 1. Cont.
Grupo 1 Metodología de la investigación.
Figure 2. Cont.
Figura 1. Composición total de ácidos grasos de la leche materna durante la lactancia. Ácidos
grasos saturados (SFA) (A); ácidos grasos monoinsaturados (MUFA) (B); ácidos grasos
poliinsaturados (PUFA) (C); PUFA n-6 total (D); PUFA n-3 total (E). Datos expresados como g de
ácido graso por 100 g FAME y representan la media_D.S. de n=21 mujeres (grupo control) y
n=19 (tratados con chía). Significancia estadística (p<0.05); *: indica diferencia significativa
cuando se compara el grupo tratado con chía con el grupo control de cada mes de
lactancia (test) y para todos los meses de lactancia (una cola ANOVA y Newman-Keuls test).
SFA corresponde a 6:0, 8:0, 10:0, 12:0, 16:0, 18:0, 20:0, y 22:0, 24:0. MUFA corresponde a 14:1 n-
5, 16:1 n-7 y 18:1, n-9. PUFA corresponde a 18:2 n-6, 18:3 n-3, 20:4 n-6, 20:5 n-3, 22:5 n-3.
Grupo 1 Metodología de la investigación.
Figura 2. Cont.
Grupo 1 Metodología de la investigación.
Figure 2. Composición individual de ácidos grasos de la leche materna durante la lactancia.
18:2, n-6 (LA) (A); 18:3, n-3 (ALA) (B); 20:4, n-6 (AA) (C); 20:5, n-3 (EPA) (D); 22:6,n-3 (DHA) (E);
(F). Datos expresados como g de ácido graso por 100 g de FAME y representan la media_D.S.
de n=21 mujeres (grupo control) y n=19 (grupo tratado con chía). Significancia estadística
(p<0.05); *: Indica diferencia significativa al comparar el grupo tratado con chía con cada
mes de lactancia del grupo control (t-test) y para todos los meses de lactancia (Una cola
ANOVA y Newman-Keuls test). n-6 PUFA/n-3 PUFA ratio is (18:2, n-6 + 20:4, n-6)/(18:3,
n-3 + 20:5, n-3 + 22:5, n-3 + 22:6, n-3).
Discusión
La ingesta dietética de ácidos grasos por las embarazadas y nodrizas en los períodos de
suplementación estudiados, se refleja en la composición de ácidos grasos de los fosfolípidos
de eritrocitos y también en la composición de ácidos grasos de la leche materna. Las
diferencias en la composición de ácidos grasos son particularmente relevantes para ALA, el
precursor de n-3 LCPUFA, que a su vez refleja el complejo metabolismo de los ácidos grasos
poliinsaturados y su conversión (a través de elongación y desaturación) a los ácidos grasos de
20 y más átomos de carbono. En el mismo sentido, nuestros resultados demuestran que el ALA
proporcionado a las mujeres embarazadas y nodrizas a través de la aceite de chía, aumenta
el contenido de ALA y EPA de los fosfolípidos de eritrocitos y el contenido de ALA y DHA de la
leche materna, pero no modifica el DHA en los fosfolípidos de los eritrocitos, lo cual refleja que
la conversión de ALA a n-3 LCPUFA y la acumulación posterior a células o fluidos biológicos,
como la leche, es un proceso altamente regulado. Los resultados para eritrocitos obtenidos
del grupo chia están en línea con las observaciones anteriores de Arterburn et al., (2006), que
sugieren que estas células no son reservorios metabólicos para DHA, a diferencia de otros
tejidos, tales como la corteza cerebral, los espermatozoides y la retina. Sin embargo, los
eritrocitos se consideran un buen marcador de sangre de la situación nutricional de los ácidos
grasos. Lauritzen y Carlson han propuesto que el perfil de ácidos grasos de los eritrocitos
materno durante el embarazo se relaciona con el perfil de ácidos grasos de los eritrocitos del
recién nacido, lo que indica un papel activo de la placenta durante el embarazo y de la
leche materna durante la lactancia. Se ha demostrado previamente que la ingesta de ALA
en la dieta aumenta la acumulación de EPA en los eritrocitos. Sin embargo, también ha sido
demostrado que la ingesta de ALA, suministrada como aceite de sacha inchi (49% ALA),
aumenta ambos ácidos grasos, EPA y DHA, en eritrocitos, introduciendo así la controversia en
relación con el metabolismo de n-3 LCPUFA en humanos.
Durante los seis meses de análisis de la la leche materna, se observó que la ingesta diaria
de aceite de chía permitió un contenido más alto y constante de ALA. Del mismo modo, se
esperaba un comportamiento igual para DHA, ya que es el producto de la supuesta continua
transformación de ALA en el hígado. Ambos ácidos grasos son transportados a la mama para
ser secretados en la leche. Sorprendentemente, el aumento de DHA en la leche sólo se
Grupo 1 Metodología de la investigación.
observó durante los primeros, segundo y tercer mes de lactancia, alcanzando valores similares
a los del grupo control después del tercer mes de lactancia, a pesar de la ingestión alta y
continua de ALA. Tampoco aumentó EPA, ya que se ha demostrado que ocurre en
poblaciones en que la ingesta de EPA a través de los alimentos marinos es alta. Estas
observaciones conducen a la hipótesis de un alto control de la conversión de ALA en EPA y
DHA, y de la presencia de estos ácidos grasos en la leche materna. La leche materna no
contiene EPA porque este ácido graso compite con AA. Esta es la razón por la que las fórmulas
iniciales fueron enriquecidas con DHA y AA a partir de fosfolípidos de huevo con exclusión de
EPA. Nuestra hipótesis es que se produce el control fisiológico de la conversión de ALA en DHA:
(i) a través de una alta regulación en la actividad de las enzimas implicadas en la elongación
y desaturación, que fijó DHA en concentraciones fisiológicas; (ii) a través de la beta oxidación
de exceder ALA para la producción de energía o el reciclado del carbono; (iii) debido al
hecho de que el exceso de PUFA y LCPUFA puede aumentar la susceptibilidad a la rancidez
oxidativa de la leche con el riesgo de estrés oxidativo del tejido en el niño, sin embargo, esta
última propuesta requiere una mayor demostración.
La literatura indica que los valores de DHA de la leche materna de mujeres pueden variar
de 0,2% a 1% de ácidos grasos totales. Estos valores son altamente dependientes de la
ingestión directa de DHA (es decir, el consumo de pescado y / o tomar suplementos n-3 de
LCPUFA) como se ha demostrado previamente. En un estudio reciente se estableció que las
mujeres embarazadas chilenas que muestran consistentemente muy bajo consumo de
pescado y otros alimentos marinos, como resultado muestran un nivel muy bajo de DHA en la
leche materna, así como un bajo contenido de DHA en los fosfolípidos de eritrocitos. Las
poblaciones que consumen grandes cantidades de pescado, como Filipinas y las mujeres
japonesas, muestran mayores niveles de DHA en la leche en comparación con las
poblaciones que consumen menos pescado (por ejemplo, Israel, Columbus, Ohio, EE.UU). Sin
embargo, el contenido de EPA de la leche de las mujeres de estos países es muy baja y no se
modifica por el consumo de pescado a pesar de la presencia de este ácido graso en los
alimentos marinos, lo que indica un control fisiológico en el transporte y acumulación de este
ácido graso en el contenido de grasa de la leche materna. De acuerdo con nuestros
resultados, la ingesta de ALA durante el período perinatal sólo permite un aumento de DHA
en la leche durante los tres primeros meses de lactancia, lo que sugiere o bien una mayor
conversión limitada y acumulación de DHA en el hígado y / o un transporte regulado en el
pecho, como fue postulado anteriormente. Después del primer período de tres meses de
lactancia, El DHA de la leche alcanza los niveles fisiológicos estimados de DHA (un promedio
de 0.3% a 0.32% de grasa total) a pesar de la alta disponibilidad nutricional de ALA. Es
interesante que el contenido de AA y EPA de la leche materna no se modificó por la
suplementación con ALA en nuestro modelo experimental. Esto es altamente relevante
debido a la estrecha relación de estos dos ácidos grasos con el control de la homeostasis
vascular y las respuestas inflamatorias en los recién nacidos. En nuestro estudio, AA siempre
Grupo 1 Metodología de la investigación.
estuvo presente en los eritrocitos de los dos grupos experimentales en las concentraciones
fisiológicas estimadas, corroborando el importante papel de este ácido graso, como para el
desarrollo del cerebro en las primeras etapas de la vida, como se ha demostrado
previamente. Las madres que consumieron aceite de chía se les indicó reemplazar los aceites
vegetales en la dieta habitual (más comúnmente aceite de girasol/ soja). Esta sustitución, que
aumenta el consumo de ALA, permitió la sustitución de una alta proporción de LA por ALA,
tanto en los eritrocitos y en la leche. Se ha demostrado que las madres que tenían una alta
ingesta dietética de LA y una baja ingesta de ALA entregados a los niños con puntuaciones
subnormales de aprendizaje, donde el consumo alto de LA se correlacionó con los niveles más
bajos de DHA en la leche materna. Un resultado relevante del presente estudio fue el cambio
en la proporción total de ácidos grasos n-6/ n-3 en los fosfolípidos de eritrocitos y de la leche
materna. Modificaciones ancestrales de esta proporción en favor de los ácidos grasos n-3
pueden haber establecido un patrón genérico evolutivo, que en la actualidad caracteriza el
cerebro de seres humanos. Nuestros resultados se obtuvieron de madres no obesas, libres de
cualquier enfermedades crónicas, ambos aspectos relevantes debido a que en las mujeres
obesas, la mayoría de los que sufren de la enfermedad de hígado graso no alcohólico, hay
una reducción en la actividad hepática de las enzimas desaturasas (Δ-5 y Δ-6 desaturasas)
con una reducción concomitante en la formación de EPA y DHA a partir de ALA. Debido a la
alta prevalencia de mujeres con obesidad en los países occidentales y la comorbilidad de
enfermedad del hígado graso no alcohólico, es un reto interesante para el futuro evaluar el
efecto de la suplementación con ALA a través de aceite de chía y la presencia de este ácido
graso y de DHA en la secreción de la leche de estas mujeres. Nuestro estudio no evaluó el
efecto de la intervención dietética de las mujeres embarazadas y nodrizas con aceite de chía
en sus bebés, como la duración del período gestacional, peso al nacer y el desarrollo
cognitivo y visual. Otros informes han estudiado el impacto de la suplementación con DHA en
estos parámetros, pero no de ALA en concentraciones como las utilizadas en nuestro estudio.
Un estudio previo, suminitró aceite de canola (10% ALA) a las mujeres embarazadas,
mostrando un incremento del período gestacional y el peso al nacer.
Conclusiones
La aceite de chía puede constituir una forma asequible y barata para proporcionar ALA en
cantidades superiores a la población de muchos países que se caracteriza por un bajo
consumo de pescado. No es de menor importancia considerando la baja disponibilidad real
de peces y las crecientes preocupaciones sobre la contaminación de peces con metales
pesados y otros productos tóxicos que influyen negativamente en el consumo de pescado.
Nuestra investigación ha demostrado que la ingesta de aceite de chía, una buena fuente
natural de ALA, permite una modificación importante en el contenido de EPA de los eritrocitos
en madres embarazadas y un interesante aumento de DHA en su leche. Sin embargo, se
Grupo 1 Metodología de la investigación.
necesita más investigación en relación con las intervenciones nutricionales pre y postnatales
con aceite de chía o de otros aceites con un alto contenido de ALA, para apoyar
científicamente la recomendación del consumo de ALA para aumentar el contenido de DHA
de la leche materna. La suplementación con aceite de Chia también puede contribuir a
mejorar la relación LA / ALA en las mujeres durante el período perinatal.